Комбінація, що включає інгібітор cdk4/6 і інгібітор pi3k, для лікування раку

Реферат: Винахід стосується комбінації інгібітору CDK4/6 – сполука А або її фармацевтично прийнятна сіль, та інгібітору РІ3 кінази - сполука В1 або її фармацевтично прийнятна сіль, або сполука В2 або її фармацевтично прийнятна сіль, та її застосування для лікування раку молочної залози та раку ободової кишки. UA 114178 C2 (12) UA 114178 C2 UA 114178 C2 5 10 15 20 25 30 35 ГАЛУЗЬ ВИНАХОДУ Комбінація інгібітору циклін-залежної кінази 4/6 (CDK4/6) і інгібітору фосфатидилінозитол 3кінази (РІЗ кінази) для лікування солідних пухлин і гемобластозів. Цей опис також відноситься до застосування цих комбінацій для лікування гіперпроліферативних захворювань, таких як рак. РІВЕНЬ ТЕХНІКИ Інгібітори циклін-залежної кінази 4/6 (CDK4/6) описані в, наприклад, WO2007/140222 і WO2010/020675, які в такий спосіб включені у вигляді посилання повністю. Інгібітори фосфатидилінозитол 3-кінази (РІЗ кінази) описані в, наприклад, WO2004/048365, WO2007/084786, WO2004/096797, WO2010/029082, WO2006/122806, які в такий спосіб включені у вигляді посилання повністю. СУТЬ ВИНАХОДУ Опис забезпечує комбінацію першого засобу, який інгібує шлях CDK4/6, і другого засобу, який інгібує РІЗ кіназу. В іншому аспекті опис забезпечує комбінації, що включають фармацевтичні композиції, що містять терапевтично ефективну кількість першого засобу, який інгібує CDK4/6, другого засобу, який інгібує РІЗ кіназу, і фармацевтично прийнятного носія. Більше того цей опис забезпечує застосування терапевтично ефективної кількості комбінації, що включає перший засіб, який інгібує шлях CDK4/6, і другий засіб, який інгібує РІЗ кіназу, або їх фармацевтично прийнятних солей або композицій, в одержанні лікарського препарату для лікування раку. Цей опис має терапевтичне застосування в лікуванні різних проліферативних захворювань. Вищевказані комбінації і композиції можна вводити в систему, що включає клітини або тканини, а також пацієнтові людині або пацієнтові тварині. В одному варіанті здійснення винаходу першим засобом, який інгібує шлях CDK4/6, є сполука А, якою є диметиламід 7-циклопентил-2-(5-піперазин-1-ілпіридин-2-іламіно)-7Нпіроло[2,3-(1]піримідин-6-карбонової кислоти або його фармацевтично прийнятна сіль(і). Сполука А описана формулою А: або її фармацевтично прийнятна сіль(і). В іншому варіанті здійснення винаходу другим засобом, який інгібує РІЗ кіназу, є сполука В1, описана формулою В1: або її фармацевтично прийнятна сіль(і). Сполука В1 описана декількома назвами, такими як 4-(трифторметил)-5-(2,6диморфолінопіримідин-4-іл)піридин-2-амін; 5-(2,6-диморфолін-4-ілпіримідин-4-іл)-4трифторметилпіридин-2-іламін; 5 -(2,6-ди-4-морфолініл-4-піримідиніл)-4-трифторметилпіридин2-амін; або CAS найменуванням 5-(2,6-ди-4-морфолініл-4-піримідиніл)-4-(трифторметил)-2піримідинамін. 1 UA 114178 C2 В іншому варіанті здійснення винаходу другим засобом, який інгібує РІЗ кіназу, є сполука В2, описана формулою В2: 5 10 15 20 25 30 35 40 або її фармацевтично прийнятна сіль(і). Сполука В2 відома як 2-амід 1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилетил)піридин-4іл]тіазол-2-іл}амід) (З)-піролідин-і, 2-бікарбонової кислоти. КОРОТКИЙ ОПИС КРЕСЛЕНЬ На фіг. 1 проілюстровані результати, коли комбінацію сполуки А і сполуки В1 або сполуки В2 використовували для обробки клітин MDA-MB-453. Отримані інгібуючі значення використовували за допомогою програмного забезпечення CHALICE для одержання матриць інгібування та інгібування надлишком ADD, а також ізоболограм. На фіг. 2 проілюстровані результати, коли комбінацію сполуки А і сполуки В1 або сполуки В2 використовували для обробки клітин НСТ-116. Отримані інгібуючі значення використовували за допомогою програмного забезпечення CHALICE для одержання матриць інгібування та інгібування надлишком ADD, а також ізоболограм. На фіг. 3 проілюстровані результати, коли комбінацію сполуки А і сполуки В1 або сполуки В2 використовували для обробки клітин MCF-7. Отримані інгібуючі значення використовували за допомогою програмного забезпечення CHALICE для одержання матриць інгібування та інгібування надлишком ADD, а також ізоболограм. На фіг. 4 проілюстровані результати, коли комбінацію сполуки А і сполуки В2 використовували для обробки клітин T47-D. Отримані інгібуючі значення використовували за допомогою програмного забезпечення CHALICE для одержання матриць інгібування та інгібування надлишком ADD, а також ізоболограм. ДОКЛАДНИЙ ОПИС ВИНАХОДУ Опис забезпечує комбінацію першого засобу, який інгібує шлях CDK4/6, і другого засобу, який інгібує РІЗ кіназу. В іншому аспекті опис забезпечує комбінації, що включають фармацевтичні композиції, що включають терапевтично ефективну кількість першого засобу, який інгібує CDK4/6, другого засобу, який інгібує РІЗ кіназу, і фармацевтично прийнятного носія. Більше того цей опис забезпечує застосування терапевтично ефективної кількості комбінації, що включає перший засіб, який інгібує шлях CDK4/6, і другий засіб, який інгібує РІЗ кіназу, або їх фармацевтично прийнятні солі або фармацевтичні композиції, в одержанні лікарського препарату для лікування раку. Цей опис має терапевтичне застосування в лікуванні різних проліферативних захворювань. Вищеописані комбінації і композиції можна вводити в систему, що включає клітини або тканини, а також пацієнтові людині або пацієнтові тварині. В одному варіанті здійснення винаходу першим засобом, який інгібує шлях CDK4/6, є сполука А, яка є диметиламідом 7-циклопентил-2-(5-піперазин-1-ілпіридин-2-іламіно)-7Нпіроло[2,3-сі]піримідин-6-карбонової кислоти або її фармацевтично прийнятною сіллю(ями). Сполука А описана формулою А: 2 UA 114178 C2 В іншому варіанті здійснення винаходу другим засобом, який інгібує РІЗ кіназу, є сполука В1, описана формулою В1: 5 10 15 20 25 або її фармацевтично прийнятна сіль(і). Сполука В1 описана декількома назвами, такими як 4-(трифторметил)-5-(2,6диморфолінопіримідин-4-іл)піридин-2-амін; 5-(2,6-диморфолін-4-ілпіримідин-4-іл)-4трифторметилпіридин-2-іламін; 5-(2,6-ди-4-морфолініл-4-піримідиніл)-4-трифторметилпіридин2-амін; або CAS найменування 5-(2,6-ди-4-морфолініл-4-піримідиніл)-4-(трифторметил)-2піримідинамін. В іншому варіанті здійснення винаходу другим засобом, який інгібує РІЗ кіназу, є сполука В2, описана формулою В2: або її фармацевтично прийнятна сіль (і). Сполука В2 відома як 2-амід 1-({4-метил-5-[2-(2,2,2-трифтор-1,1-диметилетил)піридин-4іл]тіазол-2-іл}амід) (8)-піролідин-1,2-дикарбонової кислоти. В іншому варіанті здійснення винаходу цей опис включає спосіб лікування гіперпроліферативного захворювання, переважно раку. Сполуки за цим описом являють собою інгібітори CDK4/6 і РІЗК, і, отже, можуть бути використані для лікування захворювань, при яких патологічний стан, що лежить в основі (щонайменше, частково), опосередкований активованим шляхом CDK4/6 і/або РІЗК. Такі захворювання включають рак та інші захворювання, при яких є порушення клітинної проліферації, апоптозу або диференціювання. Отже, комбінація за цим описом може бути застосовною в лікуванні RB+ve (позитивних по білку ретинобластоми) пухлин, включаючи пухлини, що несуть активуючі мутації в Ras, Raf, рецепторах факторів росту, РІЗК, або підвищену експресію рецепторів факторів росту, або інактивацію ρ 16. Сполуки за цим описом також можуть бути застосовними у лікуванні пухлин з ампліфікацією генів CDK4 і CDK6, а також пухлин, що надмірно експресують циклінові партнери 3 UA 114178 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 циклін-залежних кіназ. Сполуки за цим описом також можуть бути застосовними у лікуванні пухлин RB-ve. Комбінація за цим описом також може бути застосовна в лікуванні пухлин з генетичними порушеннями, які активують дію кінази CDK4/6. Вони включають, але не обмежуються, раки з транслокаціями D-цикліну, такі як лімфома з клітин мантійної зони і множинна мієлома, ампліфікаціями D-цикліну, такі як рак молочної залози і плоскоклітинний рак стравоходу, ампліфікаціями CDK4, такі як ліпосаркома, ампліфікаціями або підвищеною експресією CDK6, такі як Т-клітинна лімфома, і інактивацією ρ 16, такі як меланома, недрібноклітинний рак легені і рак підшлункової залози. Комбінація за цим описом може бути застосовною в лікуванні різних видів раку, які мають генетичні порушення розташованих вище регуляторів D-циклінів, де дефект приводить до підвищення надлишку D-циклінів. Вони включають, але не обмежуються, гострий мієлолейкоз з активацією FLT3, рак молочної залози з підвищеною експресією Her2/neu, ER залежністю або потрійний негативний фенотип, раки ободової кишки з активуючими мутаціями шляхів МАРК, РІЗК або WNT, меланоми з активуючими мутаціями шляху МАРК, недрібноклітинний рак легені з активуючими порушеннями шляху EGFR і раки підшлункової залози з активуючими порушеннями шляху МАРК, що включають мутації K-Ras. Комбінація за цим винаходом може бути застосовною в лікуванні раків, які мають активуючі мутації РІЗК. Вони включають, але не обмежуються, рак молочної залози, рак ендометрію, рак сечового тракту, меланому, рак ободової кишки, рак шлунку, рак шийки матки, рак передміхурової залози і рак яєчника. Приклади раків, які можна лікувати сполукою за цим описом, включають, але не обмежуються, карциному, наприклад, карциному сечового міхура, молочної залози, ободової кишки (наприклад, колоректальні карциноми, такі як аденокарцинома ободової кишки і аденома ободової кишки), нирки, епідермісу, печінки, легені (наприклад, аденокарцинома, дрібноклітинний рак легені і недрібноклітинні карциноми легені), стравоходу, жовчного міхура, яєчника, підшлункової залози (наприклад, екзокринна карцинома підшлункової залози), шлунку, шийки матки, щитовидної залози, носа, голови і шиї, передміхурової залози, і шкіри (наприклад, плоскоклітинна карцинома). Інші приклади раку, які можна лікувати сполукою за цим описом, включають гемопоетичні пухлини лімфоїдного паростка (наприклад, лейкоз, гострий лімфолейкоз, лімфома з клітин мантійної зони, хронічний лімфоцитарний лейкоз, В-клітинна лімфома (така як дифузійна крупно-В клітинна лімфома), Т-клітинна лімфома, множинна мієлома, лімфома Ходжкіна, не-Ходжкінська лімфома, волосатоклітинна лімфома, і лімфома Беркітта; гемопоетичні пухлини мієлоїдного паростка, наприклад, гострий і хронічний мієлолейкоз, мієлодиспластичний синдром, і промієлоцитарний лейкоз. Інші раки включають фолікулярний рак щитовидної залози; пухлини мезенхімального походження, наприклад, фібросаркома або рабдоміосаркома; пухлина центральної або периферичної нервової системи, наприклад, астроцитома, нейробластома, гліома або шванома; нейроендокринний рак; меланома; рак передміхурової залози; рак яєчника; рабдоїдний рак; семінома; тератокарцинома; остеосаркома; пігментна ксеродерма; ретинобластома; кератоксантома; фолікулярний рак щитовидної залози; і саркома Капоші. Одна група раків включає рак молочної залози людини (наприклад, ER позитивний рак молочної залози, Неr2 позитивний рак молочної залози, РІЗК мутований рак молочної залози, первинні пухлини молочної залози, рак молочної залози без ураження лімфовузлів, інвазивні протокові аденокарциноми молочної залози, неендометриоїдні раки молочної залози); і раки ендометрію. Інша підгрупа раків, де сполуки, що мають активність інгібування CDK4/6 і/або активність інгібування РІЗК, можуть мати певну терапевтичну перевагу, включає мультиформну гліобластому, Т-клітинну ALL, саркоми, сімейну меланому і меланому. Комбінація за цим описом також може бути застосовна в лікуванні вірусних інфекцій, наприклад, вірусів герпеса, поксвірусу, вірусу Епштейн-Барра, вірусу Сіндбіс, аденовірусу, ВІЛ, ВПЧ, ВГС (HCV) і ЧЦМВ (HCMV); профілактиці розвитку СНІД у ВІЛ-інфікованих пацієнтів; хронічних запальних захворювань, наприклад, системної червоної вовчанки, аутоімунно опосередкованого гломерулонефриту, ревматоїдного артриту, псоріазу, запальних захворювань кишечнику і аутоімунного цукрового діабету; серцево-судинних захворювань, наприклад, гіпертрофії серця, рестенозу, атеросклерозу; нейродегенеративних розладів, наприклад, хвороби Альцгеймера, СНІД-зв'язаної деменції, хвороби Паркінсона, аміотрофічного бічного склерозу, пігментного ретиніту, спинальної м'язової атрофії і дегенерації мозочка; гломерулонефриту; мієлодиспластичних синдромів, асоційованого з ішемічним ушкодженням інфаркту міокарда, інсульту і реперфузійного ушкодження, аритмії, атеросклерозу, індукованої токсинами або пов'язаної з алкоголем хвороби печінки, гематологічних захворювань, 4 UA 114178 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 наприклад, хронічної анемії і апластичної анемії; дегенеративних захворювань скелетном'язової системи, наприклад, остеопорозу і артриту, аспірин-чутливого риносинуситу, муковісцидозу, розсіяного склерозу, захворювань нирок, захворювань очей, включаючи вікову дегенерацію м'язів, увеїт і раковий біль. Фраза "фармацевтично прийнятний" відноситься до молекулярних речовин і композицій, які є фізіологічно стерпними і звичайно не дають алергійної або подібної небажаної реакції, такої як розлад шлунку, запаморочення і подібні, коли вводяться людині. Краще, як використовується в цьому описі, термін "фармацевтично прийнятний" позначає ухвалений розпорядчими органами федерального або державного керування або перерахований у Фармакопеї США або інших загальновідомих фармакопеях для застосування у тварин, і зокрема у людей. Термін "носій" відноситься до розріджувача, добавки, допоміжної речовини або основи, з якими вводять сполуку. Такими фармацевтичними носіями можуть бути стерильні рідини, такі як вода і олії, включаючи такі нафтового, тваринного, рослинного або синтетичного походження, такі як арахісова олія, соєва олія, мінеральна олія, кунжутна олія і подібні. Воду або водні сольові розчини і водні розчини декстрози і гліцерину переважно використовують як носії, особливо для ін'єкційних розчинів. Прийнятні фармацевтичні носії описані в "Remington's Pharmaceutical Sciences" by E. W. Martin. Фразу "терапевтично ефективну кількість" використовують для позначення кількості, достатньої для зниження, щонайменше, на близько 15 відсотків, краще на, щонайменше, 50 відсотків, ще краще на, щонайменше, 90 відсотків і найкраще запобігають клінічно значимому дефіциту активності, функції і відповіді організму-хазяїна. Альтернативно, терапевтично ефективна кількість достатня для розвитку поліпшення клінічно значимого стану/симптому у хазяїна. "Засіб" відноситься до всіх матеріалів, які можуть бути використані для одержання фармацевтичних і діагностичних композицій, або якими можуть бути сполуки, нуклеїнові кислоти, поліпептиди, фрагменти, ізоформи, варіанти або інші матеріали, які незалежно можуть бути використані для таких цілей, усе відповідно до цього опису. Цей опис включає всі фармацевтично прийнятні мічені ізотопами сполуки за описом, тобто сполуки за формулою (І), де один або більше атомів заміщені атомами, що мають те ж атомне число, а атомну масу або масове число, відмінні від атомної маси або масового числа, що звичайно виявляються в природі. Приклади ізотопів, що прийнятні для включення в сполуки за описом, включають ізотопи 2 3 11 13 14 36 18 водню, такі як Н і Н, вуглецю, такі як С, С і С, хлору, такі як С1, фтору, такі як F, йоду, 123 125 13 15 15 17 18 32 такі як І і І, азоту, такі як N і N, кисню, такі як O, О і О, фосфору, такі як Р, і сірки, 35 такі як S. Певні мічені ізотопами сполуки за формулою (І), наприклад, такі, що включають радіоактивний ізотоп, є застосовними в дослідженнях тканинного розподілу лікарського 3 14 засобу і/або субстрату. Радіоактивні ізотопи тритію, тобто Н, і вуглецю-14, тобто С, є особливо застосовними для цієї цілі у світлі простоти включення і готових засобів визначення. Заміна більш важкими ізотопами, такими як дейтерій, тобто Н, може давати певні терапевтичні переваги, що виникають у результаті більшої метаболічної стабільності, наприклад, збільшеному періоду на півжиття in vivo або зниженим вимогам до дозування і, отже, може бути кращою в деяких обставинах. 11 18 15 13 Заміна позитрон-випромінюючими ізотопами, такими як С, F, O і N, може бути застосовною в дослідженнях Позитронною Емісійною Томографією (ПЕТ) для вивчення зайнятості рецептора субстрату. Мічені ізотопами сполуки за формулою (І) можуть як правило бути отримані звичайними методиками, відомими фахівцеві в галузі техніки, або процесами, аналогічними таким, описаним у супровідних прикладах і одержанні з використанням реагентів, мічених ізотопами, замість реагентів, немічених ізотопами, що використовувалися раніше. Сполука А може бути синтезована, наприклад, як описано в WO2010/020675 або PCT/US2011/032062. Сполука В1 може бути синтезована, наприклад, як описано в WO2007/084786. Сполука В2 може бути синтезована, наприклад, як описано в WO2010/029082. ПРИКЛАДИ Приклад 1 Потенційні синергічні взаємодії між комбінаціями сполуки А і сполуки В1 або В2 оцінювали відносно адитивної моделі Loewe з використанням програмного забезпечення CHALICE, за допомогою балу синергії, розрахованого з відмінностей між спостережуваними значеннями і значеннями моделі Loewe по матриці відповіді. Коротко, використовували 9 концентрацій, що титрують, які варіюються від 20 мкМ, розведених серійно в три рази для сполуки А і 10 мкМ, 5 UA 114178 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 розведених серійно в 3 рази, для сполуки В1 або В2, включаючи 0 мкМ. В 96-ямковому планшеті 9 точок концентрації для кожного засобу змішували у форматі матриці, одержуючи 81 комбінацію. Отриманий планшет використовували для обробки клітин MDA-MB-453, і отримані інгібуючі значення використовували за допомогою програмного забезпечення CHALICE для одержання матриць інгібування та інгібування надлишком ADD, а також ізоболограм. Більш докладний опис методики і розрахунків може бути виявлений в Lehar et al. "Synergistic drug combinations improve therapeutic selectivity", Nat. Biotechnol. 2009, July; 27(7), 659-666, яке включено в цей опис у вигляді посилання. Як проілюстровано на фіг. 1, матриця інгібування показала реальне інгібування, що спостерігається за допомогою аналізу CTG у відповідних концентраціях сполук. Інгібування надлишком ADD показало інгібування надлишком, що спостерігається відносно інгібування, передвіщеного за допомогою адитивної моделі Loewe. На додаток до матриць для спостереження за синергією можна використовувати ізоболограми. Рівень інгібування для кожної ізоболограми вибирали вручну так, щоб спостерігати найкращі синергічні ефекти. Ізоболограму одержували з концентраціями сполуки А, показаними по х-осі, і концентраціями сполуки В1 або В2, показаними по у-осі. Пряма лінія, що з'єднує концентрації сполуки А і сполуки В1 або В2, яка давала обраний рівень інгібування, являла собою інгібування росту, яке для комбінацій було чітко адитивним. Графіки, нанесені нижче лінії адитивності (більше інгібування росту), являли собою синергічне інгібування росту, тоді як графіки вище лінії адитивності (менше інгібування росту) являли собою антагоністичне інгібування росту. Синергічну взаємодію спостерігали для комбінації сполуки А і сполуки В1 або В2 у клітинах MDA-MB-453. Приклад 2 Потенційні синергічні взаємодії між комбінаціями сполуки А і сполуки В1 або В2 оцінювали відносно адитивної моделі Loewe з використанням програмного забезпечення CHALICE, за допомогою балу синергії, розрахованого з відмінностей між спостережуваними значеннями і значеннями моделі Loewe по матриці відповіді. Коротко, використовували 9 концентрацій, що титрують, які варіюються від 20 мкМ, розведених серійно в три рази для сполуки А і 20 мкМ, розведених серійно в 3 рази, для сполуки В1 або В2, включаючи 0 мкМ. В 96-ямковому планшеті 9 точок концентрації для кожного засобу змішували у форматі матриці, одержуючи 81 комбінацію. Отриманий планшет використовували для обробки клітин раку молочної залози НСТ-116, і отримані інгібуючі значення використовували за допомогою програмного забезпечення CHALICE для одержання матриць інгібування та інгібування надлишком ADD, а також ізоболограм. Більш докладний опис методики і розрахунків може бути виявлений в Lehar et al. "Synergistic drug combinations improve therapeutic selectivity", Nat. Biotechnol. 2009, July; 27(7), 659-666, яке в такий спосіб включено в цей опис у вигляді посилання. Як проілюстровано на фіг. 2, матриця інгібування показала реальне інгібування, що спостерігається за допомогою аналізу CTG у відповідних концентраціях сполук. Інгібування надлишком ADD показало інгібування надлишком, що спостерігається відносно інгібування, передвіщеного за допомогою адитивної моделі Loewe. На додаток до матриць для спостереження за синергією можна використовувати ізоболограми. Рівень інгібування для кожної ізоболограми вибирали вручну так, щоб спостерігати найкращі синергічні ефекти. Ізоболограму одержували з концентраціями сполуки А, показаними по х-осі, і концентраціями сполуки В1 або В2, показаними по у-осі. Пряма лінія, що з'єднує концентрації сполуки А і сполуки В1 або В2, яка давала обраний рівень інгібування, являла собою інгібування росту, яке для комбінацій було чітко адитивним. Графіки, нанесені нижче лінії адитивності (більше інгібування росту), являли собою синергічне інгібування росту, тоді як графіки вище лінії адитивності (менше інгібування росту) являли собою антагоністичне інгібування росту. Синергічну взаємодію спостерігали для комбінації сполуки А і сполуки В1 або В2 у клітинах НСТ-116. Приклад 3 Потенційні синергічні взаємодії між комбінаціями сполуки А і сполуки В1 або В2 оцінювали відносно адитивної моделі Loewe з використанням програмного забезпечення CHALICE, за допомогою балу синергії, розрахованого з відмінностей між спостережуваними значеннями і значеннями моделі Loewe по матриці відповіді. Коротко, використовували 9 концентрацій, що титрують, які варіюються від 20 мкМ, розведених серійно в три рази для сполуки А і 20 мкМ, розведених серійно в 3 рази, для сполуки В1 або В2, включаючи 0 мкМ. В 96-ямковому планшеті 9 точок концентрації для кожного засобу змішували у форматі матриці, одержуючи 81 комбінацію. Отриманий планшет використовували для обробки клітин ER позитивного раку молочної залози MCF-7, і отримані інгібуючі значення використовували за допомогою 6 UA 114178 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 програмного забезпечення CHALICE для одержання матриць інгібування та інгібування надлишком ADD, а також ізоболограм. Більш докладний опис методики і розрахунків може бути виявлений в Lehar et al. "Synergistic drug combinations improve therapeutic selectivity", Nat. Biotechnol. 2009, July; 27(7), 659-666, яке в такий спосіб включено в цей опис у вигляді посилання. Як проілюстровано на фіг. 3, матриця інгібування показала реальне інгібування, що спостерігається за допомогою аналізу BrdU у відповідних концентраціях сполук. Інгібування надлишком ADD показало інгібування надлишком, що спостерігається відносно інгібування, передвіщеного за допомогою адитивної моделі Loewe. На додаток до матриць для спостереження за синергією можна використовувати ізоболограми. Рівень інгібування для кожної ізоболограми вибирали вручну так, щоб спостерігати найкращі синергічні ефекти. Ізоболограму одержували з концентраціями сполуки А, показаними по х-осі, і концентраціями сполуки В1 або В2, показаними по у-осі. Пряма лінія, що з'єднує концентрації сполуки А і сполуки В1 або В2, яка давала обраний рівень інгібування, являла собою інгібування росту, яке для комбінацій було чітко адитивним. Графіки, нанесені нижче лінії адитивності (більше інгібування росту), являли собою синергічне інгібування росту, тоді як графіки вище лінії адитивності (менше інгібування росту) являли собою антагоністичне інгібування росту. Синергічну взаємодію спостерігали для комбінації сполуки А і сполуки В1 або В2 у клітинах MCF-7. Приклад 4 Потенційні синергічні взаємодії між комбінаціями сполуки А і сполуки В1 або В2 оцінювали відносно адитивної моделі Loewe з використанням програмного забезпечення CHALICE, за допомогою балу синергії, розрахованого з відмінностей між спостережуваними значеннями і значеннями моделі Loewe по матриці відповіді. Коротко, використовували 9 концентрацій, що титрують, які варіюються від 20 мкМ, розведених серійно в три рази для сполуки А і 20 мкМ, розведених серійно в 3 рази, для сполуки В1 або В2, включаючи 0 мкМ. В 96-ямковому планшеті 9 точок концентрації для кожного засобу змішували у форматі матриці, одержуючи 81 комбінацію. Отриманий планшет використовували для обробки клітин ER позитивного раку молочної залози T47-D, і отримані інгібуючі значення використовували за допомогою програмного забезпечення CHALICE для одержання матриць інгібування та інгібування надлишком ADD, а також ізоболограм. Більш докладний опис методики і розрахунків може бути виявлений в Lehar et al. "Synergistic drug combinations improve therapeutic selectivity", Nat. Biotechnol. 2009, July; 27(7), 659-666, яке в такий спосіб включено в цей опис у вигляді посилання. Як проілюстровано на фіг. 4, матриця інгібування показала реальне інгібування, що спостерігається за допомогою аналізу BrdU у відповідних концентраціях сполук. Інгібування надлишком ADD показало інгібування надлишком, що спостерігається відносно інгібування, передвіщеного за допомогою адитивної моделі Loewe. На додаток до матриць для спостереження за синергією можна використовувати ізоболограми. Рівень інгібування для кожної ізоболограми вибирали вручну так, щоб спостерігати найкращі синергічні ефекти. Ізоболограму одержували з концентраціями сполуки А, показаними по х-осі, і концентраціями сполуки В1 або В2, показаними по у-осі. Пряма лінія, що з'єднує концентрації сполуки А і сполуки В1 або В2, яка давала обраний рівень інгібування, являла собою інгібування росту, яке для комбінацій було чітко адитивним. Графіки, нанесені нижче лінії адитивності (більше інгібування росту), являли собою синергічне інгібування росту, тоді як графіки вище лінії адитивності (менше інгібування росту) являли собою антагоністичне інгібування росту. Синергічну взаємодію спостерігали для комбінації сполуки А і сполуки В1 або В2 у клітинах T47-D. ФОРМУЛА ВИНАХОДУ 50 1. Комбінація, що включає: (1) сполуку А, описану формулою А: 7 UA 114178 C2 N N HN N N O N N N H 5 , формула А або її фармацевтично прийнятну сіль, та (2) сполуку, вибрану з групи, що включає: а) сполуку В1, описану формулою В1: O N CF3 N N H2N 10 N O N , формула В1 або її фармацевтично прийнятну сіль, та б) сполуку В2, описану формулою В2: H N N S N O O F N NH2 F F , формула В2 15 20 або її фармацевтично прийнятну сіль. 2. Застосування комбінації за п. 1 для одержання лікарського препарату, де лікарський препарат призначений для лікування раку, вибраного з групи, що включає: рак молочної залози та рак ободової кишки. 3. Застосування за п. 2, де раком молочної залози є ER позитивний рак молочної залози. 4. Застосування за п. 2, де раком молочної залози є Неr2 позитивний рак молочної залози. 5. Застосування за п. 2, де раком молочної залози є рак молочної залози з мутацією РІ3K. 6. Застосування за п. 2, де раком ободової кишки є колоректальна карцинома. 7. Застосування за п. 2, де раком ободової кишки є аденокарцинома ободової кишки. 8 UA 114178 C2 8. Застосування за п. 2, де раком ободової кишки є аденома ободової кишки. 9 UA 114178 C2 Комп’ютерна верстка О. Рябко Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 10