Компонент в як агент, що рубцює

1 Применение Компонента В в качестве рубцу ю ще го агента 2 Применение Компонента В в качестве агента для получения лекарственного препарата, пригодного для лечения ран, язв и других травматических повреждений тканей тела, заживление кото рых сопровождается рубцеванием 3 Применение по пп 1 или 2, где лекарственный препарат пригоден для лечения хирургических ран 4 Фармацевтическая композиция, пригодная в качестве рубцующего агента и находящаяся в подходящей форме для применения в качестве рубцующего агента, содержащая Компонент В в качестве активного ингредиента вместе с фармацевтически приемлемым эксципиентом 5 Способ лечения ран, язв и других травматических повреждений тканей тела, заживление которых сопровождается рубцеванием, включающий введение эффективного количества Компонента В вместе с фармацевтически приемлемым эксципиентом О Настоящее изобретение относится к использованию Компонента В в качестве рубцующего агента, в частности, в лечении ран, язв и других травматических повреждений любых тканей тела Компонент В представляет собой белок, состоящий из 81 аминокислоты, первоначально выделенный из мочи человека Человеческий ген был клонирован и экспрессирован в СНО клетках, как рекомбинантный человеческий Компонент В Молекула имеет молекулярный вес около 8,9кДа и подробно описана в WO 94/14259 Такой белок содержит десять цистеиновых остатков и несет основной элемент, типичный для ферментов сериновой протеазы Проверка последовательности в базе данных белков показала некоторое сходство Компонента В с известными молекулами, такими как CD59, рецептор урокиназы (uPA-R) и некоторыми ядовитыми токсинами Сведения, полученные Заявителем из изучения распределения Компонента В в органах и тканях мышей показывали, что глаз, легкое и кожа являются теми участками, в которых в основном экспрессирована РНК Компонента В Обнаружено, что в тканях человека Компонент В широко экс прессирован в сквамозном эпителии и слизистой, например, в коже, пищеводе и экзоцервиксе, как определено иммуногистохимическими методами Наконец, обнаружено, что EGF индуцирует экспрессию РНК Компонента В в А 431 клетках сквамозного эпидермиса человека Есть сообщения, что компонент В обладает противовоспалительной, антикоагулирующей и противоопухолевой активностью, так же как и активностью в качестве ингибитора связывания TGF-a со своим рецептором В настоящее время заявитель обнаружил, что Компонент В также пригоден в качестве рубцующего агента, и что следовательно он пригоден, в частности, для лечения ран, язв и других травматических повреждений любых тканей тела Следовательно, основным предметом настоящего изобретения является использование Компонента В для получения фармацевтической композиции, пригодной в качестве рубцующего агента, в частности в лечении ран, язв и других травматических повреждений любых тканей тела Еще одним объектом данного изобретения (О (О (О ю 56166 является способ лечения ран, язв и других травматических повреждений тканей тела, включающий применение эффективного количества Компонента В вместе с фармацевтически приемлемым эксципиентом Другим аспектом изобретения являются фармацевтические композиции, полученные так, как описано выше Что касается способа получения Компонента В и его аминокислотной последовательности, то они раскрываются в WO 94/14259 Активный ингредиент может вводиться оральным, внутривенным, внутримышечным или подкожным путем, или применяться местно Данное изобретение включает и другие пути введения, позволяющие создать в крови желаемый уровень соответствующих ингредиентов Для лечения человека предпочтительные дозы составляют 1мг/кг или менее для системного применения и 4мкг/см2 или менее для местного применения Кроме того, изобретение иллюстрируется с помощью следующих примеров, которые не должны рассматриваться, как ограничивающие настоящее изобретение В Примерах даны отсылки к Фигурам, как указано ниже Краткое описание рисунков Фигура 1 показан эффект от внутривенного применения Компонента В в сравнении с эффектом от бетаметазона (Bentenal®) в экспериментальном заживлении раны В частности, суммированы результаты Эксперимента 1 Анализируемые лекарства назначали ежедневно в течение 6 последовательных дней с 0 (дня образования раны) до 5 дня (включительно) Фигура 2 показан эффект внутривенного применения Компонента В (серия 004-001Ь) в сравнении с эффектом от бетаметазона (Bentenal®) в экспериментальном заживлении раны В частности, суммированы результаты Эксперимента 2 Анализируемые лекарства вводились ежедневно в течение 6 последовательных дней с 0 (дня образования раны) до 5 дня Фигура 3 показан эффект местного применения Компонента В (серия 004-001) в экспериментальном заживлении раны В частности, суммированы результаты Эксперимента 3 Анализируемые лекарства вводились ежедневно в течение 5 последовательных дней с 0 (для образования раны) до 4 дня Фигура 4 показан эффект местного применения бычьего сывороточного альбумина в экспериментальном заживлении раны В частности суммированы результаты Эксперимента 4 Анализируемые лекарства вводились ежедневно в течение 5 последовательных дней с 0 (дня образования раны) до 4 дня Фигура 5 представлен анализ сигмоидального ответа на введение дозы в применении к результатам Эксперимента 1 На основании результатов Эксперимента 1 проведена статистическая оценка эффекта от внутривенного введения Компонента В (серия 004-001 и 004-001Ь, обозначенные как «001» и «001Ь», соответственно) и бетаметазона (Bentenal®) на экспериментальное заживление раны Фигура 6 представлен анализ сигмоидального ответа на введение дозы в применении к результатам Эксперимента 2 На основании результатов Эксперимента 2 проведена статистическая оценка эффекта от внутривенного введения Компонента В (серия 004-001Ь, отмеченная как «001Ь») и бетаметазона (Bentenal®) на экспериментальное заживление раны Фигура 7 представлен анализ сигмоидального ответа на введение дозы в применении к объединенным результатам Экспериментов 1 и 2 На основании объединения результатов Эксперимента 1 и 2, проведена статистическая оценка эффекта от внутривенного введения Компонента В (серия 004-001Ь) на экспериментальное заживление раны Фигура 8 представлен анализ сигмоидального ответа на введение дозы в применении к кумулятивной частоте, относительно комбинации Экспериментов 1 и 2 Произведена оценка эффекта Компонента В (серия 004-001Ь) Фигура 9 представлен анализ сигмоидального ответа на введение дозы в применении к результатам Эксперимента 3 На основании результатов Эксперимента 3 проведена статистическая оценка эффекта от местного и внутривенного введения Компонента В (серия 004-001) на экспериментальное заживление раны Фигура 10 представлен анализ сигмоидального ответа на введение дозы в применении к результатам Эксперимента 4 На основании Эксперимента 4 проведена статистическая оценка сравнения между эффектами, произведенными буфером и BSA на уменьшение раны ПРИМЕРЫ Материал Животные Мыши SPF CD-1 обоих полов, закупленные у Charles River, Италия (Calco, Como, Италия) использовались для экспериментов после, по крайней мере, семидневного периода акклиматизации, проводимого под контролем условий окружающей среды (температура 22 ± 2°С, влажность 55 ± 10% и двенадцатичасовым циклом CBeTfreMHOTa) Анализируемые соединения -rec-h Компонент В партия 004-001 (сульфатированная форма) и 004-001 b (несульфатированная форма) экспрессировали в СНО клетках и получали, по существу, как описано в WO 94/14259 Коммерческий препарат бетаметазона (Bentenal®) от Glaxo (Верона, Италия) - Хлорид натрия 0,9% (физиологический раствор) от Baxter (Триест, Италия) Бычий сывороточный альбумин (BSA), фракция V от Sigma Chemical Co (сант-Луис Мо, США) СПОСОБЫ Экспериментальное заживление раны по всей ее толщине Используемый способ был предложен J J Р Morton и М Н Malon (Morton J J P and Malon M H , Arch Inc Pharmacodyn , 196 117, 1972), которые использовали этот процесс для оценки множества лекарственных средств на их ранозаживляющую активность у крыс Для настоящего исследования Компонента В этот оригинальный способ, для удобства его при менения на мышах, был модифицирован следующим образом Круглая чернильная метка (1см в диаметре) наносилась на спинную область самцов мышей (30 - 35г, возраст 6 - 7 недель), и кожа этого маркированного участка (включая panmculus cornosus и прилегающие ткани) иссекалась с помощью хирургических ножниц и хирургических щипцов Рану затем промокали насухо марлевой подушечкой до наступления гемостаза В 0 день, то есть в день операции, проводили продольный, поперечный и два диагональных измерения (относительно позвоночного столба) диаметра раны с точностью до 0,1мм, используя кронциркуль Определенные таким образом точки были отмечены несмываемыми чернилами, нанесенными на примыкающий участок кожи Последующие измерения раны проводились каждый последующий день кроме воскресенья до полного закрытия раны Как хирургиНомер группы 1 2 3 4 56166 ческая процедура, так и измерения проводились под легкой анестезией мышей эфиром Площадь каждой раны была получена путем умножения квадрата из среднего диаметра, составлявшего около 0,7854 Затем рассчитывалось процентное закрытие раны относительно 0 дня Средние значения процента закрытия раны для каждого дня измерения вносились в таблицу для каждой экспериментальной группы и интерполировалось время 50% затягивания (CTso) Системное лечение Проводились два Эксперимента (Эксперименты 1 и 2) Во втором эксперименте в каждый день проведения измерений они проводились одним и тем же оператором, который не знал схемы лечения В каждом эксперименте животных делили на 4 группы и лечили в соответствии со следующей схемой Первый эксперимент Второй эксперимент Физиологический раствор 10мл/кг интраперитонеально Компонент В 004-001 1мг/кг внутривенно Компонент В 004-001Ь, 1 мг/кг внутривенно Бетаметазон 1 мг/кг внутриперитонеально Физиологический раствор 10мл/кг внутривенно Компонент В 004-001Ь, 0,1 мг/кг внутривенно Компонент В 004-001Ь, 1 мг/кг внутривенно Бетаметазон 1 мг/кг внутривенно Животные получали лечение 1 раз в день в течение 6 последующих дней Вес тела животных измеряли в течение всего времени проведения эксперимента Местная обработка В следующем эксперименте (Эксперимент 3) эффект местного применения различных доз Компонента В (серия 004-001) изучали при использовании уже описанных способов нанесения раны с последующим лечением по схеме, описанной в приведенной ниже таблице Номер группы 1 2 3 4 5 Лечение Фосфатный буфер 0,05мл, местно Компонент В 004-001, 1 мкг, местно Компонент В 004-001, 2мкг, местно Компонент В 004-001, 4мкг, местно Компонент В 1 мг/кг, внутривенно В первый и второй дни раствор исследуемого вещества наносили (в объеме 0,05мл) на поверхность ран, тогда как в последующие дни, когда образовывался струп, его вводили под струп с помощью шприца, снабженного 25G иглой Компонент В, вводимый внутривенно в дозе 1 мг/кг, использовался в качестве положительного сравнительного стандарта Чтобы исключить возможность неспецифического эффекта от местного применения белкового раствора, в параллельном эксперименте исследовали эффект от местного применения BSA в таких же молярных концентрациях (8,8 х 10 6 М) как и Компонент В в сравнении с фосфатным буферным раствором (Эксперимент 4) РЕЗУЛЬТАТЫ Заживление раны На Фигуре 1 показаны данные первого Эксперимента, в котором сравнивалась активность двух серий (004-001 и 004-001Ь) Компонента В Они обе показали способность к ускорению процесса рубцевания, причем их эффект был очевиден уже после 1 дня лечения СТ50, то есть время, в течение которого происходил 50% закрытие (снижение площади) раны, составляет 3,0 и 3,4 дня, соответственно, и эти значения не были статистически различными Но в отличие от этого, при применении бетаметазона (Bentenal®) и физиологического раствора CTso наблюдалось на 7,8 и 7,2 дня соответственно (смотри параграф, озаглавленный «Статистический анализ») Во втором эксперименте (Фигура 2) исследовались две дозы Компонента В (партия 004-001Ь) При самых больших дозах, 1 мг/кг, CTso составляло 3,7 дня, тогда как при самых низких дозах (0,1 мг/кг) оно составляло 6,6 дней Группы, обработанные физиологическим раствором и бетаметазоном, показали CTso как 9,1 и 10 дней соответственно (смотри параграф, озаглавленный «Статистический анализ») Положительное влияние Компонента В на заживление раны также подтверждается другим показателем, а именно ЕТ50, который указывает время, когда у 50% животных происходит полное закрытие раны (смотри параграф, озаглавленный «Статистический анализ») Результаты эксперимента, в котором Компонент В (партия 004-001) наносится место на поверхность раны (Эксперимент 3), представлены на фигуре 3 Соединение исследовалось в дозах 1,2 и 4мкг/день в течение 5 последовательных дней Все исследованные дозы проявили способность к усилению процесса заживления ран по сравнению с контролем В частности, при дозах от 2 до 4мкг 56166 8 величина СТбо составляла 3,8 и 4,4 соответствентечение 6 дней но, что сравнимо с полученным CTso (3,9) при 4 - Комп В 004-001 b - 1мг/кг/день, внутривенно применении Компонента В в дозе 1мг/кг, введенв течение 6 дней ной внутривенно При самых низких дозах (1мкг) Группы лечения (Эксп №2) величина СТ50 составляла 5,3 дня, что выше ве1 - Физиологический раствор - 10мл/кг/день, личины СТбо, полученной двумя другими дозами внутривенно в течение 6 дней при местном применении, но все-таки значительно 2 - Bentenal - 1мг/кг/день, внутривенно в течеотличается от контроля (смотри параграф, озание 6 дней главленный «Статистические анализы») 3 - Комп В 004-001Ь - 0,1мг/кг/день, внутривенно в течение 6 дней Эти данные позволяют думать, что доза в 2мкг при местном нанесении на рану дает максималь4 - Комп В 004-001 b - 1мг/кг/день, внутривенно ный эффект, и что доза 1мкг все еще остается в течение 6 дней эффективной в ускорении процесса рубцевания Группы лечения (Эксп №3) Чтобы проверить, является ли положительное 1 - Фосфатный буфер - 50мкл/день, местно, в влияние Компонента В на процесс заживления течение 5 дней ран специфической характеристикой продукта, 2 - Комп В 004-001 - 1 мкг/день, местно, в течепроводился параллельный эксперимент, в котоние 5 дней ром эффект BSA в тех же молярных концентраци3 - Комп В 004-001 - 2мкг/день, местно, в течеях, что и Компонент В, сравнивался с эффектом ние 5 дней от применения фосфатного буфера (Эксперимент 4 - Комп В 004-001 - 4мкг/день, местно, в тече4) Эти данные представлены на Фигуре 4 CTso, ние 5 дней составляющий 9,9 и 7,9 дней, было отмечено с 5 - Комп В 004-001 - 1мг/кг/день, внутривенно, BSA и фосфатным буфером, соответственно в течение 5 дней Вышеприведенные значения не являются значимо Группы лечения (Эксп № 4) различными (смотри параграф «Статистический 1 - Фосфатный буфер - 50мкг/день, местно, в анализ»), таким образом указывая на то, что стантечение 5 дней дартный раствор белка, такого как BSA, не влияет 2 - Бычий сывороточный альбумин (BSA) на затягивание кожей раны 50мкл/день, (8,8 х 10 6М), местно, в течение 5 дней Конкретные данные экспериментов представлены в таблицах 1А - 4В Схема лечения (для экспериментов 1, 2, 3 и 4) СТАТИСТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ Фаза 2 Дни повторного введения в соответстСтатистическая стратегия вии с вышеприведенным описанием лечения для групп Цель статистического анализа состоит в сравнении эффекта, оказанного через определенный Фаза 2 Период наблюдения вплоть до моменпромежуток времени от применения двух препата полного затягивания раны ратов Компонента В (Комп В) как относительно РЕЗУЛЬТАТЫ СТАТИСТИЧЕСКОГО АНАЛИЗА физиологического раствора, так и лекарственного Диаграммы (анализ сигмоидальной зависимосредства для сравнения - Bentenal сти «эффект-доза» при введении), показанные на Фигуре 5 - 1 0 , суммируют эффект исследуемого Кроме этого, была также проведена оценка лекарственного средства, используя площадь раэффективности от системного и местного примены в качестве переменной величины нения одного препарата Компонента В В соответствии с графиком лечения эффект Эксперимент 1 от исследуемого лекарства изучался с учетом всеДается ссылка на фигуру 5 го периода наблюдения Результаты анализа сигмоидальной зависимости эффекта от дозы при введении (CTso) в Эксперимент по заживлению раны повторялся применении к площади раны, касающиеся экспедважды с целью подтверждения влияния Комп В римента 1, представлены в следующей таблице при различных дозах Статистический тест В статистическом тесте использовали Анализ Исследуемое лекар- ст Доверительный 50 R2 ответа на введение сигмоидальной дозы для ственное средство (дни) интервал оценки СТ50 (то есть времени, когда площадь раФизиологический 7,2 6,2-8,3 0,96 ны уменьшается на 50%) (смотри Fmney D J , раствор Biometrics, 32, рр 721-40, 1976) Bentenal 1мг/кг 7,8 6,9-8,8 0,97 Статистические показатели Комп В 004-001 3,0 2,5-3,7 0,97 1) Уменьшение раны (CTso) Средний процент 1м г/кг отклонений от среднего (основного) уровня значеКомп В 004-001 b 3,4 2,8-4,1 0,97 ний 1м г/кг 2) Кумулятивная частота (ETso) кумулятивная частота животных, показавших полное затягиваЭксперимент 2 ние раны в любой момент времени Дается ссылка на фигуру 6 Группы лечения (Эксп №1) Результаты анализа сигмоидальной зависи1 - Физиологический раствор - 10мл/кг/день, мости эффекта от дозы при введении (CTso) в интраперитонеально в течение 6 дней применении к площади раны, касающиеся экспе2 - Bentenal - 1мг/кг/день, интраперитонеально римента 2, представлены в следующей таблице в течение 6 дней 3 - Комп В 004-001 - 1мг/кг/день, внутривенно в 56166 Исследуемое лекарственное средство Физиологический раствор Bentenal 1мг/кг Комп В 004-001 b 1м г/кг Комп В 004-001 b 1м г/кг (дни) ст 5 0 Доверительный интервал R 9,1 8,4-9,9 0,98 10,0 9,6-10,4 0,99 6,6 5,5-7,7 0,94 3,7 2,8-4,8 0,92 2 Комбинация Экспериментов 1 и 2 Дается ссылка на фигуру 7 Суммируются результаты, полученные при объединении данных для групп лечения, общих для обоих экспериментов 1 и 2, то есть физиологического раствора относительно Комп В - 004001 b 1мкг/кг Кроме того, также оценивалась частота животных, показывающих по прошествии времени полное затягивание раны (анализ зависимости эффекта (ответ) от дозы при сигмоидальном введении) из объединения данных Экспериментов 1 и 2 Результаты анализа сигмоидальной зависимости эффекта от дозы при введении (CTso) в применении к площади раны, касающиеся комбинации экспериментов 1 и 2, представлены в следующей таблице Исследуемое лекар- ст Доверительный 50 R2 ственное средство (дни) интервал Физиологический 8,2 7,5-8,9 0,95 раствор Комп В 004-001 b 3,5 3,0-4,1 0,95 1м г/кг Для кумулятивной частоты дается ссылка на фигуру 8 Результаты анализа сигмоидальной зависимости эффект-доза при введении (ETso) в применении к кумулятивной частоте, касающиеся комбинации экспериментов 1 и 2, представлены в следующей таблице Исследуемое лекарственное средство Физиологический раствор Комп В 004-001 b 1м г/кг ЕТ50 Доверительный (дни) интервал R2 16,1 15,4-16,9 0,98 11,7 11,2-12,1 0,99 В заключение, сравнение значений CTso и среди значений ETso является хорошим подтверждением эффекта каждого исследуемого лекарственного средства на экспериментальной модели Обнаружено, что Комп В-001 (1мг/кг, внутривенно), так и Комп В-001 b (уровень дозы 0,1мг/кг и 1мг/кг, внутривенно) статистически отличаются от физиологического раствора и препарата Bentenal в Экспериментах 1 и 2 Результаты сочетания групп лечения, общих для экспериментов 1 и 2, подтверждают эффект внутривенного пути введения Комп В 1мг/кг Эксперимент 3 10 Дается ссылка на фигуру 9 Проводился дополнительный этап эксперимента, в котором продукт применялся местно В качестве положительного стандарта для сравнения использовался внутривенный путь введения Данные анализировались с использованием статистической модели, описанной выше Результаты анализа сигмоидальной зависимости эффект-доза при введении (CTso) в применении к площади раны, касающиеся эксперимента 3, представлены в следующей таблице Исследуемое лекар- ст Доверительный 2 50 R ственное средство (дни) интервал Фосфатный буфер 8,3 7,3-9,5 0,96 Комп В-001 1мкг 5,3 4,1 -6,9 0,91 местно Комп В-001 2мкг 3,8 2,9-4,9 0,92 местно Комп В-001 4мкг 4,4 3,4-5,6 0,92 местно Комп В-001 1мг/кг 3,9 3,0-5,2 0,92 внутривенно В заключение, местное применение Комл В001 b показало, что при всех исследованных дозах уменьшение раны (СТ50) значительно отличается от полученного при использовании фосфатного буфера Эксперимент 4 Дается ссылка на фигуру 10 Диаграмма показывает сравнение между влиянием местного применения фосфатного буфера и BSA на уменьшение раны для того, чтобы исключить возможность неспецифического воздействия Компонента В Результаты анализа сигмоидальной зависимости эффект-дозы при введении (СТ50) в применении к площади раны, касающиеся эксперимента 4, представлены в следующей таблице Исследуемое лекар- ЕТ50 Доверительный R2 ственное средство (дни) интервал Буфер 7,9 7,2-8,7 0,98 BSA 9,9 8,5-11,4 0,95 Вышеприведенные результаты не показывают какого-либо различия между местным применением фосфатного буфера и BSA ВЫВОДЫ ИЗ ВСЕГО ИССЛЕДОВАНИЯ Интересным результатом этого исследования является активность Компонента В в процессе заживления ран как при внутривенном, так и при местном применении Экспериментальная модель, использованная в этом исследовании, прямо относится к моделированию травмы человека и к указаниям по применению Компонента В в заживлении травматического повреждения кожи и при пластических и реконструктивных операциях на слизистой и эпителии 11 56166 12 Ji Xat>,fiHiid 1 С: Данные о злжиалевин паны.- Э КОМПОНЕНТ Р QQ4-OT1:1 мґ/кг,внуірнвенно Day О area 0 622 0813 0 76Ї 0 644 0S25 0 724 0 679 0 769 0 769 0 72? OO'l 0 5O S 0 116 ares %vanat area 0529 -14 9ЯВ 0 745 -8 36408 0 701 -7 88436 0418 -35 0932 33 4545 0J49 0 624 .13 8122 0 697 j 2 65095? 0 473 -37S4I4 0 48 I-32 299 % vanat -48 8746 -30 3513 -55 1905 -55 1242 -67 7S76 -4ОЗЗІ5 40 7953 •46 4239 -47 249Й 038 7 0 9 OO DayS DavU area возі 0 104 OO09 0 0 Q 0 104 006 0 -84 572 10 896 Шап ±SD 0034 -95 325 0044 6 007 DaviS % vanat -90 3537 -40 5904 -55 4ІЇ9 -34 0062 •94 0606 •65 3315 53 2106 -32 1847 72 4965 0 16? 0 134 -77 516 16 334 Btnltlan 1 МГЙЯ-, ннірагкрятонеилно DavO Day! area 0671 0 76 0 703 0S85 0 783 0 7S1 0 654 area 0 634 0 737 0 737 0 898 0 737 QOSO 0 723 0 094 0 762 0 661 0 631 Day 5 Day3 area 0 64 0 667 06ІК 0 697 % vanat -4 ві 997 -12 2363 -12 091 -21 2429 0 799 0 705 0 666 !Wanaf -5 51416 -3 02632 4 В364І5 1 46S927 -319949 -5 56348 -3 51682 1395939 0 5TO6B 1 B34862 % vanat -2*4411 -29 6053 -6D 5074 area 0 507 0 533 0277 0 735 Й594 0 493 0 466 %vsm -16 9492 -24 6193 •29 6719 -23 7462 0 635 і -6 627 о 059 і з аго 0265 0 445 0 246 0 759 0 626 0 46 0 491 -60 5067 -414474 65 0071 1 2373 4 -2Є 5554 -34 379S -24 9235 -30 661 13 935 Mes/itJ 0 0515 0 138 I 2 08S І З S47 Day Г area 0 470 0 13 8 -37 294 19 567 Day 14 Kvarfaf 0 114 0 086 area oo6 0483 out 0103 0 049 0251 0114 0137 0 195 -65 34 s 12 734 Usan ± &-> -45 014 0 23? 1071! 0 150 • 3 7299 9 -64 5756 • 2 1156 9 • 2 857! 9 94 7B79 -76 105 -S7 6229 S6 9961 • 3 3554 7 area 0 039 0 288 П06 0046 0043 0І73 0 084 01 0196 %vanst -11 295E -25 7073 -73 5874 -SO 5901 -83 8788 -56 768 -68 4831 -60 0383 -59 S025 area 0(35 0604 0 201 0125 0133 0313 0 214 03 O2S5 031S 056 6 0 341 02S9 0 266 0 432 0 401 0 412 0 374 -20 117 14 736 ay? DavS Day3 Dsyt %vartat area 0 0 039 0 0 0 0 013 0 0 - 5 016 9 -387 9 1 -0 10 -0 10 -0 10 -84 6Я34 -92 197 -100 0019 0G44 Day 9 %vm& •100 •95 203 -too -100 -100 • loo -Й0 8543 -100 -100 0 0 0 0 0 0 0 area 201 352 215 551 535 302 263 Day I t %VS!)$, area • 700447 0 199 •53 6342 | 0 339 0 084 -694ICS •37 7401 033! 0 275 Ї 2 1066 -3691S7 0 162 -59 73І9 0І73 -97 340 6 382 -S4 242 14 609 0 223 0095 08V f S % varist 0 O0 07 0 0 0 0 0046 0 0 -100 0 -99139 0 -iao 0 -ion 0 -100 0 -100 0 -93 1253 0 ion 0 -100 1 0 0 006 0015 area 0011 0008 0 0031 fl 0 0 031 % vanat -100 -100 -100 -100 -100 -ioa -100 100 100 ttfem±SD -99 152 0 2 241 oooo Day 14 • area 0 056 0 091 0 0 176 0 0 вазі 'Avatiat -91 6542 -88 0263 -IOO -80113 -IOO -100 0051 0C65 34Ї8 3947 0512 5989 1015 S902 5474 •93 579 7 55* -95 2599 Mean ± £ D . 0 3460 144 Day 18 г area -70 •55 •83 •62 65 -76 -7Ї -70 275 10 627 %vanaf -98 3607 -98 9474 -100 -96 4972 • І00 • 100 Day IS area 0 0 0 0 0 0 0 % vanat -100 -IOO -IOO • 100 j -10SOQ oooo area •95 2599 -юс -10D -100 Mean ± £ D oooo -93 438 1 891 oooo 0 012 0 014 j -100 000 oooo , (ш*) * - Сриінс • фсднеквдпряпгч Данные о заживвеняиравы-Эксндммеят} Таблица ІВ Д а н н ц ; 9и?ажщиииин раяы - Эксперимент 1 Фїимо. Коккэнснт В 004-40 Ib 1 urftr t-yrpsfflomo Шуб Davi area area 0 535 0 656 0 647 0813 0781 013! 0 777 0 724 0 747 0 903 055 0 0611 0631 0503 063a 066 5 059 5 0 6S 1 076 5 079 2 0 737 о юз _ _ _ _ _ 0 6O 2 оозз Day 5 Dav3 % vanat area -5 60743 В 402 -6 a5976 0194 0 365 •2 47295 • Ї7Ї154 _0363j 0 385 -20 35E5 -16 4331 0 435 -2S 0566 0 397 -14 6409 0І28 1 204319 0 36 -19 Ї691 0 56! 0 399 O1G0 0 19 0 0 00T 5 Oil 0 069 0146 0139 025 3 0 16 9 0 077 0 H E 002 7 area 0 162 0 017 0 114 0 142 0 169 0 205 0 259 0 323 0 256 0 175 0 0 279 0 101 Mean±^ -45 517 13 438 -61 676 14 717 от oos6 % vanat -65 7196 -97 4035 -к заоі • 2 5332 5 7S36II -73 S3 34 66 6667 -55 3367 -65 7296 - O 6202 S атеэ 0 937 0997 O3 S3 asoi 0 697 0 79 2 0619 ±п___ 0 792 ОШ -75 269 11665 %vsnat -79 6262 -100 •9! 1901 -86 4699 -91 1652 -81 4013 -76 9627 -67 5414 73 7617 -91 4729 area 0 075 0 0GS4 0 0 046 0 003 0 026 0017 0 0O49 Kvsiiaf •!5 9813 -100 •91 653S -100 -94 1101 -95 9 Ш -96 6538 -97 6S19 -loo — -94 5536 -83 959 9S44 Mean ± S 0 0 023 •95 961 0 027 4 533 Day 14 area 0 073 0 0 0 0 0 0 0 0 — 0 %vanai -86 3551 -100 • 100 -100 -100 -loo -loo -100 -loo 100 0 007 0 023 •98 636 4315 0 127 0 366 06 S D 0541 0512 0 331 от OS 05 0 338 0 206 оои :нче * средосхв&лріт area %vanai -0S54 Q39S 0601 -57 524 -39 7192 0 854 0 797 06M 0 626 0518 0 528 0 428 9 996 2 521005 • 0 57063 -13 1994 14 1239 •16 І512 •26 Ш 7 0 793 0 767 0644 0 454 0 327 0 257 •4 80192 -4 60199 -7 60402 -37 7229 -47 0874 0S55 01І9 are 0 139 0 297 -І6 618 13 199 -54 5953 -75 6408 -85 1944. S 238 0 0 -57 !79 26 106 %van&t 0 534 ОТО 03V tf area SSrarfaf -100 -S60B83 0 0 03 0 15 -55 2239 -50 2152 01 0 12 -67 3525 -100 -100 0 01 0 0 -S7 5622 -31 6356 -93 ЗЇ39 • 100 -100 0 054 00* -93 189 8 172 Mean±S.D 0 215 0151 -73 434 19519 Day 18 area 0 0 0 -31400 23 444 -3! 1654 • 0 2106 7 -593037 0 339 0 36 ВЭ47 %vana! -too -100 -60 13S9 D 03V « % vanat -S&4-46! 63 2 Ш -27 0108 -32 7! 14 -26 54ЇЗ %vanal -311238 • 2 2969 3 MemtS. 0 592 0 126 • 7 599 9 -I0Q 0 -96 269? 0 0 -100 l> -100 0 100 Mean ± S 0 99 234 oooo 1463 %vana! •0 10 too -100 -too -too -IOO -100 100 looooo oooo Day 7 Oa/5 area %\івпз! 0 636 0 675 -4 9 ! ! 2 761 -0 995 IS 364 2 195 4 369 -17 5ЙО ауП area 0006 і -Дяатривенн Компонент В 1 мг/кг внутривенно Бычий сьторот очный альбумин > уменьшения 1 3 2 2 1 3 5 1 1 1 1 21 23 1 4 S 8 Дни наблюдения Фигуре 2 Фигура 4 21 56166 22 Кумулятивная частота Физ.раствор ФйЗ-рзствор Частота Benteian I мг/кг КомпВ 1мг/кг Коші.В-001 Імг/кг to Комп.В-ООІЬ 061 !- мг/кг 050 075 100 1.25 150 09 10 11 12 13 14 Логарифм дней Логарифм дней Фигура 5 Фигура 8 Буфер * Коми В %Уменьшени " Физ-раетвор • Beratrfan T, мг/кг % Уменьшения раны • КошВООІЬ0,1 ж/кг ' оаиы 100 ' КомпВ 2Мкг * ІСомп В 4мкг 75 КомрВ-OOlbІ мг/кг 50 Коми В і мг/кг внутривенно 25 000 000 025 050 075 1ш 125 050 0 75 100 125 025 150 Логарифм дней 150 Логарифм дней Фигура 9 Фигура 6 • Фаз раствор % Уменьшения раны 100 75 И Коші В 1 мг/кг \ЕДБ! S04 7525 4 25 У 000 025 О 000 0 0 1 5 7 0 0 5 0 125 025 050 075 12S 150 150 Логарифм дней Фигура 10 Фигура? Підписано до друку 05 06 2003 р Тираж 39 прим ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)236-47-24