Похідні 2-аміно-4 морфоліно-6 пропіл-1,3,5-триазіна у вигляді вільної основи або у вигляді гідрохлориду, які мають активність потенціалізації холінергічного ефекту, які покращують пам’ять та здатність до навчання

Производные 2-амино-4-мор фолино-6пропил-1, 3,5-триазина общей формулы: в вид е свобод ного ос нования, когд а Ri водород или метил и R2 - 2-гидроксиэтил или ацетил или Ri - вод ород и R2 - гид рокс игруппа, 1-этил-2-гидроксиэтил, 2-метоксиэтил, диметиламиногруппа, 2-(ацетокси)этил или {диметиламино)карбонип, или в виде гидрохлорида, когда Ri - водород или метил и R2 ацетил или бензоил, обладающие активнос тью потенциализации х олинэ ргического э ффекта, у лучшающего память и спос обнос ть к учению. С > О Нас тоящ ее изобретение относится к новым производным 2-а мин о-4-мо рфол и н о-бпропил-1, 3,5-триазина общей формулы I: (I). сн2снгсн3 в форме свободного основания, когд а Ri - вод ород или метил и R2 - 2-гид рокс иэ тил или ацетил, или Ri - вод ород и R2 -гид рокс ильная группа, 1-э тил-2-гид рокс иэ тил, 2-метоксиэ тил, д иметиламиногруппа, 2-{ацетокси)этил или (ди метил а ми но) карбонил, или в виде гидрох лорида, когда Ri - вод ород или метил и R2 - ацетил или бензоил, имеющим активнос ть потенциализации х олинэ ргического э ффекта, у лучш ающего память и с пос обнос ть к уч ению. Указанные свойс тва позволяю т предполагать возможнос ть применения э тих с оединений в медицине. о 11064 Извес тны 2-амино-1,3,5-триазины, замещенные в положении 4 аминогру ппой, кото-роя моно- или дизамещена рад икалом ал~ кил, алкенип, циклоалкил, арил или аралкил, или азотным гетероцикличес ким рад ика- 5 лом, и в положении 6 алкилом, зрилом или аралкплом, в час тнос ти, 2-амино-4-морфолино-6-пропил-1,3, 5-триазин. Эти соед инени я о б лад аю т с в о йс тв ом п ов ыш ен и я с екреции гормонов коры над почечникои и, 10 в частнос ти, глюкогормоиов коры надпоч ечник ов [1]. Целью изобретения является получение новых производ ных 2-змино-4-мор фолино-бпропил-1, 3,5-триазина. или их гид рох ло- 15 ридов, обладающих новым видом биологического дейс твия в э том ряду соед инений. Новые 2-амино-4-морфолино-6-пропил1,3,5-триазины формулы I облад ают свойс т вом повыш ения потенциала центральных и 20 периферийных х олинзргических э ффектоз, вызванных х олииомиметическим агентом, таким как, например, окс отреморин в то время, как сами новые с оед инения не обла дают собственным холинэргическим э ффек- 25 том. Кроме того, э ти соед инения облад аю т преимущес твенным свойс твом ос лабления э ффектов при пониженной х олинзргическои деятельнос ти, вызванной холинэргическим антагонистом таким, как, например, скопо- ЗО ламин. Холинэ ргическая с ис тема ш ироко связана с явлениями запоминания и обуче ния. Введ ение молод ым пациентам антих ол и нэ рг и ч ес к ог о а ге н та та к о г о, как скополамин, вызывает нед ос татки памяти, 35 пох ожие на недос татки памяти у пожилых люд ей. Наоборот, х олинэ ргические агенты, как физос тигмин, спос обны бороться с ам незией, вызванной введ ением антихолинэ ргических агентов. 40 Кроме того, в нас тоящ ее время установлено, чго наиболее час то вс тречающимся признаком, связанным со с лабоумием являетс я именно разрушение холипэргической системы. Вот почему, новые соединения MO -* 45 гу т быть использованы д ля лечения нарушений сознания и повед ения, с вязанных с возрас том и синдромами слабоумия, в частнос ти, при лечении наруш ений, связанных с болезнью Альцхзймера, с тарческим слабо- 50 умием типа А льцхаймера и с любой развивающейс я патологией с ознания. Ниже привед енные примеры иллюс трируют нас тоящ ее изобретение. П р и м е р 1. 55 Получение 2-[(4-морфолино-6-пропил1,3, 5-триазин-1-ил)амино] -э танола (с оединение 1}, Растворяют 145,5 г (0.6 моль) 2-хлор-4морфолино-6-пропил-1, 3,5-триазина в 600 мл д иоксана. В этот рас твор вводят, по каплям и при хорошем перемеш ивании, примерно за 80 мину т, рас твор 444 г (7,28 моль) 2-аминоэ танолэ в 600 мл д иокс ана. Затем реакционную смес ь нагрепают в ре флюк се в течение 7 час ов. Образовавш ийся гид рох лорид 2-аминоэ танола ох лажд ают, декантиру ют и уд аляют д иоксаи под пониженным давлением. Полу ченный ос ад ок рас творяю т в 5 литрах диэ тилового э фира. Этот рас теор промывают вод ой, а промывочную воду повторно экс трагируют д ихл ор м е тан ом. О рга н ич ес ки е фа з ы объединяют и высушивают на сульфате магния. Удаляю т растворитель под пониженным давлением. Полученный твердый осадок рекристаллизуют в смеси 50:50 (обьем) этилацетат-петролейный э фир. Получают 169, 8 г 2[(4-морфалино-6-пропил-1, 3,5-триазин-2 ил)амино]-э танола. Выход. 88%. Температу ра плавления: 95-99°С. Анализ для C12H21N5O2 в %: Вычис лено: С 53, 91; Н 7, 92; N26,20 Найдено: С 54,30; Н 8,10; N 26,13 2-[ (4-мор фолино-6-пропил-1, 3, 5-триазин-2-ил)амино] -э танол может быть пред ставлен в двух различных крис таллических формах в зависимости от рекрис таллизации продукта в метаноле (температура плавле ния: 97-99°С) или в толуоле (температура плавления: 89-90°С). Таким же образом получают соед инения форму лы I, приведенные в таблице 1: П р и м е р 2. а) Полу чение исх од ного 2-[ (4-х лор-6пропил-1,3,5-триэзин-2-ил)амино]-э танола. При температуре окружающей среды добавляют по каплям 24,4 г (0,4 моль) 2-аминоэтанола, рас творенног о в 100 мл диоксана, в раствор 38,4 г (0,2 моль) 2,4-дихлор-б пропил1,3,5-триазина в 100 мл диоксана. После добавления выдерживают еще перемешивание в течение одной ночи. Фильтруют гидрохлорид 2-аминоэ танола, а фильтрат выпаривают под пониженным давлением. Полученный осадок рекристаллизуют в смеси этилацетатгексан 50:50 (объем). Получают 41,5 г 2-[(4хлор-6-пропил-1,3,5-триазин-2-ил)амино]-этанола, Выход: 96%. Температу ра плавления: 87-88°С. Анализ: д ля Cs HwCINiO в %: Вычис лено: С 44,34; Н 6, 00: N 25,88; CI 16,40 Найд ено: С 44,42; Н 6, 17; N 25,69; С! 16,52 в) Получение 2-[(4-морфолино-6-пропил1,3,5-триазин-2-ил)амино]-э танола. Вариант 1. 11064 Смешивают 10,83 г (0,05 моль) 2-{(4-хлор-6пропил-1,3,5-триазин-2-ил)амино}-э танола и 8,7 г (0,10 моль) морфолина в 150 мл д иок-с ана. Самопроизвольно повыш ают темпера ту ру с мес и д о 4 1° С. За те м о б ра з о- 5 вавшийся гидрохлорид морфолина нагревают в рефлюкс е в течение 30 мину т, затем охлажд ают и фильтруют. Фильтрат выпаривают и рекрис таллизируют осадок в с мес и 50:50 (объем) зтилацетат-гексан. Получают 10 11, 8 г 2-[(4-морфолино-6-пропил-1,3, 5-триз-зин2-ил)амино]-э танол2. В ых од : 88, 4% . Точка плавления: 9394°С. Р екрис таллизированный в метаноле 15 прод укт плавитс я при 97-98°С и являетс я идентичным соединению 1, полученному по примеру 1. Вариант 2. Смеш ивают 10, 83 г (0, 05 моль) 2-[ (4- 20 хлор-6-пропил-1, 3,5-триазин-2-ил)амино] -этанола и 15, 15 г (0,15 моль) N-метилмор фолина в 100 мл д иокс ана. Смесь нагревают в рефлюксе в течение 20 часов, затем ох лажд ают и уд аляю т д иокс ан под пониженным 25 давлением. Осадок рас творяю т в 200 мл этилацетата. Р ас твор промывают два раза пос ред с твом 50 м л вод ы, выс у ш ив аю т н а сульфате натрия и концентриру ют рас твор. Продукт крис таллизиру ют в ход е выпарива- 30 ния. Получают 9,23 г 2-[(4-морфолино-6-пропил -1, 3, 5- триа зин -2- ил )ам ино] -э та но ла, идентичного продукту, полученному по примеру 1. J При мер з. 35 а) Получение исходных 2-амино-4~ морфолино-6-пропип-1, 3,5-триазинов. 1. 2-амино-4 -мор фо ли но-6 -про пи л1,3,5-триазин (гид рох лорид). Смеш ивают 87 г (1 моль) морфолина и 40 8, 6 г (0, 05 моль) 2-амино-4-х лор-6-пропил1, 3, 5-триазина. Температу ру с мес и с амопро изв оль но п ов ыш аю т д о 54 °С, За тем нагревают в рефлюкс е в течение 5 час ов. Реакционну ю с месь выпаривают под пони- 45 женным д авлением, а полу ченный ос ад ок повторно рас творяют в э тилацета те. Рас твор промывают три раза вод ой, затем выс у ш иваю т ег о на су ль фа те натр ия. Р ас творите ль у д аляю т под пониженным 50 давлением, а осад ок рекрис таллизиру ют в гексане. Получают 9,1 г 2-амино-4-морфоли-но6-пропил-1, 3,5-триазина. В ыход: 82%. Температура плавления: 127~ 128°С. Гидрох лорид: температу ра плавления: 55 210-211 °С (изопропиловый спирт-эфир). Анализ для C10H17N5O • НСІ в %: Вычис лено: С 46, 24; Н 6,94; N 26, 97; СГ 13,68. Найдено: С 46,21; Н 6, 90; N 26, 78; СГ 13,61. 2,2-Метиламино-4-морфолино-6-пропил1,3,5-триазин гидрохлорид. В рас твор, содержащий 5,6 г (0,03 моль) 2-х лор-4-метиламино-6-пропил-1, 3, 5-триазина в 50 мл диоксана, добавляю т раствор, содержащий 8,7 г (0,1 моль) морфолина в 50 мл диоксана. Смесь нагревают в рефлюксе в течение 5 часов. Затем охлаждают и фильтруют образовавш ийся гид рох лорид морфолина. Растворитель удаляю т под пониженным давлением, а осадок разбавляю т в хлороформе. Промывают водой и высушивают органическую фазу на сульфате натрия. Растворитель выпаривают, а осад ок рекрис таллизу ют в этилацетате. Получают 5,3 г 2-метиламино4-морфолино-6-пропил-1,3, 5-триазина. Выход: 74%. Температу ра плавления: 131-133°С. Полученный продукт рас творяю т в изопропиловом спирте в горяч ем сос тоянии. В этот рас твор добавляю т эквивалентное количес тво х лорис товод ород ной кис лоты в рас творе в э тиловом э фире. Гидрох лорид крис таллизуют пу тем ох лаждения. Фильтруют, промываю т э тиловым э фиром и высушивают. Вых од: 75%. Температура плавления: 177-178°С, Анализ: для C11H19N5O НСІ в %. Вычис лено: С 48,26; Н 7,31; N 25,29; СГ 12,97 Найд ено: С 48, 38; Н 7, 40; N 25,57; СГ 12.64. в) Полу чение 2-амино-4-морфолино-6пропил-1, 3,5-триазинов. 1. Ы-{4-морфолино-6-пропил-1,3,5-триазин-2-ил]-ацетамид (соединение 21). При температу ре окру жающ ей с ред ы добавляю т по каплям 4 г (0,05 моль) ацетилхлорид а в рас твор 11, 2 г (0,05 моль) 2-амино-4-морфолино-6-пропил-1, 3,5-триазина в 100 мл безвод ного пирид ина. Смесь перемешивают в течение 6 часов, затем ос тавляют в теч ени е 48 час ов. Г ид р ох л ор ид пирид ина фильтруют и выпаривают фильтрат под пониженным д авлением. Полу ченный осад ок разбавляю т один раз толуолом, который снова выпаривают. Затем ос адок разбавляю т д их лорметаном, промывают рас твор водой и высуш ивают на су льфате натрия. Полу ченный пос ле выпаривания осад ок рас творителя очищают х роматографией на дву окис и кремния (э люент: 90: 10 (обьем/д их лорметан-зтанол), а продукт, в конечном итоге, рекрис таллизируют в э тилацетате. Получают 5,75 г Ы-(4-морфолино6-прогш л-1,3,5~ триазин-2-ил)ацетамид а. 7 11064 Выход: 43,4%, Температура плавления: 141-2°С (соединение 21а). Гид рох лорид: температу ра плавления: 145-146°С (изопропиловый с пирг-э фир) (со единение 21в). 6 кислотный хлорид всегд а был в избытке по отношению к триэ тиламину. Выд ерживают перемеш ивание в течение од ного часа при 5°С, и затем, в течение 12 час ов при темпорату ре окружающей сред ы. Р еакционную смесь последовательно промывают водным 5 растоором бикарбоната натрия и водой. ВыАнализ для C12H19N5O2 ' HCI в %: сушивают на сульфате натрия и выпаривают рас творитель под пониженным давлением. Вычис лено: С 47,76; Н 6, 63; N 23, 22; СГ 11,77 Осадок кристаллизуют в смеси толуол-гексан Найд ено: С 47,78; И 6, 73; N 22,80; СГ 1:2. Полученный продукт сначала очищают 11,62 10 хроматографией на двуокиси кремния (элюент:95:5 (объем) дихлорметан-этанол), затем 2. Г\]-(4~морфолиио-6-пропил-1,2,5-триаего рекристаллизируют в смеси толуол-гексан зин-2-ил)бензамид (гидрохлорид) (с оедине1:1. ПолучаютЭ.З г2-//2-(ацетокси)этил/ аминие 22). но/-4-морфолино-6-пропил-1,3, 5-триазина. В рас твор 11, 2 г (0. 05 моль) 2-амимо-4Выход: 60%. Температура плавления; морфолино-6-пропил-1, 3,5-триазина в 200 15 мл дих лорэ тана добавляю т при температуре 94-95°С. окружающей с реды, пос лед овательно, рас твор Анализ д ля СмНгз^їзОз в %: 7, 7 г (0, 055 моль) бензоиішюрид а в 50 мл Вычис лено: С 54,37; Н 7, 44; N 22,65. дихлорэ тана и рас твор 5,5 г (0,055 моль) Найдено: С 54,98; Н 7,69; N 22,62. П р и м е р 5. триэ тиламина в 50 мл д их лорэ тана. Нагре- 20 Получение Г\1,Г\!-диметил-М'-(4-морфоливают с мес ь в рефлюкс е а течение 6 час ов, но-6-пропил-1, 3.5-триаэ ин-2~ ил)мочевины затем ее ох лажд ают до температу ры окру (соединение 41). жающей с ред ы. Пос ледовательно промывают вод ой с вод ным рас твором бикарбоната При температуре 20°С пропускают в тенатрия, затем ещ е раз вод ой. Орг аниче- 25 чение трех часов газовый поток д иметиласкую фазу высушивают на суль фате натрия и мина в рас творе 5 г ( 0 , 0 1 4 5 мо ль) (4выпаривают рас творитель под пониженным морфолино-6-пропил-1, 3,5-триазии-2-ил) карбамата фенила в 100 мл безводного дихд авлением. Полученный ос ад ок х ролорметана. Затем ос тавляю т смесь в точема тогрэ фи ру ю т на д ву ок ис и к ре мн ия (элюент: 95:5 (объем) дих лорметанэ танол), 30 ние 12 часов. Последовательно промываю т затем, в конечном счете, рекрис таллизиру -ют ее разбавленным рас твором гидроокиси нав смес и 50:50 (объем) э фир-гексан. Продукт трия и водой. Органическую фазу высушиваобразует гид рох лорид о э фире. Таким ют на с у льфа те на трия и выпариваю т образом получают 12, 1 г гид рох лорид а N-(4- рас творитель под пониженным давлением. Полученный осадок кристаллизируют в смеморфолино-6-пропил-1,3,5-триазин-2-ил)- 35 си, 50:50 (объем) этилацетат-гексан. Получабензамида. ют 1.7 г Ы,Г\)-диметил-Ы'-(4-марфолина-6-лроВыход: 66,5%. Температура плавления: пил-1,3,5-гриазин-2-ил)моч евины. 197-198°С. Выход: 39,9%. Анализ: для C17H21N5O2 ' НСІ в %. Температу ра плавления: 110-111°С. Вычис лено: С 56. 12; Н 6, 05; N 19, 26; СГ 40 Анализ для C13H22N6O2 в %: 9,77. Найд ено: С 56, 30; Н 6, 50; N 19,16; СГ Вычис лено: С 53,06; Н 7, 43; N ?8,57. Найдено: С 53,20; Н 7,69; N 28,67. 9,54. 2-Амино-4-морфолино-6-пропил-1,3, 5Соединения, объединенные в таблице 2,_ получают либо по методу примера Зв (1), 45 триазины или их гид рох лориды обладают свойс твом коррекции э ффектов гипофунк либо по методу примера Зв (2). ции холинэргической системы. Это преимуП р и м е р 4. щес твенное с войс тво было выявлено в 1.2-//2-(ацетокси)этил/ амино/-4-мор форезультате серии фармакологических испылино-6-пропил-1,3,5-триазин (соединение 37). В рас твор 13. 4 г(0, 05моль)2-[ (4-морфо- 50 таний, показывающих, что соединения по изобретению оказывают определенный э флино-6-пропил-1, 3, 5-триазин-2-ил)амино] фект, подобный э ффекту хорошо известных этанола (соединение 1, полученное по примеру холинэ ргических соединений таких, как ок 1) в 200 мл д их лорметана одновременно сотреморин, ареколин или физостигмин (2) ввод ят, при температу ре 0°-5°С, 4, 3 г (0, 055 моль)ацетилх лорид а, рас творенною в 50 мл 55 или же противодейс твуют э ффекту такого холинзргического антагонис та, какскополадихлорметана, и 5,5 г (0,055 моль) триэ тиламин (3). мина в рас творе с 50 мл дих лорметана. Добавление э тик д вух реактивов регу лиру ют таким образом, чтобы в реакционной с реде 11064 Соединения настоящ его изобретения подвергли следующим фармакологическим испытаниям 1. Потенциализация холинэргических эффектов оксотреморина. 5 Целью этого теста является доказательство того, что соединения по изобретению усиливают центральные и периферийные хо линэргические эффекты, вызванные пу тем введения мыши небольшой дозы оксотремо- 10 рина. Степень пери ферийной холинэргической активации измеряют по слюновыделе нию, количественно определяемому по следующей системе отсчета: 15 0 очков: слюновыделение не превышает слюновыделение у обычной мыши, 1 очко: немного слюны находится вокруг зубов, 2 очка: слюна образует узкую полоску 20 вокруг рта, 4 очка: слюна смачивает кожу под подбородком, 6 очков: слюна течет из рта, например, на передние конечности. 25 Промежуточные очки не применяются, а слюна снимается после каждого наблюдения. Степень центральной холинзргической активации измеряется по тремогенному эф- 30 фекту, количественно определяемому по следующей системе отсчета: 0 очков: нет дрожи, 1 очко: случайное, легкое периодиче ское дрожание, 35 2 очка: умеренно-легкое, часто повторя ющееся дрожание, 4 очка: сильное дрожание, но с периодами покоя, 6 очков: очень сильное, почти постоян- 40 ное дрожание. Самцов мышей NMRI (20-25 г) распределяют на четыре группы по пять жи вотных, а именно: одна контрольная группа и три обработанные группы. Тестируемое сое- 45 динение вводят интраперитональным пу тем (в трех обработанных группах) за 20 минут перед введением оксотреморина с разными дозами для каждой из обработанных групп. Оксотреморин вводят интраперитональным 50 путем в обработанных группах и в контрольной группе, с дозировкой 0,05 мг/кг, в растворе в 10 мл/кг физиологической сыворотки. Эта доза соответствует примерно минимальной дозе оксотреморина, которая еызыеает 55 дрожание \л выделение слюны. После введения оксотреморина животных отдельно помещают в небольшие клетки и за ними устанавливают наблюдение с равномерными интервалами в 5 минут до 10 полного исчезновения холинэргических эффектов. Для каждой из групп суммируются индивидуальные очки, начисляемые за каждый период наблюдения, это позволяет составить кривую, представляющую сумму очков в зависимости от времени, характерную для каждой группы. Средние значения поверхностей под кривыми, полученными для каждой из обработанных групп, сравнивают со средним значением поверхности под кривой соответствующей контрольной группы, и проводят с та тис тич еский а на лиз п о ме тоду Манн-Уитнея. В результате этого сравнения, можно определить "минимальную активную дозу". Эта "минимальная активная доза" является минимальной дозой соединения, необходимой для наблюдения потенциализации эффекта слюновыделения или тремогенного эффекта оксотреморина, или, другими словами, для получения поверхности, большей, чем поверхность под кривой, полученной для контрольной группы. В приводимой ниже таблице 3 даны активные минимальные дозы соединений согласно изо бре тен ию, кото рые по тен циализируют слюнотечение и дрожания, вызванные оксотреморином. Результаты, полученные в этом тесте, доказывают, что соединения изобретения усиливают э ффект слюновыделения оксотреморина при минимальной дозе, составляющ е й 8, 4 - 8 8 , 6 мг/ кг, и ус и ли в а ю т тремогенный эффект при минимальной дозе, составляющей 8,0-37,8 мг/кг. Кроме того, м ин им а ль н ые ак ти вн ые до з ы н е обладают собственным холинэргическим эффектом и очень далеки от смертельных доз, определенных в тесте Ирвина. Кроме того, этот тест выявил, что некоторые соединения согласно изобретению, введенные в минимальной активной дозе, обладают более продолжительным эффек том, чем сложный метиловый эфир 1,2,5,6тетрагидро-1-метил-З-пиридинкарбоновой кислоты (ареколин), являющийся известным холинэргическим соединением Таким образом, соединения изобретения показывают потенциализацию э ффекто в с лю н ов ыд е ле н и я и тр е м ог е нн ы х эффектов оксотреморина через двадцать минут после их введения при минимальной активной дозе в то время как, в тек же , самых условиях, ареколин не дает никакой потенциализации. 2. Торможение чрезмерной активности, вызванной скополамином. Животное, помещенное впервые а новую окружающую среду, проявляет интен 11064 сивнуга исс лед овательскую активнос ть по изучению э той новой сред ы. Пос тепенное с нижение v, пос леду ющее ис чезновение этой ак тивнос ти по изучению д ругими с ловами, привыкаемос ть к новой с ред е, может 5 рассматриваться как элементарная форма обучения. Эта э лементарная форма обучения чувствительна к слиянию медикаментов, которые облегчают или которые замед ляю т обучение Так например, скополамик-соеди- 10 пение, которое вызывает мнезические расстройс тва, приводит к чрезмерной познавательной ак тивнос ти у крысы, помещ енной в новую окружающую среду, это явление связано с центральной антихолинэргической ак15 тивиос тыо э того с оед инения. Напротив, холинзршческий антагонис т пдпафизиос тпг мина противод ейс тву ет чрезмерной активнос ти, с озд анной скополамином. В нижеопис анном тес те в зависимос ти 20 от их рас творимос ти, соединения изобретения ввод ят либо в физиологичес кой с ыворотке, либо в с оответс тву ющ ем нос ителе (обычно, бу ферный рас твор-цитрате рН 5). Этот тес т позволяет установить для сое- 25 динении с огласно изобретению активнос ть, сравнимую с ак тивнос тью физиос тигмина. В э том тес те используют с амцов крыс Sprague-Dawly SP F (Specific P athogen Fiее) (160-200 г). В течение нед ели перед экспе- 30 риментом э тих животных с одержат в нор мальных условиях группами по 15 животных в с танд артных огражд енных реш етками клетках с о с вобод ным д ос тупом к пище и питью. 35 В начале эксперимента крыс распред еляю т на 4 однород ные гру ппы по 10 животных и приучают, в течение од ного часа, к мес ту эксперимента. Затем, кажд ая группа животных подвергается определенной об- 40 работке: -группа 1 получает две одновременные интраперитональные инъекции физиологи ческой с ыворотки или ис пользованного по-, сителя, 45 - группа 2 получает од ну инлраперитональную инъек цию физиологической с ыво ротки или использованног о носителя и одну интраперитональиу го инъекцию в 0, 5 мг/кг скополамина в расгворо, 50 - группа 3 получают од ну интраперитональную инъекцию тес тиру емого с оед ине ния в рас творе в соответс твующем носителе и од ну интраперигональную инъекцию фи зиологической сыворотки или ис пользован- 55 ного носителя. - группа 4 получает од ну интоапермтональную инъекцию тес тируемого с оедине ния и одну интрзперитонэ льную инъекцию в 0,5 мг/ кг скополамина. 12 Через тридцать мину т пос ле э той обработки од новременно тес тиру ют че ты ре гру ппы ж ивотных . Для э той цели к ажду ю гру ппу помещают в квад ратну ю камеру (100x 100 см) с решетчатым полом и од ной вертикальной с тенкой высотой 50 см. К аж дая из э тих камер имеет 16 зон, включая 4 зоны по уг лам, 4 централь ные зоны и 8 периферических зон. Кроме того, каждая камера с на бж ен а 2 р яд а ми э л ем е н тов ин фракрас ного излу чения, рас положенными в 2 см над полом для регис трации горизонтальных перемещений животных и 2 другими ряд ами элементов инфракрасного излучения, расположенными на высоте 10 см от пола, д ля регис трации вертикальных перемещений. Эти элементы инфракрасного излучения с оед инены с микропроцессоро м, к о то р ы й п озв о л яе т о пр ед е ля ть сред нюю от пройд енных расс тояний (в см) для одной группы животных, определять среднее чис ло осуществленных сыпрямлений, а также распред еление горизонталь н ых п е р ем ещ е н и й, в р а з л ич н ых центральных, периферийных и углос ых зонах, выраженных средним временем пребывания в э тих различных зонах. Каждое тес тированное соед инение исследуют, по меньшей мере, при трех различных д озах, исход я из которых опред еляю т минимальную активную дозу, которая тормозит чрезмерную активнос ть, наведенную интраперитональным введ ением 0, 5 мг/кг скополамина. Затем, сравнивают либо значения, полу ченные в группе 2, обработанной только скополамином, с о значениями, которые получены в гру лпе4, одновременно обработанной скополамином и тес тируемым соединением, либо значения, полученные в группе 4, с о значениями, полученными в группе 3, обработанной только тестируемым соединением. Контрольная группа 1 служит д ля контроля дейс твия скополамина, введенного в группу 2 Во вс ех случаях, отмеченные различия с татис тически оценивают по метод" Ман-Уитнея. В привед енной ниже таблице 4 д аны результаты, полученные в этом тес те с соединениями по изобретению. Полученные в этом тесте результаты показывают, что соединения изобретения обладают хорошей тормозящ ей активностью в отнош ении чрезмерной активнос ти, наведенной скополамином. Опред еленные для э тих соед инений минимальные активные дозы с ос тавляю т 1, 1-15, 5 мг/ кг. Од нако в противоположнос ть фирс тигмину, который являетс я неактивным, когд а его вводят более, чем за 15 мину т перед провед ением 13 11064 измерений, соединения, согласно изобретению, еще обладают тормозящей активностью, когда их вводят за 30 минут перед проведением измерений. Следовательно, их активность является более продолжи- 5 тельной, чем активность физостигмина. 3. Торможение эффектов скополамина на электроэнцефалограмме (ЭЭГ)Введение скополамина человеку или животному вызывает мнезические рас- 10 стройства, сравнимые с расстройствами, которые появляются в ходе нормального или патологического старения, У пациентов, страдающих старческим слабоумием типа Альцхаймера, получают улучшение мнези- 15 ческих расстройств путем введения физостигмина - соединения, которое тормозит ацетил-холинэстеразу. Скоползмин, введенный крысам интраперитональным путем, при дозе 0,5 мг/кг 20 приводит к изменениям спектра ЭЭГ, которые выражаются в повышении мощности полосы в 8 Гц, уменьшении мощности полос 20,8-40 Гц, а также в повышении общей мощности спектра ЭЭГ. Физостигмин про- 25 тиводействует этим изменениям. Целью этого теста является подтверждение посредством метода количественного анализа электроэнцефалограммы того, что соединения изобретения обладают 30 свойством нейтрализации воздействия скополамина на спектр ЭЭГ. В этом тесте используют самцов крыс Albinos Sprague Dawiy SPF (160-200 г). Когда животные достигают возраста 3 35 месяца, вживляют накрепко, асептически и под общей анестезией,5 кортикальных электродов: один нейтральный электрод, один лобный левый и один лобный правый электроды, один затылочный левый и один заты- 40 лочный правый электроды. Тест проводят, когда животные достига ют возраста примерно 15 месяцев. В интер вале животных содержат в индивидуальных клетках, они получают воду и пищу по жела- 45 нию и их подвергают регулярному суточно му циклу, содержащему период темноты от 18 часов вечера до 6 часов утра. Одновре менно животные постепенно привыкают к клеткам звуконепроницаемой кабины, ко- 50 торые они впоследствии будут занимать для Записи электроэнцефалограмм, а так же к экспериментальным условиям путем введения плацебоинтраперитональным путем. 55 Продукты вводят сразу перед записью ЭЗГ. Крыс распределяют по группам из 8 животных и записывают 16 образцов спектров ЭЭГ за 5 секунд (два спектра ЭЭГ на живо 14 тное). Затем полученные спектры анализируют на ЭВМ, что позволяет определять для каждой группы среднее из 16 проведенных измерений и вычислить из него для одного животного общую мощность спектра ЭЭГ, а также распределение этой мощности (в %) в различных полосах частот. Эту операцию (запись спектров) повторяют 9 раз (общая продолжительность: 121 минута). Эффект изучаемого соединения вычисляют из статистического сравнения результатов, полученных для различных групп животных, которым ввели соответственно тестируемое соединение, скополамин и плацебо. В нижеприведенной таблице 5 приводится для некоторых соединений изобретения, введенных интраперитонеальным путем при дозе, указанной в мг/кг, процент снижения увеличения мощности полосы 6,4-9,6 Гц (средняя 8 Гц), вызванного интраперитонеальным введением 0,5 мг/кг скополамина. Результаты показывают, что соединения изобретения, как и физостигмин, тормозят эффекты, которые оказывает скополамин на электроэнцефалограмму. Видно, что это торможение достигает и даже превышает 50% при относительно небольших дозах, очень далеких от токсичных доз, что не является случаем для физостигмина. 4. Пассивное уклонение с многократными испытаниями, Соединения настоящего изобретения исследуют с целью выявления, с одной стороны, их свойства содействия обучению, выраженного уменьшением числа испытаний, необходимых для достижения заранее определенного критерия, и, с другой стороны, их свойства противодействия амнезии, вызванной введением скополамина. Для этой цели используют метод пассивного уклонения с многократными испытаниями. Этот метод хорошо известен з плане оценки эффектов, которые оказывает продукт на память и на обучение. Тест проэодят на самцах крыс SpragueDawley (160-200 г), которых выдерживают во время эксперимента в стандартных клетках. Использованным устройством является квадратная прозрачная клетка со стороной 35 см и высотой 25 см. снабженная решетчатым электрифицированным полом. На полу, в одном из углов клетки, размещают резиновый изоляционный слой (10x17 см). Для оценки способности соединения содействовать обучению осуществляют следующее испытание. 15 11064 Каждое животное помещают на резиновый слой и отмечают время, которое животное затрачивает на реш ение пок ину ть э то мес то для исс лед ования клетки. Пос ле 20 секу нд исс ледования животное получает 5 удар электрическим током (прод олжительнос ть 3 секунды) в лапы, вызывая реакцию бегс тва. Крысу сразу извлекают из ус тройс тва и снова помещают в прежнюю клетку. Повторяю т э тот эксперимент д о тех пор, 10 пок а животное не ос тается, по меньш ей мере, 180 секу нд на резиновом с лое, чтобы избежать получения удара э лек трическим током. Обучение выражается в среднем числе испытаний, необх одимых д ля д ос тиже- 15 ния времени пребывания на с лое в 130 секунд. Время пребывания на резиновом слое в 180 секунд рассматривается как максимальная дос тигаемая х арактерис тика для живо- 20 тн ог о д л я из беж а ния по лу ч е ния у д ар а электрическим током. Крыс ы, которые ос таютс я на с лое в течение э того времени, приоб ре таю т р е фл ек с у к л он е ния и с но ва помещаются в их преж нюю клетку без полу- 25 чения удара э лектрическим током. Для оценки с пос обнос ти с оед инения содейс твовать мнезическому удержанию по ис течению времени провод ят с ледующий эксперимент. К ажд ое животное подвергают 30 четырем ис пытаниям по времени 0, 4, 24 и 28 часов. При первом ис пытании (время 0), животное помещают на резиновый с лой и отмечают время, которое затрачивает животное д ля принятия реш ения покину ть э то 35 мес то для исс лед ования клетки. После 20 секунд исс лед ования, крыса получает удар электрическим током (прод олжительнос ть 3 секунды) в лапы, вызывая реакцию бегс тва. Крысу немед ленно извлекают из ус тройс тва 40 и с нова помещают в прежнюю клетку. В ход е трех пос ледующих испытаний (время: 4, 24 и 28 часов), животной снова помещают на резиновый слой и отмечают время, затраченное для ос тавления э того мес та. К ак 45 только четыре лапы животного попад ают на решетку, оно получает удар э лектрическим током и немед ленно извлекаетс я из ус тройства. В начале эксперимента крыс рзс преде- 50 ляю т на 4 группы однородного сос тава из 15 животных. За трид цать мину т перед каждым ис пытанием каждую гру ппу ж ивотных под вергают опред еленной обработке: - группа 1 получает од ну интрзперито- 55 нальную инъекцию физиологической сыво ротки, - группа 2 получает од ну интраперитональную инъекцию тес тируемого с оедине ния, 16 - группа 3 получает одну интраперитональную инъек цию в 0,5 мг скополамина и - группа 4 одновременно получает Одну интраперитональнуга инъекцию в д озе 0,5 мг с кополамина и од ну интраперитональ ную инъекцию тес тируемого соед инения. Группы 1 и 2 использую т в первом эксперименте, а гру ппы 3 и 4 используют во втором эксперименте. Результаты, полученные в э том тес те с соединениями изобретения, привед ены в таблице 6. В этой таблице указаны подвергающеес я испытанию с оед инение (колонк а 1) и введенная интраперитональным пу тем доза, выраженная в мг/кг (колонка 2). В колонках 3 и 4 приводятся результаты, полученные в испытании, использованном для оценки обу чения- Ц и фры указывают среднее число испытаний, необходимых для того, чтобы контрольное животное (группа 1) или обработанное соед инением животное (гру ппа 2) научилось пребывать в течение 180 секунд на резиновом слое, чтобы избежать получения удара электрическим током. Результаты проанализированы по тес ту Стъюдента. В колонках 5-12 привод ятс я резу льтаты, полученные в эксперименте, использова н н ом д л я о ц е нк и м н ез ич ес к о го удержания. В колонках 5-8 ци фры представляю т среднее время пребывания, отмеченное соответс твенно во вр^мя 0,4, 24 и 28 часов для животных группы 3, обработанных только скополамином, а в колонках 9-12 представлены цифры, соответствующие животным группы 4, одновременно обработан ных с коп ол ам ин ом и ис с лед у ем ым соед инением (при д озе, указанной во второй колонк е). Б лагоприятное влияние соединения в плане противодействия амнезии, вызванное скополамином, доказано увеличением времени пребывания на слое при каждом наблюдении. Наблюдаемые различия с татис тически проанализированы по методу Ман-Уитнея. Из таблицы 6 вид но, что: - соед инения изобретения способс тву ют обучению рефлексу уклонения: сред нее чис ло испытаний, необх одимых д ля дос ти жения заранее опред еленног о критерия (макс имальное время пребывания на с лое порядка 180 секунд), является меньшим для обработанных животных (колонка 4), чем для контрольных животных (колонка 3), - амнезионный э ффект скополамина очень ярко выражен: видно, что время пре бывания животных гру ппы 3 (колонки 5-8) являетс я явно меньш е.чем 180 с екунд, по лученных контрольными животными пос ле сред него чис ла ис пытаний (колонка 3) и в 11064 этих условиях, благоприятное влияние соединений изобретения для противодействия амнезионному эффекту скополамина является очень явным: животные группы 4, одновременно обработанные скоползмином и 5 соединением изобретения, имеют время пребывания при каждом наблюдении значительно большее, чем животные группы 3, обработанные только скополамином (сравнить результаты колонки 5 с результатом 10 колонки 9, колонки б с результатами колонки 10 и т.д.), - фиэостигмин оказывает благоприят ное действие в плане противодействия ам незионному эффекту скополамина, 15 подобное действию соединений изобрете ния, но при дозе, вызывающей побочные эффекты и очень близкой к токсичной дозе, что не относится к соединениям изобрете ния. 20 5. Токсичность. Токсичность соединений изобретения определяют у самцов мышей NMRI посредством теста Ирвина. Нарастающие дозы тестируемого сое- 25 динения вводят иптраперитональным путем группам из трех мышей до достижения смертельной дозы (доза, вызывающая смерть двух животных из трех за 48 часов). В нижеприведенной таблице 7 приво- 30 дится смертельная доза, наблюдаемая для соединений изобретения. Из этой таблицы следует, что соединения изобретения явля ются малотоксичными, в противополож ность физостигмину. 35 6. Дозировка и введение. Фармацевтические композиции, содержащие соединения изобретения, могут вводиться оральным, парентеральным или ректальным путем. Фармацевтические ком- 40 позиции, которые могут использоваться для введения оральным путем, могут быть твердыми или жидкими, например, в форме таблеток (дражированных или недражированных), пилюль, драже, желатиновых капсул, 45 18 растворов, сиропов и т.д. Таким же образом, композиции, которые могут использоваться для введения парентеральным путем, имеют фармацевтические формы, известные для этого вида введения, например, растворы, суспензии, или водные, или маслянистые эмульсии. Для введения ректальным путем композиции, содержащие соединения изобретения, обычно представлены в форме свечей. Фармацевтические формы содержат также композиции, которые позволяют постепенно высвобождать активный продукт. Соединения изобретения смешивают с нетоксичным фармацевтически приемлемым твердым или жидким носителем, и е известных случаях, с диспергатором, дезинтегратором или стабилизатором. В случае необходимости, туда можно добавлять агенты подслащивания, красители. Процентное содержание активного продукта- в фармацевтических композициях может изменяться в очень широких пределах в зависимости от частоты введения. Что касается ежедневной дозировки, она может изменяться в широком диапазоне унитарных доз, например, от 0,1 до 2 г активного продукта, в зависимости от способа введения. Так, например, она может составлять 0,25-0,75 г, предпочтительно, 0,5 г один-три раза в день, когда соединение вводится в форме таблеток. В качестве примера композиции, содержащей соединение формулы I, которая может вводиться оральным путем, ниже приводится состав для таблеток; соединение I 250 мг метилцеллюлоза (Метосель К4М) 200 мг сухая лактоза 154 мг аэросил 5 мг безводная лимонная кислота 60 мг тальк 11 мг стеарат магния 20 мг. 19 20 11064 Т а бл и ца 1 2-В-4-морфолино-6-пропил-1,3,5-триазины Соедине Заместитель Моль ние R Выход, % (0х Точка плавления, °С хх 2 NHOH 1,1(2) 51,6 93-93 7 NH-CH-CH2OH і 2 75.4 90-91 1 9 С2Н5 Ы{СНз)-СН2-СН2ОН 2 62.6 32-33 10 NHCH2CH2OCH3 2 42.7 44-45 20 NHN(CH3)2 2 63,6 105-106 х (1) Число модуль амина на моль исходного продукта, (2) в присутс твии 2 моль триэ тиламина. хх Т а б л иц а 2 2-К-4-морфолино-6-пропил-1,3,5-триазин Заместитель R Метод Выход, % Точка плавления, °С 25а 27 N(CH3)COCH3 Зв.1 34,8 60-61 гидрохлорид Ы(СНз)СОСбН5 Зв.2 46,5 122 Соединение Таблица 3 Потенциализация холинэ ргических э ффектов оксотреморина Соединение Слюнотечение Активные минимальные д озы (в мг/кг) Дрожание 1 2 3 1 26J 26.7 2 7 23.9 23,9 88.6 29.5 9 8.4 8.4 10 >28.t 28.1 20 21а 20.6 8,0 26.5 26,5 21 22 11064 Прод олжение табл 3 1 2 3 22 10,9 36,4 25a 8,4 8,4 27 37,8 37,8 37 30.9 9,3 41 29,4 29,4 Та б ли ца 4 Торможение чрезмерной активнос ти, вызванной скополамином Соединение Активная минимальная д оза (в мг/кг) 5,4 1 2.4 9 • " ' г * ' 8,4 2,8 2,7 10 20 '' 21а 22 .; , 25а 5.3 3,6 2,8 J27 ' 37 41 ~ 1,1 15,5 8,8 Та бл иц а 5 Торможение э ффектов скополамина на полос е 6, 4-9, 6 Гц ЭЭГ Соед инение Доза (мг/кг) Торможение (в % ) 1 5,3 52 2 2,4 83,3 29.5 50 8,8 53.3 2,8 25,0 20 2,7 66,7 21а 2,7 100 22 3,6 66.7 25а 27 0,88 46.7 12 93,8 37 9,9 53.3 41 9,4 16,7 физос тигмин 0ч4 76,8 7 9 * Та блица б МнезичесХое удерж ание Время пребывания (в секунд ах) N3 Доза, Обучение мг/кг Соед инение среднее число испытаний Группа 3 Группа 1 Группа 4 0 4 24 28 0 4 24 28 Группа 2 1 5,35 2,27 1,53 1,27 13,3 24,2 26,3 2,7 44,8 61,3 102,7 2 2,4 1,9 1,8 1,0 3,7 3,3 4,4 1,2 57.9 42,1 104,5 7 29,54 2,67 2,57 1,0 1Л 3,3 4,0 1,3 7,3 22,5 52,1 9 8,72 2,27 2,0 1,4 2,3 3,3 5,7 3,3 67,9 62,7 160,3 О 10 28,14 2,87 2,07 1,8 4,5 2,3 4,5 5,5 15,7 31,1 34,1 О) 20 2,66 1,93 1,53 1,1 2,5 4,6 5,5 2,7 55,3 57,7 87,9 21а 2,65 1,60 1,55 2,4 9,7 9,1 33,9 3,4 60,4 74,6 102,4 22 3,64 2,20 1,0 1,7 11,1 20,3 12,8 2,8 70,9 82,8 137,6 25а 0,89 2,07 2,07 2,1 3,0 7,7 3,3 8,1 34,7 44,5 27 3,78 2,20 1,13 1,9 8,9 31,6 54,1 и 11,3 88,6 111,5 133,5 9,6 2,0 1,3 1,0 2,5 4,5 5,8 2,9 24,0 44,4 49,9 41 9,12 2,53 1,33 1,0 3,7 7,0 7.7 1,3 15,8 27,3 66,3 физостигмин 0,4 2,60 2,30 1,7 1,4 6,9 21,3 1,9 17,8 56,2 53,4 '37 N5 11064 26 Та бли ца 7 Токсичность соединений Соединение Смертельная доза {в мг/кг) 1 802 2 7 9 10 718 20 799 21а 996 1091 838 886 844 844 22 25а 41 1133 928 294 физостигмин 0,82 27 37 Упорядник Замовлення 4046 Техред М.Моргентал Коректор М- Сэмборська Тираж Підписне Дер жа вне па тен тне відо мство Україн и, 254655, ГСП, Київ-53, Львівська пл., 8 Відкрите акціонерне товариство "Патент", м. Ужгород, еул.Гагаріна, 101