Похідне 5-тієніл-1,2,4-триазол-3-тіону, що проявляє туберкулостатичну дію

Реферат: Похідне 5-тієніл-1,2,4-триазол-3-тіону ілтіо)ацетат формули: N S NH S N H2 C O C O CH3 CH CH3 що проявляє туберкулостатичну дію. , ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)-1H-1,2,4-триазол-5 UA 97868 U (12) UA 97868 U UA 97868 U 5 Корисна модель належить до фармацевтичної хімії, медицини та ветеринарії і може бути використана для створення нових протитуберкульозних засобів. Туберкульоз - це поширене захворювання як людей, так і тварин у багатьох регіонах світу. Наприкінці XX - початку XXI ст. ступінь небезпеки цієї хвороби все більше зростає. Хвороба наносить серйозні економічні збитки у тваринництві, які пов'язані зі зниженням продуктивності, передчасною вибраковкою і здаванням тварин на забій, а також іншими витратами. Прототипом речовин, що заявляються, є препарат "Ізоніазид", формули: H N O NH2 N 10 15 20 , що використовується як протитуберкульозний препарат (Машковский М.Д. Лекарственные средства. - X.: Торсинг, 2002. - Т. 2. - 608 с. (с. 306-308)). Суттєві ознаки прототипу і корисної моделі, що збігаються, є такі: - в структурі прототипу і корисної моделі присутні групи C=N, С=О. - наявність в структурі нітрогенвмісних гетероциклів. Корисна модель в порівнянні з прототипом дещо активніше проявляє туберкулостатичну дію. В основу корисної моделі поставлена задача створення нових біологічно активних сполук з протитуберкульозною активністю. Це забезпечить розширення арсеналу протитуберкульозних засобів. Поставлена задача вирішується тим, що створено похідне 1,2,4-триазолу ізопропіл-2-(3(тіофен-2-іл)-1H-1,2,4-триазол-5-ілтіо)ацетат (сполука 1) N S NH S N H2 C O C O CH3 CH CH3 25 30 35 40 45 , що проявляє туберкулостатичну дію. Сполуку 1, що заявляється, отримують шляхом взаємодії 2-(3-(тіофен-2-іл)-1H-1,2,4триазол-5-ілтіо)оцтової кислоти з ізопропіловим спиртом в присутності каталітичної кількості сірчаної кислоти. Приклад 1 У круглодонну колбу, обладнану холодильником, завантажують 241,2 г (1 моль) 2-(3(тіофен-2-іл)-1H-1,2,4-триазол-5-ілтіо)оцтової кислоти, 1000 мл ізопропілового спирту та 20 мл сірчаної кислоти. Кип'ятять 40 годин, після чого дають охолонути та нейтралізують NaНСО3 до рН=7. Промивають дистильованою водою, відфільтровують та висушують. Вихід ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)-1Н-1,2,4-триазол-5-ілтіо)ацетату складає 68,3 %. Тпл. 6062 °C нерозчинний у воді. Сполуку очищено із суміші ізопропанол:вода (1:2). Вирахувано: С 46,62 %; Н 4,62; N 14,83 %; S 22,63 %; C11H13N3O2S2. Знайдено: С 46,72 %, Н 4,61 %; N 14,85 %, S 22,61 %. В ІЧ-спектрі сполуки, що заявляється, наявні смуги поглинання тіофенового радикалу при 1430-1400 см-1, а також смуги в межах 1730-1700 см-1, що можуть вказувати на наявність СОгрупи. Крім того ІЧ спектр естеру характеризується смугами поглинання С-О-С-групи в інтервалі 1100-940 см-1. Для визначення активності сполуки, що заявляється, було проведено наступне дослідження. Було проведено культивування патогенних штамів М. bovis за температури 37 °C та їх дисоціативних форм М. bovis за температури 3°°С на середовищі із рН 6,5 та 7,1, що додатково містить ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)-1H-1,2,4-триазол-5-ілтіо)ацетат у масових концентраціях 0,1; 0,5; 1 %, а також для порівняння ізоніазид у масових концентраціях 0,1; 0,5; 1 %. Культивування та накопичення біомаси досліджуваних штамів М. bovis проводили на яєчному живильному середовищі, яке за складом було ідентичним стандартному, виготовленому ДП "Ветеринарна медицина" (Харків, Україна). До середовища додавали препарат ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)-1H-1,2,4-триазол-5-ілтіо)ацетат або ізоніазид відповідно 1 UA 97868 U 5 10 15 20 для отримання концентрацій 0,1 %; 0,5 %; 1 %. Дослідження проводили зі встановленням двох рівнів рН: 6,5 та 7,1. Висів мікобактерій 117а варіанта, накопичених за температури культивування 3°°С, у кількості двох бактеріологічних петель проводили на скошене живильне середовище в 10 пробірок з наступною інкубацією в термостаті впродовж трьох місяців за різних температур (3; 37°°С), зі щоденним спостереженням. У виділених та накопичених мікобактерій вивчали тинкторіальні властивості, морфологічні ознаки, а також строки появи первинного росту, його інтенсивність і характер субкультури. Аналіз та оцінку колоній проводили за кількістю, величиною, формою, поверхнею, консистенцією, пігментоутворенням, прозорістю, блиском та емульгованістю у фізіологічному розчині. Тинкторіальні властивості мікобактерій визначали, готуючи мазки із колоній (культур), зафарбованих за методом Ціля-Нільсена та досліджуючи їх під імерсією мікроскопа SUNNY серії XS із цифровим мікроскопічним комплексом "Микмед-2-1600". Морфологію мікобактерій визначали за: довжиною, товщиною, формою, характером кінців клітин, зернистістю та розташуванням. Гравіметричні вимірювання виконували на лабораторних електронних аналітичних вагах моделі ESJ-200-4 (США). У таблиці 1 систематизовано дані про культуральні властивості М. bovis 100 пасажу, який культивували на середовищі з рН 7,1, що додатково містить ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)-1Н1,2,4-триазол-5-ілтіо)ацетат у трьох концентраціях. Таблиця 1 Характеристика культуральних властивостей М. bovis 100 пасажу, культивованих на середовищі з рН 7,1 за температури 37 °C Контроль Шорсткий наліт Контроль 7-а доба досліду Концентрація ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)-1Н-1,2,4-триазол5-ілтіо)ацетату 0,1 % 0,5 % 1% Ріст відсутній Ріст відсутній Ріст відсутній 14-а доба досліду Концентрація ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)-1Н-1,2,4-триазол5-ілтіо)ацетату 0,1 % 0,5 % 1% Шорсткий наліт та поодинокі білі Ріст відсутній Ріст відсутній Ріст відсутній колонії за лінією посіву 30-а доба досліду Концентрація ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)-1Н-1,2,4-триазол5-ілтіо)ацетату Контроль 0,1 % 0,5 % 1% Суцільний ріст. Гладенькі, дрібні Ріст відсутній Ріст відсутній Ріст відсутній колонії білуватого кольору 60-а доба досліду Концентрація ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)-1Н-1,2,4-триазол5-ілтіо)ацетату Контроль 0,1 % 0,5 % 1% Суцільний ріст. Гладенькі, дрібні Ріст відсутній Ріст відсутній Ріст відсутній колонії білуватого кольору 90-а доба досліду Концентрація ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)-1Н-1,2,4-триазол5-ілтіо)ацетату Контроль 0,1 % 0,5 % 1% Суцільний ріст Ріст відсутній Ріст відсутній Ріст відсутній 25 До 7 доби досліду ріст культури 100 пасажу М. bovis в контрольній групі на середовищі з рН 7,1 за температури 37 °C не відмічався. Результати, наведені в табл. 1, засвідчили відсутність росту культури М. bovis 100 пасажу за трьох (0,1; 0,5 та 1 %) концентрацій ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)-1Н-1,2,4-триазол-5-ілтіо)ацетату. 2 UA 97868 U 5 Аналізуючи культуральні властивості із дослідних концентрацій ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)1Н-1,2,4-триазол-5-ілтіо)ацетату, нами відмічено відсутність росту патогенного штаму М. bovis 100 пасажу впродовж усього періоду спостереження (90 діб), що свідчить про стійку туберкулостатичну дію. У таблиці 2 систематизовано дані щодо культуральних властивостей М. bovis 100 пасажу, який культивували на середовищі з рН 6,5, що додатково містило ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)1Н-1,2,4-триазол-5-ілтіо)ацетат у трьох концентраціях. Таблиця 2 Характеристика культуральних властивостей М. bovis 100 пасажу, культивованих на середовищі з рН 6,5 за температури 37 °C 7-а доба досліду Концентрація ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)-1Н-1,2,4-триазол-5ілтіо)ацетату 0,1 % 0,5 % 1% Контроль Поодинокі посіву Контроль колонії за лінією Ріст відсутній Ріст відсутній Ріст відсутній 14-а доба досліду Концентрація ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)-1Н-1,2,4-триазол-5ілтіо)ацетату 0,1 % 0,5 % 1% Суцільний ріст. Колонії дрібні, Ріст відсутній Ріст відсутній Ріст відсутній білі, гладенькі 30-а доба досліду Концентрація ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)-1Н-1,2,4-триазол-5ілтіо)ацетату Контроль 0,1 % 0,5 % 1% Суцільний ріст. Колонії дрібні, Ріст відсутній Ріст відсутній Ріст відсутній білі, гладенькі 60-а доба досліду Концентрація ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)-1Н-1,2,4-триазол-5ілтіо)ацетату Контроль 0,1 % 0,5 % 1% Суцільний ріст. Колонії дрібні, Ріст відсутній Ріст відсутній Ріст відсутній білі, гладенькі 90-а доба досліду Концентрація ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)-1Н-1,2,4-триазол-5ілтіо)ацетату Контроль 0,1 % 0,5 % 1% Суцільний ріст. Колонії дрібні, Ріст відсутній Ріст відсутній Ріст відсутній білі, гладенькі 10 15 20 До 7-ї доби досліду ріст культури 100 пасажу М. bovis в контрольній групі на середовищі з рН 6,5 за температури 37 °C спостерігався у вигляді поодиноких колоній за лінією посіву. За результатами досліду видно, що дія сполуки, яка заявляється, за різних концентрацій на середовищі з рН 6,5 подібна, як і за рН 7,1. Аналізуючи 0,1 %, 0,5 % та 1,0 % концентрації ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)-1Н-1,2,4-триазол5-ілтіо)ацетату нами відмічена відсутність росту патогенного штаму М. bovis 100 пасажу протягом всього періоду спостереження (90 діб). Таким чином, можна зробити висновок, що усі концентрації ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)-1Н-1,2,4-триазол-5-ілтіо)ацетату суттєво впливають на культуральні властивості патогенного штаму М. bovis, культивованих на середовищі з рН 6,5 за температури 37 С, маючи туберкулостатичною дією. У таблиці 3 систематизовано дані про культуральні властивості дисоціативних форм М. bovis 117а варіанта, який культивували на середовищі з рН 7,1, що додатково містило ізопропіл2-(3-(тіофен-2-іл)-1Н-1,2,4-триазол-5-ілтіо)ацетат у трьох концентраціях. 3 UA 97868 U Таблиця 3 Характеристика культуральних властивостей М. bovis 117а варіанта, культивованих на середовищі з рН 7,1 за температури 3°°С Контроль Концентрація ілтіо)ацетату 0,1 % 3-а доба досліду ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)-1Н-1,2,4-триазол-50,5 % Слизовий наліт Ріст відсутній сіруватого кольору Контроль Концентрація ілтіо)ацетату 0,1 % Ріст відсутній Суцільний ріст колоній помаранчевого кольору Контроль Суцільний ріст колоній помаранчевого кольору 5 10 15 20 25 Ріст відсутній 7-а доба досліду ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)-1Н-1,2,4-триазол-50,5 % Слизовий наліт сірувато-жовтого Ріст відсутній кольору Контроль 1% Ріст відсутній 1% Ріст відсутній 14-а доба досліду Концентрація ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)-1Н-1,2,4-триазол-5ілтіо)ацетату 0,1 % 0,5 % 1% Шорсткий наліт за Шорсткий наліт за лінією лінією посіву сірого посіву яскраво вираженого Ріст відсутній кольору помаранчевого кольору 30-а доба досліду Концентрація ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)-1Н-1,2,4-триазол-5ілтіо)ацетату 0,1 % 0,5 % 1% Суцільний ріст колоній За лінією посіву декілька помаранчевого дрібних колоній Ріст відсутній кольору помаранчевого кольору Вже з 3-ї доби досліду в контрольній групі спостерігається ріст культури 117а варіанта дисоціативних форм М. bovis на середовищі з рН 7,1 за температури 3°°С. Аналізуючи вплив різних концентрацій ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)-1Н-1,2,4-триазол-5ілтіо)ацетату на культуральні властивості М, bovis 117a варіанта, культивованих на середовищі з рН 7,1 за температури 3°°С, відмічено, що протягом 30-и діб спостереження за 0,1 та 0,5 % концентрацій відбувається ріст культур: у вигляді шорсткого нальоту за лінією посіву сіруватого (0,1 %), помаранчевого (0,5 %) кольору - 14 доба досліду до суцільного росту (0,1 %), появі дрібних колоній помаранчевого кольору (0,5 %) - 30 доба. Між тим за 1 % концентрації ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)-1Н-1,2,4-триазол-5-ілтіо)ацетату протягом всього періоду досліду поява та ріст колоній не відмічалась, що свідчить про туберкулостатичну дію сполуки, яка заявляється, за використання високої концентрації. У таблиці 4 систематизовано дані про культуральні властивості М. bovis 117а варіанта, який культивували на середовищі з рН 6,5, що додатково містило ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)-1Н1,2,4-триазол-5-ілтіо)ацетат у трьох концентраціях. Вивчаючи вплив різних концентрацій ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)-1Н-1,2,4-триазол-5ілтіо)ацетату на культуральні властивості М. bovis 117а варіанта, культивованих на середовищі з рН 6,5 за температури 3°°С спостерігалася також тенденція, як за рН 7,1: протягом перших 3-х діб спостереження різних концентрацій ріст М. bovis відсутній; починаючи з 7 доби виявлено шорсткий наліт сіруватого кольору; а у контролі - слизовий наліт сірувато-жовтого кольору. На 14 добу досліду за 0,1 % концентрацією препарату виявлені дрібні колонії блідо-рожевого кольору; а 0,5 % - шорсткий наліт за лінією посіву; на 30-у добу за 0,1 % та 0,5 % концентрації ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)-1Н-1,2,4-триазол-5-ілтіо)ацетату суцільний ріст колоній помаранчевого кольору. За 1 % концентрацією ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)-1Н-1,2,4-триазол-5ілтіо)ацетату спостерігається відсутність росту культури дисоціативної форми М. bovis 117а варіанта. 4 UA 97868 U Таблиця 4 Характеристика культуральних властивостей М. bovis 117 а варіанта, культивованих на середовищі з рН 6,5 за температури 3°°С Контроль Концентрація ілтіо)ацетату 0,1 % 3-а доба досліду ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)-1Н-1,2,4-триазол-50,5 % Слизовий наліт Ріст відсутній сіруватого кольору Ріст відсутній 1% Ріст відсутній 7-а доба досліду Концентрація ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)-1Н-1,2,4-триазол-5ілтіо)ацетату Контроль 0,1 % 0,5 % 1% Слизовий наліт Ріст відсутній. За Ріст відсутній. За сірувато-жовтого лінією посіву шорсткий лінією посіву шорсткий Ріст відсутній кольору наліт наліт 14-а доба досліду Концентрація ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)-1H-1,2,4-триазол-5ілтіо)ацетату Контроль 0,1 % 0,5 % 1% За лінією посіву Шорсткий наліт за Суцільний ріст колоній декілька дрібних лінією посіву помаранчевого Ріст відсутній колоній блідо-рожевого помаранчевого кольору кольору кольору 30-а доба досліду Концентрація ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)-1Н-1,2,4-триазол-5ілтіо)ацетату Контроль 0,1 % 0,5 % 1% Суцільний ріст колоній Суцільний ріст колоній Суцільний ріст колоній помаранчевого помаранчевого помаранчевого Ріст відсутній кольору кольору кольору 5 10 15 20 25 Отже, ці дослідження засвідчили, що ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)-1Н-1,2,4-триазол-5ілтіо)ацетат за різних концентрацій пригнічує ріст і розвиток патогенного штаму М. bovis, культивованого на середовищі з рН 7,1 та 6,5 за температур 37 °C та 3°°С; протягом 90 діб спостерігалася відсутність росту колоній даного штаму мікобактерій, що свідчить про його туберкулостатичну дію. Різні концентрації ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)-1Н-1,2,4-триазол-5-ілтіо)ацетату (0,1, 0,5 %) на середовищі з рН 6,5 та 7,1 за температури 3°°С не впливають на характер росту колоній дисоціативних (апатогенних) форм М. bovis 117а варіанта: ріст відбувається так само, як і в контролі. Встановлено, що 1 % концентрація ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)-1Н-1,2,4-триазол-5ілтіо)ацетату затримує ріст і розвиток колоній впродовж 30 діб досліду, що засвідчує його туберкулостатичну дію за високої концентрації. В якості препарату порівняння, використовувався класичний туберкулостатик ізоніазид за різних концентрацій, рН середовища та температур (3 та 37 °C). Ізоніазид, згідно з класифікацією протитуберкульозних препаратів міжнародної спілки боротьби із туберкульозом, відноситься до І групи - препарати високої ефективності. Як контроль використовували М. bovis 100 пасажу та дисоціативні форми 117 а варіанта без додавання до середовища препарату ізоніазид. Для цього відбирали М. bovis 100 пасажу, який культивували за температури 37 °C на середовищі з препаратом ізоніазид у зазначених концентраціях у термостаті протягом трьох місяців на середовищі з рН 6,5 та рН 7,1 (в кількості десять пробірок із кожною концентрацією препарату). М. bovis 117 а варіанта культивували за температури 3°°С на середовищі з препаратом ізоніазид у зазначених концентраціях у термостаті з охолоджуючим ефектом протягом трьох місяців на середовищі з рН 6,5 та рН 7,1 (в кількості десять пробірок із кожною концентрацією препарату). У виділених та накопичених мікобактерій вивчали строки появи первинного росту, його інтенсивність і характер субкультури. 5 UA 97868 U 5 У таблиці 5 систематизовано дані про культуральні властивості М. bovis 100 пасажу, який культивували на середовищі з рН 7,1, що додатково містило препарат ізоніазид у трьох концентраціях. До 7-ї доби досліду ріст культури 100 пасажу М. bovis на середовищі з рН 7,1 за температури 37 °C не відмічався. Таблиця 5 Характеристика культуральних властивостей 100 пасажу М. bovis, культивованих на середовищі з рН 7,1 за температури 37 °C 7-а доба досліду Концентрація препарату ізоніазид Контроль 0,1 % 0,5 % 1% Слизовий наліт Слизовий наліт Слизовий наліт Ріст відсутній жовтуватого кольору 14-а доба досліду Концентрація препарату ізоніазид Контроль 0,1 % 0,5 % 1% Поодинокі гладенькі Без змін Без змін Ріст відсутній колонії 30-а доба досліду Концентрація препарату ізоніазид Контроль 0,1 % 0,5 % 1% Численні колонії білого Поодинокі колонії Дрібні колонії білого Ріст відсутній кольору білуватого кольору кольору 60-а доба досліду Концентрація препарату ізоніазид Контроль 0,1 % 0,5 % 1% Суцільний ріст. Дещо збільшилася Гладенькі, дрібні Дрібні колонії білого кількість поодиноких Ріст відсутній колонії білуватого кольору дрібних колоній кольору 90-а доба досліду Концентрація препарату ізоніазид Контроль 0,1 % 0,5 % 1% Дещо збільшилася Суцільний ріст Суцільний ріст кількість поодиноких Ріст відсутній дрібних колоній 10 15 20 Характеризуючи отримані дані, що наведені в таблиці 5, нами визначена відсутність росту культури М. bovis 100 пасажу за 1 % концентрації препарату ізоніазид. На сьому добу досліду за 0,1 % концентрації виявлений слизовий наліт жовтуватого кольору, на 30-у добу з'являються поодинокі дрібні колонії білуватого кольору, на 60-добу їх кількість збільшується і на 90-у добу визначено суцільний ріст, як і в контролі. За використання 0,5 % концентрації препарату ізоніазид на 7-у добу виявлений слизовий наліт, на 14 добу досліду з'являються поодинокі гладенькі колонії, на 30 та 60 добу - дрібні колонії білого кольору. На 90 добу збільшилася кількість поодиноких дрібних колоній. Аналізуючи 1 % концентрацію препарату ізоніазид нами визначено відсутність росту патогенного штаму М. bovis 100 пасажу протягом усього періоду досліду (90 діб), що свідчить про туберкулостатичну дію препарату. Культуральні властивості М. bovis 100 пасажу, накопиченого та культивованого на середовищі з рН 6,5 за температури 37 °C з препаратом ізоніазид у трьох концентраціях представлені в таблиці 6. 6 UA 97868 U Таблиця 6 Характеристика культуральних властивостей 100 пасажу М. bovis, культивованих на середовищі з рН 6,5 з препаратом ізоніазид за температури 37 °C 7-а доба досліду Концентрація препарату ізоніазид Контроль 0,1 % 0,5 % 1% Поодинокі колонії Слизовий наліт Шорсткий наліт Ріст відсутній білуватого кольору 14-а доба досліду Концентрація препарату ізоніазид Контроль 0,1 % 0,5 % 1% Поодинокі колонії Поодинокі гладенькі Без змін Ріст відсутній білуватого кольору колонії 30-а доба досліду Концентрація препарату ізоніазид Контроль 0,1 % 0,5 % 1% Поодинокі дрібні Численні колонії білого Поодинокі колонії Дрібні колонії білого колонії за лінією кольору білуватого кольору кольору посіву 60-а доба досліду Концентрація препарату ізоніазид Контроль 0,1 % 0,5 % 1% Ріст білуватих, Ріст білуватих, Суцільний ріст. Колонії поодиноких гладеньких поодиноких гладеньких Без змін дрібні, білі, гладенькі колоній колоній 90-а доба досліду Концентрація препарату ізоніазид Контроль 0,1 % 0,5 % 1% Збільшилася Збільшилася кількість Збільшилася кількість Суцільний ріст. Колонії кількість поодиноких дрібних поодиноких дрібних дрібні, білі, гладенькі поодиноких колоній колоній дрібних колоній 5 10 15 20 25 До 14 доби досліду ріст культури 100 пасажу М. bovis на середовищі з рН 6,5 за температури 37 °C не відмічався. Аналізуючи результати досліду, наведені в табл. 6, нами визначені відмінності дії 1 % концентрації препарату ізоніазид на середовищах з рН 6,5, і 7,1. Якщо на середовищі з рН 7,1 ріст культури М. bovis 100 пасажу протягом 90 діб культивування не спостерігався, то на середовищі з рН 6,5 з 30 доби з'являються поодинокі дрібні колонії, кількість яких на 90 добу збільшувалась. 0,1 % концентрація препарату ізоніазид незначно впливає на ріст М. bovis - вже на 7 добу виявлені поодинокі колонії білуватого кольору, кількість яких поступово збільшується з терміном спостереження. За 0,5 % концентрації препарату ізоніазид ріст колоній відмічається на 14 добу - колонії дрібні, гладенькі, білого кольору, кількість яких має тенденцію до збільшення протягом терміну спостереження. У таблиці 7 систематизовано дані про культуральні властивості дисоціативних форм М. bovis 111 а варіанта, який культивували на середовищі з рН 7,1, що додатково містило препарат ізоніазид у трьох концентраціях. Вже з 3-ї доби досліду спостерігається ріст культури 117а варіанта дисоціативних форм М. bovis на середовищі з рН 7,1 за температури 3°°С за всіх концентрацій препарату. Аналізуючи вплив різних концентрацій препарату ізоніазид на культуральні властивості 117а варіанта М. bovis, культивованих на середовищі з рН 7,1 за температури 3°°С відмічено, що протягом 30-и діб спостереження за 0,1 та 0,5 % концентрацій відбувається ріст культур: у вигляді слизового нальоту за лінією посіву - 3 доба, росту дрібних колоній блідо-помаранчевого кольору (до 14 доби) до суцільного росту з характерною пігментацією (помаранчевого кольору) 7 UA 97868 U 30-а доба досліду. За 1 % концентрації препарату ізоніазид протягом перших 14 діб досліду спостерігається слизовий наліт за лінією посіву, а на 30-у - слабкий ріст дрібних поодиноких колоній блідо-помаранчевого кольору. Таблиця 7 Характеристика культуральних властивостей 117 а варіанта М. bovis, культивованих на середовищі з рН 7,1 з препаратом ізоніазид за температури 3°°С Контроль Слизовий наліт сіруватого кольору Контроль Слизовий наліт сі ру вато-жовтого кольору Контроль Суцільний ріст колоній помаранчевого кольору Контроль Суцільний ріст колоній помаранчевого кольору 3-а доба досліду Концентрація препарату ізоніазид 0,1 % 0,5 % Ріст слабкий. Слизовий наліт Поодинокі колонії сіруватого кольору за помаранчевого лінією посіву кольору 7-а доба досліду Концентрація препарату ізоніазид 0,1 % 0,5 % За лінією посіву Ріст слабкий. декілька дрібних Поодинокі колонії колоній блідо- сіруватопомаранчевого помаранчевого кольору кольору 14-а доба досліду Концентрація препарату ізоніазид 0,1 % 0,5 % За лінією посіву За лінією посіву збільшилась кількість декілька дрібних дрібних колоній колоній блідосіруватопомаранчевого помаранчевого кольору кольору 30-а доба досліду Концентрація препарату ізоніазид 0,1 % 0,5 % За лінією посіву збільшилась кількість Суцільний ріст колоній дрібних колоній помаранчевого сіруватокольору помаранчевого кольору 1% Слизовий наліт сіруватого кольору за лінією посіву 1% Слизовий наліт сіруватого кольору за лінією посіву 1% Слизовий наліт сіруватого кольору за лінією посіву 1% Ріст слабкий. Поодинокі колонії блідо-помаранчевого кольору 5 У таблиці 8 систематизовано дані про культуральні властивості М. bovis 117а варіанта, який культивували на середовищі з рН 6,5, що додатково містило препарат ізоніазид у трьох концентраціях. Таблиця 8 Характеристика культуральних властивостей 117 а варіанта М. bovis, культивованих на середовищі з рН 6,5 з препаратом ізоніазид за температури 3°°С Контроль 3-а доба досліду Концентрація препарату ізоніазид 0,1 % 0,5 % 1% Слизовий наліт, поодинокі колонії Слизовий наліт Слизовий наліт Слизовий наліт сірувато-гірчичного сіруватого кольору сіруватого кольору сіруватого кольору кольору 10 8 UA 97868 U Продовження таблиці 8 7-а доба досліду Концентрація препарату ізоніазид 0,1 % 0,5 % Контроль Слизовий наліт, поодинокі колонії За лінією посіву колонії Слизовий наліт сірувато-гірчичного помаранчевого кольору сіруватого кольору кольору 14-а доба досліду Концентрація препарату ізоніазид Контроль 0,1 % 0,5 % Суцільний ріст колоній За лінією посіву колонії Слизовий наліт гірчичного кольору помаранчевого кольору сіруватого кольору 30-а доба досліду Концентрація препарату ізоніазид Контроль 0,1 % 0,5 % Суцільний ріст колоній Суцільний ріст колоній Суцільний ріст колоній помаранчевого сіруватопомаранчевого кольору кольору помаранчевого кольору 5 10 15 20 1% Слизовий наліт сіруватого кольору 1% Слизовий наліт сіруватого кольору 1% Слизовий наліт сіруватопомаранчевого кольору Оцінюючи вплив різних концентрацій препарату ізоніазид на культуральні властивості 117а варіанта М. bovis, культивованих на середовищі з рН 6,5 за температури 3°°С, нами виявлено подібну тенденцію, як і під час дослідження цієї культури за рН 7,1: протягом перших 3-х діб спостереження за всіх досліджуваних концентрацій виявлений слизовий наліт сіруватого кольору (на відміну від контролю, де спостерігалися поодинокі колонії сірувато-гірчичного кольору); на 7-у та 14-у добу - за концентрацій препарату 0,5 та 1 % змін не спостерігалося, за концентрації препарату 0,1 % - збільшення за лінією посіву дрібних колоній помаранчевого кольору, в контролі - суцільний ріст колоній гірчичного кольору; на 30-у добу - відзначено суцільний ріст колоній помаранчевого кольору (контроль, 0,1 % концентрація), сіруватопомаранчевого кольору (0,5 % концентрація). За 1 % концентрацій препарату ізоніазид спостерігаються подібні зміни в рості культури дисоціативної форми М. bo vis 117а варіанта, як і протягом перших 14 діб досліду. Відзначався слизовий наліт сірувато-помаранчевого кольору. Отже, проведені дослідження засвідчили, що препарат ізоніазид за 1 % концентрації пригнічує ріст і розвиток патогенного штаму М. bovis, культивованого на середовищі з рН 7,1 за температури 37 °C, що свідчить про туберкулостатичну його дію. Низька концентрація (0,1 та 0,5 %) препарату ізоніазид на середовищі з рН 6,5 та 7,1 за температури 37 °C ріст патогенного штаму М. bovis 100-го пасажу не стримує. Різні концентрації препарату (0,1, 0,5 та 1 %) на середовищі з рН 6,5 та 7,1 за температури 3 °C не впливають на характер росту колоній дисоціативних (апатогенних) форм М. bovis 117а варіанта: ріст відбувається так само, як і в контролі, що свідчить про дещо меншу туберкулостатичну дію, ніж у сполуки, яка заявляється. Таким чином, сполука, що заявляється, проявляє виражену туберкулостатичну дію та може бути використана в подальшому для створення нових протитуберкульозних засобів. 25 ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ Похідне 5-тієніл-1,2,4-триазол-3-тіону ілтіо)ацетат формули: N S NH S N H2 C O C O CH3 CH CH3 30 ізопропіл-2-(3-(тіофен-2-іл)-1H-1,2,4-триазол-5 , що проявляє туберкулостатичну дію. 9 UA 97868 U Комп’ютерна верстка Г. Паяльніков Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 10