Сіль приєднання з кислотами, гідрат і поліморфна форма етиламіду 5-(2,4-дигідроксі-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти та композиція, що містить ці форми (варіанти)

Реферат: У заявці описані нові сольові форми етиламіду 5-(2,4-дигідроксі-5-ізопропілфеніл)-4-(4морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти, зокрема його мезилат, гідрохлорид, тартрат, фосфат і геміфумарат; кристалічні форми таких солей; поліморфні форми етиламіду UA 101950 C2 (12) UA 101950 C2 5-(2,4-дигідроксі-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти; гідрати і поліморфні форми нових сольових форм, зазначених вище; застосування нових сольових форм, зазначених вище, для приготування лікарського засобу, призначеного для лікування порушення, опосередковуваного за допомогою Hsp90; спосіб лікування порушення, опосередковуваного за допомогою Hsp90 із застосуванням нових сольових форм; препарати, що включають такі сольові форми, зокрема водні розчини, придатні для внутрішньовенного введення; і контейнери, виготовлені з темного скла, заповнені такими препаратами. UA 101950 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Даний винахід відноситься до нових сольових форм і поліморфних форм етиламіду 5-(2,4дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти, до гідратів і поліморфних форм таких нових сольових форм і до нових препаратів, що включають такі сольові форми. Сімейство шаперонів Hsp90 включає чотирьох відомих представників: Hsp90 і Hsp90, обидва в цитозолі, grp94 в ендоплазматичному ретикулумі trap-1 у мітохондріях. Hsp90 є розповсюдженим клітинним шапероном, необхідним для залежного від АТФ (аденозинтрифосфат) вторинного складання денатурованих або "розгорнутих" білків і для конформаційного дозрівання множини ключових білків, що беруть участь у ростовій відповідній реакції клітин на позаклітинні фактори. Ці білки, названі білками-клієнтами, включають стероїдні рецептори, а також різні протеїнкінази. Hsp90 важливий для життєздатності еукаріотних клітин і понадекспресується в багатьох пухлинах. Ракові клітини, мабуть, чутливі до тимчасового інгібування активності Hsp90 АТФази і це показує, що інгібітори Hsp90 можуть бути перспективними протираковими засобами. Кожний представник сімейства Hsp90 містить консервативний єднальний АТФ сайт у своєму N-кінцевому домені, який виявляється в декількох інших, що зв'язуються з АТФ білків. Слабка АТФазна активність Hsp90 стимулюється при його взаємодії з різними допоміжними шаперонними білками. Різні природні сполуки, такі як гелданаміцин або радіцикол, зв'язуються з єднальним АТФ сайтом Hsp90, інгібуючи його АТФазну активність. У клітинних системах in vivo ці лікарські засоби при зв'язуванні з Hsp90 запобігають складанню білків-клієнтів, які потім руйнуються в протеосомі. 17-Аліламіно-17деметоксигелданаміцин (17-AAG), похідне гелданаміцину, досліджується у фазі I клінічних досліджень. Попередні клінічні дані для 17-AAG привели до попереднього результату про те, що для людей можна забезпечити концентрації лікарського засобу, що забезпечують активність у доклінічних системах, при стерпній токсичності, привели до попереднього результату про модуляцію мішені щонайменше в деяких модельних і пухлинних системах. Обмежуючу дозу токсичністю 17-AAG є токсичність для печінки. Погана розчинність 17-AAG робить скрутним приготування/введення його препарату і його синтез є складним (звичайно його одержують шляхом ферментації). Тому необхідні альтернативні сполуки, що мають кращі фізико-хімічні характеристики і, можливо, ще вищу специфічність (17-AAG інгібує всі ці чотири парологи Hsp90). В WO 2004/072051 розкриті такі альтернативні сполуки, точніше, група похідних ізоксазолу, які здатні інгібувати білки теплового шоку. Етиламід 5-(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3карбонової кислоти є інгібітором Hsp90 і описаний WO 2004/072051 (приклад 78). Сполуку можна одержати, наприклад, як розкрито в цій публікації. Етиламід 5-(2,4-дигідрокси-5ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти є погано розчинною у воді сполукою, що має розчинність у воді, рівну менше 0,1 мг/мл. Розчинність вільної основи в 0,1 н. HCl дорівнює приблизно 1-2,5 мг/мл. Крім того, вільна основа трохи гіроскопічна і при рівній 80 % відносній вологості (ВВ) при 25 °C поглинає максимально 1,8 % води. Відповідно до винаходу, зненацька отримані нові сольові форми етиламіду 5-(2,4дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти, включаючи гідрохлорид, тартрат, фосфат, геміфумарат і мезилат. Виявлено, що ці солі і вільна основа є кристалічними, що робить ці форми особливо придатними для розробки препаратів. Встановлено, що ні мезилат етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти, ні гідрохлорид етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти не є гігроскопічними. Крім того, встановлено, що мезилат етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти має кращу розчинність у воді, ніж вільна основа та інші солі. Внаслідок кращої розчинності у воді, мезилат також є придатним для здатного до відтвореного приготування при придатному співвідношенні кислота/основа. Ця особливість робить мезилат особливо придатним для використання в рідких препаратах, а також для препаратів, призначених для внутрішньовенного введення. Всієї солі етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)ізоксазол-3-карбонової кислоти мають кращу розчинність, ніж вільна основа. Розчинність гідрохлориду у воді дорівнює 2,5-5 мг/мл, при pH 5 вона дорівнює приблизно 12,5 мг/мл і дорівнює менше 1 мг/мл в 0,1 н. HCl. Розчинність тартрату у воді дорівнює більше 2 мг/мл. Розчинність фосфату у воді дорівнює приблизно 0,5-1,0 мг/мл. Розчинність геміфумарату у воді дорівнює приблизно 0,1-0,25 мг/мл. 1 UA 101950 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Розчинність мезилату при pH 5 дорівнює приблизно 1-2,5 мг/мл і 10-20 мг/мл в 0,1 н. HCl. Розчинність у воді при pH 4 знайдена рівною 33,5 мг/мл. На додаток до зазначеного вище встановлено, що мезилат етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти можна одержати у формі гідратів. Модифікація A є безводною формою мезилату етиламіду 5-(2,4дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти і форми HA і HB є гідратованими формами мезилату етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти. Відповідно до винаходу також встановлено, що можна одержати різні кристалічні форми вільної основи і мезилату етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти. Крім того, встановлено, що кристалічна форма гідрохлориду етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти не змінюється при встановленні рівноваги в суспензії в широкому діапазоні умов. Відсутність поліморфізму є сприятливою характеристикою твердої форми, призначеної для використання як лікарського засобу. Тому першим об'єктом даного винаходу є нові солі етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти, краще мезилат етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)ізоксазол-3-карбонової кислоти, гідрохлорид етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти, тартрат етиламіду 5-(2,4-дигідрокси5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти, фосфат етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3карбонової кислоти і геміфумарат етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти. Другим об'єктом даного винаходу є нові кристалічні форми і гідрати мезилату етиламіду 5(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти. Третім об'єктом даного винаходу є нові кристалічні форми вільної основи етиламіду 5-(2,4дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти. Крім того, даний винахід відноситься до застосування мезилату етиламіду 5-(2,4-дигідрокси5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти, гідрохлориду етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3карбонової кислоти, тартрату етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти, фосфату етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти і геміфумарату етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3карбонової кислоти для приготування лікарського засобу, призначеного для лікування порушення, опосередковуваного за допомогою Hsp90. Загальні терміни, що використовуються вище і нижче в даному винаході, у контексті даного опису, якщо не зазначено інше, краще мають наступні значення. Вираження "порушення, опосередковувані за допомогою Hsp90" при використанні в даному винаході означає порушення, такі як пухлинні захворювання, які обумовлені понадекспресуванням, активацією або порушенням регуляції Hsp90 або при яких таке понадекспресування, активація або порушення регуляції відіграє істотну роль. Висловлення "що не містить яких-небудь інших солей" при використанні в даному винаході означає, що не містяться які-небудь солі, утворені з неорганічних або органічних кислот, такі як хлорид натрію, що використовується в якості ізотонічного реагенту, і не містяться які-небудь буферні солі. Встановлено, що в присутності таких інших солей кристали утворюються раніше або пізніше, що робить розчин мезилату етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти нестабільним і є особливо неприйнятним ризиком для препарату, призначеного для внутрішньовенного введення. Висловлення "хімічно стабільний" при використанні в даному винаході означає, що 5-(2,4дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти не вступає в які-небудь хімічні реакції, такі як сольволіз, краще - не піддається гідролізу, перегрупуванням і окислюванню. Короткий опис креслень На фіг. 1-13 наведені рентгенограми кристалічних форм вільної основи, метансульфонату, гідрохлориду, тартрату, фосфату і геміфумарату етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти. На рентгенограмах наведені 2 UA 101950 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 залежності кута рефракції 2-тета, відкладеного по горізонтальній осі (осі x), від відносної інтенсивності лінії (інтенсивності піку з поправкою на фон), відкладеної по вертикальній осі (осі y). Порошкові рентгенограми зняті з використанням джерела випромінювання Cu K ((випромінювання K(1, довжина хвилі (= 1,54060 A). На фіг. 1 наведена рентгенограма вільної основи етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти, форма I. На фіг. 2 наведена рентгенограма вільної основи етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти, форма II. На фіг. 3 наведена рентгенограма вільної основи етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти, форма III. На фіг. 4 наведена рентгенограма вільної основи етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти, форма IV. На фіг. 5 наведена рентгенограма вільної основи етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти, форма V. На фіг. 6 наведена рентгенограма вільної основи етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти, форма VII. На фіг. 7 наведена рентгенограма форми I метансульфонату етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти. На фіг. 8 наведена рентгенограма гідратної форми HA етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти. На фіг. 9 наведена рентгенограма гідратної форми HB метансульфонату етиламіду 5-(2,4дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти… На фіг. 10 наведена рентгенограма гідрохлориду етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти. На фіг. 11 наведена рентгенограма тартрату етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти. На фіг. 12 наведена рентгенограма фосфату етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти. На фіг. 13 наведена рентгенограма геміфумарату етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти. У кращому варіанті здійснення форма I в основному чистого метансульфонату етиламіду 5(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти має рентгенограму, наведену на фіг. 7. Особлива перевага також віддається формі I метансульфонату етиламіду 5-(2,4-дигідрокси5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти, що має рентгенограму типу, наведеного на фіг. 7, з піками значної інтенсивності при значеннях 2-тета: 16,7, 19,4 і 22,7±0,2. Для зразків, що не містять яких-небудь додаткових речовин (інших кристалічних форм, безводної форми, інертних наповнювачів), повинні спостерігатися піки при наступних значеннях 2-тета: 8,0, 11,9, 13,9, 14,2, 16,7, 18,5, 19,4, 22,7, 23,3±0,2. В іншому кращому варіанті здійснення форма HA в основному чистого метансульфонату етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3карбонової кислоти має рентгенограму, наведену на фіг. 8. Особлива перевага також віддається формі HA метансульфонату етиламіду 5-(2,4дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти, що має рентгенограму типу, наведеного на фіг. 8, з піками значної інтенсивності при значеннях 2-тета: 18,1 і 20,5, ±0,2. Для зразків, що не містять яких-небудь додаткових речовин (інших кристалічних форм, безводної форми, інертних наповнювачів), повинні спостерігатися піки при наступних значеннях 2-тета: 11,0, 11,6, 14,1, 18,1, 20,1, 20,5, 21,1, 21,7, 21,9, 25,8±0,2. В іншому кращому варіанті здійснення форма HB в основному чистого метансульфонату етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3карбонової кислоти має рентгенограму, наведену на фіг. 9. Особлива перевага також віддається формі HB метансульфонату етиламіду 5-(2,4дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти, що має рентгенограму типу, наведеного на фіг. 9, з піком значної інтенсивності при значенні 2тета, рівному 25,4±0,2. Для зразків, що не містять яких-небудь додаткових речовин (інших кристалічних форм, безводної форми, інертних наповнювачів), повинні спостерігатися піки при наступних значеннях 2-тета: 6,2, 10,1, 12,6, 14,5, 18,0, 18,5, 19,0, 20,4, 20,9, 21,8, 22,2, 25,4±0,2. В іншому кращому варіанті здійснення в основному чистий гідрохлорид етиламіду 5-(2,4дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти має рентгенограму, наведену на фіг. 10. 3 UA 101950 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Особлива перевага також віддається гідрохлориду етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти, що має рентгенограму типу, наведеного на фіг. 10. В іншому кращому варіанті здійснення в основному чистий тартрат етиламіду 5-(2,4дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти має рентгенограму, наведену на фіг. 11. Особлива перевага також віддається тартрату етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти, що має рентгенограму типу, наведеного на фіг. 11. В іншому кращому варіанті здійснення в основному чистий фосфат етиламіду 5-(2,4дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти має рентгенограму, наведену на фіг. 12. Особлива перевага також віддається фосфату етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти, що має рентгенограму типу, наведеного на фіг. 12. В іншому кращому варіанті здійснення в основному чистий фумарат етиламіду 5-(2,4дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти має рентгенограму, наведену на фіг. 13. Особлива перевага також віддається фумарату етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти, що має рентгенограму типу, наведеного на фіг. 13. Термін "в основному чистий" у контексті даного винаходу означає, що краще - не менше 90, ще краще - не менше 95 і найкраще - не менше 99 мас. % кристалів солі приєднання з кислотою етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3карбонової кислоти перебувають у кристалічній формі, запропонованій в даному винаході. Іншим об'єктом даного винаходу є новий препарат, що включає мезилат етиламіду 5-(2,4дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти. Точніше, даний винахід відноситься до водного розчину, що включає мезилат етиламіду 5-(2,4дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти, що не містить яких-небудь інших солей. Краще, якщо водний розчин має значення pH, рівні від 3,2 до 5,2. Краще, якщо препарат являє собою приблизно від 4,8 і 5,2 мг/мл розчин, ще краще - 5,0 мг/мл розчин мезилату етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти. Значення pH такого розчину становить приблизно 4,2 і це відповідає максимуму стабільності мезилату. Цей несподіваний факт робить розчин особливо придатним для застосування у фармацевтиці. Зокрема, це дозволяє застосовувати розчин без додавання яких-небудь інертних наповнювачів, таких як буфери, для стабілізації лікарської речовини. Крім того, внаслідок високої стабільності розчин, що включає приблизно від 4,8 і до 5,2 мг/мл мезилату етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти можна обробляти в автоклаві (наприклад, шляхом нагрівання приблизно до 120 °C, протягом від 20 до 40 хв, наприклад, 30 хв, під тиском, рівним приблизно 2 бар), не викликаючи яких-небудь змін фарбування і утворення продуктів розкладання. В одному варіанті здійснення препарат включає ізотонічний водний розчин мезилату етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3карбонової кислоти і 5 мас./мас. % глюкози або маніту. Останній варіант здійснення має ту додаткову перевагу, що утворення кристалів можна уникнути навіть при тривалому зберіганні, наприклад, протягом декількох місяців. Крім того, у цьому препараті мезилат хімічно стабільний. Крім того, значення pH такого розчину перешкоджає протіканню реакції Майяра при обробці в автоклаві з 5 % розчином глюкози, що приводить до знебарвлення в нейтральному середовищі. Внаслідок несподіваних фактів, зазначених вище, даний винахід відноситься до - препарату, що включає мезилат етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти, що краще є водним розчином, що включає мезилат етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)ізоксазол-3-карбонової кислоти, що не містить яких-небудь інших солей, що краще має значення pH, рівні від 3,2 до 5,2; - краще - до препарату, що включає ізотонічний водний розчин мезилату етиламіду 5-(2,4дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти і 5 мас./мас. % глюкози або маніту; 4 UA 101950 C2 5 10 15 20 25 - і краще - до водного препарату, що включає мезилат етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти при концентрації, рівній приблизно від 4,8 до 5,2 мг/мл. Водний розчин, описаний вище в даному винаході є особливо придатним для внутрішньовенного введення мезилату етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти. Крім того, відповідно до винаходу зненацька було встановлено, що мезилат етиламіду 5(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти чутливий до впливу світла, коли він перебуває у формі твердої речовини, а також у розчині. Тому в іншому варіанті здійснення даний винахід відноситься до контейнера, виготовленого з темного скла, заповненого лікарською речовиною або водними розчинами препаратів, описаними вище в даному винаході. Крім того, даний винахід відноситься до способу лікування порушення, опосередковуваного за допомогою Hsp90, що включає введення тварині, що потребує цього, терапевтично активної кількості мезилату етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти або гідрохлориду етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти. Приклади Наведені нижче приклади ілюструють даний винахід. o Температуру вимірюють у градусах Цельсія ( C). Якщо не зазначено інше, реакція протікає при кімнатній температурі. Абревіатури EtOAc етилацетат ВВвідносна вологість КТкімнатна температура ТБМЕ трет-бутилметиловий ефір Приклад 1: Гідрохлорид етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти N HO O x HCl O OH O N 30 35 40 N H Етиламід 5-(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3карбонової кислоти (4,19 г, 9 ммоля) при обережному нагріванні розчиняють в абсолютному спирті (19,7 мл). Після перемішування протягом 5 хв при КТ (приблизно 25 °C) додають 6 н. водний розчин хлористоводневої кислоти (1,5 мл, 9 ммоля). У прозорий розчин як запал вносять дуже невелику кількість гідрохлориду етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти і додають етилацетат (2 мл), після чого суміш повільно каламутніє. Через 1 год. порціями додають EtOAc (5 мл) і суспензію перемішують при КТ протягом ночі. Додають ще EtOAc (2 мл). Суспензію перемішують протягом приблизно 5 год. і фільтрують. Осад на фільтрі промивають суміш. абсолютний спирт/EtOAc 1:1 (об./об.) і сушать протягом 16 год. при 45 °C при зниженому тиску і одержують шукану сполуку у вигляді білого порошку. Температура плавлення (за даними диференціальної скануючої калориметрії): 237 °C Приклад 2: Мезилат етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти - умови (A) N HO O x HO3SCH3 O OH O N N H 5 UA 101950 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60При перемішуванні суспензію етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти (7,76 г, 15 ммоля, містить приблизно 9 мас. % ТБМЕ) в ацетоні (15 мл) нагрівають до 35 °C. До суміші протягом 20 хв додають розчин метансульфонової кислоти (1,43 г, 14,85 ммоля) у воді (3,33 г). Через 15 хв, розчин нагрівають до 45 °C і фільтрують у теплу колбу (приблизно 45 °C) з одержанням чистого фільтрату. Фільтр промивають сумішшю ацетон/вода 9:1 (об./об., 12 мл). Нагрітий до 45 °C теплий фільтрат розбавляють ацетоном (53 мл) протягом 30 хв і як запал вносять метансульфонат етиламіду 5(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти (4 мг), після чого починається кристалізація. Через 1 год. при 45 °C додають ацетон (30 мл). Суспензію перемішують при 45 °C протягом 1 год. і потім охолоджують до 24 °C протягом 90 хв. Додають ТБМЕ (20 мл) і суспензію перемішують приблизно при 24 °C протягом 15 год. Додають ще дві порції ТБМЕ (по 20 мл) і після кожного додавання перемішують протягом 2 год. Потім суспензію охолоджують до 0-5 °C і перемішують протягом 3 год. і після цього фільтрують. Осад на фільтрі промивають сумішшю ацетон/трет-бутилметиловий ефір 3:1 (об./об.) і сушать при зниженому тиску при 50 °C протягом приблизно 17 год. і одержують 7,18 г (85 %) бажаної сполуки у вигляді білого кристалічного порошку. Температура плавлення: 233 °C Якщо не додавати запал, то кристали, що утворюються, мають таку ж форму, але можуть містити до 1,5 мас. % ацетону. Приклад 3: Мезилат етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти - умови (B) 186,2 мг (0,4 ммоля) Метансульфонату етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти розчиняють в 0,75 мл ацетону. При КТ додають 154 мг водного розчину (25 мас./мас. %) метансульфонової кислоти (0,4 ммоля) і утворюється синій розчин. Після перемішування протягом 2 год. додають 3,5 мл ацетону і 0,5 мл ТБМЕ. Після перемішування розчину протягом ще 12 год. повільно додають ще 3,5 мл ТБМЕ і перемішування продовжують протягом ще 12 год. Отриману емульсію фільтрують і отриману тверду речовину промивають за допомогою 0,5 мл ТБМЕ. Тверду речовину сушать протягом 16 год. при 50 °C і 20 мбар і одержують 180 мг бажаної сполуки. Приклад 4: Гігроскопічність вільної основи, метансульфонату і гідрохлориду етиламіду 5(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти Гігроскопічність визначають за допомогою приладу для вимірювання динамічної сорбції води. Вимірювання проводять при 25 °C з використанням приблизно 8-10 мг речовини. ОВ міняють із кроком в 10 % ОВ у такий спосіб: 40-0-95-0-40 % ОВ. Мінімальна тривалість стадії становить 60 хв, максимальна - 180 хв, якщо зміна маси за 10 хв становить менше 0,002 %/хв, то переходять до наступного значення ОВ. Встановлено, що ні мезилат етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти, ні гідрохлорид етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти не є гігроскопічними. Вільна основа трохи гігроскопічна і при рівній 80 % відносній вологості (ВВ) при 25 °C поглинає максимально 1,8 % води. Приклад 5: Приготування мезилату етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти у вигляді рідини в ампулі, що містить 50 мг/10 мл 391,95 г AUY922 мезилату (що відповідає 325 г вільної основи) і 3,25 кг глюкози розчиняють в 65 л води для ін'єкцій. Одержують безбарвний або трохи жовтуватий розчин, що має щільність, рівну 1,018±0,005 г/мл при 20 °C, осмолярністю, рівною 315±15 мОсм/кг, і значенням pH, рівним 4,2±1,0. Розчин фільтрують через фільтр із отворами розміром 0,22 мкм. 10,5±0,4 мл Розчини поміщають в ампулу з темного скла. Ампулу запаюють в атмосфері азоту і обробляють в автоклаві протягом 30 хв при 121 °C. Приклад 6: Розведення отриманого в прикладі 5 концентрату, що містить 50 мг/10 мл 10 мл з ампули, що містить 50 мг/10 мл, виготовленої в прикладі 5, розбавляють за допомогою 250 мл наявного в продажі 5 % розчину глюкози і вводять пацієнтові внутрішньовенно за допомогою гравіметричного пристрою для вливання. Приклад 7: Розчинність мезилату етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти Визначали розчинність мезилату етиламіду 5-(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти (AUY922) у різних водних середовищах і одержали наступні результати: 6 UA 101950 C2 5 10 15 20 Вода (pH насиченого розчину = 3,6) 37,5 мг/мл; 0,9 % розчину NaCl 12,8 мг/мл; 5 % розчину глюкози 39 мг/мл; 5 % розчину маніту 39 мг/мл; 5 % розчину глюкози pH 4 35,6 мг/мл; 5 % розчину глюкози pH 7 37,5 мг/мл: буферні розчини pH 4,0 (ацетатний буфер) 14,6 мг/мл; pH 5,0 (ацетатний буфер) 3,2 мг/мл; pH 6,0 (фосфатний буфер) 0,6 мг/мл; pH 7,0 (фосфатний буфер) 0,7 мг/мл; pH 8,0 (боратний буфер) 1,8 мг/мл. Виявлено високу розчинність у розчинах глюкози і маніту. У буферних розчинах найбільша розчинність спостерігається при pH=4. Приклад 8: Дослідження в жорстких умовах у розчині або суспензіях мезилату етиламіду 5(2,4-дигідрокси-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти Стабільність AUY922 мезилату в різних водних середовищах визначали в жорстких умовах (4 тижня при 50 °C) і отримані наступні результати для зовнішнього вигляду/вилучення вмісту/сума вмісту побічних продуктів і продуктів розкладання: Вода: безбарвний розчин/97,0 %/0,32 %; 0,9 % розчин NaCl: безбарвний розчин/98,5 %/0,34 %; 5 % розчин глюкози: безбарвний розчин/99,6 %/0,34 %. Буферні розчини pH=1,0 (HCl): безбарвний розчин/96,7 %/2,83 %; pH 2,0 (цитратний буфер): безбарвний розчин/97,8 %/0,58 %; pH 3,0 (цитратний буфер): безбарвний розчин/99,2 %/0,47 %; pH 4,0 (ацетатний буфер): безбарвний розчин/100,5 %/0,36 %; pH 5,0 (ацетатний буфер): безбарвний розчин/99,1 %/0,50 %; pH 6,0 (фосфатний буфер): безбарвна суспензія/96,2 %/0,49 %; pH 6,8 (фосфатний буфер): безбарвна суспензія/96,3 %/0,79 %; pH8,0 (боратний буфер): безбарвна суспензія/88,5 %/0,26 %. Ці дані свідчать про максимальну стабільність AUY922 мезилату при pH 4. Крім того, показано, що 5 % розчин глюкози приводить до максимальної стабільності у порівнянні з іншими водними середовищами. 25 ФОРМУЛА ВИНАХОДУ 30 35 40 45 50 55 1. Сіль, яка являє собою 5-(2,4-дигідроксі-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)ізоксазол-3-карбонової кислоти етиламіду мезилат або його гідрат. 2. Кристалічна форма солі за пунктом 1, яка являє собою безводний 5-(2,4-дигідроксі-5ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти етиламіду мезилат. 3. Кристалічна форма І безводного 5-(2,4-дигідроксі-5-ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти етиламіду мезилату за пунктом 1, що має рентгенограму, на якій відносні інтенсивності кожного піка не відхиляються більше ніж на 10 % від наведених на Фіг. 7 відносних інтенсивностей піків. 4. Кристалічна форма солі за пунктом 1, яка являє собою гідрат 5-(2,4-дигідроксі-5ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти етиламіду мезилату. 5. Гідратна форма НА солі за пунктом 1, що має рентгенограму, на якій відносні інтенсивності кожного піка не відхиляються більше ніж на 10 % від наведених на Фіг. 8 відносних інтенсивностей піків. 6. Гідратна форма НВ солі за пунктом 1, що має рентгенограму, на якій відносні інтенсивності кожного піка не відхиляються більше ніж на 10 % від наведених на Фіг. 9 відносних інтенсивностей піків. 7. Композиція, що містить терапевтично ефективну кількість 5-(2,4-дигідроксі-5-ізопропілфеніл)4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти етиламіду мезилату за пунктом 1 та розріджувач або носій. 8. Композиція за пунктом 7, яка являє собою водний розчин, що містить 5-(2,4-дигідроксі-5ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти етиламіду мезилат, вільний від будь-яких інших солей. 9. Композиція за пунктом 8, яка має рH між 3,2 та 5,2 рH. 10. Композиція, що містить ізотонічний водний розчин солі мезилату 5-(2,4-дигідроксі-5ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти етиламіду за пунктом 4 та 5 % мас./мас. глюкози. 11. Композиція, що містить ізотонічний водний розчин солі мезилату 5-(2,4-дигідроксі-5ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти етиламіду за пунктом 1 та 5 % мас./мас. маніту. 7 UA 101950 C2 12. Композиція за пунктом 11, що містить від приблизно 4,8 до 5,2 мг/мл 5-(2,4-дигідроксі-5ізопропілфеніл)-4-(4-морфолін-4-ілметилфеніл)-ізоксазол-3-карбонової кислоти етиламіду мезилату. 8 UA 101950 C2 9 UA 101950 C2 10 UA 101950 C2 11 UA 101950 C2 12 UA 101950 C2 13 UA 101950 C2 Комп’ютерна верстка А. Крижанівський Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 14