Композиція людських ембріональних стовбурових клітин або їхніх похідних, способи застосування та способи одержання (варіанти)

Реферат: Даний винахід стосується фармацевтичної композиції, яка включає препарати людських ембріональних стовбурових (hES) клітин та їх похідних, та способів її одержання. Вказані стовбурові клітин є вільними від тваринних продуктів, живильних клітин, факторів росту, інших ніж βhCG та прогестерон, інгібіторного фактора лейкемії, додаткових мінеральних комбінацій, додаткових амінокислот, вітамінних домішок, фактора росту фібробластів, мембраноасоційованого фактора Стіла, розчинного фактора Стіла та кондиціонованих середовищ. UA 99813 C2 (12) UA 99813 C2 UA 99813 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 РІВЕНЬ ТЕХНІКИ Галузь винаходу Цей винахід стосується фармацевтичних композицій, які включають людські ембріональні стовбурові (hES) клітини або їхні похідні, вищезгадані стовбурові клітини є вільними від тваринних продуктів, живильних клітин, факторів росту, інгібіторного фактора лейкемії, додаткових мінеральних комбінацій, додаткових амінокислот, вітамінних домішок, фактор росту фібробластів, мембрано-асоційованого сталевого фактора, розчинного сталевого фактора та кондиціонованих середовищ, для застосування для лікування наразі невиліковних, термінальних та медичних захворювань, станів або порушень. тобто, винахід стосується способів лікування клінічних порушень і термінальних або наразі невиліковних станів з застосуванням hES клітин через протокол трансплантації. Винахід також стосується нових способів одержання нових ліній стовбурових клітин, які є вільними від тваринних продуктів, живильних клітин, факторів росту, інгібіторного фактора лейкемії, додаткових мінеральних комбінацій, додаткових амінокислот, вітамінних домішок, фактор росту фібробластів, мембраноасоційованого сталевого фактора, розчинного сталевого фактора та кондиціонованих середовищ. Цей винахід також стосується виділення, культивування, підтримання, поширення, диференціації, зберігання та консервації таких стовбурових клітин. Рівень техніки Велика кількість людських медичних порушень, станів та хвороб нині або не піддаються лікуванню з застосуванням існуючих засобів медикаментозної терапії, хірургії та трансплантації, або вони є термінальними. Стовбурові клітини мають здатність до ділення для утворення "дочірніх" клітин, які зберігають властивості стовбурової клітини, або до вироблення дочірніх клітин, які починають видозмінюватися до більш пристосованого типу клітин, або до вироблення однієї дочірньої клітини кожного типу. Таким чином, стовбурові клітини є ключовими для нормального росту та розвитку людини і, завдяки своїм природним характеристикам, також є потенційними джерелами нових клітин для регенерації хворої або пошкодженої тканини. Стовбурові клітини є присутніми на всіх стадіях розвитку і у багатьох (можливо, у більшості) тканин дорослих організмів. Стовбурові клітини з різних тканин і з різних стадій розвитку є різними за кількістю та типами клітин, які вони зазвичай утворюють. Головними класами стовбурових клітин згідно з цією класифікацією є ембріональні стовбурові клітини, соматичні стовбурові клітини та ембріональні зародкові клітини. На найперших стадіях після запліднення (до стадії восьми клітин) усі клітини ембріона є тотипотентними (тобто, вони мають здатність розвиватись у будь-який тип клітини, необхідний для повного розвитку, включаючи позаембріональні тканини, такі, як плацента та пуповина). Приблизно через два-п'ять днів досягається стадія бластоцист. У межах цієї кулі з 50-100 клітин знаходиться маса внутрішніх клітин, які розвиваються у власне ембріон. Маса внутрішніх клітин включає приблизно чверть від усіх клітин на цій стадії розвитку та унікальний клас стовбурових клітин; ембріональні стовбурові клітини. Ембріональні стовбурові клітини мають властиву здатність або потенціал до диференціації до кожного з приблизно 200 типів клітин організму і описуються як плюрипотентні. Здатність hES клітин до сприяння розвиткові всіх типів тканин до цього часу повністю не доведено, але вони можуть вирощуватися протягом тривалих періодів часу у культурі і збільшуватися у кількості без зміни їх клітинного генотипу або фенотипу, зберігаючи свій плюрипотентний стан за цих умов. Після стадії бластоцист стовбурові клітини складають дедалі зменшувану частку клітин в ембріоні, плоді та дорослому організмі. Багато, якщо не більшість, тканин у плоді та дорослому організмі містять стовбурові клітини, які в їх звичному місці мають потенціал до диференціації до обмеженої кількості конкретних типів клітин з метою регенерації тканини, в якій вони зазвичай перебувають. Ці стовбурові клітини (соматичні стовбурові клітини) є мультипотентними і можуть мати більш обмежений потенціал, ніж ембріональні стовбурові клітини, в тому, що вони зазвичай утворюють деякі, але не всі з типів клітин у людському організмі. Головними джерелами соматичних стовбурових клітин є кістковий мозок та пуповинна кров плоду та дорослого організму. Ембріональні стовбурові клітини являють собою чудову in vitro систему для дослідження явищ диференціації клітин, лікарського скринінгу і як первинне джерело спеціалізованих диференційованих клітин для майбутнього регенеративного терапевтичного застосування. Ембріональні стовбурові клітини, будучи плюрипотентними, мають потенціал розвитку до утворення будь-якого типу диференційованих клітин. Таким чином, хвороба, яка є результатом недостатності або дерегуляції, генетичної або набутої, конкретних типів клітин, можуть піддаватися лікуванню шляхом трансплантації hES клітин або їхніх похідних через заміну 1 UA 99813 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 дефектних клітин та регенерацію ураженого органа або тканини, а також через стимулювання неактивної й відмираючої тканини. Вказувалося, що трансплантація hES клітин або їхніх похідних у людський організм має потенціал як засіб від нерозв'язаних медичних проблем. Існує поширена думка, що трансплантація hES клітин має створити революцію у лікуванні багатьох різних хвороб, станів та порушень, але на разі дослідження обмежуються доклінічними дослідами на мишах та приматах. Існують сумніви стосовно того, що результати, які спостерігаються у тваринних моделях, дійсно є репрезентативними для явищ, які мають траплятися після трансплантація таких клітин у людський організм. Крім того, без клінічного застосування концепції фармацевтичні композиції, протоколи, шляхи введення та дозування для введення стовбурових клітин залишаються невизначеними і невипробуваними. Крім того, хоча в клінічних умовах застосовували людські стовбурові клітини, які походять із джерел, відмінних від ембріонів або ксенотрансплантатів клітин, тканин та органів з інших видів, ці спроби значною мірою були невдалими або викликали шкідливі для здоров'я побічні ефекти. Даний винахід забезпечує трансплантацію фармацевтичної композиції, яка включає hES клітини та/або їхні похідні в організм людей, які страждають від різних наразі невиліковних або термінальних станів, хвороб або порушень. У Патенті США № 5,453,457 описується композиція, яка включає плюрипотентні клітини відмінного від миші ссавця, які походять від первісних зародкових клітин і включають основний фактор росту фібробластів, мембрано-асоційований сталевий фактор, розчинний сталевий фактор та інгібіторний фактор лейкемії. У Патенті США № 6,800,480 заявляється композиція, яка включає недиференційовані hES клітини, які проліферують на позаклітинному матриксі. У Патентній заявці США № 2003/0017587 описується in vitro поширення недиференційованих ембріональних стовбурових клітин, які отримують з недоношеного плоду або свіжих або заморожених бластоцист у стадії розщеплення з застосуванням культурального середовища, яке не потребує живильних клітин. Відразу після виділення ембріональні стовбурові клітини вводять культуральне середовище для клітин, доповнене факторами росту, ембріональною сироваткою великої рогатої худоби, фактором росту нейронів, інгібіторним фактором лейкемії, фактором росту фібробластів, мембрано-асоційованим сталевим фактором, розчинним сталевим фактором або кондиціонованими середовищами, які є небажаними, якщо враховувати можливі побічні ефекти після трансплантації в організм пацієнта. Крім того, у вищезгаданій патентній заявці нічого не сказано про протокол, який має застосовуватися для лікування генетичних або клінічних порушень, за винятком випадків, коли пацієнт потребує однієї дози кожного типу клітин. У Патентній заявці США № 2004/0071665 пропонується терапевтичний спосіб, який передбачає застосування стовбурових клітин ссавця для лікування від кардіопатологій. У прикладі пропонуються ембріональні стовбурові клітини, диференційовані для утворення кардіоміогенного кластера, який культивують на живильних клітинах, а потім шляхом ін'єкції вводять у три місця серця миші, яка має інфаркт міокарда. У Патентній заявці США № 2004/0107453 описується спосіб одержання, підтримання та диференціації стовбурових клітин дорослого організму та їх застосування у терапевтичному лікуванні. У Патентній заявці США № 2005/0124003 описується спосіб одержання, підтримання та диференціації ембріональних стовбурових клітин та їх застосування у терапевтичному лікуванні. Зокрема, оскільки це особливо стосується даного винаходу, трансплантація ембріональних стовбурових клітин у мишачих моделях пошкодження спинного мозку (SCI) чітко продемонструвала їх майбутній потенціал як першочергового засобу у лікуванні гострого SCI (McDonald et al., (1999) Nature Med. 5:1410; Kerr et al., (2003) J. Neurosci. 23:5131; Roy et al., (2004) Nature Biotechnology, 22:297; Hori et al., (2003) Stem Cells, 21:405; Harper, (2004) Proc. Natl. Acad. Sci. 101:7123). Незважаючи на продемонстровану ефективність у тваринних моделях, через скептицизм стосовно проблеми відторгнення "трансплантат проти хазяїна", перспективи довічного введення імуносупресорів і утворення пухлин та тератом, досі не отримано дозволу на відновлення експериментальних випробувань доклінічної безпеки та ефективності на людях. Ще одна проблема, пов'язана з проектуванням клінічних досліджень, яка, зокрема, стосується даного винаходу, полягає в тому, що не існує визначених протоколів або режимів введення, немає досліджень щодо терапевтично ефективної дози або активної фармацевтичної композиції, або щодо того, які типи клітин або комбінації клітин слід застосовувати. 2 UA 99813 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Таким чином, метою даного винаходу є розробка фармацевтичних композицій, які включають hES клітини та їх похідні, які є вільними від тваринних продуктів, живильних клітин, факторів росту, інгібіторного фактора лейкемії, додаткових мінеральних комбінацій, додаткових амінокислот, вітамінних домішок, фактора росту фібробластів, мембрано-асоційованого сталевого фактора, розчинного сталевого фактора та кондиціонованих середовищ, суспендованих у біосумісному розчині, носії або матриксі, і, таким чином, є придатними до застосування для людини. Ще однією метою даного винаходу є розробка протоколу для лікування наразі невиліковних або термінальних порушень. Ще однією метою даного винаходу є розробка протоколу для лікування SCI (пошкодження спинного мозку). Композиції згідно з даним винаходом є простими у приготуванні, безпечними, дешевими, ефективними, легко піддаються транспортуванню, є масштабованими, мають добрий термін зберігання і не створюють побічних ефектів, таких, як реакції антитіла з антигеном, аберантні іннервації, канцерогенність, утворення тератом або відторгнення трансплантата хазяїном. Також даний винахід вимагає лише одного ембріона, а отже, не вимагається постійного постачання людських ембріонів. Також протокол лікування згідно з даним винаходом не вимагає застосування імуносупресорів і не залежить від типу HLA, не залежить від раси, статі або віку суб'єкта, який піддається лікуванню, для ефективного лікування хвороб, станів або порушень, не викликає рецидивів і не вимагає попередньої підготовки з введення. Таким чином, лікування суб'єктів фармацевтичними композиціями згідно з практикою даного винаходу є можливим у будь-якій належним чином оснащеній клініці у будь-якій частині світу. Для трансплантації людських ембріональних стовбурових клітин людині з терапевтичними цілями важливим є, щоб такі клітини були вільними від забруднень, таких, як бактерії, віруси, пріони та віроїди. Запровадження робочих стандартів лабораторної практики, таких, як належні норми виробництва та клінічної практики, знижує ризик таких забруднень до прийнятного рівня. Однак ризик для пацієнта виникає через існуючі способи культивування клітин. Основний ризик полягає в тому, що вводяться компоненти культурального середовища для клітин, які зберігаються у фармацевтичному продукті для введення людині, і вони являють загрозу для пацієнта через непередбачувані побічні ефекти, які неможливо передбачити лише на основі досліджень "безпеки" через випробування на тваринах. Таким чином, існує потреба в усуненні ризику. Характеристики джерела культивування ембріональних стовбурових клітин для введення людині було визначено за таким принципом: воно має бути здатним до проліферації протягом тривалого періоду часу без диференціації, зберігає каріотип, у якому всі з характеристик донора надійно підтримуються протягом культивування, зберігає потенціал до диференціації у похідні ендодерми, мезодерми та ектодерми протягом усього культивування, не диференціюється при культивуванні за відсутності екзогенних чинників, не викликає виникнення тератом, не є імуногенним, не утворює аберантних зв'язків та ектопічної тканини, має вплив на ушкоджену тканину і ділиться in vivo не безперервно, а тоді, коли ці клітини є запрограмованими на це у природному життєвому циклі. Спосіб культивування та описана згідно з винаходом клітинна лінія виключають наявність забруднювачів. Основна увага у дослідженнях до цього часу приділялася розробці умов культивування, які відповідають цим вимогам, але на даний час такі умови не передбачаються або не підтверджуються клінічними випробуваннями. Зокрема, до цього часу дослідження було зосереджено на усуненні потреби у мишачих живильних клітинах як матриксі для вирощування та дедиференціації культури людських ембріональних стовбурових клітин. Частковий захід з забезпечення невідомих факторів росту через видалення живильних клітин та доповнення "кондиціонованих середовищ" також виявив неприйнятний ризик в ідеальному культуральному середовищі. Людські ембріональні стовбурові клітини, які культивували у присутності живильних кондиціонованих середовищ, все одно піддаються характерному ризикові забруднення, а отже, неприйнятному ризикові під час трансплантації в людський організм. Додатковим чинником розробки умов культивування людських ембріональних стовбурових клітин, призначених для введення людині, є питання залишкових екзогенних додатків у середовищах, які можуть бути присутні у фармацевтичній композиції, яка вводиться, але є суттєвими під час фази поширення клітин. До них належать основний фактор росту фібробластів, інгібіторний фактор лейкемії, мембрано-асоційований сталевий фактор, розчинний сталевий фактор, сироватка, альбуміни або альбумінові додатки, додаткові амінокислоти, вітамінні домішки, трансферини або трансферинові додатки, антиоксиданти, інсулін або замісники інсуліну, прекурсори колагену або 3 UA 99813 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 замісники прекурсорів колагену, мікроелементи, залишки "кондиціонованих середовищ", тваринні продукти, живильні клітини, фактори росту, додаткові мінеральні комбінації, додаткові амінокислоти та вітамінні домішки. Вважається, що залишки таких додаткових домішок являють зайвий ризик для безпеки пацієнтів під час трансплантації людських ембріональних стовбурових клітин в організм таких суб'єктів. Крім того, додавання таких факторів до культурального середовища збільшує ризик забруднення з навколишнього середовища і збільшує майбутні витрати на терапію з застосуванням стовбурових клітин, а отже, обмежує можливість її застосування при багатьох захворюваннях, станах або порушеннях. Пропонувалося багато підходів до зниження такого ризику, включаючи описані у патентах та патентних заявках США №№ 5,843,780; 5,690,926; 6,642,048; 6,800,480; 5,166,065; 6,200,806; 5,453,357; 6,090,622; 6,562,619; 6,921,632, 2006/0073587 та 2002/076747. Однак жоден із цих підходів не забезпечує систему для створення фармацевтичного продукту, який містить людські ембріональні стовбурові клітини та їх похідні, які є вільними від потенційно забруднюючих факторів, які можуть впливати на ефективність та безпечність людських ембріональних стовбурових клітин та їх похідних після введення людині. Таким чином, ще одна мета винаходу полягає у розробці спрощеної системи культивування клітин для поширення hES клітин та їх похідних у практично недиференційованому стані з метою вироблення фармацевтичного продукту, який є готовим до застосування при різних медичних порушеннях. Тобто, мета винаходу полягає у забезпеченні способу культивування, який дозволяє одержувати лінію стовбурових клітин, вільну від тваринних продуктів, живильних клітин, факторів росту, інгібіторного фактора лейкемії, додаткових мінеральних комбінацій, додаткових амінокислот, вітамінних домішок, фактора росту фібробластів, мембрано-асоційованого сталевого фактора, розчинного сталевого фактора та кондиціонованих середовищ. КОРОТКИЙ ОПИС ВИНАХОДУ Даний винахід забезпечує фармацевтичні композиції, які включають hES клітини та/або їхні похідні, та застосування hES клітин та їх похідних у лікуванні різних станів, хвороб та порушень, при яких стовбурові клітини вводять у людський організм різними шляхами введення, шляхом місцевого нанесення або введення в уражену тканину. Даний винахід також забезпечує спосіб лікування суб'єкта, який страждає від термінального або нині невиліковного захворювання, порушення або стану, включаючи графік введення терапевтично ефективної кількості hES клітин або їхніх похідних через внутрішньом'язову, внутрішньовенну, каудальну, інтравітреальну, інтрастріарну, інтрапаренхімальну, інтратекальну, епідуральну, ретробульбарну, підшкірну, інтракардіальну, внутрішньоміхурову, внутрішньосуглобну або інтратекальну ін'єкцію, інфузію через епідуральний катетер, інфузію за допомогою катетера у субарахноїдальний блок, внутрішньовенну інфузію, через розпилювач, через аерозоль, внутрішньовагінальним шляхом, через місцеві очні та вушні краплі, і з застосуванням графіка введення hES клітин та їх похідних за місцем або всередину уражених тканин. Перевагу віддають застосуванню hES клітини або їхні похідних, які є вільними від тваринних продуктів, живильних клітин, факторів росту, інгібіторного фактора лейкемії, додаткових мінеральних комбінацій, вітамінних домішок, додаткових амінокислот, фактора росту фібробластів, мембрано-асоційованого сталевого фактора, розчинного сталевого фактора та кондиціонованих середовищ, для уникнення будь-якої можливості забруднення та виникнення негативних побічних ефектів. Клітини hES та їх похідні можуть бути одержані будь-якими відомими й визнаними способами з культури клітин, яка є вільною від живильних клітин та від забруднювачів з будь-якого джерела і є придатною для трансплантації до людського організму. До похідних hES належать диференційовані клітини з людського організму. Даний винахід також забезпечує фармацевтичні композиції для лікування термінальних або нині невиліковних захворювань, порушень або станів, які включають терапевтично ефективну кількість hES клітин та/або їх похідних, причому вищезгадані hES клітини або їхні похідні є вільними від тваринних продуктів, живильних клітин, факторів росту, інгібіторного фактора лейкемії, додаткових мінеральних комбінацій, додаткових амінокислот, вітамінних домішок, фактора росту фібробластів, мембрано-асоційованого сталевого фактора, розчинного сталевого фактора та кондиціонованих середовищ, суспендованих у фармацевтично прийнятному біосумісному розчині або будь-якому іншому носії. Даний винахід також включає hES клітини та/або їхні похідні, вільні від тваринних продуктів, живильних клітин, факторів росту, інгібіторного фактора лейкемії, додаткових мінеральних комбінацій, додаткових амінокислот, вітамінних домішок, фактора росту фібробластів, 4 UA 99813 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 мембрано-асоційованого сталевого фактора, розчинного сталевого фактора та кондиціонованих середовищ, захоплених у біосумісний матеріал або матрикс. Біосумісний матеріал або матрикс може бути вибраний з-поміж біополімерів, включаючи поліпептиди або білки, полісахаридів, включаючи фібронектин, різних типів колагену, ламініну, кератину, фібрину, фібриногену, гіалуронової кислоти, гепаринсульфату, хондроїтинсульфату, агарози або желатину. Композиції згідно з даним винаходом можуть бути у готовій до застосування лікарській формі, в якій стовбурові клітини мають достатню виживаність, тобто, вони мають виживаність, достатньо високу для застосування згідно з одним або кількома способами даного винаходу. В одному варіанті втілення стовбурові клітини мають виживаність, більшу, ніж приблизно 40 %, наприклад, більшу, ніж приблизно 50 %, 60 %, 70 % або 80 %. Композиції також можуть включати антимікробний агент, антибактеріальний агент, гормональний продукт або інший фармацевтичний засіб. Для приготування композицій від приблизно 750 000 до приблизно 160 мільйонів hES клітин та/або одну або кілька з їхніх похідних, таких, як кровотворні стовбурові клітини-попередники, нейрональні стовбурові клітини-попередники, мезенхімальні стовбурові клітини-попередники, інсулін-продукуючі стовбурові клітини-попередники, гепатоцитарні стовбурові клітинипопередники, серцеві стовбурові клітини-попередники, епітеліальні стовбурові клітинипопередники або їх суміші, суспендують у приблизно від 0,25 мл до 100 мл носія-наповнювача. В одному варіанті втілення від приблизно 750 000 до приблизно 80 мільйонів hES клітин суспендують у приблизно від 0,25 мл до 10 мл носія-наповнювача. Збагачення конкретними типами диференційованих стовбурових клітин-попередників у популяції є пріоритетним завданням, хоча пропорція недиференційованих стовбурових клітин у композиції зберігається. В одному варіанті втілення частка недиференційованих стовбурових клітин становить не більше, ніж приблизно 80 % від загальної популяції клітин. В іншому варіанті втілення частка недиференційованих стовбурових клітин становить не більше, ніж приблизно 40 % від загальної популяції клітин. До термінальних захворювань та інших порушень або станів, які піддаються лікуванню або можуть бути послаблені згідно з даним винаходом, крім інших, належать рак, порушення печінки та нирок, порушення нервової системи, порушення шкіри, аутоімунні порушення, генетичні порушення, очні порушення, кістково-м'язові порушення, порушення фертильності та репродуктивної функції та серцево-судинні порушення, включаючи, крім інших, гостру мієлоїдну лейкемію, аденокарциному, артрит, астроцитому, атрофію слухового нерва, аутизм, аутоімунні порушення, хворобу Альцгеймера, анкілозуючий спондилоартрит, м'язову дистрофію Беккера, пошкодження головного мозку, опіки, цереброваскулярний інсульт, кірковий параліч, кому, виразки рогівки, відторгнення рогівкових трансплантатів, кортикобазальну дегенерацію нервової системи, хворобу коронарної артерії, діабет, деменцію, синдром Дауна, м'язову дистрофію Дюшена, абсолютну ниркову недостатність, спінальний параліч Ерба, фасціоскапулярну м'язову дистрофію, порушення фертильності, атаксію Фридрейха, серцеву недостатність, гепатоцелюлярну карциному, спадковий боковий аміотрофічний склероз, хорею Хантінгтона, хворобу Краббе, дистрофію плечового (тазового) пояса, цироз печінки, дегенерацію жовтої плями, уроджене слабоумство, розсіяний склероз, хворобу рухових нейронів, інфаркт міокарда, нефротичний синдром, хворобу Німанна-Піка, незагойну виразку шкіри, церебелярну атрофію Олівіо-Понто, атрофію зорового нерва, хворобу Паркінсона, енцефалопатію після електричного шоку, енцефалопатію після вакцини проти сказу, пролежні, прогресуючий над'ядерний параліч, псоріаз, фтизис очного яблука, облітеруючу кардіоміопатію, пігментозний ретиніт, блокаду правої ніжки передсердно-шлуночкового пучка, саркоїдоз, синусову брадикардію, спінальну м'язову дистрофію, спіноцеребральну атаксію, синдром Стивена-Джонсона, системний червоний вовчак, тромбоцитопенію, таласемію, виразковий коліт, вегетативний стан, кістозний фіброз, інтерстиціальну хворобу легенів, азооспермію, первинне порушення овуляції, афтозні виразки, гормональний дисбаланс, остеоартрит, синдром Гомера та Osteogenic Imperfecta, разом з шанелопатією та гіпогаммаглобулінемією. Зокрема, даний винахід забезпечує спосіб лікування SCI у суб'єкта, який включає: a) введення від приблизно 750 000 до приблизно 80 мільйонів hES клітини та/або їхніх похідних шляхом підшкірної ін'єкції; b) повторення етапу (a) після заданого періоду з наступним введенням hES клітин та/або їх похідних через внутрішньом'язову ін'єкцію; c) введення терапевтично ефективної кількості hES клітин та/або їхніх похідних, причому до вищезгаданих клітин належать нейрональні стовбурові клітини-попередники та кровотворні стовбурові клітини-попередники, через внутрішньовенну ін'єкцію або інфузію; 5 UA 99813 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 d) введення терапевтично ефективної кількості hES клітин та/або їхніх похідних, причому до вищезгаданих клітин належать нейрональні стовбурові клітини-попередники, через епідуральну ін'єкцію і повторення вищезгаданої дози після заданого періоду, залежно від стану суб'єкта який визначають шляхом клінічного та/або неврологічного обстеження; e) введення терапевтично ефективної кількості hES клітин та/або їхніх похідних, причому до вищезгаданих клітин належать нейрональні стовбурові клітини-попередники, через каудальну ін'єкцію; f) введення терапевтично ефективної кількості hES клітин та/або їхніх похідних, причому до вищезгаданих клітин належать нейрональні стовбурові клітини-попередники, через інтратекальну ін'єкцію або за допомогою катетера у субарахноїдальний блок; g) введення терапевтично ефективної кількості hES клітин та/або їхніх похідних, причому до вищезгаданих клітин належать нейрональні стовбурові клітини-попередники, через епідуральну ін'єкцію або епідуральний катетер; h) введення терапевтично ефективної кількості hES клітин та/або їхніх похідних через глибоку спінальну ін'єкцію з будь-якого боку хребта; та i) введення терапевтично ефективної кількості hES клітин та/або їхніх похідних через внутрішньовенну інфузію; причому етапи (a) та (b) здійснюють першими, а решта етапів може здійснюватись у будьякому порядку. В одному варіанті втілення етап (f) повторюють з наступним здійсненням етапу (g), принаймні одноразово, доти, доки суб'єкт не почне виявляти клінічні ознаки одужання від вищезгаданого SCI. Винахід також забезпечує спосіб лікування суб'єкта з хворобою, порушенням або станом, включаючи введення терапевтично ефективної кількості hES клітин та/або їхніх похідних, культивованих у середовищах, вільних від тваринних продуктів, живильних клітин, кондиціонованих середовищ, факторів росту, інгібіторного фактора лейкемії, фактора росту фібробластів, мембрано-асоційованого сталевого фактора або розчинного сталевого фактора, через внутрішньом'язову ін'єкцію або внутрішньовенну ін'єкцію або епідуральну ін'єкцію або епідуральний катетер або ретробульбарну ін'єкцію або підшкірну ін'єкцію або інтракардіальну ін'єкцію або внутрішньоміхурову ін'єкцію або інтратекальну ін'єкцію, або шляхом місцевого нанесення або введення всередину ураженої тканини. В одному варіанті втілення хвороба, порушення або стан є термінальною або нині невиліковною хворобою, порушенням або станом. Винахід також забезпечує спосіб лікування пов'язаних з розвитком, дегенеративних, родинних та травматичних порушень нервової системи та цереброваскулярних нападів, включаючи введення від приблизно 750 000 до приблизно 160 мільйонів hES клітин та/або їхні похідні, причому до вищезгаданих клітин належать нейрональні стовбурові клітини-попередники та кровотворні стовбурові клітини-попередники окремо або у комбінації, через внутрішньовенну ін'єкцію, підшкірну ін'єкцію, внутрішньом'язову ін'єкцію, інтратекальну ін'єкцію, інфузію через епідуральний катетер та інфузію за допомогою катетера у субарахноїдальний блок. Винахід також забезпечує спосіб лікування від порушень шкіри, включаючи введення від приблизно 750 000 до приблизно 160 мільйонів hES клітин та/або їхніх похідних, причому до вищезгаданих клітин належать кровотворні стовбурові клітини-попередники, через підшкірну або внутрішньовенну ін'єкцію. Винахід також забезпечує спосіб лікування пролежнів, включаючи введення від приблизно 750 000 до приблизно 160 мільйонів hES клітин та/або їхніх похідних через локальне або місцеве нанесення та через внутрішньом'язову ін'єкцію. Винахід також забезпечує спосіб лікування від аутоімунних порушень, включаючи введення від приблизно 750 000 до приблизно 160 мільйонів hES клітин та/або їхніх похідних, причому до вищезгаданих клітин належать кровотворні стовбурові клітини-попередники, через внутрішньом'язову ін'єкцію, або внутрішньовенну ін'єкцію, або підшкірну ін'єкцію, або внутрішньосуглобну ін'єкцію або внутрішньовенну інфузію, або їх комбінацію. Винахід також забезпечує спосіб лікування від генетичних порушень, включаючи введення від приблизно 750 000 до приблизно 160 мільйонів hES клітин та/або їхніх похідних, причому до вищезгаданих клітин належать нейрональні стовбурові клітини-попередники та кровотворні стовбурові клітини-попередники окремо або у комбінації, через внутрішньовенну ін'єкцію, підшкірну ін'єкцію, внутрішньом'язову ін'єкцію, інтратекальну ін'єкцію, інфузію через епідуральний катетер або інфузію за допомогою катетера у субарахноїдальний блок, або їх комбінацію. Винахід також забезпечує спосіб лікування від гангрени, включаючи введення від приблизно 750 000 до приблизно 160 мільйонів hES клітин та/або їхніх похідних через внутрішньовенну 6 UA 99813 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 ін'єкцію, внутрішньом'язову ін'єкцію або місцеве нанесення на межі живої та відмерлої тканини, або їх комбінацію. Винахід також забезпечує спосіб лікування від станів, пов'язаних зі старінням, включаючи введення від приблизно 750 000 до приблизно 160 мільйонів hES клітин та/або їхніх похідних через внутрішньовенну ін'єкцію, підшкірну ін'єкцію, внутрішньом'язову ін'єкцію або місцеве нанесення у суспензії або у суміші з біосумісним носієм, таким, як гель, мазь, матрикс, паста або аерозоль. Винахід також забезпечує спосіб лікування від цукрового діабету, включаючи введення від приблизно 750 000 до приблизно 160 мільйонів hES клітин та/або їхніх похідних, причому до вищезгаданих клітин належать інсулін-продукуючі клітини-попередники, через внутрішньовенну або внутрішньом'язову ін'єкцію або їх комбінацію. Винахід також забезпечує спосіб лікування від серцево-судинних порушень, включаючи введення від приблизно 750 000 до приблизно 160 мільйонів hES клітин та/або їхніх похідних, причому до вищезгаданих клітин належать кровотворні стовбурові клітини-попередники, через внутрішньовенну ін'єкцію, підшкірну ін'єкцію, внутрішньом'язову ін'єкцію, інтракардіальну ін'єкцію, ангіографію або пряму ін'єкцію під час хірургічної операції. Винахід також забезпечує спосіб лікування від порушень печінки та нирок, включаючи введення від приблизно 750 000 до приблизно 160 мільйонів hES клітин та/або їхніх похідних, причому до вищезгаданих клітин належать кровотворні стовбурові клітини-попередники, альбумін-продукуючі стовбурові клітини-попередники та білірубін-продукуючі стовбурові клітини-попередники, через внутрішньовенну ін'єкцію, підшкірну ін'єкцію, внутрішньом'язову ін'єкцію, внутрішньовенну інфузію або місцеву ін'єкцію. Винахід також забезпечує спосіб лікування від порушень фертильності та репродуктивної функції включаючи введення від приблизно 750 000 до приблизно 160 мільйонів hES клітин та/або їхніх похідних, причому до вищезгаданих клітин належать кровотворні стовбурові клітини-попередники, через місцеву внутрішньом'язову ін'єкцію, інтратестикулярну ін'єкцію, або через підшкірну ін'єкцію поблизу від епідермісу. Винахід також забезпечує спосіб лікування від кістково-м'язових порушень, включаючи введення від приблизно 750 000 до приблизно 160 мільйонів hES клітин та/або їхніх похідних, причому до вищезгаданих клітин належать нейрональні стовбурові клітини-попередники та кровотворні стовбурові клітини-попередники окремо або у комбінації, через внутрішньовенну ін'єкцію, підшкірну ін'єкцію, внутрішньом'язову ін'єкцію або внутрішньовенну інфузію за допомогою катетера. Винахід також забезпечує спосіб лікування від очних порушень, включаючи введення від приблизно 750 000 до приблизно 160 мільйонів hES клітин та/або їхніх похідних, причому до вищезгаданих клітин належать нейрональні стовбурові клітини-попередники, кровотворні стовбурові клітини-попередники та мезенхімальні стовбурові клітини-попередники окремо або у комбінації, через місцеву внутрішньовенну ін'єкцію, підшкірну ін'єкцію, внутрішньом'язову ін'єкцію, ретробульбарну ін'єкцію, інтравітреальну ін'єкцію або місцеве застосування. В одному варіанті втілення від приблизно 750 000 до приблизно 160 мільйонів hES клітин та/або їхніх похідних, які включають нейрональні стовбурові клітини-попередники, вводять через ретробульбарну ін'єкцію. В іншому варіанті втілення від приблизно 750 000 до приблизно 160 мільйонів hES клітин та/або їхніх похідних, які включають нейрональні стовбурові клітинипопередники, вводять через інтравітреальну ін'єкцію. В іншому варіанті втілення від приблизно 750 000 до приблизно 160 мільйонів hES клітин та/або їхніх похідних, які включають мезенхімальні стовбурові клітини-попередники, наносять на контактні лінзи для поміщення на око для лікування від стирання рогівки (наприклад, контактну лінзу культивують з hES клітинами та/або їхніми похідними для вкривання контактної лінзи клітинами, а потім лінзу поміщають на око приблизно на 24 години). Винахід також забезпечує спосіб лікування від легеневих порушень, включаючи введення від 750 000 до 160 мільйонів hES клітин та/або їхніх похідних, причому до вищезгаданих клітин належать кровотворні стовбурові клітини-попередники окремо або у комбінації з нейрональними стовбуровими клітинами-попередниками, через внутрішньом'язову ін'єкцію, внутрішньовенну ін'єкцію, за допомогою аерозолю або розпилювача. В одному варіанті втілення від 750 000 до 160 мільйонів кровотворних стовбурових клітин-попередників вводять через розпилювач, у який додають 2 мл нормального сольового розчину. В іншому варіанті втілення від 750 000 до 160 мільйонів кровотворних стовбурових клітин-попередників вводять через аерозоль (puff). Винахід також забезпечує спосіб лікування від гормональних порушень, включаючи введення від 750 000 до 160 мільйонів hES клітин та/або їхніх похідних, причому до 7 UA 99813 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 вищезгаданих клітин належать кровотворні та нейрональні стовбурові клітини, внутрішньом'язовим та внутрішньовенним шляхами. Винахід також забезпечує спосіб лікування афтозних виразок та інших виразок, включаючи введення від 750 000 до 160 мільйонів hES клітин та/або їхніх похідних, причому до вищезгаданих клітин належать кровотворні та нейрональні стовбурові клітини у комбінації або окремо внутрішньом'язовим та внутрішньовенним шляхами. Винахід також забезпечує спосіб лікування від остеоартриту колінних та тазостегнових суглобів, включаючи введення від 750 000 до 160 мільйонів hES клітин та/або їхніх похідних через внутрішньом'язову, внутрішньовенну або внутрішньосуглобну ін'єкції. В одному варіанті втілення від 750 000 до 160 мільйонів кровотворних стовбурових клітин-попередників вводять внутрішньосуглобно. Даний винахід забезпечує методологію культивування клітин, яка може застосовуватися для культури hES клітин та їх похідних, які можуть застосовуватися для трансплантації в організм людини без будь-яких побічних ефектів, таких, як утворення тератом, утворення пухлин, проблеми антигенності або відторгнення трансплантата хазяїном. Методологія культивування є розробленою спеціально для вироблення hES клітин та їх похідних з достатньою життєздатністю та відповідними характеристиками для оптимальної терапевтичної активності після трансплантації в організм людини. В оптимальному варіанті втілення методологію культивування клітин застосовують для вирощування, поширення, диференціації та зберігання hES клітин. Крім того, винахід стосується готових для ін'єкцій композицій, які включають hES клітини та/або їхні похідні, які зберігаються в умовах зберігання, які є придатними для трансплантації безпосередньо після розморожування. На відміну від існуючих методологій культивування клітин для підтримання hES клітин у практично недиференційованому стані, культуральне середовище не містить домішок, таких, як основний фактор росту фібробластів, інгібіторний фактор лейкемії, мембрано-асоційований сталевий фактор, розчинний сталевий фактор, сироватка, альбуміни або альбумінові додатки, додаткові амінокислоти, вітамінні домішки, трансферини або трансферинові додатки, антиоксиданти, інсулін або замісники інсуліну, прекурсори колагену або замісники прекурсорів колагену, мікроелементи, залишки "кондиціонованих середовищ", тваринні продукти, живильні клітини, фактори росту, додаткові мінеральні комбінації, додаткові амінокислоти та вітамінні домішки. Також на відміну від інших методологій культивування клітин для поширення hES клітин, практичне втілення даного винаходу не призводить до утворення ембріоїдних тіл, що звільняє від необхідності у хірургічному втручанні. У даному разі варто зазначити, що продукт згідно з винаходом є цілковито людським продуктом, і ксенотрансплантація (наприклад, випробування на тваринах) може не вимагатися. Отже, прикладом є перша вагітність при in vitro заплідненні (IVF). На відміну від інших методологій культивування клітин, способи культивування клітин згідно з даним винаходом дозволяють здійснювати майже необмежене поширення hES клітин без суттєвої диференціації. Головна перевага даного винаходу полягає в тому, що єдиний ембріон є достатнім для забезпечення терапевтично ефективної кількості hES клітин та/або їхніх похідних для лікування багатьох пацієнтів. Таким чином, немає потреби у багаторазовому придбанні людських ембріонів, і можна уникнути багатьох етичних проблем, пов'язаних із застосуванням людських ембріонів. Ще одна перевага даного винаходу полягає в тому, що hES клітини та їхні похідні є загальноприйнятими продуктами з точки зору імунології, тому не вимагається перевірки сумісності пацієнтів та клітин, а також імуносупресії. Один аспект винаходу стосується способів виділення hES клітин, який включає: (a) збирання 2-7-денних ембріонів у мінімальному підтримувальному середовищі, (b) відокремлення hES клітин від ембріона механічними засобами. Один аспект винаходу стосується способу поширення людських ембріональних стовбурових клітин, вільних від тваринних продуктів, живильних клітин, факторів росту, інгібіторного фактора лейкемії, додаткових мінеральних комбінацій, додаткових амінокислот, вітамінних домішок, фактора росту фібробластів, мембрано-асоційованого сталевого фактора, розчинного сталевого фактора та кондиціонованих середовищ, який включає етапи: (a) введення людських ембріональних стовбурових клітин у середовище для клітин, яке складається з мінімального підтримувального середовища, прогестину та агоніста βхоріонічного гонадотропіну людини (βhCG); та (b) інкубування стовбурових клітин при температурі від приблизно 34 °C до приблизно 38 °C в умовах від приблизно 3,5 % до приблизно 6 % діоксиду вуглецю протягом періоду від приблизно 12 годин до приблизно 48 годин. 8 UA 99813 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Інший аспект винаходу стосується способів вирощування hES клітин таким чином, щоб вони перебували у стадії, яка передує частково диференційованій стадії, і були вільними від тваринних продуктів, живильних клітин, факторів росту, інгібіторного фактора лейкемії, додаткових мінеральних комбінацій, додаткових амінокислот, вітамінних домішок, фактора росту фібробластів, мембрано-асоційованого сталевого фактора, розчинного сталевого фактора та кондиціонованих середовищ, включаючи етапи: (a) введення hES клітин у середовище для культивування клітин, яке складається з мінімального підтримувального середовища; та (b) інкубування стовбурових клітин при температурі від приблизно 34 °C до приблизно 38 °C в умовах від приблизно 3,5 % до приблизно 6 % діоксиду вуглецю протягом періоду від приблизно 12 годин до приблизно 48 годин. Інший аспект винаходу стосується способу приготування готової для застосування композиції людських ембріональних стовбурових клітин для трансплантації в організм людини, який включає: (a) отримання людських ембріональних стовбурових клітин, вільних від тваринних продуктів, живильних клітин, факторів росту, інгібіторного фактора лейкемії, додаткових мінеральних комбінацій, додаткових амінокислот, вітамінних домішок, фактора росту фібробластів, мембрано-асоційованого сталевого фактора, розчинного сталевого фактора та кондиціонованих середовищ, (b) центрифугування вищезгаданих стовбурових клітин для одержання осаду та (c) суспендування осаду у біосумісному розчині. Інший аспект винаходу стосується способу зберігання людських ембріональних стовбурових клітин у життєздатному стані, який включає (a) збирання стовбурових клітин, одержаних способами згідно з даним винаходом, (b) додавання засобу кріоконсервації та (c) заморожування клітин при температурі від -4 до -80 °C. Мета вирощування hES клітин згідно з практикою даного винаходу за відсутності таких додатків полягає у зниженні ризику занесення у культуру бактеріальних, грибкових, вірусних або інших забруднювачів. Це знижує ризик інфекції та мінливості характеристик клітин. Іншою метою даного винаходу є забезпечення простих, ефективних, масштабованих способів продукування та поширення hES клітин та їх похідних у формі, вільній від будь-яких забруднюючих залишків і безпечній у застосуванні для людини. Таким чином, метою цього винаходу є забезпечення фармацевтичних продуктів, у яких ризик введення всіх супутніх забруднювачів є зниженим, і усувається залишкове забруднення додаткових факторів. Іншою метою даного винаходу є забезпечення методології культивування клітин, яка знижує ризик хромосомних аберацій або генетичної нестійкості. Іншою метою даного винаходу є забезпечення методології культивування клітин, яка знижує ризик утворення тератом у пацієнтів, яким трансплантують вищезгадану культуру. Іншою метою даного винаходу є забезпечення методології культивування клітин, яка знижує ризик утворення пухлин у пацієнтів, яким трансплантують вищезгадану культуру. Іншою метою даного винаходу є забезпечення методології культивування клітин, яка знижує ризик проблем антигенності або проблем відторгнення "трансплантат проти хазяїна" у пацієнтів, яким трансплантують вищезгадану культуру. Зокрема, даний винахід забезпечує композиції, які включають hES клітини та їх похідні, та біосумісне середовище, які передбачено у формі, яка відповідає міжнародним регулятивним нормам безпеки та якості, а отже, у формі, яка є готовою для ін'єкцій людям з терапевтичними цілями. Даний винахід також забезпечує продукт виробництва, який включає суспензію hES клітин та/або їхніх похідних, які суспендують у біосумісному розчині і поміщують у тару для зберігання, транспортування або трансплантації безпосередньо в людський організм. Даний винахід також забезпечує спосіб поширення hES клітин та їх похідних. Даний винахід також забезпечує спосіб поширення hES клітин та їх похідних та інгібування їх диференціації. Даний винахід також забезпечує спосіб вирощування hES клітин та їх похідних, який робить їх терапевтично ефективними після трансплантації в людський організм, який страждає від хвороби, стану або порушення. ДЕТАЛЬНИЙ ОПИС ВИНАХОДУ Визначення 9 UA 99813 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 У представлених нижче описі та прикладах авторами вжито багато термінів. Для забезпечення чіткого й стійкого розуміння опису та формули винаходу, включаючи обсяг значень таких термінів, пропонуються нижчезазначені визначення. Слід зазначити, що терміни, вжиті для загального опису даного винаходу, вживаються у загальноприйнятих значеннях з точки зору спеціаліста у даній галузі. "Ембріональна стовбурова клітина" означає плюрипотентні клітини людини (тобто, hES клітини). В одному варіанті втілення hES клітини є виділеними з ембріона до стадії бластоцист. В іншому варіанті втілення hES клітини одержують шляхом диференціації принаймні частково диференційованих клітин (наприклад, мультипотентних клітин), і на практиці вони є тотипотентними. Способи одержання hES клітин є загальновідомими і описуються, наприклад, у патентах США №№ 5,843,780, 6,200,806, 7,029,913, 5,453,357, 5,690,926, 6,642,048, 6,800,480, 5,166,065, 6,090,622, 6,562,619, 6,921,632 та 5,914,268, опублікованій патентній заявці США 2005/0176707 та Міжнародній заявці № WO2001085917. "Ембріональні стовбурові клітини" означають стовбурові клітини, взяті з ембріональної тканини, тобто, тканин недорозвиненого людського організму після імплантації ембріона у матку. Термін "мультипотентні" стосується стовбурових клітин, які можуть продукувати лише клітини з родини близько споріднених клітин. Термін "плюрипотентні" стосується стовбурових клітин, які є потомством тотипотентних клітин і можуть розвинутись у будь-який тип клітин, за винятком тотипотентних стовбурових клітин. Термін "тотипотентні" стосується стовбурових клітин, які виробляються через злиття яйцеклітини та сперматозоїда. Клітини, вироблені через перші кілька ділень заплідненої яйцеклітини також є тотипотентними. Ці клітини можуть розвинутись у будь-який тип клітини без винятку. Термін "терапевтично ефективна кількість" вжито для опису концентрації або кількості компонентів, таких, як ембріональні стовбурові клітини, попередники нейронів, нейрональні клітини, кровотворні стовбурові клітини-попередники, серцеві стовбурові клітини-попередники, або будь-яка інша похідна стовбурових клітин або інші агенти та їх суміші, які є ефективними для забезпечення потрібного результату у контексті практичного втілення одного або кількох аспектів даного винаходу. Терміни "пересадження" та "трансплантація" вжито авторами як синоніми для опису процесу, за допомогою якого ембріональні стовбурові клітини та/або їхні похідні згідно з даним винаходом доставляють до місця в людському організмі, де клітини мають виявити свій передбачений сприятливий вплив у зв'язку з лікуванням або послабленням описаних авторами хвороби, порушення або стану, включаючи, крім іншого, відновлення пошкодженої центральної нервової системи пацієнта, лікування нейродегенеративного захворювання або лікування від впливу пошкодження нервів, викликаного інсультом, серцево-судинною хворобою, серцевим нападом або фізичним пошкодженням або травмою, або генетичним пошкодженням або несприятливим впливом середовища на головний мозок та/або спинний мозок або інші органи, викликаним, наприклад, через нещасний випадок або інші події, пошкодження печінки, аутоімунне порушення, статеву або репродуктивну дисфункцію, дегенерацію різних частин ока, пошкодження нирок та ін. Вжитий авторами термін "біосумісний розчин" означає розчини, в яких hES клітини та/або їхні похідні є суспендованими для застосування згідно з протоколом трансплантації або для будь-якого іншого подальшого застосування. Такі біосумісні розчини включають сольовий розчин, а також можуть включати інші інгредієнти, такі, як консерванти, антимікробні засоби і т. ін., а також інші фармацевтичні засоби. Вжитий авторами термін "біосумісний носій" означає тверді носії, розчини та суміші, в яких hES клітини та/or їхні похідні є суспендованими для застосування згідно з протоколом для місцевого введення, трансплантації або для будь-якого іншого подальшого застосування. До таких біосумісних носіїв належать гелі, мазі, пасти та аерозолі. Вжитий авторами термін "біосумісне вмістище" означає вмістища (наприклад, вмістища для культивування або зберігання), в які поміщують hES клітини та/або їхні похідні та які не перешкоджають застосуванню клітин для трансплантації, тобто, не забруднюють клітини сполуками, які не можуть бути введені суб'єктам. Прикладами матеріалів для біосумісних вмістищ є, крім інших, скло, нержавіюча сталь та полістирол. "Прогестин" є будь-яким природним або синтетичним гормоном, який має подібну до прогестерону активність, тобто, має принаймні 25 % активності прогестерону в одному з будьяких аналізів на біологічну активність. Прикладами, крім інших, є прогестерон, дидрогестерон, 10 UA 99813 C2 5 10 15 20 25 30 35 медроксипрогестерон, норетистерон, левоноргестрел, норгестрел, гестоден та дроспіренон. Приклади інших прогестинів описуються у патентах США №№ 7,091,234, 7,084,151, 7,081,457, 7,071,205, 6,562,857, 6,319,911, 6,245,757, 6,043,235 та 6,028,064. "Агоністи β-хоріонічного гонадотропіну людини (βhCG)" визначаються як будь-які природні або синтетичні βhCG або їх фрагменти або похідні, які мають принаймні 25 % активності природного βhCG в одному з будь-яких аналізів на біологічну активність. Прикладами агоністів βhCG, крім інших, є βhCG та ті, які описуються у патентах США №№ 6,635,445, 6,585,982, 6,583,109, 6,469,139 та 5,997,871. Вжитий авторами термін "мінімальне підтримувальне середовище" означає культуральне середовище для клітин, яке включає амінокислоти, солі, глюкозу та вітаміни. Прикладами є RPMI, DMEM, EMEM та GMEM. "Розпилення" означає введення медикаменту або речовини у легені за допомогою розпилювача. "Внутрішньосуглобне" означає введення у внутрішньосуглобний простір. "Ретробульбарне" означає введення у ретробульбарний простір. "Внутрішньовенна інфузія" означає введення у вену з застосуванням придатної для внутрішньовенного введення рідини, яка включає продукт або медикамент. "Епідуральна" ін'єкція або катетерна інфузія означає введення у ділянку за межами твердої мозкової оболонки мозку. "Інтратекальна" ін'єкція або катетерна інфузія означає введення у найглибший шар оболонки мозку, тобто, павутинної оболонки, у цереброспінальну рідину, яка складає одне ціле з головним мозком. "Каудальна" ін'єкція означає введення через сакральну оболонку, яка знаходиться приблизно на три сантиметри вище кінця куприка і складає одне ціле з епідуральним простором. "Глибока спінальна ін'єкція" означає ін'єкцію у розгинальні остисті м'язи з будь-якого боку хребта. "Внутрішньом'язова" ін'єкція означає введення між м'язовими шарами. "Внутрішньовенна" ін'єкція означає введення у вену. "Гостре SCI" означає термін до трьох місяців після дати SCI. "Підгостре SCI" означає термін від трьох місяців після дати SCI до дев'яти місяців після дати пошкодження. "Хронічне SCI" означає термін понад дев'ять місяців після дати SCI. "Похідні" hES клітин означають мультипотентні стовбурові клітини, плюрипотентні стовбурові клітини, стовбурові клітини дорослого організму та тканиноспецифічні стовбурові клітини, не включаючи повністю диференційовані клітини. Приклади тканиноспецифічних стовбурових клітин представлено нижче у таблиці. Тип клітини Стовбурова клітина жирового походження Стовбурові клітини епітелію молочної залози Ендотеліальні стовбурові клітини Клітини-попередники гангліоцитів дорсального корінця + + Кровотворні клітини-попередники CD34 , CD7 , Lin , Lin , CD45RA , + Кровотворні стовбурові клітини Thy-1 + + Кровотворні стовбурові клітини Thy-1 , CD34 + + Кровотворні стовбурові клітини CD34 , CD38 , HLA-DR + + + Кровотворні лімфоїдні та дендритні клітини CD34 , CD45RA , CD10 ; + + + Кровотворні дендритні клітини CD34 , CD45RA , CD10 , Кровотворні стовбурові клітини c-kit , Thy-1 + Кровотворні стовбурові клітини CD34 + Кровотворні стовбурові клітини HCC-1 + + Кровотворні клітини-попередники CD34 , гaлактоза-специфічний лектин + Кровотворні стовбурові клітини (спочиваючі) CD34 Стовбурові клітини кератиноцити Стовбурові клітини печінки Не експресують OC2 Лімфокровотворні стовбурові клітини-попередники My 10 40 11 Номер патенту 6,777,231 5,814,511 6,852,533 6,835,567 6,537,807 5,061,620 5,750,397 5,840,580 5,972,627 5,876,956 5,681,559 5,677,136 5,858,782 5,807,686 6,485,971 6,129,911 6,872,389 5,256,560 UA 99813 C2 Тип клітини Лімфоїдні клітини-попередники Невральні клітини-попередники середнього мозку + Мезенхімальні стовбурові клітини CD45 Мезенхімальні стовбурові клітини Мезенхімальні стовбурові клітини Мезенхімальні стовбурові клітини Мезенхімальні стовбурові клітини Мезенхімальні стовбурові клітини Плюрипотентні епітеліальні клітини мюллерового протоку hi Мієлоїдні клітини-попередники c-kit , IL-7Rα Мієлоїдні клітини-попередники Thy-1 , IL-7Rα Невральні клітини-попередники Невральні стовбурові клітини Нейрональні клітини-попередники Нейрональні стовбурові клітини Нейрональні клітини-попередники, які не експресують білок Hu + Лінієспецифічні нейрональні клітини-попередники E-NCAM Нейроепітеліальні стовбурові клітини Невральні стовбурові клітини центральної нервової системи Нейрональні клітини-попередники Невральні клітини-попередники Нейрон-специфічні клітини-попередники центральної нервової системи Клітини-попередники нейронів вентрального середнього мозку Стовбурові клітини нервового валика Мультипотентні клітини нервового валика, які містять RET білок Клітини-попередники нейтрофілів Клітини-попередники підшлункової залози Клітини-попередники панкреатичних острівців експресують ErbB2 Плюрипотентні клітини Плюрипотентні клітини, трансформовані геном HOX11 Клітини-попередники периферичної крові Ниркові стовбурові клітини Ниркові стовбурові клітини Стовбурові клітини сітківки Скелетні клітини-попередники + Стовбурові клітини FGFR , не ES клітини Стовбурові клітини, які утворюють клітини крові CD34 , MHC-I , MHC-II int int hi Клітини-попередники T-лінії CD8 , CD4 , c-kit , high bcl-2; lo lo hi CD8 , CD4 , c-kit , high bcl-2 + + + Клітини-попередники T-лімфоцитів CD34 , CD7 , Leu 8 5 10 15 Номер патенту 6,908,763 6,913,925 6,387,367 5,486,359 5,827,735 5,908,782 6,936,281 6,908,764 6,416,999 6,465,247 6,761,883 5,753,505 5,851,832 6,251,669 6,969,608 6,852,532 6,734,015 7,037,702 5,968,829 6,812,027 6,913,925 6,787,353 5,411,883 5,589,376 6,890,724 5,955,357 6,436,704 6,753,153 5,914,268 5,874,301 5,541,103 6,410,320 6,458,588 6,117,675 6,517,872 6,767,737 5,744,347 5,821,108 5,622,853 Цей даний винахід стосується фармацевтичних композицій, які включають hES клітини та/або їхні похідні, вищезгадані стовбурові клітини є вільними від тваринних продуктів, живильних клітин, факторів росту, інгібіторного фактора лейкемії, додаткових мінеральних комбінацій, додаткових амінокислот, вітамінних домішок, фактора росту фібробластів, мембрано-асоційованого сталевого фактора, розчинного сталевого фактора та кондиціонованих середовищ, для застосування у клінічному лікуванні наразі невиліковних або термінальних захворювань, станів або порушень. В іншому варіанті втілення винахід стосується способу лікування наразі невиліковних або термінальних станів з застосуванням hES клітин та/або їхніх похідних через протокол трансплантації. Визначення "вільні від тваринних продуктів, живильних клітин, факторів росту, інгібіторного фактора лейкемії, додаткових мінеральних комбінацій, додаткових амінокислот, вітамінних домішок, фактора росту фібробластів, мембрано-асоційованого сталевого фактора, розчинного сталевого фактора та кондиціонованих середовищ" не виключає слідової кількості прогестину та агоніста βhCG, які можуть бути присутні у фармацевтичній композиції в результаті застосування способу культивування згідно з даним винаходом. Термін "тваринні продукти" стосується продукту нелюдського походження. 12 UA 99813 C2 5 10 15 20 25 В іншому варіанті втілення процес згідно з цим винаходом забезпечує простий, безпечний, широко застосовуваний, відтворюваний і ефективний спосіб трансплантації фармацевтичної композиції, яка включає hES клітини та/або їхні похідні у готовій для застосування формі, вільної від живильних клітин та будь-яких інших забруднювачів. Ці клітини можуть бути одержані будь-яким способом культивування і трансплантовані у людський організм незалежно від генетичного середовища пацієнта, його віку, раси та статі і без реакції антитіла з антигеном або відторгнення трансплантата хазяїном, без утворення тератом або пухлин, або інших послаблювальних побічних ефектів, без виникаючих в результаті аберантних іннервацій і без потреби у введенні імуносупресорів для лікування від різних хвороб, станів та порушень. На відміну від інших відомих способів, hES клітини, які застосовують для одержання фармацевтичних композицій згідно з даним винаходом, вирощують у культуральному середовищі, яке є вільним від тваринних продуктів, живильних клітин, факторів росту, інгібіторного фактора лейкемії, додаткових мінеральних комбінацій, додаткових амінокислот, вітамінних домішок, фактора росту фібробластів, мембрано-асоційованого сталевого фактора, розчинного сталевого фактора та кондиціонованих середовищ, а отже, не викликають будьякого забруднення, що може вплинути на безпечність або ефективність передбаченого клінічного застосування. Згідно з практикою винаходу, hES клітини та/або їхні похідні вводять у людський організм шляхом внутрішньом'язової, внутрішньовенної, каудальної, інтравітреальної, інтрастріарної, інтрапаренхімальної, інтратекальної, епідуральної, ретробульбарної, підшкірної, пероральної, інтракардіальної, внутрішньоміхурової, внутрішньосуглобної або інтратекальної ін'єкції або через епідуральний катетер, за допомогою катетера у субарахноїдальний блок, шляхом внутрішньовенної інфузії, через розпилювач, через аерозоль, внутрішньовагінальним шляхом і/або через місцеві очні та вушні краплі. В іншому варіанті втілення hES клітини та/або їхні похідні вводять за місцем або всередину уражених тканин. Кожен шлях введення передбачає застосування конкретного об'єму для ін'єкції, а отже, конкретної кількості клітин з вихідних розчинів hES клітин та/або їхніх похідних, як вказано у Таблиці 1. Якщо розпізнають типи клітин (наприклад, у представленій нижче таблиці графіку ін'єкцій, вказані тип клітин є типом, який є домінуючим у популяції клітин. 30 ТАБЛИЦЯ 1 Шлях введення внутрішньом'язово внутрішньовенно підшкірно каудально епідурально інтратекально внутрішньосуглобно ретробульбарно епідуральний катетер внутрішньовенна інфузія розпилювач інтравагінально 35 40 45 Об'єм 0,25 мл 0,25 мл 0,25 мл 2 мл 2 мл 2 мл 2 мл 2 мл 4-5 мл 0,75 мл 2 мл 2 мл Кількість клітин 750 000-1,5 мільйона 750 000-1,5 мільйона 750 000-1,5 мільйона 6-16 мільйонів 6-16 мільйонів 6-16 мільйонів 6-16 мільйонів 6-16 мільйонів 12-40 мільйонів 2,25-4,5 мільйона 6-16 мільйонів 6-16 мільйонів Між лабораторією та кінцевим пунктом застосування, у клініці чи будь-якому іншому місці, фармацевтичні композиції повинні зберігатись у холодному місці. В одному варіанті втілення фармацевтичні композиції зберігають при температурі від приблизно +4 до приблизно -160 °C. В іншому варіанті втілення фармацевтичні композиції зберігають при температурі від приблизно -15 до приблизно -72 °C, наприклад, від приблизно -20 до приблизно -40° C. В одному варіанті втілення hES клітини, які застосовують згідно з даним винаходом, виділяються з наявного ембріона, вилучаються з природного циклу in vitro запліднення і надаються через інформовану згоду. В альтернативному варіанті втілення у даному винаході застосовують плюрипотентні ембріональні стовбурові клітини, такі, як ті, що описуються в опублікованій патентній заявці США 2005/0124003, які виділяють з хоріональної ворсини, амніотичної рідини та/або плаценти. Цей винахід забезпечує спосіб лікування від різних захворювань, станів та порушень, включаючи, крім інших, рак, інсульт, генетичні порушення, печінкові порушення, порушення нервової системи, судинні порушення, хвороби та порушення шкіри, аутоімунні порушення, очні 13 UA 99813 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 порушення, ниркові порушення, серцеві порушення, кістково-м'язові порушення, порушення репродуктивної функції та фертильності та артрит, з застосуванням hES клітин та/або їхніх похідних. Необмежувальними прикладами видів раку, які піддаються лікуванню згідно з даним винаходом, є пухлина спинного мозку, рак молочної залози, рак передміхурової залози, лімфома, рак шкіри, рак підшлункової залози, рак товстої кишки, меланома, злоякісна меланома, рак яєчника, рак головного мозку, первинна карцинома мозку, рак голови та шиї, гліома, гліобластома, рак печінки, рак міхура, недрібноклітинний рак легенів, карцинома голови або шиї, карцинома молочної залози, карцинома яєчника, рак шийки матки, метастатичні ураження, карцинома легенів, дрібноклітинна карцинома легенів, пухлина Вілма, карцинома шийки матки, карцинома яєчка, карцинома міхура, карцинома підшлункової залози, карцинома шлунка, карцинома товстої кишки, карцинома передміхурової залози, сечостатева карцинома, тиреоїдна карцинома, карцинома стравоходу, мієлома, множинна мієлома, карцинома надниркової залози, нирково-клітинний рак, карцинома ендометрію, карцинома кори надниркової залози, злоякісна інсулінома підшлункової залози, злоякісна карциноїдна карцинома, хоріокарцинома, злоякісна гіперкальціємія, гіперплазія шийки матки, лейкемія, гостра лімфоцитарна лейкемія, хронічна лімфоцитарна лейкемія, гостра мієлогенна лейкемія, хронічна мієлогенна лейкемія, хронічна гранулоцитарна лейкемія, гостра гранулоцитарна лейкемія, волохатоклітинна лейкемія, нейробластома, рабдоміосаркома, саркома Капоші, справжня поліцитемія, ессенціальний тромбоцитоз, хвороба Ходжкіна, неходжкінська лімфома, саркома м'яких тканин, остеогенна саркома, первинна макроглобулінемія та ретинобластома. В одному варіанті втілення hES клітини не обробляють диференціюючим агентом, оскільки, будучи ембріональними, ці клітини є запрограмованими і відразу після введення суб'єктові вони мігрують до місця ураження. У цьому місці клітини диференціюють у відповідь на in vivo сигнали диференціації. У місці ураження hES клітини та їх похідні не проліферують безкінечно, таким чином, вимагаючи режиму повторних ін'єкцій. Те, що hES клітини та їх похідні не проліферують безкінечно, виключає ймовірність канцерогенності та утворення тератом. Після лікування hES клітинами та/або їхніми похідними згідно з практикою даного винаходу пацієнт має відпочити і чітко дотримуватися режиму утримання від споживання таких речовин, як алкоголь або тютюн, які можуть зашкодити функції клітин і перешкоджати процесам регенерації, які запускаються через міграцію hES клітин та їх похідних до місця ураження. Пацієнт також має уникати будь-якого медикаментозного лікування, яке є шкідливим під час вагітності, оскільки медикаменти можуть мати шкідливий вплив на трансплантовані клітини. Застосування hES клітин та їх похідних у лікуванні від SCI На даний час існує чотири ефективні способи лікування від SCI, включаючи гостре пошкодження спинного мозку, підгостре пошкодження спинного мозку або хронічне пошкодження спинного мозку, яке в результаті часто призводить до параплегії, тетраплегії та квадриплегії. Трансплантація hES клітин для лікування від SCI забезпечує унікальну можливість розв'язання існуючої медичної проблеми та значного поліпшення життя мільйонів людей в усьому світі, які страждають від наслідків SCI. Відновлення втрачених функцій центральної та вегетативної нервових систем через трансплантацію hES клітин та їх похідних здебільшого у стані попередників дозволяє відновлювати парасимпатичні, симпатичні, рухові, вегетативні та сенсорні шляхи через заміну втраченої функції клітин, регенерацію втрачених нервових клітин, усунення фізичних бар'єрів, таких, як рубцева тканина, блокування шляхів інгібіторних сигналів та вивільнення нейротрофічних факторів з трансплантованих попередників hES клітин. До переваг відновлення неврологічної функції через трансплантацію hES клітин згідно з практикою даного винаходу належать: поліпшення моторної та сенсорної функції, загальна якість життя, скорочення системи підтримки, яка зазвичай забезпечується членами родини, зниження залежності від інших фармацевтичних композицій та інших медичних пристроїв та засобів, поліпшення психічного та психологічного стану, а також економічної незалежності. Знижуються витрати на медичне обладнання та допомогу з непрацездатності, а також залежність від медикаментозного лікування через відновлення парасимпатичної, симпатичної, сенсорної та моторної функцій. Забезпечується підвищення самодостатності, поліпшення соціального статусу, сімейного стану та здатність до здійснення репродуктивних прав при обмеженій кількості візитів до клініки на рік з метою лікування. Лікування шляхом введення hES клітин та їх похідних згідно з даним винаходом не призводить до проблем антигенності, утворення пухлин, утворення тератом або аберантних невральних зв'язків. Також введення hES клітин та їх похідних, зокрема, для суб'єктів з SCI забезпечує лікування пролежнів, зниження потреби у засобах підвищення артеріального тиску або антидепресантах, відновлення чутливості міхура та контролю над ним, відновлення чутливості кишечника і 14 UA 99813 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 чутливості до болю та дотику; відновлення втрачених рефлексів; зниження симптомів холодного поту; зниження відчуття запаморочення; нормалізацію кров'яного тиску та нормалізацію повного діафрагмального дихання. Процедура введення hES клітин пацієнтам, які страждають від підгострого пошкодження спинного мозку або хронічного пошкодження спинного мозку, і для яких природні механізми відновлення виявилися невдалими, детально описується нижче. Інша процедура лікування від гострого SCI, яка є першочерговою процедурою у лікуванні протягом трьох місяців після пошкодження згідно з практикою даного винаходу, також нижче описується у деталях. Терапевтично ефективна доза, графік введення та шлях введення hES клітин, які мають вводитися, залежать, насамперед, від трьох чинників: типу порушення, клінічного статусу пацієнта та тяжкості наявних симптомів. Під час практичного втілення даного винаходу було виявлено, що терапевтично ефективні дози та графіки введення не залежать від віку, статі, маси тіла або раси. Протокол для кожного пацієнта визначають індивідуально на основі безперервного процесу оцінки пацієнта. В одному варіанті практичного втілення даного винаходу фармацевтичну композицію, яка містить hES клітини та/або їхні похідні, вводять суб'єктові, який страждає від нині невиліковного порушення або термінального стану або іншого з вищезгаданих клінічних порушень, через серію ін'єкцій з метою лікування від порушення. Різні варіанти лікування від клінічних порушень та термінальних станів згідно з даним винаходом далі описуються з посиланням на представлені нижче приклади. Лікування, дозування, режим, шляхи введення, оцінка та подальше спостереження за пацієнтами, які страждають від SCI В одному варіанті втілення hES клітини та/або їхні похідні вводять суб'єктові, який страждає від SCI протягом більш, ніж трьох місяців (підгостре та хронічне SCI), через серію ін'єкцій з метою лікування від порушення. В іншому варіанті втілення похідні hES є кровотворними стовбуровими клітинами-попередниками. В іншому варіанті втілення похідні hES є нейрональними стовбуровими клітинами-попередниками. Випробувана доза В одному варіанті втілення від приблизно 750 000 до приблизно 80 мільйонів hES клітин та/або їхніх похідних, причому до вищезгаданих клітин належать кровотворні стовбурові клітини-попередники та нейрональні стовбурові клітини-попередники, розведених у стерильному нормальному сольовому розчині до кінцевого об'єму від приблизно 0,25 до приблизно 1,0 мл, випробують на забруднення та життєздатність і на кількість, застосовуючи стандартні протоколи, а потім вводять шляхом підшкірної ін'єкції як випробувану дозу у передпліччя. Здійснюють спостереження для перевірки наявності анафілактичного шоку, болю або запалення у місці ін'єкції, генералізованого свербежу, припливу крові або лихоманки через п'ять хвилин, десять хвилин, п'ятнадцять хвилин, тридцять хвилин, одну годину та двадцять чотири години. В одному варіанті втілення співвідношення hES клітин з кровотворними стовбуровими клітинами-попередниками та нейрональними стовбуровими клітинамипопередниками становить від приблизно 4:1 до приблизно 1:4. В іншому варіанті втілення співвідношення становить приблизно 1:1. Стимулююча доза Протокол передбачає введення підшкірної, внутрішньом'язової та/або внутрішньовенної стимулюючої ін'єкції фармацевтичної композиції, яка містить від приблизно 750 000 до приблизно 80 мільйонів hES клітин та/або їхніх похідних, причому до вищезгаданих клітин належать кровотворні стовбурові клітини-попередники та нейрональні стовбурові клітинипопередники, ресуспендовані в об'ємі від приблизно 0,25 мл до приблизно 1,0 мл стерильного нормального сольового розчину. Стимулюючу ін'єкцію здійснюють як ін'єкцію фармацевтичної композиції, яка містить однакову кількість hES клітин та їх похідних, щоденно протягом періоду від одного тижня до 10 днів. Епідуральна ін'єкція та епідуральний катетер Приблизно від 750 000 до 80 мільйонів hES клітин та/або їхніх похідних, причому до вищезгаданих клітин належать нейрональні стовбурові клітини-попередники, суспендовані в об'ємі 2 мл стерильного нормального сольового розчину і додатково розведені до 5-40 мл стерильного нормального сольового розчину, вводять шляхом епідуральної ін'єкції або за допомогою епідурального катетера вище або нижче місця ураження двічі на день протягом трьох послідовних днів, через сім-десять днів після першої стимулюючої ін'єкції. Введення шляхом епідуральної ін'єкції / за допомогою епідурального катетера повторюють вище або нижче місця ураження залежно від клінічного прогресу у поліпшенні симптомів, наявних у пацієнта, і на розсуд лікаря. Також спостерігалося, що у випадках, коли пацієнт лягає на спину 15 UA 99813 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 після епідуральної ін'єкції, суттєвим є сенсорне поліпшення, а коли він лежить у позиції обличчям донизу, суттєвим є моторне поліпшення. В обох випадках ноги пацієнта мають триматись у піднятій позиції. Інтратекальне введення Приблизно від 750 000 до 11 мільйонів hES клітин та/або їхніх похідних, причому до вищезгаданих клітин належать нейрональні стовбурові клітини-попередники, суспендовані у 2 мл стерильного нормального сольового розчину і додатково розведені 2 мл стерильного нормального сольового розчину до кінцевого об'єму 4 мл, вводять шляхом інтратекальної ін'єкції вище або нижче місця ураження через два, п'ять, вісім, дванадцять, сімнадцять та двадцять два місяці після початку стимулюючих ін'єкцій. В одному варіанті втілення лікування від SCT продовжують через введення клітин шляхом епідуральної ін'єкції через катетер вище або нижче місця ураження, наприклад, через п'ятнадцять днів після ураження. В одному варіанті втілення шляхом ін'єкції вводять суспензію приблизно від 750 000 до 80 мільйонів hES клітин та/або їхніх похідних, причому до вищезгаданих клітин належать нейрональні стовбурові клітини-попередники, розведену в об'ємі 2 мл стерильного нормального сольового розчину з наступним розведенням у 15-40 мл стерильного нормального сольового розчину. Ця процедура може бути повторена через півтора місяці. Глибока спінальна ін'єкція Залежно від прогресу, який спостерігається в усуненні симптомів, можуть вводитися додаткові бустерні ін'єкції фармацевтичної композиції, які включають від приблизно 750 000 до приблизно 80 мільйонів hES клітин та/або їхніх похідних, причому до вищезгаданих клітин належать як кровотворні стовбурові клітини, так і нейрональні стовбурові клітини-попередники, суспендовані в об'ємі від 0,25 мл до 1,0 мл стерильного нормального сольового розчину. В одному варіанті втілення фармацевтичну композицію вводять шляхом глибокої спінальної ін'єкції у задню частину хребта щотижня або раз на два тижні. Це лікування зміцнює м'язи спини й поліпшує фізичну реабілітацію, коли у пацієнта відновлюється рухливість. Каудальна ін'єкція Згідно з практикою даного винаходу, фармацевтичну композицію, яка містить від 750 000 до приблизно 80 мільйонів hES клітин та/або їхніх похідних, причому до вищезгаданих клітин належать нейрональні стовбурові клітини-попередники, ресуспендовані у 2 мл мольового розчину і розведені у 10 мл, окремо або у комбінації з DEPOMEDROL (метилпреднізолон ацетатом) у кількості до 20 мл, вводять шляхом каудальної ін'єкції. Це лікування зміцнює м'язи поперекової ділянки і дозволяє відновлювати сенсорну та моторну функцію у поперековій та крижовій ділянках. Крім поточної трансплантації hES клітин, відновленню пацієнта сприяє щоденна фізіотерапія та відновлення здатності до користування втраченою моторною функцією, а також вказівки з підтримання здорового способу життя, який сприяє процесам клітинної функції та регенерації клітин. Місцеве введення Крім безпосереднього лікування SCI з застосуванням hES клітин та/або їхніх похідних згідно з практикою даного винаходу, пролежні, які виникають в результаті довготривалої нерухомості пацієнта, можуть швидко й ефективно виліковуватися через місцеве застосування фармацевтичної композиції, яка містить hES клітини та/або їхні похідні. Виліковування пролежнів може досягатися шляхом місцевого застосування фармацевтичної композиції, яка містить від приблизно 750 000 до приблизно 160 мільйонів hES клітин та/або їхніх похідних, причому до вищезгаданих клітин належать кровотворні клітини-попередники. Ударні або стимулюючі дози вводять шляхом внутрішньовенної та внутрішньом'язової ін'єкції для забезпечення внутрішнього загоєння, а також для сприяння утворенню нових судин. В альтернативному варіанті hES клітини та їх похідні ресуспендують у 2 мл сольового розчину, розводять 2-4 мл сольового розчину і вводять всередину уражених тканин. Внутрішньовенна інфузія Згідно з практикою даного винаходу, фармацевтичну композицію, яка включає від 750 000 до 80 мільйонів hES клітини та/або їхніх похідних, причому до вищезгаданих клітин належать кровотворні та нейронні клітини-попередники, ресуспендують у 100 мл нормального сольового розчину і вводять внутрішньовенним шляхом. Це лікування забезпечує безперервний потік стовбурових клітин в організм і може бути особливо корисним у випадках, коли інші прямі шляхи з якихось причин є недоступними, наприклад, через пролежні на місці, надмірне ослаблення пацієнта і т. ін. Протокол лікування гострого SCI 16 UA 99813 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Швидке втручання при лікуванні від гострого SCI значною мірою підвищує шанси на виживаність пацієнта. Крім того, швидке втручання при лікуванні від будь-якої невиліковної хвороби, стану або порушення через практичне втілення даного винаходу підвищує шанси на одужання. У ще одному варіанті втілення даного винаходу пацієнти, які страждають від гострого SCI менше, ніж протягом трьох місяців після пошкодження хребта, також успішно піддаються лікуванню, як описується в деталях нижче. Фармацевтична композиція hES клітин та/або їхніх похідних разом з ефективною програмою фізіотерапії, реабілітації та перенавчання згідно з практикою даного винаходу є ефективним першочерговим засобом лікування від гострого SCI. Лікування від гострого SCI включає всі етапи, які застосовують для лікування від підгострого та хронічного SCI, плюс два додаткові етапи. Під час первісного втручання у разі SCI відразу після того, як відбулося пошкодження (наприклад, через хірургічну операцію), hES клітини та/або їхні похідні вводять безпосередньо у місце пошкодження. Подальше лікування включає дві інтратекальні ін'єкції та одну епідуральну ін'єкцію протягом трьох місяців з моменту пошкодження. Клінічна оцінка та спостереження Для пацієнтів, які втратили рухову функцію ніг на тривалий період часу, під час лікування згідно з даним винаходом мають бути запроваджені програми з їх перенавчання ходінню та інша фізіотерапія, коли до ніг повертається рухова функція. Як перший етап таких програм ефективним виявляється застосування ходильних рам та шарнірних пристроїв для перенавчання. Додаткова програма мускуляризації рук та верхньої частини тіла має запроваджуватися для того, щоб пацієнт при ходінні міг утримувати масу свого тіла без сторонньої допомоги. Програми перенавчання можуть скорочуватися у процесі лікування з поліпшенням стану пацієнта. Крім зниження потреби у підтримці з застосуванням медичних пристроїв та фізіотерапії завдяки поліпшенням у симпатичних та парасимпатичних симптомах пацієнта, лікування згідно з практикою даного винаходу забезпечує зниження потреби у медикаментозному лікуванні, включаючи застосування медикаментів від коливання кров'яного тиску, депресії, пролежнів, медикаментів та медичних засобів від ускладнень кишечника та міхура, антиспастичних медикаментів та насосів. Крім зниження потреби у медикаментах для лікування від симптомів, прямо або непрямо пов'язаних з SCI, також спостерігається, що діабетики з SCI, які отримують лікування згідно з даним винаходом, демонструють зниження потреби в інших протидіабетичних медикаментах. Клінічна оцінка поступового поліпшення симптомів, які має пацієнт, який страждає від SCI і піддається лікуванню згідно з даним винаходом, регулярно спостерігається протягом курсу лікування та після ремісії. Багато фізіологічних, симпатичних, парасимпатичних, моторних, вегетативних та психологічних параметрів оцінюють з метою оцінки ефективності способу усунення симптомів SCI, і вони детально описуються нижче. Здійснюють дослідження записів лікаря, включаючи опис симптомів, категоризацію місця ураження, прогресування симптомів, клінічне втручання, лікування та загальну історію пошкодження. На основі цього дослідження і протягом усього дослідження пацієнта, включаючи магнітно-резонансну візуалізацію (MRI), електроміографію (EMG), швидкість провідності нерва (NCV), та інших неврологічних обстежень та досліджень, включаючи неврологічне обстеження для оцінки ступеня пошкодження і для отримання записів про ураження перед лікуванням, розробляють методологію напівкількісного опису поліпшення після трансплантації згідно з практикою даного винаходу, яку детально описано нижче. У рамках фізіологічної оцінки записують симпатичні параметри та стан неврологічного здоров'я, включаючи психічний стан пацієнта, депресивний чи інший, поведінкові характеристики, функцію черепно-мозкового нерва та загальну поведінку. Здійснюють оцінку ознак та симптомів, пов'язаних з неврологічним пошкодженням у місці ураження та функціонування вегетативної нервової системи. Вона включає неврологічне обстеження, випробування здатності до відчуття притискання, відчуття дотику, сприйняття, рівноваги, здатності до відчуття болю, здатності до відчуття зміни температури, перевірку мимовільних рухів, наявності холодного поту, запаморочення, кров'яного тиску, утрудненого дихання, відхилень у позі при ляганні та здатності до сидіння без сторонньої допомоги. Здійснюють оцінку функції міхура та кишечника. Вона включає контроль над міхуром, сечовий струмінь та відчуття наповнення міхура, контроль над кишечником, час випорожнення кишечника та відчуття у кишечнику. Оцінку моторної функції верхньої частини тіла здійснюють з метою оцінки ступеня пошкодження для центральної нервової системи. Вона включає рух плечей, рух зап'ястка та пальців, сухожильні рефлекси та силу руху кінцівок, атрофію м'язів та хапальний рефлекс. 17 UA 99813 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Оцінку моторної функції нижньої частини тіла здійснюють з метою оцінки ступеня пошкодження для центральної нервової системи. Вона включає рух стегна, рух коліна, рух пальців ніг, сухожильні рефлекси та силу кінцівки, атрофію м'язів та плантарний рефлекс. Також здійснюють детальне неврологічне обстеження з регулярними інтервалами під час лікування з метою спостереження за процесом іннервації кінцівок. Для сприяння відновленню пацієнта протягом курсу візитів до клініки застосовують стандартні способи фізіотерапії для тонусу пацієнта з поверненням рухової функції, таким чином, щоб він міг відновити здатність до користування своїми кінцівками та суглобами і набути більшої рухливості. Регенерація нейронів підтверджується відновленням неврологічної функції та неврологічною оцінкою. Приклади протоколу лікування від SCI у даній заявці представлено як дослідження конкретних випадків. Лікування від пов'язаних з розвитком порушень нервової системи Клітини hES та/або їхні похідні згідно з практикою даного винаходу вводять у кількості від приблизно 750 000 до приблизно 160 мільйонів для лікування від пов'язаних з розвитком порушень, таких, як аутизм та уроджене слабоумство. В іншому варіанті втілення вводять від приблизно 750 000 до приблизно 80 мільйонів клітин внутрішньом'язовим або внутрішньовенним шляхами після випробуваної дози. Також застосовують інтратекальний шлях. У ще одному варіанті втілення також може застосовуватися внутрішньочерепна трансплантація. Клітини hES та/або їхні похідні здебільшого є нейронними клітинамипопередниками. В іншому варіанті втілення кровотворні та нейронні клітини-попередники вводять внутрішньом'язовим або внутрішньовенним шляхами. Це лікування триває протягом періоду в один рік, починаючи з щоденних ін'єкцій внутрішньом'язовим або внутрішньовенним шляхами протягом періоду у 3 місяці. Потім такі самі ін'єкції продовжують раз на тиждень протягом наступних 3-6 місяців, а потім один раз на два тижні протягом наступних 3 місяців, а потім раз на місяць згідно зі спостереженнями лікаря. Інтратекальну ін'єкцію включають до протоколу лише через 6-8 місяців після початку лікування, а також лише у разі, якщо пацієнт не реагує на внутрішньом'язові та внутрішньовенні ін'єкції. В іншому варіанті втілення даного винаходу від 750 000 до 80 мільйонів hES клітини та/або їхніх похідних ресуспендують у 100 мл нормального сольового розчину і вводять через внутрішньовенну інфузію. ПРИКЛАД 1: Пацієнт, у якого діагностовано аутизм з "пурхаючим" тремором, гіперактивним станом, без соціальних навичок, без зорового контакту, з обертальними рухами, нездатністю до втілення вказівок, без бажання навчатися, демонстрували поліпшення введення фармацевтичної композиції, яка включає hES клітини та їх похідні, включаючи нейронні стовбурові клітинипопередники та кровотворні стовбурові клітини-попередники. Графік ін'єкцій для цього пацієнта показано у Таблиці 2. Для цієї таблиці та всіх наступних таблиць, які стосуються графіків ін'єкцій, показник типу клітин "нейронні" стосується популяції hES клітин, які були частково диференційовані у середовищі (наприклад, DMEM), яке сприяє диференціації до невральних стовбурових клітин-попередників. Популяція клітин включає hES клітини та стовбурові клітини, які здебільшого є нейронними стовбуровими клітинамипопередниками. Показник "ненейрональні " стосується популяції hES клітин, які були частково диференційовані у середовищі (наприклад, RPMI), яке сприяє диференціації до стовбурових клітин-попередників, відмінних від нейрональних стовбурових клітин-попередників. Популяція клітин включає hES клітини та різні стовбурові клітини, які здебільшого не є нейрональними стовбуровими клітинами-попередниками. ТАБЛИЦЯ 2 Дата 3/13 3/14 3/16 3/17 3/18 3/20 3/21 3/22 3/23 Шлях введення випробувана доза внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово 18 Типи клітин ненейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні ненейрональні UA 99813 C2 ПРОДОВЖЕННЯ ТАБЛИЦІ 2 Дата 3/24 3/27 3/28 3/29 3/30 3/31 4/3 4/4 4/5 4/6 4/7 4/11 4/12 4/13 4/14 4/17 4/19 4/21 4/24 4/25 4/28 5/1 5/3 5/5 5/8 5/10 5/12 5/15 5/17 5/29 5/31 6/2 6/5 6/7 6/9 6/12 6/14 6/16 6/19 6/21 6/23 7/3 7/5 7/7 7/10 7/12 7/14 7/17 7/18 7/20 7/24 7/28 7/31 Шлях введення внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньовенна інфузія внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньовенна інфузія внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньовенна інфузія × 2 внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово 19 Типи клітин нейрональні нейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні нейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні ненейрональні ненейрональні нейрональні нейрональні нейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні UA 99813 C2 ПРОДОВЖЕННЯ ТАБЛИЦІ 2 Дата 8/2 8/4 8/7 8/10 8/11 8/14 8/18 8/21 8/23 8/28 8/30 9/1 9/4 5 10 15 20 25 30 Шлях введення внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово Типи клітин ненейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні Лікування від дегенеративних порушень нервової системи Клітини hES та/або їхні похідні, причому до вищезгаданих клітин належать нейрональні стовбурові клітини-попередники та кровотворні стовбурові клітини-попередники згідно з практикою даного винаходу, вводять у кількості від приблизно 750000 до приблизно 160 мільйонів клітин для лікування від дегенеративних порушень нервової системи, включаючи, крім інших, кортикобазальну дегенерацію, церебелярну атрофію Олівіо-Понто, хворобу Альцгеймера, хворобу Паркінсона, розсіяний склероз, слабоумство, атрофію слухового нерва та хворобу рухових нейронів. В іншому варіанті втілення вводять від приблизно 750 000 до приблизно 80 мільйонів клітин. Хоча протоколи введення можуть змінюватися для відповідності потребам конкретного пацієнта, типовий протокол лікування дегенеративних порушень нервової системи у дітей включає щоденні внутрішньом'язові та внутрішньовенні ін'єкції у перший місяць, ін'єкції тричі на тиждень протягом 2-4-го місяців, щотижневі ін'єкції у 5-й та 6-й місяці та щотижневі бустерні ін'єкції протягом 9-12-го місяців. Для дорослих типовий протокол включає щоденні внутрішньом'язові та внутрішньовенні ін'єкції разом з введенням через епідуральний катетер, поперекову пункцію, інтратекальний або каудальний шляхи. Після цього здійснюють дві внутрішньовенні інфузії з мінімальним інтервалом принаймні у 7 днів. І нарешті, бустерні ін'єкції вводять раз на місяць протягом 6 місяців а потім раз на 2 місяці протягом принаймні 6 місяців. Лікування може тривати протягом довших періодів і навіть може тривати протягом усього життя, якщо хвороби є прогресуючими. У разі прогресуючих та дегенеративних порушень зупинка або стабілізація прогресування хвороби через швидке втручання згідно з практикою даного винаходу дозволяє збільшувати самостійність пацієнта. Лише після стабілізуючого ефекту можна побачити певні поліпшення. ПРИКЛАД 2: Пацієнт, який мав дворічну історію періодичного прогресуючого розсіяного склерозу і щодня приймає SOLUMEDROL (метилпреднізолон), не міг ходити, не мав контролю над міхуром та кишечником і часто страждав від респіраторних порушень. Відповідно до лікування згідно з даним винаходом, стан суб'єкта поліпшився, пацієнт зміг ходити, відновився контроль над міхуром та кишечником, і приймання SOLUMEDROL було скорочено. MRI показала 50 % поліпшення. Графік ін'єкцій для цього пацієнта показано у Таблиці 3. ТАБЛИЦЯ 3 Дата 7/15 7/25 7/26 7/27 7/28 7/29 Шлях введення випробувана доза внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово Типи клітин нейрональні нейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні нейрональні 35 20 UA 99813 C2 ПРОДОВЖЕННЯ ТАБЛИЦІ 3 Дата 8/1 8/2 8/3 8/4 8/5 8/9 8/10 8/11 8/12 8/16 8/22 11/7 11/21 11/24 Шлях введення внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово × 2 внутрішньом'язово × 2 внутрішньом'язово × 2 внутрішньом'язово × 2 внутрішньом'язово внутрішньом'язово × 2 внутрішньом'язово внутрішньом'язово × 4 внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово 1/19 внутрішньом'язово × 2 1/25 внутрішньом'язово × 2 внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово × 2 внутрішньовенно внутрішньом'язово × 2 внутрішньовенно внутрішньом'язово × 2 внутрішньовенно внутрішньом'язово × 2 внутрішньовенно внутрішньом'язово × 2 внутрішньовенно внутрішньом'язово × 2 внутрішньом'язово × 2 внутрішньовенно внутрішньом'язово × 2 внутрішньовенно внутрішньом'язово × 2 внутрішньовенно 8/24 9/2 9/8 9/15 9/19 9/22 9/26 9/29 10/3 10/6 10/13 10/17 10/20 10/24 10/31 11/3 2/2 2/15 2/23 3/2 3/8 3/16 5/2 5/12 6/8 6/16 Типи клітин нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні Hes нейрональні нейрональні нейрональні суміш нейрональних та ненейрональних нейрональні нейрональні суміш нейрональних та ненейрональних суміш нейрональних та ненейрональних суміш нейрональних та ненейрональних ненейрональні суміш нейрональних та ненейрональних суміш нейрональних та ненейрональних нейрональні суміш нейрональних та ненейрональних суміш нейрональних та ненейрональних суміш нейрональних та ненейрональних ненейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні нейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні 21 UA 99813 C2 ПРОДОВЖЕННЯ ТАБЛИЦІ 3 Дата 7/3 7/4 7/5 7/6 7/7 7/18 7/22 7/24 8/1 8/4 8/7 8/24 8/28 9/2 9/6 9/9 5 10 Шлях введення внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово × 2 внутрішньовенно внутрішньом'язово × 2 внутрішньовенно внутрішньом'язово × 2 внутрішньовенно внутрішньом'язово × 2 внутрішньовенно внутрішньом'язово × 2 внутрішньовенно внутрішньом'язово × 2 внутрішньовенно внутрішньом'язово × 2 внутрішньовенно внутрішньом'язово × 2 внутрішньовенно внутрішньом'язово × 2 внутрішньовенно внутрішньом'язово × 2 внутрішньовенно внутрішньом'язово × 2 внутрішньовенно Типи клітин нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні ПРИКЛАД 3: 60-річний чоловік мав ALS (хворобу рухових нейронів) два роки тому зі швидким виснаженням функції рук та кистей. Спостерігалися постійні судомні скорочення м'язів та фасцикуляція рук, кистей та язика. Він не міг здійснити супінацію та пронацію лівої руки або підняти її над головою. Його права рука піднімалася вгору різким рухом, і він мав скелетоподібні руки. Через півтора року після лікування його руки відновилися з кістяка з гіпотенарних та тенарних м'язів обох рук. Обидві руки мають здатність до супінації та пронації. Пацієнт має такі самі труднощі з ковтанням, які з того часу не погіршилися. Не спостерігається виснаження функції рук, погіршення дихання та мови. Графік ін'єкцій для цього пацієнта показано у Таблиці 4. ТАБЛИЦЯ 4 Дата Шлях введення 8/2 внутрішньом'язово 8/4 внутрішньом'язово 8/5 8/8 8/9 8/10 8/11 8/12 8/16 8/17 Типи клітин нейрональні (випробувана доза) нейрональні ненейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні hES внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово 22 UA 99813 C2 ПРОДОВЖЕННЯ ТАБЛИЦІ 4 Дата 8/22 8/23 8/24 8/25 8/26 8/29 8/31 9/2 9/5 9/7 9/9 9/12 9/13 9/16 9/19 9/22 9/23 9/26 9/27 9/28 9/30 10/3 10/7 10/10 10/12 10/17 10/20 10/21 10/24 10/27 10/28 10/31 11/2 11/3 11/4 11/7 11/9 11/11 11/14 11/17 11/21 11/23 12/13 12/19 12/21 Шлях введення внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово × 3 внутрішньом'язово × 3 внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно епідурально внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньовенно епідурально внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово Типи клітин нейрональні нейрональні ненейрональні ненейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні змішані нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні змішані нейрональні змішані нейрональні нейрональні ненейрональні змішані змішані нейрональні ненейрональні змішані ненейрональні змішані ненейрональні нейрональні змішані нейрональні змішані нейрональні нейрональні змішані нейрональні змішані змішані змішані нейрональні змішані ненейрональні ненейрональні нейрональні нейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні нейрональні нейрональні 23 UA 99813 C2 ПРОДОВЖЕННЯ ТАБЛИЦІ 4 Дата 12/23 12/29 1/3 1/9 1/12 1/13 1/16 1/19 1/23 1/27 1/29 2/1 2/3 2/6 2/8 2/10 2/13 2/15 2/17 2/20 2/22 2/24 2/27 3/1 3/6 3/8 3/9 3/10 3/11 3/22 3/24 3/27 3/29 3/31 4/3 4/5 4/7 4/10 Шлях введення внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно епідурально внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньовенно пероральний спрей внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньовенно епідурально епідурально епідурально внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово пероральний спрей внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно Типи клітин нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні ненейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні 24 UA 99813 C2 ПРОДОВЖЕННЯ ТАБЛИЦІ 4 Дата 6/5 6/6 6/7 Шлях введення внутрішньом'язово внутрішньовенно епідурально внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньовенна інфузія внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно епідуральний катетер епідуральний катетер епідуральний катетер 6/12 внутрішньом'язово 4/12 4/19 4/24 4/26 4/28 5/2 5/3 5/5 5/8 5/11 5/12 5/14 5/15 5/16 5/17 5/19 5/22 5/24 5/26 5/29 6/1 6/2 6/14 6/16 6/21 6/24 7/3 7/5 7/7 7/10 7/12 7/14 7/17 7/20 7/24 внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньовенна інфузія внутрішньом'язово внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньовенно 25 Типи клітин нейрональні ненейрональні нейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні ненейрональні нейрональні нейрональні ненейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні UA 99813 C2 ПРОДОВЖЕННЯ ТАБЛИЦІ 4 Дата 7/25 7/31 8/2 8/3 8/8 8/11 8/16 8/23 8/28 8/29 9/5 9/6 9/8 9/13 9/15 9/18 9/19 9/20 9/22 9/25 9/27 9/29 10/2 10/4 10/9 10/13 10/16 10/18 10/20 10/23 10/25 10/27 11/1 11/6 11/8 11/10 11/13 Шлях введення епідурально (інтратекально) внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньовенна інфузія внутрішньовенна інфузія внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньовенна інфузія внутрішньовенна інфузія внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно інтратекально внутрішньом'язово внутрішньовенно 26 Типи клітин ненейрональні нейрональні нейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні нейрональні нейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні змішані ненейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні UA 99813 C2 ПРОДОВЖЕННЯ ТАБЛИЦІ 4 Дата 11/15 11/17 11/20 11/22 11/24 11/27 12/1 12/4 12/6 12/8 12/11 12/14 12/15 12/18 12/20 12/27 12/29 1/4 1/8 1/9 1/10 1/12 1/16 1/19 1/22 5 10 Шлях введення внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньовенна інфузія внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньовенна інфузія внутрішньовенна інфузія внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньовенна інфузія внутрішньовенна інфузія внутрішньовенна інфузія внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно Типи клітин ненейрональні нейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні нейрональні змішані змішані змішані ненейрональні нейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні ненейрональні нейрональні нейрональні нейрональні ненейрональні змішані змішані змішані ненейрональні ненейрональні ненейрональні змішані ПРИКЛАД 4: У пацієнта було діагностовано хворобу Паркінсона. Пацієнт не реагував на стандартне лікування, і його стан з часом погіршувався. Він мав типову човгаючу ходу. Спостерігався односторонній тремор правої руки, і фізіологічно пацієнт був дуже ослаблений. Він не міг відкрити очі. З початку лікування стан пацієнта поступово поліпшився, і після одного року лікування з застосуванням hES клітин пацієнт поліпшення було помітним. Хода нормалізувалася, тремор руки є мінімальним, спостерігається фізіологічне пожвавлення. Очі повністю відкриваються. Пацієнт може писати, що було неможливим на початку лікування. Зменшилася залежність від інших осіб. Графік ін'єкцій для цього пацієнта показано у Таблиці 5. 27 UA 99813 C2 ТАБЛИЦЯ 5 Дата 1/30 1/31 2/1 2/2 2/3 2/4 2/5 2/6 2/8 2/9 2/10 2/11 2/12 2/13 2/14 2/15 2/16 2/17 2/18 2/19 2/20 2/21 2/23 2/25 2/26 2/27 2/28 3/1 3/2 Шлях введення внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньовенно внутрішньом'язово внутрішньовенно внутрішньом'язово Типи клітин нейрональні (випробувана доза) нейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні нейрональні нейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні нейрональні ненейрональні нейрональні ненейрональні 28