Спосіб інгібування естрогензалежних пухлин з використанням стероїдних сульфатовмісних інгібіторів

1 Способ ингибирования аісгивности стероидсульфатазы у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение указанному субъекту ингибирующее активность стероид-сульфатазы количество соединения, включающего кольцевую систему и сульфаматную группу формулы \ N д О где Ri и R2 независимо выбраны из Н, алкила, алкенила, циклоалкила и арила или вместе они представляют алкилен, необязательно содержащий один или несколько гетероатомов или групп в алкиленовой цепи, и соединение является ингибитором фермента, обладающего активностью стероидсульфатазы (ЕС 3 1 6 2) причем, если бы сульфаматная группа соединения была бы замещена сульфатной группой для образования сульфата и инкубирована с ферментом стероид-сульфатазы (ЕС 3 1 6 2) при рН 7,4 и температуре 37°С, оно бы обеспечило значение К т менее 50 мкМ 2 Способ по п 1, отличающийся тем, что соединением является соединение формулы .0 \ / N R2 вш S~ О О полицию!, где Ri и R2 - как они определены в п 1 3 Способ по п 2, отличающийся тем, что полицикл является остатком полициклического спирта 4 Способ по п 2 или 3, отличающийся тем, что полицикл является остатком стерина 5 Способ по п 4, отличающийся тем, что стерином является 3-стерин 6 Способ по п 4 или 5, отличающийся тем, что стерин выбирают из группы, состоящей из эстрона, дегидроэпиандростеронов, замещенных эстронов и замещенных дегидроэпиандростеронов 7 Способ по любому из пунктов 1-6, отличающийся тем, что сульфаматная группа присоединена к кольцевой системе 8 Способ по любому из пунктов 1-7, отличающийся тем, что Ri и R2 независимо выбраны из Н или C-i-C-io алкила 9 Способ по любому из пунктов 1-8, отличающийся тем, что Ri и R2 независимо выбраны из Н или С1-С5 алкила 10 Способ по любому из пунктов 1-9, отличающийся тем, что Ri и R2 независимо выбраны из Н или метила 11 Способ по любому из пунктов 1-10, отличающийся тем, что соединением является соединение, выбранное из эстрон-3-сульфамата, эстрон3-г\І,І\І-диметилсульфамата, эстрон-З-Ы-монометилсульфамата 12 Способ по любому из пунктов 1-11, отличающийся тем, что по меньшей мере один из Ri и R2 является Н 13 Способ по любому из пунктов 1-12, отличающийся тем, что Ri является Н и R2 является Н 14 Способ по любому из пунктов 1-13, отличающийся тем, что соединением является эфир сульфаминовой кислоты и пол и циклического спирта или N-алкил, N-алкенил, N-циклоалкил или N-арилпроизводное указанного эфира, или фармацевтически приемлемая соль любого из указанных эфиров, или N-замещенных эфиров, спиртовой остаток эфира является остатком полициклического спирта, сульфат которого является гидролизуемым ферментом, обладающим активностью стероид-сульфатазы (ЕС 3 1 6 2) о РГ Ю 00 5 41875 Настоящее изобретение касается новых соединений, используемых в качестве ингибиторов стероид-сульфатазы, и содержащих их фармацевтических составов Известно, что предшественники стероидов или прогормоны, имеющие сульфатную группу в 3-положении стероидного ядра, имеют большое значение как промежуточные продукты в метаболизме стероидов в организме человека Эстронсульфат и дегидроэпиандростерон-сульфат (ДЭС) например, играют, как известно, важную роль как промежуточные продукты в производстве эстрогенов, таких как эстрон и эстрадиол, в теле человека В частности известно, что эстронсульфат, например, представляет собой один из основных циркулирующих предшественников эстрогена, особенно у женщин постклимактерического периода, а активность эстрон-сульфатазы при опухолях груди в 100-1000 раз больше, чем других ферментов, участвующих в образовании эстрогена (James и сотр Steroids, 50 269-279(1987)) Другие эстрогены, например, эстрон и эстрадиол, особенно при их перепроизводстве, также показаны при различных заболеваниях например, при раке груди, см Breast Cancer Treatment and Prognosis RA Stall, стр 156-172 Blackwell Scientific Publications (1986) и контроль за производством эстрогенов является специфической целью многих направлений противораковой терапии, в том числе химиотерапии и хирургического подхода, например, овариэктомии (удаления яичников) и адреналэктомии (резекции надпочечника) Что касается эндокринной терапии, то все усилия направлены пока еще только на концентрирование ингибиторов ароматазы, т е соединений, способных ингибировать активность ароматазы, активность которой как показывает схема метаболизма эстрогена (фиг 1), состоит в превращении андрогенов, например, андростендиона и тестостерона в эстерон и эстрадиол соответственно В недавно опубликованной Международной заявке W091/13083 предлагалось воздействовать на другой участок метаболического пути эстрогена, или скорее на два различных участка, иными словами на превращение сульфата ДЭС и эстронсульфата в ДЭС и эстрон соответственно под влиянием активности стероид-сульфатазы при использовании 3-моноалкилтиофосфонат-стероидэфиров как ингибитора стероид-сульфатазы, в частности эстрон-3-монометилтиофосфоната 1 Целью настоящего изобретения является создание новых соединений, способных ингибировать активность стероид-сульфатазы in vitro и in vivo 2 Целью настоящего изобретения является также создание новых соединений, обладающих высокой активностью в качестве ингибиторов стероид-сульфатазы in vitro и in vivo 3 Кроме того целью изобретения является создание фармацевтической композиции, эффективной припечений эстрогензависимых опухолей 4 Целью изобретения также является создание фармацевтической композиции, эффективной при лечении рака груди 5 Далее целью изобретения также является разработка способа лечения эстрогензависимых опухолей у млекопитающих, в частности у человека 6 И, наконец, целью изобретения является разработка способа лечения рака груди у млекопитающих, в частности у женщин Настоящее изобретение основывается на открытии новых соединений, обладающих ингибирующей активностью стероид-сульфатазы, в ряде случаев исключительно высоким уровнем активности Эти соединения являются эфирами сульфаминовой кислоты и пол и циклических спиртов, сульфат которых представляет собой субстрат для ферментов, обладающих активностью стероид-сульфатазы (ЕС 3 1 6 2), N-алкил- и N-арилпроизводные этих эфиров сульфаминовой кислоты и их фармацевтически приемлемых солей Соединения формулы (I) О 1\ N—S—О' полицикл (I) О в которой Ri и R2 каждый независимо друг от друга представляет собой Н, алкил, циклоалкил, алкенил и арил или вместе они представляют собой алкилен, необязательно содержащий один или несколько гетеро-атомов или групп в цепи алкилена, и группа -О-полициклической структуры представляет собой остаток полициклического спирта, сульфат которого представляет собой субстрат для ферментов, обладающих активностью стероид-сульфатазы (ЕС 3 1 6 2) Что касается спиртов, сульфаты которых являются субстратом для ферментов, обладающих активностью стероид-сульфатазы, то речь идет о полициклических спиртах, сульфаты которых, т е производные формулы при выдерживании с сте ро ид-сульфата зо й ЕС 3 1 6 2 при рН 7 4 и температуре 37°С дают значение К т менее 50 мкмолей Активность заявленных соединений как ингибиторов активности стероид-сульфатазы иллюстрируется следующими рисунками На фиг 1 представлена схема метаболических путей, ферментов и стероидных промежуточных продуктов, участвующих в производстве эстродиола in vivo На фиг 2 представлена гистограмма зависимого от дозы ингибирующего действия эстрон-3сульфамата на активность стероид-сульфатазы в клетках MCF-7 in vitro На фиг 3 представлено зависимое от дозы ингибирующее действие эстрон-3-г\1,г\1-диметилсульфамата на активность стероид-сульфатазы в клетках MCF человека in vitro На фиг 4 дано сравнение кривых реагирования для эстрон-3-сульфамата и 3crpoH-3-N,N 41875 диметилсульфамата на аісгивность стероид-сульфатазы в MCF-клетках человека in vitro На фиг 5 представлено зависимое от дозы ингибирующее действие эстрон-3-сульфамата вместе с ІСбо-значением (концентрация, необходимая для 50% ингибирования) на активность стероид-сул ьфатазы в плацентарных микросомах Одним из аспектов изобретения являются новые соединения эфира сульфаминовой кислоты и полициклических спиртов Под полициклическими спиртами имеются ввиду такие спирты, сульфаты которых являются субстратом для ферментов, обладающих активностью стероид-сул ьфатазы, а также их N-алкил, N-циклоалкил, N-алкенил и N-арил-производные Эти соединения соответствуют вышеприведенной формуле I Предпочтительно, если полициклическая группа содержит, включая все заместители максимум около 40, обычно же не более 30 заместителей Предпочтительными полициклами можно считать стероидные циклические структуры, так называемый циклопентанофенантреновый скелет Предпочтительно, если сульфамил- или замещенная сульфамил-группа находится в этом скелете в 3-положении, т е речь идет о соединениях формулы II 1\ N—S—О О в которой Ri и F 2 имеют указанные выше значе? ния, а циклическая система ABCD представляет собой замещенное или незамещенное, насыщенное или ненасыщенное стероидное ядро, предпочтительно эстрон или дегидроэпиандростерон Другие приемлемые системы стероидных колец представляют собой замещенные эстроны, а именно 2-ОН-эстрон, 2-метокси-эстрон, 4-ОН-эстрон, ба-ОН-эстрон, 7а-ОН-эстрон, 16а-ОН-эстрон, 1бр-ОН-эстрон, эстрадиолы и замещенные эстрадиолы, а именно 2-ОН-17р-эстрадиол, 2-метокси-17р-эстрадиол, 4-ОН-17р-эстрадиол, 6а-ОН-17р-эстрадиол, 7а-ОН-17р-эстрадиол, 16а-ОН-17а-эстрадиол, 1брОН-17а-эстрадиол, 1 бр-ОН-17р-эстрадиол, 17аэстрадиол, 17р-эстрадиол, 17а-этинил-17р-эстрадиол, эстриолы и замещенные эстриолы, а именно эстриол, 2-ОН-эстриол, 2-метокси-эстриол, 4-ОН-эстриол, ба-ОН-эстриол, 7а-ОН-эстриол, замещенные дегидроэпиандростероны, а именно ба-ОН-дегидроэпиандростерон, 7а-ОН-дегидроэпиандростерон, 16а-ОН-дегидроэпиандростерон, 1 бр-ОН-дегидроэпиандростерон Циклическая стероидная система ABCD может содержать различные немешающие заместители В частности, циклическая система ABCD может содержать один или несколько гидрокси, ал кил, особенно низший алкил-(Сі є)-заместителей, например, метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил, и других изомеров пентила, а также н-гексил, и другие изомеры гексила, алкокси, особенно низшие (Сі є)-алкокси-заместители, например метокси, этокси, пропокси и т д , алкинил, например, этинил или галоген, например, фтор Приемлемые нестероидные циклические системы включают в себя диэтилстильбоэстрол, стильбоэстрол и другие циклические системы, при условии, что сульфаты имеют Кт-значение менее 50 мкмолей со стероид-сульфата зой ЕС 3 1 6 2 Если представляемые изобретением замещенные, N-замещенные соединения содержат один или два N-алкил, N-алкенил, N-циклоалкил или N-арил-заместителя, предпочтительно, если они или каждый из них содержит максимум 10 Сатомов В случае, если Ri и/или F 2 алкил, пред? почтительно, выбирать такие значения, при которых Ri и R2 каждый независимо друг от друга выбирается из числа низших алкильных групп с 1-5 С-атомами, т е из числа метила, этила, пропила и т д Предпочтительно, если Ri и R2 оба представляют собой метил В случае, если Ri и/или F?2арил, обычно - фенил и толил (-РпСНз, о-, м- пара) Если Ri и R2 представляют собой циклоалкил, обычно это - циклопропил, циклопентил, циклогексил и т д Соединенные вместе Ri и R2 представляют собой группу алкилена, при условии, что кольцо состоит из 4-6 С-атомов, необязательно разрываемых одним или несколькими гетеро-атомами или группами, например, -О- или -NH- с получением 5-, 6- или 7-членного гетероцикла например, морфолина, пирролидина или пиперидина Под алкильными, циклоалкильными, алкенильными и арильными группами следует иметь ввиду группы, содержащие в качестве заместителей в них одну или несколько групп, которые не оказывают влияния на ингибирующую активность сульфатазы в рассматриваемых соединениях Немешающими заместителями можно считать гидрокси, амино, гало, алкокси, арил и алкил Более предпочтительны соединения формул (III) и (IV) О О N—S—О О О N—S—О О 41875 в которых Ri и F 2 представляют собой Сі 5-ал? кил, т е эстрон-3-сульфамат и дегидроэпиандростерон-3-сульфамат и их N-(Ci б)-алкил-производные, особенно диметил-производные Ri= R2-CH3 R1R2NSO2CI /NaH Представляемые изобретением эфиры сульфаминовой кислоты получают путем реакции полициклического спирта, например, эстрона или дегидроэпиандростерона с сульфамилхлорид ом R1R2NSO2CI, т е в соответствии со схемой, представленной ниже N—S—О О эстрон В соответствии с указанной схемой реакцию проводят следующим образом Нитрат натрия и сульфамилхлорид добавляют при перемешивании в раствор эстрона в безводном диметилформамиде при 0°С В последующем реакцию проводят при нагревании до комнатной температуры еще в течение 24 часов Реакционную смесь выливают в холодный насыщенный раствор бикарбоната натрия и образовавшуюся водную фазу экстрагируют дихлорметаном Объединенный органический экстракт сушат над безводным сульфатом магния После фильтрования и последующего выпаривания растворителя в вакууме и совыпаривания с толуолом получают необработанный остаток, который в дальнейшем очищают с помощью флеш-хроматографии В случае необходимости функциональные группы в полициклическом спирте (стероле) могут быть защищены известным способом с последующим удалением защищающих групп или группы в конце реакции Для фармацевтического применения ингибиторы стероид-сульфатазы, представляемые настоящим изобретением, могут быть приготовлены согласно известным опробованным традиционным фармацевтическим методикам с использованием традиционных фармацевтических носителей, наполнителей, разбавителей и т д , обычно рекомендуемых для парентерального применения Средняя эффективная доза в зависимости от индивидуальной активности соединений, рассматриваемых в настоящем изобретении, и в расчете на средний вес тела пациента (70 кг) колеблется в пределах от 100 до 800 мг/день Обычная доза для предпочтительных или более активных соединений составляет от 200 до 800 мг/день, более предпочтительно 200-500 мг/день, еще более предпочтительно от 200 до 250 мг/день Лекарство можно принимать в виде однократной дозы, дробной дозы или же многократных мелких доз в течение нескольких дней Для орального применения лекарственные средства могут быть приготовлены в виде таблеток, капсул, растворов или суспензий, содержащих от 100 до 500 мг соединения на стандартную дозу Предпочтительно, если для парентерального применения соединения будут приготовлены при использовании пригодных для парентерального введения носителей и если однократ ная дневная доза будет содержать от 200 до 800 мг, предпочтительно от 200-500, более предпочтительно от 200 до 250 мг указанных соединений Однако такие эффективные дневные дозы будут весьма значительно зависеть от активности присущей активному ингредиенту и в значительной степени должны определяться весом тела пациента, что всегда должно быть учтено лечащим врачом Для так называемого "частичного" применения, рассматривается вопрос, что представляемые изобретением ингибиторы стероид-сульфатазы могут быть использованы для комбинированного лечения, либо в сочетании с другим ингибитором сульфатазы, либо например, в комбинации с ингибитором ароматазы, в частности с 4-гидроксиандростендионом (4-ОНА) Более подробно предмет изобретения иллюстрируется приведенными ниже примерами и результатами проведенных испытаний Пример 1. Получение эстрон-3-сульфамата Гидрид натрия (60% дисперсия, 2 экв) и сульфамоилхлорид (2 экв) добавляют при перемешивании в раствор эстрона (1 экв) в безводном диметилформамиде при 0°С Затем реакцию проводят при нагревании до комнатной температуры, продолжая перемешивание, еще в течение 24 часов Реакционную смесь выливают в холодный насыщенный раствор бикарбоната натрия и образовавшуюся водную фазу экстрагируют дихлорметаном Объединенный органический экстракт сушат над безводным сульфатом магния После фильтрования с последующим выпариванием растворителя в вакууме и совыпариванием с толуолом получают необработанный продукт, который затем очищают с помощью флеш-хроматографии Анализ показывает следующие результаты 51Н (270 МГц, CD3OD) 0,91 (с , ЗН , Ci8-Me), 1,40-2,55 (серии от м , 13Н), 2,90-2,92 (м , 2Н), 7,04 (шир д , и=10,44Гц), 7,33 (шир д , 1Н, J = 8,42 Гц) 513С (67,8 МГц, CD3OD) 14,53 (кв , Ci8-Me), 22,80 (т), 27,24 (т), 27,73 (т), 30,68 (т), 33,05 (т), 37,01 (т), 39,76 (д), 45,73 (с, Сі 8 ), 51,86 (д), 120,76 (д), 123,54 (д), 127,89 (д), 139,83 (с), 150,27 (с), 273,87 (с, С=О) m/z (%) 349(9) (m+), 270(100), 233(26), 185(43), 172(31), 159(21), 146(36), 91(33), 69(37), 57(73), 43(56), 29(24) 41875 Данные микроанализа С Н N Рассчитано, % 61,87 6,63 4,01 Найдено, % 61,90 6,58 3,95 Пример 2. Получение эстрон-З-^метилсульфамата Повторяют методику, описанную в примере 1, но вместо сульфамоил хлорида берут такое же количество N-метилсульфамоилхлорида При анализе получают следующие результаты 51Н (270 МГц, CDCI3) 0,91 (с, ЗН, Ci8-Me), 1,28-1,68 (м , 6Н), 1,93-2,60 (серия от м, 7Н), 2,90-2,95 (м , 2Н), 2,94 (д , ЗН, J = 5,13 Гц, MeN), 4,68-4,71 (шир м изменяемый, 1H-NH), 7,02-7,07 (м , 2Н), 7,26-7,32 (м , 1Н) m/z (%) 364(М+Н)+ Пример 3. Получение эстрон-З-^^диметилсульфамата Повторяют методику, описанную в примере 1, но вместо сульфамоилхлорида берут такое же количество N.N-диметилсульфамоилхлорида При анализе получают следующие результаты 51Н (270 МГц, CDCI3) 0,92 (с, ЗН, Ci8-Me), 1,39-1,75 (м , 5Н), 1,95-2,60 (серия от м , 6Н), 2,82 (с, ЗН, MeN-), 2,96-3,00 (м , 4Н), 2,98 (с, ЗН, MeN-), 7,04 (шир д , 2Н, J = 7,69 Гц), 7,29 (шир д , 1Н, J =7,88 Гц) m/z (%) 377(М)+ Данные микроанализа С Н N Рассчитано, % 63,63 7,21 3,71 Найдено, % 63,50 7,23 3,60 Пример 4. Ингибирование стероид-сульфатазной активности в MCF7-meTKax под действием эстрон-3сульфамата Под стероид-сул ьфатазой следует понимать стерильную сульфатазу ЕС 3 1 6 2 Стероид-сульфатазную активность измеряют in vitro, используя для этой цели интактные MCF-7 раковые клетки груди человека Гормонозависимую линию клеток широко используют для регуляции роста раковых клеток груди человека Она отличается ярко выраженной стероид-сульфатазной активностью (Maclndoe и сотр Endocrinology, 123 1281-1287(1988) Purohit и Reed Int J Cancer 50 901-905 (1992)) и может быть получена в США из Американской коллекции клеточных культур, а в Великобритании, например, из Королевского фонда раковых исследований Клетки обрабатывают в минимальной эссенциальной среде (Flow Laboratories, Irwme, Шотландия), содержащей 20 ммолей HEPES, 5% сыворотки новорожденных крупного рогатого скота, 2 ммолей глютамина, аминокислоты и 0,075% бикарбоната натрия До 30 емкостей с образцами клеточных культур (25 см2) засевают примерно 2x105 клеток на каждую емкость, используя указанную выше среду Клетки выращивают до 80% слияний, среду меняют каждый третий день Интактные монослои клеток MCF-7 в трех вариантах по 25 см 2 клеточной культуры в каждой емкости промывают сбалансированным солевым раствором Эрла (EBSS из ICN Flow, High Wycombe, Великобритания) и выдерживают в течение 3-4 часов при 37° с 5 пмолями (7x105 число распадов в минуту) (6,7- Н)-эстрон-3-сульфата) удельная активность 60 кюри/ммоль из Ядерного общества Новая Англия, Бостон, Массачусетс, США) в несодержащей сыворотки минимальной среде (2,5 мл) вместе с эстрон-3-сульфаматом (11 концентраций 0, 1фМ, 0,01 пМ, 0,1 пМ, 0,01 нМ, 0,1 нМ, 1 нМ, 0,01 мкМ, 0,1 мкМ, 1 мкМ) По окончании выдерживания каждую емкость охлаждают и среду пипеткой вводят в отдельные трубки, содержащие (14С/эстрон) 7x103 распадов/в мин Удельная активность 97 кюри/ммоль получена из Эмерсгеймского Международного радиохимического центра Amersham, Великобритания) Смесь встряхивают в течение 30 секунд с толуолом (5 мл) Эксперименты показывают, что > 90% (14С) эстрона и 90% 14 С-эстрона и < 0,1% 3Н-эстрон-3-сульфата удаляются из водной фазы при подобной обработке Часть (2 мл) органической фазы удаляют, упаривают и определяют содержание 3Н и 14С в остатке, используя метод сцинтилляционной спектрометрии Массу гидролизованного эстрон-3-сульфамата определяют путем расчетов на основании значения 3Н (с поправкой на объем среды и используемую органическую фазу и для выделения 14Сэстрона) и удельной активности субстрата Результаты, полученные для эстрон-3-сульфамата, представлены в таблице 4 и на фиг 5 Результаты определения стероид-сульфатазной активности даны в таблице 4 в виде общего продукта (эстрон+эстрадиол), образовавшегося в ходе инкубационного периода (как функция времени) и процентного уменьшения (ингибирования) в сравнении с контрольной группой без использования эстрон-3-сульфамата Результаты, полученные для стероид-сульфатазной активности, представлены на фиг 4 в виде процентного уменьшения (ингибирования) по отношению к контрольной группе при использовании ICso-значения (те концентрации эстрон-3-сульфамата, которая дает 50% ингибирование в сравнении с контрольной группой) в 0,07 мкмолей Пример 8. Ингибирование стероид-сульфатазной активности в препаратах, приготовленных из микросом печени, выделенных из крыс, обработанных подкожно эстрон-3-сульфаматом Четырем группам самок крыс породы Wistar (весом около 80-110 г) вводят подкожно 100 мкм инъекции (один раз в день в течение 7 дней, жидкий носитель пропиленгликоль) следующих веществ пропиленгликоль (контрольная группа) эстрон-3-сульфа мат (10 мг/кг/день) эстрон-3-сульфат (10 мг/кг/день) (контрольный субстрат) эстрон-3-сульфат (10 мг/кг/день/+эстрон-3сульфамат (10 мг/кг) день) На восьмой день крыс забивают и при препарировании выделяют печень Микросомные составы печени получают в соответствии с методиками, описанными в примере 6, за исключением того, что в качестве источника ткани используют печень крыс и проводят двойной эксперимент по определению стероид-сульфатазной активности, используя (6,7-3Н)-эстрон-3-сульфат и (7-3Н) дегидроандростерон-3-сульфат в качестве раздельных субстратов Результаты определения стероид-сульфатазной активности представлены в таблице 5 и выражены в виде общего продукта, образующегося в ходе инкубационного периода в виде средних значений + стандартное отклонение Результаты инкубации тканей, полученные в группах крыс, обработанных эстрон-3-сульфаматом, также представлены в виде процентного уменьшения (ингибирования) активности стероид-сульфатазной активности в сравнении с соответствующими данными для контрольной группы На фиг 1 приведен метаболизм ферментов в стероидогенезе 1 -дегидроэпиандростеронсуль 41875 фат, 2-дегидроэпиандростерон, 3-андростендион, 4-дигидротестостерон, 5-тестостерон, 6-эстрон, 7эстронсульфат, 8-эстрадиол Условные обозначения к фиг 1 1-сульфатаза, 2-ароматаза, 3-дегидрогеназа, 4-5-редуктаза Фиг 2 1 - полученный продукт (фмоль/20 час/106 клеток), 2-эстрон-З-сульфамат Фиг 3 1 - полученный продукт (фмоль/20 час/106 клеток), 2-(эстрон-3-г\1,г\1-диметилсульфамат) Фиг 4 %-ингибирования, 1-эстрон, -3-сульфамат, 2-эстрон-3-г\1,г\1-диметилсульфамат) Фиг 5 1-% ингибирования, 2-(эстрон-3сульфамат/мкмоль) Таблица 1 Стероид-сульфатазная активность в MCF-7 клетках в присутствии эстрон-3-сульфамата Концентрация эстрон3-сульфамата Стероид-сульфатазная активность* (фмоль/20 час/108 клеток) % уменьшения по сравнению с контрольной группой (% ингибирования) 0 (контроль) 319,7+18,5 1fM 353,3+39,0 0,01 рМ 362,3+21,2 0,1 рМ 330,7+17,8 1 рМ 321,8+6,2 0,01 пМ 265,1+11,0* 17,2% 0,1 пМ 124,8+12,4*** 60,9% 1 пМ 16,49+4,7*** 95,0% 0,01 цМ 3,92+0,4*** 98,8% 0,1 цМ 2,53+1,1*** 99,2% 1 цМ 1,68+0,7*** 99,5% х среднее значение +1 стандартное п=3 *р < 0,05 ***р < 0,001 отклонение, Таблица 2 Стероид-сульфатазная активность в MCF-7 клетках в присутствии эстрон-3-г\1,г\1-диметилсульфамата Концентрация эстрон3-М,М-диметилсульфамата Стероид-сульфатазная активность* (фмоль/20 час/108 клеток) % уменьшения в сравнении с контрольной группой (% ингибирования) 0 (контроль) 82,63+3,6 0,001 цМ 68,33+3,2** 17,3% 0,01 цМ 46,0+4,9*** 44,3% 0,1 цМ 17,43+4,3*** 78,9% 1 цМ 11,89+3,7*** 85,6% *среднее значение + стандартное отклонение п=3 **р < 0,01 ***р < 0,001 Таблица 3 Стероид-сульфатазная активность в МСF-7-клетках, предварительно обработанных эстрон-3-сульфаматом Предварительная обработка Стероид-сульфатазная 8 активность* (фмоль/20 час) 10 клеток % уменьшения в сравнении с контрольной группой (% ингибирования) Контрольная группа 65,4+6,4 Эстрон-3-сульфамат 1,7+0,2*** 97,4% Эстрон-3-г\1,г\1-диметилсульфамат 53,1+3,4* 18,8% х среднее значение +_1 стандартное отклонение, п = 3 *р < 0,05 ***р < 0,001 41875 Таблица 4 Стероид-сульфатазная активность в микросомах плаценты в присутствии эстрон-3-сульфамата Концентрация эстронсульфамата % уменьшения в сравнении с контрольной группой (% ингибирования) 0 (контроль) Стероид-сульфатазная активность* (пмоль/час/0,1 мг протеина) 768,6 0,05 цМ 430,4 44,0% 0,1 цМ 305,9 60,2% 0,2 цМ 140,0 81,8% 0,4 цМ 83,3 89,2% 0,6 цМ 61,8 92,0% 0,8 цМ 49,2 93,6% 51,6 93,3% 1,0 цМ среднее значение двух определении Таблица 5 Стероид-сульфатазная активность в микросомных препаратах печени крыс, обработанных подкожно эстрон-3-сульфаматом Обработанная группа Анализ субстрата Активность стероидсульфатазы* (нмоль/30 мин) 200 мкг протеина % уменьшения в сравнении с контрольной группой 20,95 + 0,2 (контрольная группа) (жидкий наполнитель) (Ei-SO3NH2)Ei-S 0,34 + 0,1*** (жидкий наполнитель) DHA-S Ei-SO3NH2 DHA-S 1,73 + 0,4 0,1 +0,01*** 20,6 + 0,4 0,21 +0,03** 1,71+0,1 0,09 + 0,01*** контрольная группа 98,4% контрольная группа op op E1-S+E1-SO3NH2 LJJ LJJ контрольная группа (Ei-S) контрольная группа (Ei-S) DHA-S E1-S+E1-SO3NH2 DHA-S *среднее значение +1 стандартное отклонение, п = 3 ***р < 0,001 Ei-S- = эстрон-3-сульфамат DHA-S = дегидроэпиандростерон-3-сульфат E1-SO3NH2 = эстрон-3-г\1,г\1-диметилсульфамат 94,2% 99,0% 94,7% 41875 СУЛЬФАТ ДЕПДРОЕПЇАНДР0СТЕРОНУ ДЕПДРОЕПІАНДРОСТЕРОН АНДРОСТЕНДІОН 5а-ДЕПДР0ТЕСТ0СТЕР0Н ТЕСТОСТЕРОН ЕСТРОН ^ = Ь С У Л Ь Ф А Т ЕСТРОНУ t Г ЕСТРАДІОЛ КЛЮЧОВІ ФЕРМЕНТИ У СТЕРОЩОГЕНЕЗі 1. СУЛЬФАТАЗА 2. АРОМАТАЗА 3. ДЕГІДРОГЕНАЗА 4 5а-РЕДУКГАЗА Фиг. 1 400 -і 400 350 350 300 300 17.1% 250 ё 20 250 °* Я 150 Я 50 - 150 100 а: О - 200 61.0% - 100 - 50 94.8Г. 98.8% 0.01 рМ О.ірМ ІрМ 0.01ПМ О.ШМ [Есгром-З-сульфамат] Фиг. 2 ШМ 99.2% O.t|tM 99.5% % Інгібування О О О О О О О О Одержаний продукт (fmol/20 год./106 клітин) О О О о о СЛ о о о ш о о ю о о © о о є о S "о. о Є 6 Z Z р Ь 0Э О1 І •є ш сі р CS х: т: І— і о 1 —ь го о о і 1 о о О1 о 1 1 t о о о о 1 (0 о 41875 0.1 0.2 [EcTpQH-3-сульфамат] (pM) Фиг. 5 Тираж 50 екз Відкрите акціонерне товариство «Патент» Україна, 88000, м Ужгород, вул Гагаріна, 101 (03122) 3-72-89 (03122) 2-57-03 11