Застосування складних ефірів гідроксибензойної кислоти та аналогів для одержання лікарського засобу для попередження та лікування вірусної інфекції

1. Застосування складного ефіру гідроксибензойної кислоти та його аналогів, що мають формулу (І), наведену нижче, для одержання лікарського засобу для попередження та лікування вірусної інфекції, де R являє собою С1-11алкільну групу; R1, R2, R3, R4 і R5 незалежно являють собою ОН або Н; і щонайменше один із яких являє собою ОН; але за виключенням складного ефіру саліцилової кислоти COOR 2 (19) 1 3 90159 4 ної інфекції за будь-яким з пп. 1-6, де зазначений 12. Застосування складного ефіру гідроксибензойскладний ефір гідроксибензойної кислоти і його ної кислоти і його аналогів для одержання лікарсьаналог вибрані із групи, яка складається з складкого засобу для попередження та лікування вірусного ефіру 4-гідроксибензойної кислоти, складного ної інфекції за будь-яким з пп. 1-11, де зазначена ефіру 2,4-дигідроксибензойної кислоти, складного сполука та/або композиція, що містить таку сполуефіру 3,4-дигідроксибензойної кислоти, складного ку як активний інгредієнт, виконана/виконані у фоефіру 2,3,4-тригідроксибензойної кислоти, складрмі порошку, розчину, таблетки, капсули, гранули ного ефіру 3,4,5-тригідроксибензойної кислоти та або рідини з різними ад'ювантами для ін'єкції або складного ефіру 3,4,6-тригідроксибензойної кислопероральної композиції, або виконані у формі мазі, ти. гелю, лосьйону, таблетки, супозиторія, діафрагми 10. Застосування складного ефіру гідроксибензойабо спрея з різними ад'ювантами для шкірної та ної кислоти і його аналогів для одержання лікарсьслизової композиції або іншої фармацевтично кого засобу для попередження та лікування вірусприйнятної композиції. ної інфекції за будь-яким з пп. 1-9, де зазначений 13. Застосування складного ефіру гідроксибензойскладний ефір гідроксибензойної кислоти і його ної кислоти і його аналогів для одержання лікарсьаналоги вибрані із групи, яка складається з складкого засобу для попередження та лікування вірусного ефіру 2,3,4-тригідроксибензойної кислоти, ної інфекції за будь-яким з пп. 1-10, де зазначену складного ефіру 3,4,5-тригідроксибензойної кислосполуку та/або композицію, що містить таку сполути та складного ефіру 3,4,6-тригідроксибензойної ку як активний інгредієнт, застосовують як засіб кислоти. особистої гігієни, де такими засобами особистої 11. Застосування складного ефіру гідроксибензойгігієни є мила для рук, дезинфекційні засоби для ної кислоти і його аналогів для одержання лікарсьрук, очищувальні засоби для миття тіла, гелі для кого засобу для попередження та лікування вірустіла, мила для миття тіла, вологі серветки для ної інфекції за будь-яким з пп. 1-10, де зазначеним особистої гігієни, косметичні серветки, назальні складним ефіром гідроксибензойної кислоти і його спреї або їх комбінації. аналогів є складний ефір 3,4,5тригідроксибензойної кислоти. Даний винахід стосується застосування складних ефірів гідроксибензойної кислоти і їх аналогів для отримання лікарського засобу для попередження та лікування вірусної інфекції. Особливо, даний винахід стосується застосування складних ефірів гідроксибензойної кислоти і їх аналогів для отримання лікарського засобу для лікування хвороб, пов'язаних з вірусом гепатиту В, вірусом папіломи людини та простим вірусом герпесу у людей та тварин (таких як, гепатит В, гострокінцева кондилома, простий герпес, вагініт, цервіцит і цервікальна ерозія), і застосування такого лікарського засобу для забезпечення лікування рака шийки матки. Серед складних ефірів гідроксибензойної кислоти і їх аналогів складні ефіри ргідроксибензойної кислоти часто використовують як консерванти продуктів харчування і ліків. Складний ефір галової кислоти ("складний ефір 3,4,5,тригідроксибензойної кислоти") може інгібувати синтез тромбоксана А2 (ТХА2). Він має більш сильний і більш швидкий ефект на агрегацію тромбоцитів, ніж аспірин (ASP), і застосовується в розчині для ін'єкцій. Доведено, що галова кислота інгібує реплікацію вірусу гепатиту В (див. Journals of Guangzhou Liberation Army High Specialized School, 1998, 26 (2):5-7). Дотепер немає повідомлень про застосування складних ефірів гідроксибензойної кислоти і їх аналогів, включаючи складні ефіри 3,4,5,-тригідроксибензойної кислоти, для лікування вірусної інфекції у людини, наприклад, гепатиту В або вірусній інфекції шкіри і слизової. У патенті Китаю №1411339А і патенті США №6294186 розкрита протимікробна композиція. Композиція включає безпечну і ефективну кількість аналогів бензойної кислоти, які мають наступну будову (II): Де R1, R2, R4 і R5 незалежно являють собою Н, ОН, F, І, Br, СІ, SH, NH2, CN, алкіл, алкокси, NR2, OR, NO2, COR, CONR2, CO2R або SO3R, де R незалежно являє собою Η, алкіл або алкокси; R3 незалежно являє собою Н, ОН, F, І, Br, СІ, SH, CN, алкіл, алкокси, OR, NO2, COR, CONR2, CO2R або SO3R, де R незалежно являє собою Н, алкіл або алкокси. Вищезгадані посилання на патенти вказують також на переважний варіант здійснення, такий як саліцилова кислота ("2-гідроксибензойна кислота"), бензойна кислота або їх комбінація; вони також обмежують діапазон рН, у якому ці сполуки можуть використовуватися, до 1-7. Хоча віруси є самими дрібними відомими патогенними мікроорганізмами, вони найбільш широко поширені. На сьогодні, майже три чверті контагіозних хвороб у світі викликані вірусами. У клінічній діагностиці багато хвороб належать до вірусної інфекції. Гострокінцева кондилома, яка також називається половими бородавками або венеричними бородавками, є доброякісним ростом шкіри і слизової, індукованим вірусом папіломи людини (HPV). Це - одна з найбільше часто спостережува 5 90159 6 них хвороб, що передаються статевим шляхом, дин, які перевірили в 1980-і роки, більш не застотісно пов'язана із запаленням і раком статевих совували для лікування гепатиту В через серйозні органів. На даний час подофілотоксин є одним з побічні ефекти та високу токсичність. Останнім ліків для лікування статевих бородавок. Його печасом, розробили безліч нуклеозидних ліків, таких ревага полягає в короткому часі лікування, а неяк ламівудин, фамцикловір, лобукавір, адефовір, долік - у подразненні шкіри та у серйозних побічFTC, FMAU, FDDC, BMS 200475 і так далі, і вони них ефектах, які включають біль, набряк, ерозію і появляють суттєвий інгібуючий ефект на HBV. На жаль, віруси можуть мутувати і ставати стійкими так далі. Гель рекомбинантного інтерферону -2 до ліків після тривалого строку застосування цих визнають ефективними зовнішніми ліками для ліків. Крім того, ці ліки необхідно застосовувати лікування статевих бородавок. тривалий час, тому що короткочасне застосування Останні дослідження показали, що 29,3% пазабезпечують лише тимчасовий ефект. цієнтів із цервікальною ерозією виявилися HPV Таким чином, завжди досліджуються та розро(вірус папіломи людини) позитивними, тоді як відбляються нові ліки для запобігання та лікування соток позитивних серед нормальної популяції стаHBV, HPV і/або HSV інфекції. новить тільки 11,1% (Fuqiang Chen, Tumor Основною метою даного винаходу є забезпеPrevention Magazine, 2001, 8 (4) 342-344; Chenkang чення застосування складних ефірів гідроксибенXu, Journal of Zhongshan Medical University, 1998, зойної кислоти і їх аналогів для отримання лікар19 (3): 223-226). Повідомлялося, що високий ризик ського засобу для попередження та лікування HPV16 і HPV18 очікували у близько 69% пацієнтів вірусної інфекції, особливо для отримання лікаріз хронічним цервіцитом; і виявили, що відсоток ського засобу для попередження та лікування хвоцих підтипів збільшився, оскільки підвищився стуроб, пов'язаних з HBV, HPV і HSV, у людини та пінь цервікальної ерозії (Ahn ws et al, J Cell тварин. Biochem Suppl, 1997; 28-29: 133-139). Розходження Даний винахід стосується складних ефірів гідпевних відсотків HPV16 і HPV18 між гранулярною роксибензойної кислоти і їх аналогів, описаних або папілярною ерозією та нормальною шийкою наступною загальною формулою (І): матки було значним. Позитивний відсоток HPV16 і HPV18 у раку шийки матки міг би досягати 83,33% при визначенні за допомогою PCR (полімеразна ланцюгова реакція). ДНК високого ризику HPV можна вставити в хромосоми клітин хазяїна, а потім продукувати пухлинні білки Е6 і Е7. Е6 і Е7 могли б відповідно інгібувати протиракові гени р53 і Rb. У результаті, клітини втратили б контроль над р53 і Rb. Це змусило б клітини в стабільному стані активно рости, і вони могли б стати раковими. Якщо HPV16 залишається в клітинах, це може перетводе, R являє собою С1-11 алкіл; R1, R2, R3, R4, R5 рити патологічні зміни шийки матки на рак. Відміннезалежно є ОН або Н, та, щонайменше, один з на від інфекції жіночих статевих органів HPV інфеR1, R2, R3, R4, i R5 є ОН, за винятком саліцилата. кція шийки матки головним чином включає HPV Переважно R являє собою С1-8 алкіл, тобто 16/18 та зазвичай не викликає бородавки. Вона СН3, С2Н5, С3Н7, С4Н9, С5Н11, С6Н13, С7Н15, С8Н17; існує як прихована інфекція протягом тривалого найбільш переважним числом атомів вуглецю є 1часу та спочатку індукує атипичную гіперплазію та 3, тобто СН3, С2Н5 та С3Н7. стає раковою, коли з'являються інші фактори. R1, R2, R3, R4, R5 разом містять переважно дві Вірус простого герпесу (HSV) є вірусом із двоабо більше групи ОН, і більш переважно містять ланцюгової ДНК і може попадати в організмітри або більше групи ОН. мішені через рот, дихальний шлях, слизову статеУ деяких переважних варіантах здійснення вого шляху, ушкоджену шкірута багато інших каскладні ефіри гідроксибензойної кислоти і їх ананалів. Це досить розповсюджена інфекція серед логи формули (І) включають наступні сполуки: людей, і відсоток інфекції досягає 80~90%. Типові складний ефір 4-гідроксибензойної кислоти; скласимптоми включають групи пухирців на певних дний ефір 2,4-дигідроксибензойної кислоти; склачастинах слизової та шкіри, поряд із цим іноді модний ефір 3,4-дигідроксибензойної кислоти; склаже виникнути серйозна системна хвороба та заподний ефір 2,3,4-тригідроксибензойної кислоти; діяти шкоду внутрішнім органам. Попередні досліскладний ефір 3,4,5-тригідроксибензойної кислоти дження показали, що HSV-1 і HSV-2 окремо або складний ефір 3,4,6-тригідроксибензойної кисможуть бути пов'язаними з раком губи, раком вулоти. В переважному варіанті здійснення сполуки льви та раком шийки матки, і це привернуло до за даним винаходом включають складний ефір них велику увагу (Sunhe, China practical 2,3,4-тригідроксибензойної кислоти, складний ефір gynaecology and obstetrics journal, 2001, 17 (7):4073,4,5-тригідроксибензойної кислоти та складний 409). Тепер ліки для лікування HSV інфекції вклюефір 3,4,6-тригідроксибензойної кислоти. У найчають ідоксуридин, цитозину арабінозид, відарабільш переважному варіанті здійснення сполуки за бін, бромовініл, уридин, ацикловір і так далі. Але даним винаходом включають складний ефір 3,4,5час лікування такими ліками досить тривалий, тригідроксибензойної кислоти. близько 5-7 днів. Сполуки за даним винаходом та/або композиПротивірусні ліки, використовувані для лікуції, що містять такі сполуки як активні інгредієнти, вання інфекції вірусного гепатиту В (HBV), такі як можна використати для отримання лікарських завідарабін, відарабіну фосфат, ацикловір і зидову 7 90159 8 собів для лікування пов'язаних з вірусом хвороб у мила для рук, дезінфекційні засоби для рук, миючі людини та тварин, особливо для лікування хвороб, засоби для тіла, очищувальні гелі для тіла, мила пов'язаних з HPV, HBV, HSV, включаючи, без обдля миття тіла, персональні гігієнічні серветки, меження, гепатит В, гострокінцеву кондилому, косметичні серветки, назальні спреї для знищення простий герпес, вагініт, цервіцит, цервікальну еровірусів на шкірі. зію та цервікальний рак. Формуляції та засоби особистої гігієни за даЯк терапевтичні ліки, сполуки за даним винаним винаходом можна отримати традиційними ходом та/або композиції, які містять ефективну способами, відомими в даній області. кількість таких сполук як активні інгредієнти, є осСполуки та/або композиції, які містять такі новними компонентами продуктів для запобігання сполуки можуть ефективно знищувати або попета лікування вірусної інфекції в організмі та на шкіреджати віруси HPV 6/11, 16/18, можуть застосорі людини. Їх не використовують як допоміжні інгвуватися для отримання лікарських засобів для редієнти, такі як консерванти, антиоксиданти і так лікування вірусної інфекції HPV, для лікування далі. Якщо противірусний ефект продукту знижугострокінцевої кондиломи, вагініту, цервіциту, церється при зниженні концентрації сполук та/або вікальної ерозії та допомоги при лікуванні цервікакомпозицій, які містять такі сполуки як активні інгльного рака. У даному винаході використовують редієнти, він повинен діяти як ефективний інгредікількісну флуоресцентну PCR реального часу для єнт для попередження і лікування хвороб шкіри та визначення кількості HPV у зразку для обстеження слизової, пов'язаних з вірусом. Вищезгадана ефесполук і їх лікувальних ефектів. Про цей спосіб ктивна кількість означає дозу, при якій такі сполуки повідомляють у деяких публікаціях (Youling, Cai, або композиції можуть ефективно усунути вірусну Prevention of Chinese venereal disease and cancer, інфекцію або запобігти їй. 2002, 8:2, 108; Yuansheng, Wu, Ruiqiang, Qu, Більшість сполук даного винаходу є відомими Practical Chinese and western medicine clinics, 2003, сполуками. Деякі з них використовувалися для 3: 2, 1). створення харчових добавок, деякі є фармацевтиЛінія 2.2.15 клітин пухлини печінки, яку можна чними ад'ювантами, а деякі є фармацевтичними культивувати in vitro протягом тривалого часу, є проміжними сполуками, які можна придбати на найбільш часто використовуваною моделлю клітин ринку, екстрагувати з рослин або отримати відодля гепатиту В. Її використовують у даному винамими способами. ході для дослідження ефекту сполук за даним виСполуки за даним винаходом та/або композинаходом на клітинну секрецію HBsAg і HBeAg. Реції, які містять такі сполуки разом з різними ад'юзультати показують, що ефект складних ефірів вантами для ін'єкції або пероральних формуляцій, гідроксибензойної кислоти та їх аналогів за даним можна виконати у формі порошку, розчину, таблевинаходом сильніший, ніж ефект гідроксибензойток, капсул, гранул, рідин або інших фармацевтичної кислоти та її аналогів. но прийнятних препаратів. Деякі із сполук даного винаходу є харчовими Сполуки за даним винаходом та/або композидобавками, які не токсичні в діапазоні їх дози. Кліції, які містять такі сполуки разом з різними ад'юнічне обстеження пацієнтів, інфікованих HPV або вантами для шкірних і слизових формуляцій, можHSV, показало, що складні ефіри гідроксибензойна виконати у формі різних препаратів, таких як ної кислоти та їх аналоги мають сильніший лікувамазі, гелі, рідини для промивання, таблетки, супольний ефект на вірусну інфекцію, ніж гідроксибензиторії, діафрагми, спреї або інші фармацевтично зойна кислота і її аналоги. прийнятні препарати. Складні ефіри гідроксибензойної кислоти Сполуки за даним винаходом та/або композибільш стабільні, ніж гідроксибензойна кислота. ції, які містять такі сполуки, можна використовуваЕксперименти показали, що пропілгалат був більш ти для створення противірусних засобів особистої стабільним, ніж галова кислота, особливо, коли він гігієни. Засоби особистої гігієни включають, але не перебуває в слабкому лужному середовищі оргаобмежуються, стерильні розчини, мила для рук, нізму людини (рН 7,4) або кишковому лужному дезінфекційні засоби для рук, миючі засоби для середовищі (рН 8,6). Як показала спектрофотометіла, очищувальні гелі для тіла, мила для миття трія, розчин гідроксибензойної кислоти змінювався тіла, персональні гігієнічні серветки, косметичні від безбарвного до жовтого за більш короткий песерветки, назальні спреї. ріод часу, ніж складний ефір гідроксибензойної Окрему сполуку або комбінацію більш ніж одкислоти за умови рН 6,8~8,6. нієї сполуки за даним винаходом можна застосоПри цьому противірусна активність складного вувати для отримання лікарських засобів за даним ефіру гідроксибензойної кислоти вище, ніж активвинаходом. Сполуку(и) можна скомбінувати з різність відповідної йому кислоти. Наприклад, протиними фармацевтично прийнятними носіями для вірусна активність пропілгалата більш ніж в один забезпечення утворення фармацевтично прийнятраз вища, ніж активність галової кислоти. Дані, ної формуляції. Такі носії включають, але не обпоказані в прикладах даної заявки, продемонструмежуються, крохмаль, декстрин, Tween-80, карбовали, що складні ефіри гідроксибензойної кислоти мер, целюлозу, карбоксиметилцелюлозу, альгінат не діють як проліки гідроксибензойних кислот. Тонатрію, гліцерин, пропандіол, поліетиленгліколь, му, із сполук за даним винаходом можна зробити лаурокапрам, ізопропанол, троламін та Span 60 противірусні ліки або засоби особистої гігієни з (сорбітану моностеарат). перевагами контрольованої якості та значного До того ж, оскільки окрема сполука або комбілікувального ефекту. нація сполук є активними інгредієнтами, активні Приклади інгредієнти можна додавати в стерильні розчини, 9 90159 10 Наступні приклади забезпечують додаткове Матеріали (>99% змісту), які застосовуються в ілюстрування даного винаходу та не призначені даному винаході, і їх постачальники є наступними: для обмеження об'єму даного винаходу. Матеріали р-Гідрокисбензойна кислота Етил р-гідрокисбензоат 2,3-Дигідроксибензойна кислота Метил 2,3-дигідроксибензоат 2,4-Дигідроксибензойна кислота Метил 2,4-дигідроксибензоат 3,4-Дигідроксибензойная кислота Метил 3,4-дигідроксибензоат 2,3,4-Тригідроксибензойна кислота Галова кислота Пропілгалат Етилгалат Метилгалат Октилгалат Додецилгалат Рекомбінантний інтерферон -2 людини, гель Поліінозинова кислота Постачальники Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. GuangZhou Gases Factory Co., Ltd. Taizhou Zhongda Chemical Co., Ltd. Taizhou Zhongda Chemical Co., Ltd. Taizhou Zhongda Chemical Co., Ltd. Taizhou Zhongda Chemical Co., Ltd. Taizhou Zhongda Chemical Co., Ltd. Taizhou Zhongda Chemical Co., Ltd. Nanjing Longyuan Natural Polyphenol Synthesis Factory Zhejiang Ouhai Chemical Reagent Co. Ltd. Lianyungang Hongqi Chemical Plant Nanjing Longyuan Natural Polyphenol Synthesis Factory Nanjing Longyuan Natural Polyphenol Synthesis Factory Nanjing Longyuan Natural Polyphenol Synthesis Factory Nanjing Longyuan Natural Polyphenol Synthesis Factory SIU-FUNG USTC Pharmaceutical Co., Ltd. Guangdong Kaiping Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd. Приклад 1. Отримання анти-НРV мікроемульсії Змішують разом 20мл 1,2-пропіленгліколю, 15мл Tween-80 і 5мл азона, додають необхідну кількість стерильної дистильованої води для отримання 100мл розчину для зовнішнього застосування. По 10г кожного із бензойної кислоти, саліцилової кислоти, комбінації бензойної кислоти та саліцилової кислоти, р-гідроксибензойної кислоти, 2,3-дигідроксибензойної кислоти, 2,4дигідроксибензойної кислоти, 3,4дигідроксибензойної кислоти, етил ргідроксибензоата, метил 3,4-дигідробензоата, галовой кислоти, додецилгалата, октилгалата, пропілгалата, етилгалата, метилгалата, метил 2,4-дигідробензоата додають в 50мл розчину для зовнішнього застосування, відповідно. Значення рН розчину регулюють до 5,5. Потім відповідну кількість розчину для зовнішнього застосування додають для отримання 100мл мікроемульсії, що містить 10% сполук за даним винаходом або контрольну групу. Приклад 2. Отримання анти-HBV ін'єкційного розчину, який містить пропілгалат Змішують 10г пропілгалату, 8,5г хлориду натрію, 10мл 1,2-пропіленгліколя та 10мл Tween-80 і розчиняють у стерильній дистильованій воді до остаточного об'єму 100мл. Значення рН розчину регулюють до 7,4. Потім розчин фільтрують, інкапсулюють і стерилізують при 100°С протягом 30 хвилин для отримання розчину для ін'єкції пропілгалату. Приклад 3. Отримання шипучих таблеток, що містять етилгалат 0,25г етилгалата, 0,01г поліінозинової кислоти та 0,45г винної кислоти просівають через сито 80меш окремо, перетворюють у м'які матеріали з 95% етанолом, потім просівають через сито 12меш. Отримані вологі частки сушать при 50°С. 0,65г натрію гідрокарбонату, 0,02г декстрину та стерильну дистильовану воду змішують разом для утворення м'якого матеріалу, що потім просівають крізь сито 12меш і сушать при 50°С. Отримані матеріали змішують із сухими частками, отриманими спочатку. Остаточно, до суміші додають стерильну дистильовану воду, нагрівають, змішують із 0,01г PEG6000 (поліетиленгліколь 6000) і виготовляють із неї шипучі таблетки. Приклад 4. Дослідження ліків за допомогою кількісного флуоресцентного PCR аналізу Зразки Мікроемульсію, отриману в Прикладі 1 використовують як дослідні зразки, а як контроль використовують солону воду. Зразки HPV: зразки гострокінцевої кондиломи відбирають у клінічних пацієнтів. Зразки промивають солоною водою від крові. Потім їх подрібнюють у стерильних умовах, змішують із трьома об'ємами солоної води, гомогенізують і зберігають при -40°С до подальшого використання. Таблиця 1 Результати досліду по дослідженню кількісним флуоресцентним PCR аналізом HPV Дослідні сполуки 1 Контроль Бензойна кислота Саліцилова кислота Бензойна кислота та саліцилова кислота Вірус HPV 6/11 (копії/мл) 2 1,45 106 3,60 105 5,50 105 2,90 105 Вірус HPV 16/18 (копії/мл) 3 1,40 105 2,90 104 2,60 104 4,50 104 11 90159 12 Продовження таблиці 1 1 р-Дигідроксибензойна кислота Етил р-дигідроксибензоат 3,4-Дигідроксибензойна кислота Метил 3,4-дигідроксибензоат Галова кислота Додецилгалат Октилгалат Пропілгалат Етилгалат Метилгалат 2,3-Дигідроксибензойна кислота 2,4-Дигідроксибензойна кислота Метил 2,4-дигідроксибензоат Експериментальні способи До 50мкл гомогенату зразка HPV додають 50мкл мікроемульсії кожної дослідної сполуки або 50мкл солоної води. Суміш інкубують у тепловій ванні при 37°С протягом 24 годин. Потім кількість ДНК HPV 6/11 та HPV 16/18 визначають за допомогою діагностичного набору FQ-PCR (кількісна флуоресцентна полімеразна ланцюгова реакція), придбаного від Da An Gene Diagnostics Center. 0,2мл ДНК екстрагують із кожного зразка традиційним способом лужного розщеплення та поміщають у тонкостінну пробірку. У пробірку додають необхідну кількість праймерів, F-PROBE, DNTP (деоксинуклеозидтрифосфат), ДНК полімеразу та буферні розчини. Використовують апарат кількісного флуоресцентного PCR АВІ PRISMTM7700. Реакцію проводять при наступних умовах: початкова денатурація при 93°С протягом 2 хвилин; подальша денатурація та відпал при 93°С протягом 45 секунд і 55°С протягом 120 секунд, цикл повторюють 40 разів. Остаточно, результат аналізують, розраховують на комп'ютері та заносять у Таблицю 1. Результати експерименту Через 24 години після додавання дослідної сполуки ні HPV 6/11, ні HPV 16/18 не виявлено за допомогою FQ-PCR при дослідженні октилгалата, пропілгалата, етилгалата, метилгалата, галової кислоти. Для групи етил р-гідроксибензоата HPV 16/18 також не визначають. Але HPV 16/18 визначають у досліді з р-гідроксибензойною кислотою. Невелику кількість HPV 16/18 визначають у дослідах з метил 2,4-дигідроксибензоатом і метил 3,4-дигідроксибензоатом. Навпроти, великі кількості HPV 6/11 і HPV 16/18 виявляють у контрольній групі та дослідах з бензойною кислотою, саліциловою кислотою та сумішшю бензойної кислоти та саліцилової кислоти, додецилгалатом і 3,4-дигідроксибензойною кислотою. Результати показують, що сполуки за даним винаходом можуть елімінувати HPV ефективно та швидко in vitro. Кількість атомів вуглецю складного ефіру гідроксибензойної кислоти та алкілового спирту повинна бути меншою дванадцяти. 2 7,00 105 8,50 104 1,90 104 8,50 104 0 6,70 104 0 0 0 0 2,30 104 1,60 104 5,20 104 3 1,30 103 0 8,50 104 6,00 102 0 4,90 104 0 0 0 0 3,20 103 4,60 103 2,50 102 Приклад 5. Клінічне застосування складного ефіру гідроксибензойної кислоти при лікуванні гострокінцевої кондиломи Діагностичні стандарти Наступні стандарти взяли з довідника по попередженню та лікуванню венеричних захворювань, друге видання, опубліковано Бюро Охорони здоров'я та попередження епідемії Міністерства Охорони здоров'я республіки Китаю. М'яку гіперплазію або з горбком у формі кольорової капусти, або з горбками іншої форми виявляють на шкірі навколо жіночих полових органів або ануса. Результат досліду з 5% оцтовою кислотою по виявленню білих ділянок був позитивним. Стандарти відбору пацієнтів Пацієнти, вибрані для клінічного дослідження, повинні відповідати вищеописаним стандартам. До того ж, діаметр їх шкірних ушкоджень повинен дорівнювати або бути меншим 1см. Крім того, пацієнти не повинні лікуватися від хвороби за два тижні перед обстеженням. Не вибирають пацієнтів, що мають грибок, трихомоноз, бактеріальну інфекцію або інші ускладнення, хронічні хвороби, серйозні хвороби печінки та нирок, вагітних жінок або жінок у період лактації. Лікування жінок не проводили в період менструації. Експериментальні способи Відбирають 50 підходящих пацієнтів і довільно розподіляють їх на п'ять груп для досліду з ргідроксибензойною кислотою, галовой кислотою, етил р-гідроксибензоатом, пропілгалатом і гелем рекомбинантного інтерферону -2 людини, відповідно. Зразки р-гідроксибензойної кислоти, галовой кислоти, етил р-гідроксибензоата та пропілгалата отримують, як описано в прикладі 1. Уражені області пацієнтів обробляють дослідним зразком три рази на день, вранці, удень і ввечері. Зразки наносять на горбки, і пацієнти повинні залишити оброблені області відкритими та не рухатися протягом 20 хвилин. Критерій ефекту лікування: Час обстеження: 8 днів. Пацієнти, які не вилікувались за 8 днів, продовжують застосовувати дослідні зразки ще 12 тижнів, а їх прогноз триває протягом 12-тижневого періоду. 13 90159 14 Предмети обстеження: розташування, форкінцевої кондиломи, необхідно застосовувати, ма, розмір і число горбків обережно обстежують і щонайменше, 4 тижня, що б видалити горбки. відзначають перед лікуванням. Статистичний аналіз показав, що ефект етил р"Вилікування": всі ушкодження шкіри зникли. гідроксибензоата та пропілгалату був значно ви"Очевидний ефект": більш ніж 70% ушкощий, ніж ефект р-гідроксибензойної кислоти та джень шкіри зникли. галовой кислоти. При порівнянні з гелем реком"Поліпшення": більш ніж 30% ушкоджень шкібинантного інтерферону -2 людини етил рри зникли. гідроксибензоат і пропілгалат проявляють більш "Відсутність ефекту": менш ніж 30% ушкоявний ефект. Крім того, сполуки за даним винаджень шкіри зникли або первісні ушкодження ходом не викликають ніяких очевидних подразшкіри не змінилися або навіть збільшилися. нень шкіри. Єдиний побічний ефект полягав тільРезультати показали, що гель рекомбинантки у тому, що деякі пацієнти можуть епізодично ного інтерферону -2 людини, який вважається переживати відчуття печіння при застосуванні кращим лікарським засобом при лікуванні гостросполук. Таблиця 2 Результати клінічного застосування сполук для лікування гострокінцевої кондиломи Вилікування 1-4 дні 5-8 днів 2 7 1 Очевидний ефект 1-4 дні 5-8 днів 3 1 2 5 2 Поліпшення Галова кислота Пропілгалат р-Гідрокси-бензойна кислота Етил р-гідроксибензоат 6 2 Рекомбинантний інтерферон Самий короткий період лікування - 4 тижні -2 людини, гель Приклад 6. Ефект інгібування аналогу складного ефіру гідроксибензойної кислоти на секрецію HBsAg за допомогою лінії клітин гепатиту В 2.2.15 Матеріали експерименту Лінія клітини гепатиту В 2.2.15, транфікована за допомогою HBV ДНК (отримана від Institute of Biochemistry and Cell Biology of Shanghai Institute for Biological Sciences or the National Center for Drug Screening) і використовувана як модель клітини для вивчення анти-HBV лікарських сполук (Cм. Chinese Journal Of Integrated Traditional and Western Medicine on Liver Diseases, 2004, 14(3): 158). Культуральне середовище клітин DMEM (GIBCO Company), ембріональна сироватка бика (Hangzhou Siji Qing Biochemical Manufacturer), G418 (GIBCO Company), 3-(4,5-диметилтіазол-2ил)-2,5-дифенілтетразолійбромид (Sigma), діагностичний комплект HBsAg и HBeAg (Shanghai Kehua Bio-engineering Co., Ltd). Експериментальні способи За результатами досліджень токсичності аналоги складного ефіру гідроксибензойної кислоти, наведені в Таблиці 3, нижче, розчиняють у Відсутність ефекту 4 2 3 суміші, що містить 20мл 1,2-пропіленгліколю та 15мл Tween-80, і розбавляють стерильною солоною водою до 2мкмоль/мл дослідної сполуки. Потім його змішують із культуральним середовищем клітин у рівному об'ємі для отримання розчину, що містить 1мкмоль/мл дослідної сполуки. Клітини при концентрації 1 105 клітин на мілілітр інокулюють в 24-лунковий планшет при 1мл/лунка. Супернатант із суміші клітинної культури збирають через три дні для доліду. Результати ступенів інгібування HBsAg і HBeAg наведені в Таблиці 3. Результати експерименту Галова кислота, пропілгалат, 3,4дигідроксибензойна кислота, етил 3,4дигідроксибензоат проявляли інгібуючий ефект на секрецію HBsAg і HBeAg по клітинах лінії 2.2.15. Інгібування пропілгалатом і етил 3,4дигідроксибензоатом було більш ефективним у порівнянні з галовою кислотою та 3,4дигідроксибензойною кислотою. Таблиця 3 Ефект гідроксибензойної кислоти і її складного ефіру на секрецію HBsAg і HBeAg по клітинах лінії 2.2.15 Групи Контроль Галова кислота Пропілгалат 3,4-Дигідроксибензойна кислота Етил 3,4-дигідроксибензоат HBsAg Ступінь інгібування 0 8,83% 18,83% 9,81% 14,20% Значення Ρ