Спосіб отримання екстракту хмелю, збагаченого преніловими флавоноїдами з естрогенною дією

Реферат: Спосіб отримання екстракту хмелю, збагаченого преніловими флавоноїдами з естрогенною дією, що полягає в послідовній екстракції суплідь (шишок) хмелю Humulus Lupulus L. Попередньо здійснюють термічну обробку рослинної сировини, потім її екстрагують алканом, вибраним з групи С6-С7 з наступним видаленням екстрагенту з сировини, далі - водноорганічним розчинником, вибраним з групи спиртів С1-С4 в фільтраційному екстракторі, з наступним видаленням екстрагенту з екстракту. UA 103469 U (12) UA 103469 U UA 103469 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до фармацевтичної хімії, а саме до способів отримання екстракту хмелю, збагаченого преніловими флавоноїдами з естрогенною дією. Впродовж багатьох століть хміль у виробництві пива використовується як консервант та ароматизатор. Проте таке застосування хмелю є не єдиним, оскільки відомо, що фармакологічна дія препаратів суплідь хмелю пов'язана з седативною активністю, яка обумовлюється хмельовими - та -кислотами, похідними флороглюцину - основними компонентами гіркої смоли. Найважливішою є потужна естрогенна активність поліфенольної фракції екстракту хмелю, яка забезпечується двома пренілованими халконами: ксантохумолом (X) та дисметилксантохумолом (DMX) і трьома пренілованими флаванонами: ізоксантохумолом (IX), 6-пренілнарінгеніном (6-PN) та 8-пренілнарінгеніном (8-PN) (рис. 1). [14, 30, 35]. Проте найбільш вираженою естрогенною активністю володіє саме 8-PN внаслідок неселективного зв'язування з  та  рецепторами естрогену (ΕΡα, ΕΡβ) [15, 29]. Для інших активних компонентів екстракту також притаманна чітко направлена фармакологічна дія відносно стероїдної гормональної сфери людини. Так, відомо, що X здатний пригнічувати клітинний метаболізм і тому як антипроліферативний агент в складі певного лікувального засобу може розглядатись як компонент з профілактичною антиканцерогенною дією. Інтерес до препаратів з активними речовинами екстрактів суплідь хмелю насамперед пов'язаний з можливостями використання їх як засобів для регулювання вікових гормональних клімактеричних порушень. В жіночому організмі серед чисельних гормонально залежних фізіологічних процесів естрогени спільно з прогестероном та гонадотропінами здійснюють контроль над розвитком та функціонуванням репродуктивної системи та забезпеченням всього комплексу фізіологічних заходів. Разом з тим естрогени приймають участь в цілому комплексі важливих супутніх фізіологічних процесів. Клімактеричний період в житті жінки складається з декількох послідовно змінних гормонально контрольованих фаз, пов'язаних зі зниженням гормональної функції яєчників. «Золотим стандартом» лікування та профілактики порушень, менопаузи, як гормонодефіцитного стану, стала гормональна замісна терапія (ГЗТ). При традиційній ГЗТ застосовуються «чисті» естрогени (кон'юговані, естрадіол-17-β, естрадіолу валеат). Відомі комбінована естроген-гестагенна терапія (циклічний або безперервний режим), а також комбінована естроген-андрогенна терапія. Останнім часом знайшли застосовування селективні модулятори естрогенних рецепторів - (ралоксифен) та тканино-селективні регулятори естрогенної активності (гонадоміметикі з естрогенним, гестагенним та андрогенним ефектами - тиболон). В лікуванні та профілактиці симптомів клімактеричного синдрому, альтернативою ГЗТ можуть бути рослинні лікарські засоби, терапевтично-активними компонентами яких є речовини естрогеноподібної дії - фітоестрогени (ФЕ). ФЕ - органічні сполуки рослинного походження або метаболіти, які здатні моделювати або імітувати дію ендогенних естрогенів внаслідок їх зв'язування з естрогенними рецепторами (ЕР) і естрогенні ефекти при їх введенні в організм проявляються за наступними механізмами [10, 12, 13, 34]: - взаємодія з ЕР для модуляції експресії естроген-залежних генів; - інгібування ферментів, що задіяні в біосинтезі та метаболізмі естрогенів; - модуляція біосинтезу гормонів щитовидної залози; - інгібування протеінкіназ та взаємодія з компонентами клітинного циклу, в тому числі проліферації, диференціації та апоптозу; - інгібування топоізомерази; - антиоксидантні реакції. Експериментами підтверджено, що 8-PN є найбільш потужним серед відомих фітоестрогенів, активність якого проявляється через рецептор-опосередкований механізм, однаково сильно зв'язуючись з обома лізоформами естрогенних рецепторів (ΕΡ, ΕΡβ) [11]. На відміну від інших відомих фітоестрогенів 8-ΡΝ є більш селективним відносно ΕΡ [23]. Маючи схожі профілі зв'язування з ендогенним естрадіолом, 8-ΡΝ здатний повторювати його ефекти, хоча в залежності від систем дослідження та реакційних умов [16, 29]. Проте його активність в декілька разів є слабшою за активність 17-естрадіолу. В кількох дослідженнях in vitro та in vivo, встановлена поряд із потужною естрогенною активністю, здатність 8-PN до антиандрогенної активності, інгібування ангіогенезу та метастазів, запобігання руйнування кісткової тканини. Слід зазначити, що за даними експериментального вивчення ксантохумол (X) виявив суттєву хіміопрофілактичну активність відносно процесів онкогенезу, включаючи окремі стадії 1 UA 103469 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 механізмів інгибування проліферації та метастазування [6, 7, 18]. Встановлено, що X є активним модулятором активності ферментів (хінонредуктази, ферменту CYP450), а також тих, що приймають пряму чи опосередковану участь в метаболізмі та детоксикації канцерогенів (пригнічення утворення та поглинання активних форм кисню, включаючи утворення супероксиданіону та оксиду азоту) [4, 5, 9, 17, 19, 20]. Аналізуючи вищезазначену потужну естрогенну активність 8-PN та схожість його профілів дії з ендогенним естрадіолом, даний поліфенол потенційно здатен викликати розвиток гормонзалежних ракових пухлин. Беручи до уваги попередньо описаний широкий спектр механізмів інгібування канцерогенезу X, проліферативна активність 8-PN може бути врівноважена антипроліферативною активністю X. Підтвердженням даного припущення є результати досліджень відносно впливу даних сполук на проліферацію ракових клітин молочної залози MFC-7. Згідно одержаних даних, підвищення концентрації 8-PN, дійсно, призводило до посилення проліферації. Проте додавання X в ваговому співвідношенні між X та 8-PN не менше 10:1, значно інгібувало проліферацію ракових клітин молочної залози штаму MFC-7, що дозволяло зробити висновок про можливість пригнічення або навіть нейтралізації проліферативної активності, викликаної 8-PN присутністю X [40]. Зазначені властивості ФЕ екстрактів хмелю, характеризують їх як потенційних агентів для «рослинної» альтернативи ГЗТ. [3, 16, 21, 22, 26, 36]. Виходячи із обґрунтованої практичної зацікавленості в пренілованих флавоноїдах хмелю та, зокрема у 8-PN, слід звернути увагу на головне харчове джерело даних компонентів - пиво. В залежності від технологічного процесу пивоваріння та використання сортів хмелю, концентрація даних сполук в продукті може досягати 4 мг/л. Відомо, що домінуючим пренілованим флавоноїдом в сировині є халкон ксантохумол X (до 1% мас./мас.), проте в процесі варіння сусла відбувається термічна ізомеризація, внаслідок якої більша частина X трансформується в ізоксантохумол IX (рис. 2). Як результат, основним пренілфлавоноїдом пива є IX, концентрації якого коливаються від 500 мкг/л (лагер/пілснер) до 4 мг/л (міцний ель). Щодо іншого халкону десметилксантохумол DMX, то внаслідок термічної ізомеризації він трансформується до 8-PN та 6-PN (рис. 2) в варіабельних співвідношеннях між собою. Хоча максимальна концентрація 8PN в пиві може досягати 100 мкг/л, загальна естрогенна активність напою є в 500-1000 разів нижча в порівнянні з небезпечною концентрацією визначеною на щурах in vivo (100 мг/л). Крім того, сучасне масове виробництво пива застосовує екстракти хмелю, а не цільну його сировину, що суттєво знижує або виключає вміст 8-PN в кінцевому продукті [1, 2, 14, 16, 27, 32, 33]. Відомим методом хімічної трансформації пренілових халконів X та DMX до відповідних флаванонів IX, 8-PN та 6-PN також є лужна ізомеризація, яка здійснюється в присутності розбавлених основ і часто знаходить своє практичне застосування [8]. Здатність пренілфлавоноїдів хмелю до термічної ізомеризації (циклізації) є, безперечно, важливим фактором при розробці технології отримання фармакологічно-активної субстанції для виробництва лікарського засобу чи дієтичної добавки. Не менш важливим фактором, що має бути врахований при створенні лікарського засобу чи дієтичної добавки на основі екстракту хмелю, є здатність ФЕ до мікробіологічної трансформації в товстій кишці організму людини. Враховуючи здатність бактеріальних ензимів товстої кишки людини до каталізу багатьох реакцій, зокрема О-диметилюванню, підвищення естрогенної активності продуктів хмелю після введення в організм можна пояснити біологічною трансформацією 8-PN з IX шляхом О-диметилювання останнього. Результати ряду in vitro та in vivo досліджень свідчать, що в залежності від індивідуальних особливостей мікрофлори кишечника людини, конверсія IX може майже в 10 разів підвищувати концентрацію наявного 8PN, що дозволяє сміливо віднести дану сполуку до про-естрогенів і має бути обов'язково враховано [24, 25, 28, 31]. Відомий спосіб отримання екстракту хмелю, збагаченого ксантохумолом, описаний в патенті DE 19939350 [37]. В способі наведено приклади отримання екстракту хмелю, збагаченого ксантохумолом і спосіб в цілому, який включає попередню водну екстракцію та/або надкритичним СО2, наступну екстракцію органічним розчинником (частіше розчинами спирт/вода 30:70 чи 80:20) та лужною водою. В патенті не наведені дані щодо складу всіх пренілових флаванонів не дивлячись на ймовірність лужної ізомеризації X та IX. Відомий спосіб отримання сухого екстракту хмелю з підвищеним вмістом пренілових халконів та флаванонів, який характеризується двоступеневим екстрагуванням стиснутим СО 2, застосовуючи спершу тільки СО2, а потім другу стадію екстрагування проводять з СО 2 та з додаванням органічного спів-розчинника, використовуючи спирти групи С1-С4, описаний в патенті WO 2005/092353 "Екстракти хмелю, їх виробництво та застосування" [38]. Спосіб екстракції здійснюється в проміжках температур 40-80 °С, при тиску в межах 100-300 Бар та при 2 UA 103469 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 часі в проміжках 0,5-5 год. До складу активних інгредієнтів в отримуваному екстракті разом з преніловими халконами та флаванонами входять а- та β-кислоти, які завжди присутні в усіх сортах хмелю. Пропонується отриманий екстракт застосовувати як фармацевтичну субстанцію при виготовленні ліків, проте авторами не визначено конкретних вимог до компонентного складу екстракту та його кількісних характеристик. Відомий спосіб отримання екстракту хмелю, збагаченого преніловими флавоноїдами халконами та флаванонами X, IX, 6-ΡΝ та 8-ΡΝ, описаний в патенті WO 2003/014287 "Екстракти хмелю, метод їх одержання та застосування" [39]. Спосіб включає стадії: 1) екстрагування сировини хмелю за допомогою С 5-С7-алканів чи надкритичного СО2 з метою видалення гідрофобних речовин; 2) екстрагування водою залишку сировини, отриманого на стадії 1 для видалення гідрофільних речовин при температурі в межах 60-95 °С; 3) екстрагування залишку сировини, отриманого на стадії 2 водно-етанольним розчинником. Концентрації IX, 6-PN та 8-PN в отриманих екстрактах, як виявилось, зростали з підвищенням температури під час екстракції водою на стадії 2. Слід зазначити, що запропонований метод одержання екстракту хмелю передбачає ряд додаткових технічних рішень. Так, для забезпечення ефективності екстрагування на кожній з зазначених стадій, автори застосовували диспергування сировини в екстрагенті з наступним постійним перемішуванням екстракційного середовища. В свою чергу, створення даних динамічних умов, зокрема диспергування, вимагає проведення спеціалізованих операцій розділення утворених дисперсних систем (золів) на кожній із стадії, що значно ускладнює загальний технічний аспект запропонованого методу одержання екстракту хмелю. В залежності від умов виділення, вихід пренілових флавоноїдів X, IX, 8-PN та 6-PN з сировини становив в межах 0,609-0,756 %; 0,0260,083 %; 0,011-0,027 %; 0,049-0,095 % відповідно. Вагове співвідношення 8-PN/(8-PN+6-PN) 100 % в кожному зі зразків екстрактів знаходилось в межах 18-25 %, вагове співвідношення між X та 8-PN в межах 25,4 - 67,7. Відомий також спосіб отримання екстрактів хмелю, збагаченого 8-пренілнарінгеніном (8-PN), з естрогенною та антипроліферативною дією, який полягає в екстракції сировини, описаний в патенті WO 2005/058336 [40]. Спосіб включає наступні основні стадії: 1) застосування для сировини хмелю реакції ізомеризації в інертній атмосфері в водному лужному середовищі, в межах концентрацій КОН (мас./об. %) 0,1, 0,5, 1, 1,5 при температурі в межах між кімнатною та 60 °С, та протягом часу в проміжку 0,25-4,0 год.; 2) екстрагування залишку органічними розчинниками, вибраними з групи спиртів, водних сумішей спиртів, кетонів, водних сумішей кетонів або ефірів та їх сумішей або підлуженою водою. У відомому патенті відзначена довільна послідовність наведених стадій, але описано проведення попереднього екстрагування хмелю або хміль-продукту за допомогою рідкого або надкритичного СО2 або неполярним органічним розчинником з метою видалення гідрофобних речовин та використання як вихідної сировини будь-яких різновидів обробленого хмелю (в т.ч. екстрактів). Обов'язковою умовою запропонованого способу одержання екстракту хмелю є витримування вагового співвідношення між X та 8-PN щонайменше в межах від 10 до ЗО, адже саме даний діапазон співвідношення передбачає врівноваження можливої проліферативної активності 8-PN антипроліферативною активністю X. Крім того, автори передбачають змішування екстракту одержаного вищезгаданим методом з екстрактом збагаченим X, так як зростання співвідношення 8-PN/(8-PN+6-PN) 100 % в екстракті більше за 50 %, призводить до суттєвого зменшення співвідношення між X та 8-PN. Вихід пренілових флавоноїдів X, IX, 8-PN та 6-PN з сировини до і після ізомеризації в 5 % розчині КОН у воді становили 0,332 %, 0,014 %, 0,004 %, 0,013 % та 0,018 %, 0,329 %, 0,012 %, 0,004 % відповідно. Співвідношення 8-PN/(8PN+6-PN) x l00 % до та після ізомеризації становило 23 % та 73 %, при цьому вагове співвідношення між X до 8-PN було 84,8 та 1,5. Таким чином отриманий екстракт збагачений 8PN, із ваговим співвідношенням 8-PN/(8-PN+6-PN) 100 % не меншим 50%, З наведених прикладів способів [37, 38, 39, 40] отримання екстрактів хмелю, збагачених преніловими флавоноїдами з естрогенною дією видно, що за технічним вирішенням винаходи перевантаженні складними технологічними методами виконання окремих стадій або ж виходи пренілових флаванонів, залишаються в кількісних величинах не оптимальними та з не найкращим співвідношенням активних речовин, а саме X та 8-PN. 3 UA 103469 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 В основу корисної моделі покладено задачу створити такий спосіб отримання екстракту хмелю, збагаченого преніловими флаванонами з естрогенною дією, в якому зміною умов виконання операцій, забезпечилось би зростання кількісного вмісту екстрактивних речовин з сировини хмелю в поєднанні із оптимальним вмістом пренілових флавоноїдів в екстракті як фармакологічно-активної субстанції для виробництва лікарського засобу чи дієтичної добавки. Поставлена задача досягається тим, що способі отримання екстракту хмелю, збагаченого преніловими флавоноїдами з естрогенною дією, що полягає в послідовній екстракції суплідь (шишок) хмелю Humulus Lupulus L, згідно з корисною моделлю, попередньо здійснюють термічну обробку рослинної сировини, потім її екстрагують алканом, вибраним з групи С 6-С7 з наступним видаленням екстрагенту з сировини, далі - водно-органічним розчинником, вибраним з групи спиртів С1-С4 в фільтраційному екстракторі, з наступним видаленням екстрагенту з екстракту. При цьому термічну обробку суплідь (шишок) хмелю Humulus Lupulus L. проводять водяною парою протягом 0,5- 2,0 годин. Крім того для видалення з рослинної сировини ліпофільних речовин, як екстрагент вибирають алкан з групи С6-С7 - н-гексан чи н-гептан. При цьому екстракцію водно-органічним розчинником, вибраним з групи спиртів С1-С4, проводять розчином етанол/вода з концентрацією етанолу в межах від 50 до 90 % (об). При цьому концентрацію етанолу вибирають 70 % (об). При цьому екстракцію проводять в фільтраційному екстракторі із співвідношенням висоти шару завантаженої сировини і діаметра фільтруючої поверхні (h/d) в межах від 1:2 до 3:1, переважно 1:1. При цьому видалення екстрагенту для отримання порошкоподібної маси здійснюють у вакуумі. Крім того сорт суплідь (шишок) хмелю Humulus Lupulus L. є сорт хмелю Ксанта, що має високий вміст екстрактивних пренілових флавоноїдів. При цьому отримують екстракти з вмістом ксантохумолу щонайменше 1,0 %, ізоксантохумолу щонайменше 0,3 %, 8-пренілнарінгеніну щонайменше 0,05 % та 6пренілнарінгеніну щонайменше 0,15 % в перерахунку на суху речовину. Попередня термічна обробка суплідь (шишок) хмелю Humulus lupulus L, екстракція обробленої сировини алканом, вибраним з групи С6-С7 з наступним видаленням екстрагенту з сировини, екстракція сировини водно-органічним розчинником, вибраним з групи спиртів С 1-С4 в фільтраційному екстракторі з наступним видаленням екстрагенту з екстракту призводить до зростання кількісного вмісту найбільш активного фітоестрогена 8-PN , що збалансовано зростанням вмісту X у ваговому співвідношенні між X та 8-PN в межах 10-30, що дозволяє забезпечити максимальний вихід X, IX, 8-PN, та екстрактивних речовин з сировини хмелю в поєднанні із оптимальним вмістом зазначених пренілових флавоноїдів в екстракті як фармакологічно-активної субстанції для виробництва лікарського засобу чи дієтичної добавки. Оптимізація виконання окремих стадій способу отримання екстракту хмелю, збагаченого преніловими флаванонами з естрогенною дією, досягається технологічними та апаратурними можливостями та перевагами методу фільтраційної екстракції підготовленої належним шляхом рослинної сировини суплідь хмелю, вилученням гідрофобних речовин та виконанням операції термічної Ізомеризації пренілованих халконів. Зазначена методична та технологічна оптимізація процесів екстрагування рослинної сировини суплідь хмелю дозволяє отримувати екстракт хмелю у вигляді порошку, збагачений преніловими флаванонами з естрогенною дією. При цьому зростання кількісного вмісту найбільш активного фітоестрогена 8-PN збалансовано зростанням вмісту X у ваговому співвідношенні між X та 8-PN не менше 20 і характеризується максимальними значеннями виходу X, IX, 6-PN, 8-PN (0,500; 0,091; 0,020; 0,058) та екстрактивних речовин (22,73 %) з вихідної сировини відповідно, в поєднанні із оптимальним вмістом зазначених пренілових флавоноїдів в кінцевому екстракті. Екстракція сировини в фільтраційному екстракторі, який завдяки своїм оптимальним конструктивним можливостям замкнутої ємності дозволяє виконувати послідовно всі технологічні операції не перевантажуючи рослинну сировину та контролюючи видалення з неї всіх продуктів елюції, де виконання всіх послідовних операцій, починаючи з вилучення алканами гідрофобних речовин з підготовленої рослинної сировини суплідь хмелю, потім термічної обробки шроту та екстрагування його органічним та/чи водно-органічними елюентами здійснювалось в фільтраційних екстракторах з їх різними конструктивними параметрами. Зокрема подібні фільтраційні екстрактори є циліндричними ємностями, в яких в нижній частині вмонтована перфорована поверхня покрита відповідним фільтрувальним матеріалом. За своєю загальною будовою такі екстрактори містять відповідні отвори для 4 UA 103469 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 завантаження/вивантаження сировини, подачі/прийому екстрагента/елюента та отвору для відводу повітря. Технологічний процес включає операції завантаження рослинної сировини, подачу екстрагента з верхньої частини екстрактора на поверхню сировини та відсмоктування його за допомогою вакууму в нижню частину в приймальний резервуар. Протягом всього часу екстрагування свіжі порції екстрагенту безперервно подаються зверху і тим самим дозволяють максимально і направлено вилучати з сировини екстрактивні речовини внаслідок підтримки їх різниці концентрацій, динамічного порушення процесів десорбції/сорбції. В представленому способі екстрагування застосовувались екстрактори, в яких робочі об'єми ємностей конструктивно забезпечували співвідношення висоти шару завантаженої сировини до діаметру фільтруючої поверхні (h/d) 1:1 та 1:2. Зазначені конструктивні відмінності фільтраційного екстрактора позначились на ефективності термічної ізомеризації халконів, про що свідчить незначне підвищення вісту IX, 8-PN, 6-PN в екстракті одержаному при (h/d) 1:2. Проте, більш високий вихід екстрактивних речовин з сировини при застосуванні екстрактора з (h/d) 1:1, призводив до підвищення виходу X, IX, 8-PN в порівнянні із аналогічними показниками екстракту одержаного при застосуванні екстрактора з (h/d) 1:2. Вихідною сировиною були супліддя хмелю сортів «Руслан», «Ксанта» та «Чаклун» які за сумарним виходом екстрактивних речовин, за вмістом пренілових халконів та флаванонів дещо відрізнялись. Так, екстракти одержані з сорту "Ксанта" характеризувались найбільшим вмістом X, IX, 6-PN та 8-PN та найбільшим їх виходом з сировини, тому саме цьому сорту була надана перевага. Термічна ізомеризація в запропонованому способі отримання екстракту хмелю, збагаченого преніловими флаванонами з естрогенною дією здійснюється водяним паром на початковій стадії і тим самим це дозволяє запобігти швидкому окисленню пренілових флаванонів. Обробку сировини здійснювали водяною парою (100 °С ) впродовж 0,5-2,0 год, позаяк за цей час відбувалась ефективна термічна ізомеризація пренілових флавоноїдів, та наступним видаленням частково поглинутої води зі шроту. Основними перевагами даного технічного вирішення перед іншими описаними підходами, такими як екстракція водою при підвищених температурах або ізомеризація в лужному середовищі в інертній атмосфері, є виключення можливості екстракції поліфенольної фракції як баластного продукту та максимальної циклізації X в поєднанні з важливою технічною доступністю в промисловому виробництві. На другій стадії способу отримання екстракту хмелю, збагаченого преніловими флаванонами з естрогенною дією, попередньо оброблену водяною парою сировину хмелю екстрагували н-гексаном чи н-гептаном до загального співвідношення «сировина:екстракт» 1:12, з наступним видаленням залишків екстрагенту зі шроту. Застосування обох екстрагентів дозволяє максимально видалити ліпофільні (гідрофобні) речовини і тим самим підготовити сировину до подальших технологічних операцій. Виключення даної стадії з загального процесу значно ускладнює одержання екстракту збагаченого преніловими флавоноїдами через високий початковий вміст екстрактивних речовин ліпофільної природи в сировині та їх відносно-добру екстракцію в розчини середньої полярності. На третій стадії способу отримання екстракту хмелю, збагаченого преніловими флаванонами з естрогенною дією, напівпродукт після другої стадії екстрагували етиловим спиртом та/або його водними розчинами в межах концентрацій 50-90% (об.) при різних співвідношеннях «сировина:екстракт». Отримані фракції водно-спиртовий витягу почергово упарювали та висушували у вакуумі. Критеріями оцінки ефективності процесу екстрагування попередньо-підготовленої сировини хмелю були вміст в кінцевому екстракті X, IX, 8-PN, 6-PN, виходи зазначених сполук та екстрактивних речовин з екстрагованої сировини, співвідношення 8-PN/(8-PN+6-PN)*100%, вагове співвідношення між X та 8-PN. Крім того, важливим фактором оцінювання був технологічний стан кінцевого продукту в аспекті його подальшого використання як активного інгредієнту для виготовлення лікарських засобів або харчових продуктів з мінімальним доповненням фармацевтично-прийнятними допоміжними речовинами. Технічне вирішення запропонованого винаходу ілюструється наведеними Прикладами. Приклад 1 Отримання екстракту хмелю шляхом двоступеневої екстракції н-гексаном (1:12) та 70 % (об.) етанолом (1:10) з попередньою обробкою вихідної сировини водяною парою. 90 г шишок хмелю (сорт «Руслан») завантажували в лабораторний фільтраційний екстрактор з сорочкою обігріву із співвідношенням висоти шару завантаженої сировини до діаметру фільтруючої поверхні (h/d) 1:1. Завантажену сировину обробляли водяною парою протягом 1 години. Після завершення термічної обробки, залишки поглиненої сировиною вологи максимально видаляли за допомогою вакууму при температурі середовища 60-65 °С. Оброблену та доведену до кімнатної температури сировину екстрагували н-гексаном до 5 UA 103469 U 5 загального співвідношення «сировина:екстракт» 1:12. Після завершення екстрагування, залишки екстрагенту максимально видаляли за допомогою вакууму при температурі середовища 60-65°С. Напівпродукт хмелю (шрот) охолоджували до кімнатної температури та екстрагували 70 % (об.) розчином етанолу до загального співвідношення «сировина:екстракт» 1:10. Одержаний водно-спиртовий витяг випарювали до сухого стану в роторному випарнику Btichi R134 у вакуумі за температури водяної бані 60-65 °С. Таблиця 1 Кількісні характеристики екстракту Вміст, % (ВЕРХ) 1,531 0,298 0,030 0,098 Ксантохумол (X) Ізоксантохумол (IX) 8-пренілнарінгенін (8-PN) 6-пренілнарінгенін (6-PN) Вихід екстрактивних речовин, % Співвідношення 8-PN/(8-PN+6-PN)* 100 % Співвідношення X/8-PN 10 Вихід, % 0,335 0,065 0,007 0,021 21,91 23,44 51,0 Наведені кількісні характеристики та співвідношення X, IX, 8-PN, 6-PN в одержаному екстракті свідчать про ефективність запропонованого способу одержання екстракту як активного інгредієнта лікарських засобів або дієтичних добавок. Приклад 2 Отримання екстракту хмелю відрізняється від прикладу 1 тим, що попередню обробку вихідної сировини водяною парою не проводили. 15 Таблиця 2 Кількісні характеристики екстракту 20 Вміст, % (ВЕРХ) Вихід, % Ксантохумол (X) 2,367 0,538 Ізоксантохумол (IX) 0,121 0,026 8-пренілнарінгенін (8-PN) 0,020 0,005 6-пренілнарінгенін (6-PN) 0,069 0,016 Вихід екстрактивних речовин, % 22,74 Співвідношення 8-PN/(8-PN+6-PN)* 100% 22,47 Співвідношення X/8-PN 118,4 Аналіз кількісних характеристик екстракту одержаного за прикладом 2 демонструє суттєве зниження кількісного вмісту та виходу IX, 8-PN, 6-PN в порівнянні із аналогічними показниками за прикладом 1, що свідчить про їх залежність від застосування попередньої термічної обробки сировини як важливого фактора ізомеризації X та DMX. Приклад 3 Отримання екстракту хмелю відрізняється від Прикладу 1 тим, що попередню обробку вихідної сировини водяною парою проводили 0,5 години. Таблиця 3 Кількісні характеристики екстракту Вміст, % (ВЕРХ) 1,993 0,149 0,023 0,085 Ксантохумол (X) Ізоксантохумол (IX) 8-пренілнарінгенін (8-PN) 6-пренілнарінгенін (6-PN) Вихід екстрактивних речовин, % Співвідношення 8-PN/(8-PN+6-PN)* 100 % Співвідношення X/8-PN Вихід, % 0,472 0,035 0,005 0,020 23,73 21,30 86,7 6 UA 103469 U 5 Наведені дані демонструють ефективний вплив застосованої протягом 0,5 годин попередньої термічної обробки сировини на зростання вмісту та виходу IX, 8-PN, 6-PN в порівнянні із аналогічними показниками за прикладом 2 та є нижчими за відповідні показники за прикладом 1, що свідчить про недостатній ступіть ізомеризації X та DMX. Приклад 4 Отримання екстракту хмелю відрізняється від Прикладу 1 тим, що попередню обробку вихідної сировини водяною парою проводили 2 години. Таблиця 4 Кількісні характеристики екстракту Вміст, % (ВЕРХ) 1,506 0,306 0,031 0,101 Ксантохумол (X) Ізоксантохумол (IX) 8-пренілнарінгенін (8-PN) 6-пренілнарінгенін(6-PN) Вихід екстрактивних речовин, % Співвідношення 8-PN/(8-PN+6-PN)* 100% Співвідношення X/8-PN Вихід, % 0,323 0,066 0,007 0,022 21,48 23,48 48,6 10 15 Наведені дані демонструють ефективний вплив застосованої протягом 2 годин попередньої термічної обробки сировини на зростання вмісту IX, 8-PN, 6-PN в порівнянні із аналогічними показниками за прикладами 1, 2, 3. Практично сталий приріст виходу IX, 8-PN, 6-PN в порівнянні із даними показниками за прикладом 1 свідчить про не значний вплив тривалості термічної обробки в проміжку часу 1,0-2,0 год. на ефективність ізомеризації X та DMX. Приклад 5 Отримання екстракту хмелю відрізняється від Прикладу 1 тим, що на першій ступені екстрагування використовували н-гептан. Таблиця 5 Кількісні характеристики екстракту Вміст, % (ВЕРХ) 1,460 0,272 0,027 0,091 Ксантохумол (X) Ізоксантохумол (IX) 8-пренілнарінгенін (8-PN) 6-пренілнарінгенін (6-PN) Вихід екстрактивних речовин, % Співвідношення 8-PN/(8-PN+6-PN)* 100 % Співвідношення X/8-PN Вихід, % 0,325 0,061 0,006 0,020 22,25 22,88 54,1 20 25 Як видно із таблиці, застосування н-гептану на стадії знежирення сировини в незначній мірі впливає на показники кількісного вмісту пренілових флавоноїдів в порівнянні із даними показниками за прикладом 1 та демонструє близькість значень їх виходів з сировини. Це вказує на рівноцінність впливу н-гептану та н-кексану на характер екстрагування X, IX, 8-PN, 6-PN. Приклад 6 Отримання екстракту хмелю відрізняється від Прикладу 1 тим, що як вихідну сировину використовували шишки хмелю сорту «Ксанта». 7 UA 103469 U Таблиця 6 Кількісні характеристики екстракту Вміст, % (ВЕРХ) 2,198 0,399 0,090 0,257 Ксантохумол (X) Ізоксантохумол (IX) 8-пренілнарінгенін (8-PN) 6-пренілнарінгенін (6-PN) Вихід екстрактивних речовин, % Співвідношення 8-PN/(8-PN+6-PN)* 100 % Співвідношення X/8-PN 5 Вихід, % 0,500 0,091 0,020 0,058 22,73 25,94 24,4 Аналіз наведених в таблиці даних свідчить про суттєве збільшення показників вмісту та виходу X, IX, 8-PN, 6-PN в одержаному екстракті в порівнянні із аналогічними показниками за попередніми прикладами 1-5, завдяки використанню сорту хмелю «Ксанта», як більш якісної сировини. Приклад 7 Отримання екстракту хмелю відрізняється від Прикладу 1 тим, що як вихідну сировину використовували шишки хмелю сорту «Чаклун». 10 Таблиця 7 Кількісні характеристики екстракту Вміст, % (ВЕРХ) 0,372 0,078 0,015 0,068 Ксантохумол (X) Ізоксантохумол (IX) 8-пренілнарінгенін (8-PN) 6-пренілнарінгенін (6-PN) Вихід екстрактивних речовин, % Співвідношення 8-PN/(8-PN+6-PN)* 100% Співвідношення X/8-PN 15 Вихід, % 0,074 0,016 0,003 0,014 19,93 18,07 25,8 Аналіз наведених в таблиці даних свідчить про суттєве зменшення показників вмісту та виходу X, IX, 8-PN, 6-PN в одержаному екстракті в порівнянні із аналогічними показниками за попередніми прикладами 1-6, що свідчить про недостатню ефективність сорту хмелю «Чаклун» як сировини. Приклад 8 Отримання екстракту хмелю відрізняється від Прикладу 6 тим, що другій ступені екстрагування використовували 50 % (об.) розчин етанолу. Таблиця 8 Кількісні характеристики екстракту Вміст, % (ВЕРХ) 1,986 0,452 0,096 0,252 Ксантохумол (X) Ізоксантохумол (IX) 8-пренілнарінгенін (8-PN) 6-пренілнарінгенін (6-PN) Вихід екстрактивних речовин, % Співвідношення 8-PN/(8-PN+6-PN)* 100% Співвідношення X/8-PN Вихід, % 0,402 0,092 0,019 0,051 20,27 27,59 20,7 20 Аналіз наведених в таблиці даних демонструє підвищення показників вмісту IX, 8-PN в одержаному екстракті, проте зниження показників виходу X, 8-PN, 6-PN з сировини в порівнянні 8 UA 103469 U 5 із аналогічними показниками за прикладом 6, що свідчить про недостатню ефективність 50 % (об.) розчину етанолу на другій ступені екстрагування. Приклад 9 Отримання екстракту хмелю відрізняється від Прикладу 6 тим, що другій ступені екстрагування використовували 90 % (об.)розчин етанолу. Таблиця 9 Кількісні характеристики екстракту Вміст, % (ВЕРХ) 2,705 0,539 0,114 0,342 Ксантохумол (X) Ізоксантохумол (IX) 8-пренілнарінгеніну (8-PN) 6-пренілнарінгеніну (6-PN) Вихід екстрактивних речовин, % Співвідношення 8-PN/(8-PN+6-PN)* 100% Співвідношення X/8-PN 10 15 Вихід, % 0,382 0,076 0,016 0,048 14,12 25,00 23,7 Аналіз наведених в таблиці даних демонструє значне підвищення показників вмісту X, IX, 8PN, 6-PN в одержаному екстракті, проте зниження показників виходу зазначених компонентів з сировини в порівнянні із аналогічними показниками за прикладами 6 та 8, що свідчить про недостатню ефективність застосування 90 (об.) розчину етанолу на другій ступені екстрагування. Приклад 10 Отримання екстракту хмелю відрізняється від Прикладу 6 тим, що технологічні операції з термічної обробки та екстрагування проводили в фільтраційному екстракторі із співвідношенням висоти шару завантаженої сировини до діаметра фільтруючої поверхні (h/d) 1:2. Таблиця 10 Кількісні характеристики екстракту Вміст, % (ВЕРХ) 2,052 0,403 0,091 0,292 Ксантохумол (X) Ізоксантохумол (IX) 8-пренілнарінгеніну (8-PN) 6-пренілнарінгеніну (6-PN) Вихід екстрактивних речовин, % Співвідношення 8-PN/(8-PN+6-PN)* 100 % Співвідношення X/8-PN 20 25 30 35 Вихід, % 0,429 0,084 0,019 0,061 20,89 23,76 22,5 Як видно із таблиці, застосування фільтраційного екстрактора із співвідношенням висоти шару завантаженої сировини до діаметру фільтруючої поверхні (h/d) 1:2 впливає на зменшення вмісту в екстракті X та підвищення вмісту IX, 8-PN, 6-PN в порівнянні із аналогічними показниками за прикладом 6, що свідчить на позитивний вплив зменшення висоти шару сировини на ефективність ізомеризації халконів. Проте нижчі показники виходу X, IX, 8-PN в порівнянні із даними показниками за прикладом 6, говорять про ефективність фільтраційного екстрактора із співвідношення (h/d) 1:1. Аналізуючи наведені приклади можна говорити про те, що важливими факторами запропонованого способу держання екстракту хмелю, що впливають на ефективність процесу та кількісні характеристики кінцевого продукту є вибраний сорт хмелю (переважно сорт «Ксанта»), тривалість попередньої обробки сировини (переважно 1 година), концентрація розчину етанолу на другій ступені екстрагування (переважно 70% (об.)) та співвідношенням висоти Шару завантаженої сировини до діаметру фільтруючої поверхні в фільтраційному екстракторі (переважно 1:1). Отримані за заявленим способом екстракти хмелю знайдуть застосування для виготовлення лікарських засобів або харчових продуктів для профілактики та лікування патологічних станів 9 UA 103469 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 викликаних дефіцитом естрогенів або порушеннями регуляції метаболізму статевих гормонів, зокрема метаболізму естрогенів. Список літератури: 1. Coldham, N. G.; Sauer, Μ. J. Identification, quantitation and biological activity of phytoestrogens in a dietary supplement for breast enhancement. Food Chem. Toxicol. 2001,59, 12111224. 2. De Keukeleire, J.; Ooms, G.; Heyerick, Α.; Roldan-Ruiz, I.; Van Bockstaele, E.; De Keukeleire, D. Formation and accumulation of alpha-acids, beta-acids, desmethylxanthohumol, and xanthohumol during flowering of hops (Humulus lupulus L.). J. Agric. Food Chem. 2003, 51, 4436-4441. 3. Diel, P., Thomae, R. В., Caldarelli, Α., Zierau, O., Kolba, S., Schmidt, S., Schwab, P., Metz, P., Vollmer, G. Regulation of gene expression by 8 prenylnaringenin in uterus and liver of Wistar rats. Planta Med. 2004, 70, 39-44. 4. Dietz B, Kung YH, Liu G, Eggler AL, Yao P, Chadwick LR, Pauli GF, Farnsworth NR, De Mesear RB, van Breemen RB, Bolton JL. Xanthohumol isolated from Humulus lupulus inhibits menadion-induced DNA damage through induction of quinone-reductase. Chem Res Tox 2005; 18: 1296-1305. 5. Gerhauser C, Alt A, Eldeen AG, Neumann I, Frank N, Chmiel H, Bartsch H, Becker H. Antioxidant and radical-scavenging potential of phenolic constituents of beer. Proc Am Assoc Cancer Res, 2001 b; 42: 18. 6. Gerhauser C, Alt A, Heiss E, et al. Cancer chemopreventive activity of xanthohumol, a natural product derived from hop. Мої Cancer Ther 2002; 1: 959-969. 7. Gerhauser C, Alt A, Klimo K, Heiss E, Gamal-Eldeen A, Neumann I, Knauft J, Scherf H, Frank N, Bartsch H, Becker H. Xanthohumol from hop (Humulus lupulus) as a novel potential cancer chemopreventive agent. Proc Am Assoc Cancer Res 2001a; 42: 19. 8. Hansel R, Schulz J. Desmethylxanthohumol: Isolierung aus Hopfen und Cyclisierung zu Flavanonen. Archiv der Pharmazie, Vol. 321, Iss. 1, 37^40, 1988. 9. Henderson MC, Miranda CL, Stevens JF, Deinzer ML, Buhler DR. In vitro inhibition of human P450 enzymes by prenylated flavonoids from hops, Humulus lupulus. Xenobiotica2000; 30: 235-251. 10. Knight DC, Eden. JA. A review of the clinical effects of phytoestrogens. Obstet. Genecol. 1996. 87: 897-904. 11. Kuiper GG, Carlsson B, Grandien K, Enmark E, Haggblad J, Nilsson S, Gustafsson JA. Comparison of the ligand binding specificity and transcript tissue distribution of estrogen receptors alpha and beta. Endocrinol. 1997, 138:863-870. 12. Lieberman S. Are the differences between estradiol and other estrogens, naturally occurring or synthetic, merely semantical? // J. Clin. Endocrinol. Metab. -1996. V. 81.-P.850. 13. Markiewicz L., Garey J., Adlerczeutz M., Gurpide E. In vitro baiassays of non-steroidal phytoestrogens. J. Steroid Biochem. Molec. Biol. 1993. 45: 399 - 405. 14. Milligan SR, Kalita JC, Heyerick A, Rong H, De Cooman L, De Keukeleire D. Identification of a potent phytoestrogen in hops {Humulus lupulus L.) and beer. J Clin Endocrinol Metab. 1999, 84:22492252. 15. Milligan SR, Kalita JC, Pocock V, Van de Kauter V, Stevens JF, Deinzer ML, Rong H, De Keukeleire D. The endocrine activities of 8-prenylnaringenin and related hop {Humulus lupulus L) flavonoids. J Clin Endocrinol Metab. 2000, 85:4912-4915. 16. Milligan, S.; Kalita, J.; Pocock, V.; Heyerick, Α.; De Cooman, L.; Rong, H.; De Keukeleire, D. Oestrogenic activity of the hop phyto-oestrogen, 8-prenylnaringenin. Reproduction 2002, 123, 235242. 17. Miranda CL, Aponso GLM, Stevens JF, Deinzer ML, Buhler DR. Prenylated chalcones and flavanones as inducers of quinone reductase in mouse Hepa lxlC7 cells. Cancer Lett 2000b; 149: 2129. 18. Miranda CL, Stevens JF, Helmrich A, Henderson MC, Rodrigeuz RJ, Yang YH et al. Antiproliferative and cytotoxic effects of prenylated flavonoids from hops (Humulus lupulus) in human cancer cell lines. Food Chem Toxicol 1999; 37: 271-285. 19. Miranda CL, Stevens JF, Ivanov V, McCall M, Frei B, Deinzer ML, Buhler DR. Antioxidant and prooxidant actions of prenylated and nonprenylated chalcones and flavanones in vitro. J Agric Food Chem 2000c; 48: 3876-3884. 20. Miranda CL, Yang YHA, Henderson MC, Rodriguez RJ, Yang Y-H, Deinzer ML, Barnes DW, Buhler DR. Prenylflavonoids from hops inhibit the metabolic activation of the carcinogenic heterocyclic amine 2-amino-3-methylimidazo (4,5-F) quinoline, mediated by cDNA-expressed human CYP1A2. Drug Metab Disp 2000a; 28: 1297-1302. 10 UA 103469 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 21. Miyamoto, M.; Matsushita, Y.; Kiyokawa, Α.; Fukuda, C; Iijima, Y.; Sugano, M.; Akiyama, T. Prenylflavonoids: A new class of nonsteroidal phytoestrogen (part 2). Estrogenic effects of 8isopentenylnaringenin on bone metabolism. Planta Med. 1998,64,516-519. 22. Pepper, M. S.; Hazel, S. J.; Humpel, M.; Schleuning, W. D. 8-prenylnaringenin, a novel phytoestrogen, inhibits angiogenesis in vitro and in vivo. J. Cell. Physiol. 2004,799,98-107. 23. Pike AC, Brzozowski AM, Hubbard RE, Bonn T, Thorsell AG, Engstrom O, Ljunggren J, Gustafsson JA, Carlquist M. Structure of the ligand-binding domain of oestrogen receptor beta in the presence of a partial agonist and a full antagonist. EMBOJ. 1999, 18:4608-4618. 24. Possemiers S, Bolca S, Grootaert C, Heyerick A, Decroos K, Dhooge W, De Keukeleire D, Rabot S, Verstraete W, Van de Wiele T. The Prenylflavonoid Isoxanthohumol from Hops (Humulus lupulus L.) Is Activated into the Potent Phytoestrogen 8-Prenylnaringenin In Vitro and in the Human Intestine. J. Nutr. 2006; 136: 1862-1867. 25. Possemiers S, Heyerick A, Robbens V, De Keukeleire D, Verstraete W. Activation of proestrogens from hops (Humulus lupulus L.) by intestinal microbiota; conversion of isoxanthohumol into 8-prenylnaringenin. J Agric Food Chem. 2005; 53: 6281-8. 26. Rong, H. J.; Boterberg, Т.; Maubach, J.; Stove, C; Depypere, H.; Van Slambrouck, S.; Serreyn, R.; De Keukeleire, D.; Mareel, M.; Bracke, M. 8-Prenylnaringenin, the phytoestrogen in hops and beer, upregulates the function of the E-cadherin/catenin complex in human mammary carcinoma cells. Eur. J. Cell Biol. 2001, 80, 580-585. 27. Rong, H.; Zhao, Y.; Lazou, K.; De Keukeleire, D.; Milligan, S. R.; Sandra, P. Quantitation of 8prenylnaringenin, a novel phytoestrogen in hops (Humulus lupuhis L.), hop products, and beers, by benchtop HPLC-MS using electrospray ionization. Chromatographia 2000, 51, 545-552. 28. Rowland I, Wiseman H, Sanders T, Adlercreutz H, Bowey E. Metabolism of oestrogens and phytoestrogens: role of the gut microflora. Biochem Soc Trans. 1999;27:304-8. 29. Schaefer O, Hiimpel M, Fritzemeier KH, Bohlmann R, Schleuning WD. 8-Prenylnaringenin is a potent ER alpha selective phytoestrogen present in hops and beer. J Steroid Biochem and Мої Biol 2003; 84: 359-360. 30. Schiller H, Forsten A, Vonhoff C, Hegger M, Biller A, Wintershoff H. Sedating effects of Humulus lupulus L. extracts. Phytomedicine 2006; 13: 535-541. 31. Simons AL, Renouf M, Hendrich S, Murphy PA. Human gut microbial degradation of flavonoids: structure-function relationships. J Agric Food Chem. 2005;53: 4258-63. 32. Stevens, J. F.; Page, J. E. Xanthohumol and related prenylflavonoids from hops and beer: To your good health! Phytochemistry 2004, 65, 1317-1330. 33. Stevens, J. F.; Taylor, A. W.; Deinzer, M. L. Quantitative analysis of xanthohumol and related prenylflavonoids in hops and beer by liquid chromatography tandem mass spectrometry. J. Chromatogr. A 1999, 832, 97-107. 34. Turner KJ., Sharpe RM. Environmental oestrogens - present understanding. Rev. Reprod. 2. 1997: 69-73. 35. Zanoli P, Rivasi M, Zavatti M, Brusiani F, Bardhi M. New insight in the neuropharmacological activity of Humulus lupulus L. J Ethnopharmacol 2005; 102: 102-106. 36. Zierau, O.; Morrissey, C; Watson, R. W. G.; Schwab, P.; Kolba, S.; Metz, P.; Vollmer, G. Antiandrogenic activity of the phytoestrogens naringenin, 6-(l,l-dimethylallyl)naringenin and 8prenylnaringenin. Planta Med. 2003, 69, 856-858. 37. DE 19939350 B4. Hopfenextrakt und Verfahren zu dessen Herstellung / Kriesl E.: Erfinder; Plantextrakt GmbH & Co.: Patentinhaber; Veroffentlichungstag der Patenterteilung 07.04.2005. 38. WO 2005/092353 Al. Hop extracts, production and use thereof/ Erdelmeier C, Schmidt P., Walker R.: inventor(s); Dr. Willmar Schwabe GmbH & Co.: applicant(s); international publication date 06.10.2005. 39. WO 2003/014287. Hops extracts, method for the production and use / Erdelmeier C, Koch E.: inventor(s); Dr. Willmar Schwabe GmbH & Co.: applicant(s); international publication date 20.02.2003. 40. WO 2005/058336 Al. Production of hops extracts having oestrogenic and antiproliferative bioactivity / Maes F., Keukeleire D., Heyerick Α.; inventor(s); Biodynamics: applicant(s); international publication date 30.06.2005. 55 ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 60 1. Спосіб отримання екстракту хмелю, збагаченого преніловими флавоноїдами з естрогенною дією, що полягає в послідовній екстракції суплідь (шишок) хмелю Humulus Lupulus L., який відрізняється тим, що попередньо здійснюють термічну обробку рослинної сировини, потім її екстрагують алканом, вибраним з групи С6-С7 з наступним видаленням екстрагенту з сировини, 11 UA 103469 U 5 10 15 20 далі - водно-органічним розчинником, вибраним з групи спиртів С 1-С4, в фільтраційному екстракторі, з наступним видаленням екстрагенту з екстракту. 2. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що термічну обробку суплідь (шишок) хмелю Humulus Lupulus L. проводять водяною парою протягом 0,5-2,0 годин. 3. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що, для видалення з рослинної сировини ліпофільних речовин, як екстрагент вибирають алкан з групи С6-С7 - н-гексан чи н-гептан. 4. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що екстракцію водно-органічним розчинником, вибраним з групи спиртів С1-С4, проводять розчином етанол/вода з концентрацією етанолу в межах від 50 до 90 % (об). 5. Спосіб за п. 4, який відрізняється тим, що концентрацію етанолу вибирають 70 % (об). 6. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що екстракцію проводять в фільтраційному екстракторі із співвідношенням висоти шару завантаженої сировини і діаметра фільтруючої поверхні (h/d) в межах від 1:2 до 3:1, переважно 1:1. 7. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що видалення екстрагенту для отримання порошкоподібної маси здійснюють у вакуумі. 8. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що сортом суплідь (шишок) хмелю Humulus Lupulus L. є сорт хмелю Ксанта, що має високий вміст екстрактивних пренілових флавоноїдів. 9. Спосіб за п. 1-8, який відрізняється тим, що отримують екстракти з вмістом ксантохумолу щонайменше 1,0 %, ізоксантохумолу щонайменше 0,3 %, 8-пренілнарінгеніну щонайменше 0,05 % та 6-пренілнарінгеніну щонайменше 0,15 % в перерахунку на суху речовину. 12 UA 103469 U Комп’ютерна верстка Д. Шеверун Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 13