2,4-дисульфоніл-a-феніл-трет-бутилнітрон (варіанти), його солі, фармацевтична композиція (варіанти), спосіб лікування пацієнта (варіанти)

1 2,4-Дисульфонил- а -фенил-трет-бутилнитрон 2 2,4-Дисульфонил-а -фенил-трет-бутилнитрон, имеющий струїсгурную формулу HO3S N-C(CH,) З'З SO3H З Ионизированный 2,4-дисульфонил- а -фенилтрет-бутилнитрон формулы О" CH=N~C(CH 3 ) 3 4 Ионизированный 2,4-дисульфонил- а -фенилтрет-бутилнитрон по п 3 в виде соли формулы xo3s о u з/з CH=N-C(CH3) so 3 x при этом X выбирают из группы, состоящей из Na, К, NH4, Ca, Mg, CaY и MgY, где Y представляет собой фармацевтически приемлемый одновалентный анион 5 Фармацевтическая композиция для лечения не врологических расстройств, удара, контузии и уменьшения побочного действия химиотерапевтических агентов, отличающаяся тем, что содержит соединение по п 1 в фармацевтически приемлемом носителе, пригодном для парентеральной инъекции 6 Фармацевтическая композиция для лечения неврологических расстройств, удара, контузии и уменьшения побочного действия химиотерапевтических агентов, отличающаяся тем, что содержит соединение по п 2 в фармацевтически приемлемом носителе, пригодном для парентеральной инъекции 7 Фармацевтическая композиция для лечения неврологических расстройств, удара, контузии и уменьшения побочного действия химиотерапевтических агентов, отличающаяся тем, что содержит ионизированный 2,4-дисульфонил- ее -фенил-третбутилнитрон по п 3 в фармацевтически приемлемом носителе, пригодном для парентеральной инъекции 8 Фармацевтическая композиция для лечения неврологических расстройств, удара, контузии и уменьшения побочного действия химиотерапевтических агентов, отличающаяся тем, что содержит соль по п 4 в фармацевтически приемлемом носителе, пригодном для парентеральной инъекции 9 Фармацевтическая композиция для лечения неврологических расстройств, удара, контузии и уменьшения побочного действия химиотерапевтических агентов, отличающаяся тем, что содержит соединение по п 1 в фармацевтически приемлемом носителе, пригодном для перорального введения 10 Фармацевтическая композиция для лечения неврологических расстройств, удара, контузии и уменьшения побочного действия химиотерапевтических агентов, отличающаяся тем, что содержит соединение по п 2 в фармацевтически приемлемом носителе, пригодном для перорального введения 11 Фармацевтическая композиция для лечения неврологических расстройств, удара, контузии и уменьшения побочного действия химиотерапевтических агентов, отличающаяся тем, что содержит О (О ю 45964 4 эффективного количества фармацевтической ионизированный 2,4-дисульфонил- ее -фенилкомпозиции по любому из пп 5, 6, 7 или 8 трет-бутилнитрон по п 3 в фармацевтически при17 Способ по п 16, отличающийся тем, что комемлемом носителе, пригодном для перорального позицию вводят внутривенно введения 18 Способ лечения пациента, страдающего от с12 Фармацевтическая композиция для лечения остояния прогрессирующей потери функции центневрологических расстройств, удара, контузии и ральной нервной системы, отличающийся тем, уменьшения побочного действия химиотерапевтчто включает пероральное введение пациенту ических агентов, отличающаяся тем, что содержит эффективного количества, по крайней мере 0,1 мсоль по п 4 в фармацевтически приемлемом г/кг в сутки, фармацевтической композиции по носителе, пригодном для перорального введения любому из пп 9, 10, 11 или 12 13 Способ лечения пациента, страдающего от у19 Способ ослабления интенсивности побочных дара или контузии, отличающийся тем, что паредействий, причиной которых у пациента является нтерально вводят пациенту эффективное для левызывающее окислительное нарушение лечение чения удара или контузии количество, состаопухолевого заболевания, отличающийся тем, вляющее по крайней мере 0,2 мг/кг/час фарчто включает пероральное введение пациенту мацевтической композиции по любому из пп 5, 6, эффективного количества фармацевтической 7 или 8 композиции по любому из пп 9, 10, 11 или 12 14 Способ по п 13, отличающийся тем, что ком20 Способ ослабления интенсивности побочных позицию вводят внутривенно действий, причиной которых у пациента является 15 Способ лечения пациента, страдающего от увызывающее окислительное нарушение лечение дара или контузии, отличающийся тем, что ввоопухолевого заболевания, отличающийся тем, чдят пациенту перорально эффективное колто включает парентеральное введение пациенту ичество фармацевтической композиции по эффективного количества фармацевтической любому из пп 9 10, 11 или 12 композиции по любому из пп 5, 6, 7 или 8 16 Способ лечения пациента, страдающего от с21 Способ по п 20, отличающийся тем, что комостояния прогрессирующей потери функции центпозицию вводят внутривенно ральной нервной системы, отличающийся тем, что включает парентеральное введение пациенту Настоящее изобретение относится к производному нитрона, его солям и их применению в качестве фармацевтических нитронных средств улавливания свободных радикалов Ал ьфа-фенил-трет-бутил нитрон О" -C=R-C(CH 3 ) 3 или "ФБН") идентифицирован в 70-х годах как полезный аналитический реактив, который применяют вместе с электронным спиновым резонансом ("ЭСР") для способствования обнаружению свободных радикалов Обнаружено, что РВ N реагирует с некоторыми свободными радикалами и генерирует образование химических частиц, дающих характерный ЭПР-спектр, и, таким образом, делающих возможным определение присутствия или отсутствия свободных радикалов В конце 70-х - начале 80-х годов медики начали сосредоточивать внимание на роли, которую играют свободные радикалы при таких заболеваниях, как сердечные приступы, удары и при подобных заболеваниях ФБН все чаще применяют in vitro, чтобы получить аналитические данные о присутствии свободных радикалов при таких состояниях Позднее его вводят животным моделям in vivo, вновь в качестве вспомогательного средства при попытках обнаружить свободные радикалы при моделировании ишемии и подобных заболеваний В середине 80-х появились первые предполо жения о возможном терапевтическом действии ФБН, когда эксперименты на животных с тяжелой травматической ишемией показали, что животные, которых лечили ФБН, имеют больше шансов на выживание, чем контрольные В 1991 г, 2 мая, опубликована заявка PCTW 091-05552 В этой заявке, которая частично соответствует выданным в настоящее время патентам США №№5825032 и 5036097, описывается ФБН и ряд производных ФБН, определяемых формулой н с=іг \ , где X представляет собой фенил или Of , где R, представляет собой Н, о ~^~ -сн=н о ' ИЛИ Z, ИЛИ \ у и п представляет собой целое число от 1 до 5, или о , и У представляет собой трет-бутил или гидроксилированный или ацетилированный трет-бутил, или замещенный фенил Такие соединения описываются как фармацевтические средства для лечения последствий удара и других состояний, которые описываются как ассоциируемые с вредным влиянием свободных радикалов В 1992г была подана другая заявка РСТ, относящаяся к ФБН и родственным соединениям и применению их в медицине Эта заявка, основанная на предшествующей заявке США (сер №716952 с датой подачи 18 июня 1991) , опубликована 23 декабря 1992 под номером WO92/22290 В этой публикации 1992г приводятся два очень широких описания общего характера Во-первых, делается попытка описать все возможные болезненные состояния, которые ассоциируются со свободными радикалами Диапазон этих состояний начинается от нарушений ЦНС (удар, старение, мигрень и т п ), проходит через заболевания периферических органов (включая атеросклероз, пролежни, раны и мышечное перенапряжение), через воздействие УФ-излучения к упоминанию, но лишь мельком, о воздействии яркого освещения Во-вторых, делается попытка привести перечень всех возможных спиновых ловушек 45964 ем, причем сообщается, что он не имеет ощутимого действия на нормальные или поврежденные клетки, и также утверждается, что и некоторые производные являются полезными, в том числе, гидроксипроизводные, особенно, 2-, 3- или 4-гидроксифенил-трет-бутилнитрон и фенил(моно-, диили тригид-рокси)-трет-бутилнитрон, сложные эфиры ФБН, в особенности, эфиры, которые высвобождают 2-, 3- или 4-гидроксифенил-трет-бутилнитрон, такие как ацетоксипроизводное, 2-, 3- или 4-карбокси-фенил-трет-бутилнитрон, фенилгидроксибутилнитрон, алкоксильные производные, в особенности, алкоксильные производные, которые высвобождают 2-, 3- или 4-гидроксифенил-третбутилнитрон, например, 2-, 3- или 4-метоксифенильные производные ФБН, и ацетамидные производные, в особенности, ацетамидные производные, которые высвобождают 2-, 3- или 4-аминофенилтрет-бутилнитрон, дифенилнитрон ДФН и аналогичные производные дифенилнитрона, N-трет-бутил-а-(4-нитрофенил)нитрон, и N-трет-бутил-а-(2-сульфофенил)нитрон Помимо целого ряда веществ, не относящихся к ФБН, в этой заявке весьма подробно дается определение потенциально полезным соединениям ФБН, к которым относятся ФБН и его производные формулы ОЩ+ , где X представляет фенил, имидазолил, фенотиазинил или 2 собой п = 1 - 5, предпочтительно, 1 - 3, R2 = независимо (может изменяться в пределах молекулы) галоген, ал^ил, оксиалкил, алкенил, оксиалкенил, ОН, NH2, NHZ, NZ, N0, О" -CK=R+ А А A A A it / ІІ II II I! , -C-HHZ, -OH 2 2 ' -SH-C-Z , - G - 2 , -C-OZ , У или -Q-C-й, , -SO3H, -OSO3H, SH, -S (алкил), -S (алкенил), и галоидалкил, в особенности, включая CF3, Z представляет собой Ci - CQ линейную, разветвленную, алкильную или циклическую группу, и У представляет собой трет-бутильную группу, которая может быть гидроксилированной или ацетилированной в одном или нескольких положениях фенил или Обнаружено, что одно из производных ФБН и его соли обладают превосходными фармакологическими свойствами Хотя это производное (2,4дисульфонил-ФБН-) входит в обширную группу веществ, описанных в общем виде в вышеупомянутой публикации WO92/022290, подробно это соединение не описывается Не сообщается и о его преимущественных свойствах Ожидается, что это соединение с его двумя сульфонатными группами будет обладать повышенной растворимостью, но также ожидается, что оно будет плохо преодолевать гематоэнцефалический барьер по причине своего лиофобного характера Однако, когда это соединение получают и испытывают in vivo, оно обнаруживает неожиданное возрастание эффективности при сравнении с ФБН Такое возрастание эффективности имеет место наряду с возрастанием активности по сравнению с ФБН Прямой противоположностью этому заметному возрастанию активности и эффективности является заметное и весьма существенное снижение токсичности по сравнению с ФБН Такие результаты оказались неожиданными, поскольку в литературе по корреляции строения и активности среди определенных групп соединений терапевтическая активность, как правило, является ковариантной токсичности Таким образом, наиболее близкие родственные соединения сохраняют свое соотношение терапевтической силы и токсичности В противоположность этому, соединение настоящего изобретения отклоняется от такого ожидаемого соотношения, когда его активность возрастает, а его токсичность уменьшается при сравнении с ближайшими аналогами Соответственно, настоящее изобретение, с одной стороны, раскрывает ФБН-дисульфонильное производное о II сн=к,-с{сн 3 )з Утверждается, что в настоящий момент РВ N является наиболее предпочтительным соединени $, о 3 н и его фармацевтически приемлемые соли 8 45964 В соответствии со вторым своим аспеїсгом, нающая эффективность соединения изобретения в стоящее изобретение относится к фармацевтичесснижении конечной зоны инфаркта, наблюдаемого ким композициям, содержащим это соединение после закупорки средней артерии головного мозга или его соль в качестве активного ингредиента, у крыс которые можно вводить парентерально, например, На Фиг 6 (А, В и С) приводятся три диаграмвнутривенно, и перорально мы, иллюстрирующие способность соединения изобретения снижать побочное действие высоких В своем третьем аспекте настоящее изобретеконцентраций противораковых средств у животние относится к способу лечения пациента, котоных рый страдает от заболевания, включающего острое окислительное поражение центральной нервСоединение и его соли ной системы, такого пациента, как пациент, котоСоединение настоящего изобретения рый перенес удар, причем при упомянутом спосопредставляет собой 2,4-дисульфонил-а-фенил-бе лечения вводят парентерально, например, внутрет-бутилнитрон Оно также упоминается в натривенно, фармацевтическую композицию на осстоящем описании как "2,4-дисульфонил-ФБН" нове упомянутого соединения или его соли или как "ФБН-2,4-дисульфонат" Это соединение существует в форме кислоты В-четвертых, настоящее изобретение относится к способу лечения пациента, страдающего от О заболевания, характеризуемого длительным низCI ким окислительным давлением на центральную С(СН 3 ) 3 HSO3 — \ O / — ' нервную систему и прогрессирующей потерей функции центральной нервной системы При упомянутом способе вводят парентерально, например, в виде твердого вещества и в растворе с низким внутривенно, или, предпочтительно, перорально рН Оно также существует при более высоких фармацевтическую композицию на основе упомязначениях рН в форме ионизированной соли, нутого соединения или его соли которую можно представить как В-пятых, настоящее изобретение относится к О" способу снижения или уменьшения интенсивности побочных действий, возникающих из-за окислите- СН = Н+ — С ( С Н 3 ) 3 , льного нарушения, происходящего у пациента при S О: лечении рака По этому способу вводят парентерально, например, внутривенно, или перорально или в виде фармацевтическую композицию на основе упомянутого соединения или его соли — сн = н+ — с(сн 3 ) 3 Подробное описание настоящего изобретения состоит из перечисленных далее разделов где X представляет собой фармацевтически приКраткое описание рисунков (Фиг) емлемый катион Чаще всего, этот катион предСоединение и его соли ставляет собой одновалентную частицу, такую как Получение соединения натрий, калий или аммоний, но он также может Фармацевтические композиции представлять собой многовалентный катион в соСостояния, которые лечат, и схемы лечения четании с фармацевтически приемлемым одноваПримеры лентным анионом, например, катион кальция с Краткое описание рисунков (Фиг) хлорид-, бромид-, иодид-, гидроксил-, нитрат-, суВ настоящем разделе описываются прилагаельфонат-, ацетат-, тартрат-, оксалат-, сукцинат-, мые рисунки (фиг) пальмоат-анионом или с подобным анионом, катиНа Фиг 1 дается схема последовательности он магния в сочетании с такими же анионами, кареакций при получении соединения настоящего тион цинка с такими же анионами или подобное изобретения Когда в настоящем описании в структурных форФиг 2 (А, В и С) и Фиг З (А, В и С) представлямулах показываются такие сочетания поливалентют собой два набора графиков, иллюстрирующих ного катиона с одновалентным анионом, однованежелательное изменение способности к термолентный анион изображается как "У" регулированию организма животного, которое проСреди этих веществ наиболее предпочтительявляется в виде зависимости от дозы известного ными являются свободная кислота и простые нанитронного соединения-ловушки радикалов и, в триевая, калиевая и аммониевая соли, наряду с противоположность этому, отсутствие такого несолями кальция и магния, которые также являются желательного токсичного действия в случае заявпредпочтительными, но в меньшей степени ленного соединения Получение Фиг 4 (А, В, С и Д) представляет собой набор Как подробно показывается на рис 1 и описыиз четырех графиков, демонстрирующих превосвается в примере 1, соединение настоящего изобходство соединения изобретения над ближайшим ретения может быть получено при проведении реизвестным нитронным соединением при сравнеакции в две последовательные стадии На первой нии их для лечения постепенной нейродегенерастадии промышленный трет-бутилнитрат (2-меции (таких как болезнь Альцгеймера), что иллюсттил-2-нитропропан) превращают в соответствуюрируется их относительной способностью препятщий н-гидроксиламин, применяя подходящий каствовать бета-амилоидбелковой инактивации клютализатор, такой как активированный цинк с уксусчевых ферментов в растворе ной кислотой или ртутная амальгама алюминия На Фиг 5 приводится диаграмма, иллюстриру Эта реакция может быть осуществлена в течение 0,5 - 12 часов, в основном - в течение 2 - 6 часов или около этого, при температуре от 15 до 100°С в жидкой реакционной среде, такой как смесь спирта с водой - в случае цинкового катализатора, или смесь эфира с водой - в случае амальгамы алюминия На второй стадии свежеполученный гидроксиламин вводят во взаимодействие с 4-формил-1,3бензолдисульфоновой кислотой, причем, как правило, используют небольшой избыток амина Эта реакция может быть осуществлена при аналогичных температурных условиях Эта реакция обычно завершается за время от 10 до 24 часов Полученный таким образом продукт представляет собой свободную кислоту и имеет молекулярную массу 89г/моль Он представляет собой вещество в виде белого порошка, которое разлагается при нагревании Это вещество отличается растворимостью в воде свыше 1г/мл, и имеет 1Н ЯМР-спектр в D2O 8,048м д (дд, 8,4, 1,7Гц), 8,836ррт (д, 8,4Гц), 8,839ррт (д, 1,7Гц), 8,774 ррт (с) Различные соли можно легко получить путем смешивания свободной кислоты в водной среде с двумя эквивалентами соответствующего основания, например, КОН, чтобы получить калиевую соль, и т п Фармацевтические композиции Соединение (в том числе, его соли) может быть введено в состав фармацевтических композиций, пригодных для перорального или парентерального, например, путем внутривенной или внутримышечной инъекции, введения Композиции для перорального введения могут принимать форму жидких растворов или суспензий, порошков, таблеток, капсул или подобную В таких композициях ФБН-2,4-дисульфонат или его соли составляют, как правило, небольшую часть (от 0,1 до, скажем, 50мас %), причем остальную часть составляют различные наполнители или носители и вспомогательные вещества, полезные при формировании нужной лекарственной формы Жидкая форма может включать в себя подходящий водный или неводный наполнитель, содержащий буферы, суспендирующие и диспергирующие вещества, красители, корригенты и подобные добавки Твердая форма может включать, например, любой из перечисленных далее ингредиентов или соединение аналогичной природы связующее, такое как микрокристаллическая целлюлоза, трагакантовая смола или желатин, эксципиент, такой как крахмал или лактоза, дезинтегрирующее средство, такое как альгиновая кислота, примогель (Pnmogel) или кукурузный крахмал, смазывающее вещество, такое как стеарат магния, облегчающее скольжение вещество, такое как коллидальный диоксид кремния, смачиватель, такой как сахароза или сахарин, или корригирующий агент, такой как перечная мята, сахар, метилсалицилат или апельсиновая заправка В случае композиций для инъекций основу составляет, как правило, стерильный солевой раствор для инъекций или солевой раствор с фосфатным буфером, либо другие известные носители 45964 10 для инъекций Активный нитрон вновь, как правило, является компонентом, присутствующим в небольшом количестве, часто - от 0,05 до Юмас %, причем остальную часть составляют носитель, пригодный для инъекций, и подобные вещества Заболевания и схемы лечения Заболевания, которые лечат с помощью 2,4дисульфонил-ФБН, делятся натри группы Первая включает острое интенсивное окислительное нарушение в области центральной нервной системы Примерами таких состояний являются удар, состояния, ассоциируемые с ударом, контузия и субарахноидальное кровотечение При таком состоянии соединение вводят способом, который предназначен для непосредственной подачи лекарственного средства в кровоток пациента настолько быстро, насколько это возможно Обычно такой способ включает внутривенное введение Дозы для внутривенного введения при лечении таких состояний колеблются от 0,1мг/кг/час до, по крайней мере, 10мг/кг/ час, и вводятся за время 1 до 120 часов, в основном, от 24 до 96 часов Может быть также назначен предварительный болюс от 10 до 500мг, чтобы добиться адекватного динамического равновесия Хотя внутривенное введение является предпочтительным способом, также могут использоваться другие формы парентерального введения, такие как внутримышечная инъекция Неожиданным и ключевым преимуществом 2,4-дисульфонил-ФБН является тот факт, что его можно вводить при значительно более высоких концентрациях, чем те, которые возможны для самого ФБН Как будет показано в примерах, возможно введение доз до 1000мг/кг/час и выше или внутривенных болюсных доз от 10 до 2500мг/кг для 2,4-дисульфонил-ФБН или его солей, в то время как для самого ФБН такие дозы приводят к смерти или острой токсичности Для 2,4-дисульфонил-ФБН наблюдается неожиданное позитивное продолжение кривой доза/отклик при этих высоких дозах при четком обнаружении того, что введение таких интенсивных доз сразу после удара или других травм может во многих случаях дать основной положительный импульс к выздоровлению Второй группой заболеваний, которые благоприятно реагируют на лечение с помощью 2,4-дисульфонил-ФБН, являются заболевания, характеризуемые длительным низким оксидативным напряжением центральной нервной системы и постепенной потерей функций центральной нервной системы К таким состояниям относятся болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, боковой амиотрофический склероз (ALS), мультиинфарктная деменция, ретинопатия и подобные состояния Каждое из этих состояний характеризуется прогрессирующей потерей функции При пероральном или парентеральном, например, внутривенном введении 2,4-дисульфонил ФБН или его солей, можно замедлить потерю этой функции и, возможно, восстановить ее Если желательно парентеральное, например, внутривенное введение, обычно используют дозировки, подобные применяемым при острых состояниях, но в более узких пределах В таких случаях схема лечения может растя 11 45964 12 нуться на многие месяцы или годы, поэтому ораСоединение 1 может быть введено до адриамицильное введение предпочтительно ввиду удобства на, например, за 60 минут перед введением адридля пациента и своей толерантности При перораамицина, одновременно с ним или после его ввельном введении требуется от одной до трех доз в дения, спустя несколько часов или нескольких сусутки, от 0,02 до 50мг/кг каждая, причем предпочток Педиатрическая доза, как правило, ниже для тительные дозы составляют от 0,04 до 5,0мг/кг обоих лекарственных препаратов Для лечения опухолей, резистентных к многократным дозам, Конечно, 2,4-дисульфонил-ФБН можно ввомогут быть использованы более высокие дозы дить как единственное активное средство, или его можно вводить в сочетании с другими средствами ПРИМЕРЫ Такой подход ведет к третьему варианту применеПример 1 ния этого соединения Синтез 2,4-дисульфонил- N-трет-бутилТретьей группой заболеваний, которые отвенитрона (в последующих примерах - соединение чают на лечение 2,4-дисульфонил-ФБН, являются 1) побочные действия, которые появляются у пациеПредлагаемый способ синтеза основан на рантов из-за окислительного нарушения, вызываеботе авторов R Н Hmton and E G Janzen (J Org мого лечением рака (опухолевого заболевания) Chem , 57 2646 - 2651, 1992) , Как показано на Лечение, которое вызывает окислительное наруфиг1, этот способ включает конденсацию альдешение (и, таким образом, побочные эффекты), гида с гидроксиламином Гидроксиламин является включает лучевую терапию (например, гамма-изнеустойчивым соединением, и его свежеприготовлучением) и лечение соответствующими химиотеленным в день применения, используя в качестве рапевтическими средствами Примерами таких катализатора активированный цинк Синтез провосредств являются антибиотики, такие как даунорудят следующим образом бицин, доксорубицин и блеомицин, прокарбазин, Необходимые реактивы азотистые иприты, такие как ифосфамид, мелфа1 Этанол 95% лан и хлорамбуцил, алкилирующие средства, ан2 2-Метил-2-нитропропан тиметаболиты, гормоны и антагонисты 3 Цинковая пыль Введение 2,4-дисульфонил-ФБН может сни4 Ледяная уксусная кислота зить ощущение дискомфорта у пациента во время 5 Диэтиловый эфир такого лечения Кроме того, введение соединения 6 Насыщенный раствор хлорида натрия настоящего изобретения может увеличить способ7 Сульфат магния, твердый, безводный ность пациента переносить такое лечение Часто 8 Гидрат динатриевой соли 4-формил-1,3-бепобочное действие при лечении удлиняет продолнзолсульфоновой кислоты (ММ310,21 г/моль) жительность этого лечения или препятствует вве9 Метанол дению оптимально высоких доз или частой повто10 Дихлорметан ряемости такого лечения В некоторых случаях поМетодика бочное действие является настолько деструктивА Получение N-трет-бутилгидроксиламина ным, что ведет к сердечной недостаточности и по1 Трехгорлую 500-мл колбу снабжают магниттере основной функции При испытаниях на живоной мешалкой, держателем термометра, термометных наблюдали, что заявленное соединение мотром и капельной воронкой жет увеличить переносимость пациентом назна2 В колбу загружают 95%-ный этанол (350мл) ченного лечения и охлаждают до 10°С на ледяной бане При таком лечении соединение настоящего 3 Добавляют в один прием 2-метил-2-нитропизобретения может быть введено до, во время и ропан (6,18г, 0,060моль) и цинковую пыль (5,89, после того, как назначается облучение или химио0,090моль) терапия Введение может быть осуществлено па4 В капельную воронку наливают ледяную рентеральным или пероральным, или любым друуксусную кислоту (10,8г, 0,180моль), и добавляют гим способом, который позволит 2,4-дисульфонилее к реакционной смеси по каплям с такой скороФБН попасть в кровь пациента стью, чтобы, при энергичном перемешивании, теНаблюдалось позитивное соотношение дозампература оставалась ниже 15°С отклик По существу, имея в виду тяжесть побоч5 Удаляют ледяную баню, и смесь перемешиного действия и преимущества обеспечения маквают в течение 3 часов при комнатной температусимально возможной снижения интенсивности поре бочного действия, в некоторых случаях может по6 Растворитель удаляют из смеси, оставляя требоваться введение больших количеств 2,4-дитрет-бутил-гидроксиламин, ацетат цинка и вода сульфонил-ФБН, как для лечения состояний с ост7 Добавляют дихлорметан (50мл), и смесь рым интенсивным окислительным поражением фильтруют через воронку Бюхнера ЦНС При других заболеваниях могут быть испо8 Оставшийся на фильтре ацетат цинка прользованы меньшие дозы, назначаемые для лечемывают дихлорметаном (2 х 25мл) ния прогрессирующих нейронных заболеваний 9 В делительной воронке от фильтрата отдеПримерами характерных схем введения являляют воду, и органический слой сушат над сульются следующие схемы При монотерапии (только фатом магния адриамицин) две комбинации представляют собой 10 Сульфат магния удаляют фильтрацией че10 - 600мг соединения 1 на кв м площади плюс рез складчатый бумажный фильтр, затем из филь60мг адриамицина на кв м площади поверхности трата удаляют дихлорметан на роторном испарипри введении адриамицина, которое осуществлятеле ют каждые семь суток или двадцать одни сутки 11 Продукт (выход 100% = 5,34г), имеющий 13 45964 14 вид вязкой жидкости, растворяют в метаноле гружают в этанол, затем погружают в эфир, и за(50мл) для использования на стадии В тем помещают в 5-л колбу, содержащую 500мл диэтилового эфира и 21,4мл воды В Получение 2,4-дисульфофенил-П-трет-бутилнитрона 2 Колбу снабжают механической мешалкой, трубкой для ввода азота и холодильником Фрид1 Круглодонную 250-мл трехгорлую колбу рихса, охлаждаемым оборотной смесью воды со снабжают магнитной мешалкой, газоподводящей льдом трубкой, капельной воронкой и холодильником Фридрихса (Friednchs), охлаждаемым циркуляци3 Смесь перемешивают в течение 10 минут онной смесью воды со льдом 4 Добавляют 2-метил-2-нитропропан (71,68г, 75,5мл), используя капельную воронку, с такой 2 В колбу загружают 200мл метанола, 4-форскоростью, чтобы поддерживалось энергичное обмил-1,3-бензолдисульфоновую кислоту (9,31 г, ратное стекание ЗОммоль) и N-трет-бутил-гидроксиламин (25мл раствора в метаноле продукта со стадии А, теор Примечание Добавка должна быть завершена ЗОммоль) менее чем за 20 минут, или существенно падает выход 3 Реакционную смесь нагревают до темпера5 Добавление вводят эфир порциями по туры перегонки с помощью нагревателя при пере500мл Это делается для того, чтобы сохранить мешивании и пропускании через нее азота высокую концентрацию продукта, по возможности, 4 Смесь кипятят с обратным холодильником в без образования геля Можно добавить до 2л эфитечение 2 часов ра без отрицательного влияния на выход продук5 Добавляют остальной гидроксиламин со та стадии А 6 Как только добавление 2-метил-2-нитропро6 Кипячение с обратным холодильником при пана завершено, реакционную смесь перемешивапропускании азота продолжают по крайней мере в ют еще в течение 30 минут течение 18 часов, но не более 24 часов 7 Получающуюся в результате серую суспен7 Горячую реакционную смесь фильтруют на зию фильтруют с отсосом в три загрузки, чтобы воронке Бюхнера, и твердое вещество промывают удалить соли алюминия горячим метанолом 8 Каждый раз осадок на фильтре промывают 8 Метанол удаляют на роторном испарителе, 1л эфира и получают желтое вязкое масло 9 Объединенные эфирные слои промывают 9 Добавляют горячую смесь этанола с ацето300мл 2М NaOH, затем сушат (MgSO4) и концентном (1 1, 200мл), и смесь нагревают для растворируют в вакууме, получают в остатке низкоплаврения масла кое белое твердое вещество 10 Для кристаллизации продукта раствор охлаждают 10 Твердое вещество плавится при температуре чуть выше комнатной, но его можно еще по11 Продукт собирают на воронке Бюхнера и сушить в вакуумной печи (не более нескольких мисушат в вакууме в течение ночи нут), причем остается 38 - 45г твердого вещества 12 Реакция, как правило, приводит к получению соединения 1 в виде белого порошка с выхо11 Твердое вещество можно использовать в дом 75% том виде, какое оно получено, или очистить перекристаллизацией из пентана Пример 2 12 Молекулярная масса 89г/моль Альтернативный синтез 2,4-дисульфонил- N-трет-бутилнитрона (соединение 1) В Получение 2,4-дисульфонилфенил- N-третбутилнитрона Он представляет собой ранее разработанный способ, который используют для получения образ1 Колбу емк 250мл снабжают мешалкой и хоцов соединения, применяемого в некоторых прилодильником Фридрихса, охлаждаемым оборотмерах настоящего описания Продукт, который поной смесью воды со льдом лучают в этом примере, по всем параметрам иде2 В колбу загружают 71,8мл метанола, 14,5г нтичен продукту примера 1 Этот синтез осуществ4-формил-1,3-бензолдисульфоновой кислоты ляют следующим образом Необходимые реакти(46,7ммоль, 1экв) и 5,0г N-трет-бутилгидроксилавы мина (56,2ммоль, 1,2экв) 1 Алюминиевая фольга, нарезанная на широ3 Смесь кипятят с обратным холодильником в кие полоски и скатанная в цилиндрики диаметром течение ночи прибл 1см 4 Продукт реакции переносят в круглодонную 2 Хлорид ртути (П) (9,68г в 476мл воды) колбу и упаривают досуха на роторном испарите3 Этанол ле 4 Эфир (6л) 5 Твердый остаток растирают с эфиром, и 5 Чистая вода эфир декантируют (желтого цвета) 6 2-Метил-2-нитропропан 6 Повторяют стадию 5 7 Гидроксид натрия, 2М (80г в 1л воды) 7 Продукт ("соединение 1") кристаллизуют из 8 Сульфат магния, твердый, безводный метанола, осуществляя горячее фильтрование 9 4-Формил-1,3-бензолсульфоновая кислота метанольного раствора для удаления нераствори(ММ310,21 г/моль) мого осадка, и дважды перекристаллизовывают из метанола Методика А Получение N-трет-бутилгидроксиламина Пример 3 1 Цилиндры из алюминиевой фольги погружаВыполняют ряд экспериментов, чтобы сравют в раствор НдСЬ на 15 - 30 секунд, затем их понить in vivo эффективность 2,4-дисульфонил-ФБН 15 45964 16 ("соединение 1"), ФБН и двух моносульфонатов ми-сульфонатами при постишемическом лечении ФБН в качестве средств для защиты от потери Применяют общий способ, описанный в примере нейронов после ишемии головного мозга и репер1, но проверяемые соединения вводят р в виде фузионного повреждения Процедура испытаний единичной дозы через 30 минут после реперфусоответствует описанной статье в W Cao, J М зии, следующей за 5-минутной ишемией РезульCarney, A Duchon, R A Floyd and M Chevion, таты сводятся в табл 2 Табл 2 показывает, что "Oxygen free radical involvement in ischemia and соединение 1 вновь является более сильным при repeerfusion injury to brain", Neuroschcience Letters , малых дозах, и более действенным и менее токси88 (1988), 233 В этих экспериментах проверяемое чным при высоких дозах Также вновь токсич соединение вводят методом і р песчанкам в групность препятствует возможности применения тапах по шесть особей, в виде единичной дозы за ких высоких доз соединений, известных в технике, ЗОмин до билатерального 5-минутного закрытия при которых соединение изобретения обеспечивасонной артерии Измеряют плотность нейронных ет наглядно эффективное лечение ядер на протяжении ЮОмкм Присутствуют две контрольных группы контрольная группа, которая не Таблица 2 получает проверяемого соединения, и контрольНейронные ядра/поле 100 мкм ная группа, которая не получает проверяемого соPBN 2-сульфо 3-сульфо Соед единения и не испытывает ишемии головного мозга Как видно из табл 1, соединение изобретения Контроль, 418 418 418 4,18 показывает неожиданные преимущества при сравбез (59) (59) (59) (59) нении с соединениями, известными в технике Воишемии первых, видно, что при низких уровнях дозы, таких Контроль, 0 85 0 85 0 85 0 85 как 3,2мг/кг, соединение 1 в 2 - 3 раза действеннее ишемия (19) (19) (19) (19) для предотвращения неронной потери Выясняет32 м г/кг 1 09 ND ND 1 83 ся, что при более высоких дозах соединение 1 (41) способно обеспечить полную защиту от потери (-31) нейронов, так как нейронная плотность у экспери50 м г/кг 1 85 0 68 0 73 2 73 ментальных животных идентична показателям ко(49) (39) (-34) (31) нтрольной группы, не подвергавшейся ишемии 100 м г/кг 211 0 78 1 09 3 41 Соединения, известные в технике, являются либо (51) (-23) (48) (37) токсичными при таких дозах, либо обеспечивают 320м г/кг 2 25 0 81 0 93 3 55 защиту в значительно меньшей степени Эти ре(-43) (48) (-31) зультаты показывают четкое возрастание эффек1000м г/кг токсичн ND ND 3 58 тивности соединения 1 для нейронной защиты, по (-39) сравнению с ФБН и двумя близкими аналогами, и ND - не определен неожиданное снижение токсичности по сравнению с ФБН Таблица 1 Нейронные ядра/поле ЮОмкм PBN 2-сульфо 3-сульфо Соед Контроль, 4 21 4 21 4 21 4 21 без (43) (43) (43) (43) ишемии Контроль, 0 58 0 58 0 58 0 58 ишемия (-28) (28) (28) (28) 3 2 м г/кг 0 43 0 73 0 35 1 43 (18) (34) (21) (31) 10м г/кг 1 13 0 68 0 81 2 57 (39) (40) (-25) (31) 32 м г/кг 1 83 0 73 1 63 3 53 (21) (35) (41) (31) 50 м г/кг 311 1 01 1 63 411 (29) (61) (43) (-35) 100 м г/кг 3 68 0 93 1,93 418 (0 71) (0 53) (-49) (-39) 320м г/кг 3 78 1 11 1 78 4 23 (-43) (41) (-40) (39) 1000м г/кг токсичн 0 98 1 58 411 (43) (38) (41) 3200м г/кг токсичн 418 Пример 4 Проводят ряд экспериментов, при которых соединение 1 сравнивают с ФБН и двумя аналога Пример 5 Чтобы определить относительную эффективность для защиты от потери нейронов, соединение 1 сравнивают с ФБН при введении і v через бОмин после начала реперфузии, следующей за 5минутной ишемией у песчанок, используя общий метод испытаний, описанный в примере 1 Результаты сводятся в табл 3, и они показывают, что соединение 1 является значительно более полезным средством при лечении состояния, следующего за повреждением головного мозга Таблица 3 N=6 в группе Солевой раствор, без ишемии Солевой раствор, ишемия ФБН Соединение 1 мг/кг разовая доза 00 05 10 411 10 (0 26) 0 93 (17) 0 83 (23) 1 25 (19) 1 07 (-29) 1 75 (-28) 1 23 (-31) 2 43 (-31) Ни ФБН, ни соединение 1 не влияют на плотность нейронов у контрольных песчанок без повреждения головного мозга 17 45964 18 Пример 6 льности (% выживающих) старых песчанок (возраст 18 - 24 месяцев, п = 12/группу) после 10-миПовреждение головного мозга может само нутной ишемии, когда, препарат дают за 30 минут проявляться как изменения поведенческих реакдо ишемии Как показано в таблице 6, соединение ций В этом эксперименте подвергают испытанию 1 является превосходным при всех уровнях дозы, молодых взрослых песчанок (возраст 3 - 4 месяи обеспечивает полную защиту при высоких уровца), чтобы определить их способность выполнять нях, в то время как ФБН является лишь частично тест через 24 часа после события ишемии, как оно эффективным описано в примере 1 При сравнении с животными, у которых ишемия не вызывалась, когда животных не лечат, они совершают значительно больТаблица 6 ше ошибок Некоторым из подопытных животных вводят ФБН и соединение 1 Как подробно описаПредварительное 10 32 100 320 но в таблице 4, песчанки, получившие высокие долечение (мг/кг) 0,0 зы соединения 1, имеют уровень ошибок неотлиСолевой раствор 11 чимый от уровня ошибок животных без ишемии ФБН 42 50 75 92 ФБН является менее эффективным Это свидетеСоединение 1 50 75 100 100 льствует о том, что соединение 1 может защитить от потери временной/пространственной кратковременной памяти, следующей за ишемией (спустя 24 часа), проявляющейся в ошибках в испытании у молодых песчанок после 5-минутной ишемии Таблица 4 N=6 на группу Контроль Постишемическое ФБН Соединение 1 мг/кг/час в течении 24 часов 00 10 32 50 100 41 (-38) 37 6 (4 85) 29 8 1819 6,23 5 83 (7 27) (5 83) (71) (-49) 14,63 719 4 28 411 (3 81) (81) (-29) (19) Пример 7 Определяют способность соединения изобретения снижать инфарктный объем после ишемического события Как подробно показано в таблице 5, наблюдают, что хотя ФБН и соединение 1 оба являются эффективными при малых дозах, при высоких дозах соединение 1 дает наилучшую защиту, а ФБН является токсичным В таблице 5 приводится инфарктный объем, отслеживаемый в случае, когда проверяемое соединение і v спустя бОмин после средней церебральной закупорки, и затем в течение 24 часов, у мышей C57BL/6J Таблица 5 Инфарктный объем в мм'5 Постлечение 00 10 10 (мг/кг/час) Контроль, без 0 ишемии Солевой 23 раствор, ишемия (2) ФБН 17,7 138 Соединение 1 (2 8) 168 (17) (2-3) 127 (3 93) 100 Токсич н 83 (71) Пример 8 При этом исследовании соединение 1 и ФБН сравнивают по их способности защищать от лета Пример 9 Важным преимуществом соединения настоящего изобретения, при сравнении с известным в технике соединением - ФБН, является его заметно уменьшенная токсичность Как показано в таблице 7, у мышей C57BL / 6L наблюдают сильную летальность, вызванную изменением величины единичных і р доз нитрона ФБН показывает значительную токсичность при уровне дозы 560мг/кг Соединение 1 не проявляет токсичности при дозах примерно в двадцать раз больших Таблица 7 % выживающих п = 20 мышей ФБН Соединение 1 мг/кг 320 100 100 560 25 100 1000 3000 0 0 100 100 10000 0 100 Пример 10 Еще одним нежелательным побочным действием, которое наблюдают in vivo для нитронных ловушек радикалов, является снижение температуры тела Такая токсичность может иметь серьезные последствия для здоровья, и также может усложнить диагностику других состояний Как показывается на фиг 2 и фиг 4, соединение настоящего изобретения вводят мышам и песчанкам при таких высоких уровнях как 1000мг/кг без заметного падения температуры Напротив, известное соединение ФБН дает снижение температуры тела на 8°С при дозах, составляющих только 500мг/кг Пример 11 Проводят испытания соединения изобретения для определения его эффективности при лечении состояний, характеризуемых длительным низким окислительным давлением на центральную нервную систему и постепенной прогрессирующей потерей функции центральной нервной системы Эффективность проверяют на модели болезни Альцгеймера ("АД") Такая модель основана на следующем Последние исследования показали, что существуют связанные с возрастом увеличение окисления белков и потеря ферментативной активности в головном мозгу пожилых индивидуумов Как тканевые культуры фибробластов пожилых индивидуумов, так и эритроциты индивидуумов разного возраста показывают экспоненциаль 20 19 45964 ное возрастание содержания протеинкарбонила эффективность соединения изобретения при за(мера окисления белков) и снижение отметки ферщите центральной нервной системы от повреждементативной активности Окисление белков голония, вызываемого ударом вного мозга постепенно увеличивается с продолРезультаты, полученные при фокальной ишежительностью жизни индивидуума мии у крыс Роль обработки аномального амилоидного Проводят два опыта, чтобы определить эффепредшественника белка и метаболизма при АД тактивность соединения 1 при фокальной ишемии кже объясняется на ряде различных моделей Исна крысиной модели В этой модели крыс Sprague следования in vitro с применением эмбриональных Dawley (200 - 300г) длительно подвергают пермагиппокампальных нейронных и нейронных/глиальнентной закупорке средней артерии головного моных культур показали, что ВАР 1 - 40 продуцирует зга (МСАО), чтобы индуцировать фокальный удар цитотоксичность свыше продолжительного периСоединение 1 вводят после перманентной закупоода коинкубации Когда такой пептид инфузируют рки сначала в виде интраперитонеальной (і р) бов головной мозг крысы, продуцируются поврежделюсной дозы, а затем путем непрерывной инфуния Не которые из названных фрагментов расщезии в течении времени, оставшегося до 24 часов пления ВАР являются также нейротоксичными /напосле удара Используемые дозы соединения 1 пример, ВАР (25 - 35)/ Оказывается, что нейротоксоставляют либо 100мг/кг, і р, и затем сичность переносится как через механизм глута4,2мг/кг/час, і v, либо 10мг/кг, і р, и затем матных рецепторов, так и через механизм неглу0,42мг/кг/час, і v таматных рецепторов Исследования нейронных Крыс скарифицируют через 3суток после удакультур методами софокусной спектроскопии пора, ткани обрабатывают гистологически, испольказали, что воздействие ВАР (1 - 40) приводит в зуя методику с окрашиванием трифенилтетразорезультате к окислительному стрессу /дихлорфлулием, и количественно определяют инфарктный оросцеин и возрастание внутриклеточного свободобъем и область полного омертвления клеток, исного кальций - Fura - 2/ пользуя анализ подобия Показано, что фрагменты ВАР могут непосРезультаты этих экспериментов даются в граредственно инактивировать тутами нсинтетазу фическом изображении на фиг 5 и показывают, (GS) и креатинкиназу (СК) в экстрактах тканей и в что соединение 1 обеспечивает существенную закультивированных гиппокампальных нейронах и щиту, приблизительно 70%, в обоих опытах глиях (см фиг 4, А и В) На фиг 4, А и В, приводитСравнение с результатами, приведенными в ся связанная с дозой инактивация АР (25 - 35) глулитературе таминсинтетазы и креатинкиназы Получают цитоО подобных данных для соединения, не являзольные фракции из неокортекса песчанки, и ющегося соединением изобретения, а именно, для определяют ферментную активность Образцы пеФБН, недавно сообщалось Сао и Philhs (Brain ред испытаниями инкубируют в присутствии разResearch 664 267 - 272, 1994) При этих исследоличных концентраций пептида в течение Юмин ваниях крыс подвергают перманентной закупорке Заштрихованные значки представляют действие средней артерии головного мозга (МСАО) и закувстречающегося в природе фрагмента 25 - 35 Не порке общей сонной артерии ФБН вводят і р при заштрихованные кружки показывают, что обратная дозе 100мг/кг в различное время после удара последовательность (32 - 25) не влияет на фермеКрыс скарифицируют через 2 суток после удара, и нтативную активность Не заштрихованные треуопределяют количественно инфарктный объем, гольники показывают, что смешанная (scrambled) используя трифенилтетразолиевый краситель аминокислотная последовательность также не Когда ФБН вводят через 0,5, 5, 17, 29 и 41 час влияет на ферментативную активность, по сравнепосле удара, или через 5, 17, 29 и 41 час после нию с действием 25 - 35 Каждая точка представудара, инфарктный объем в каждом случае уменьляет собой среднее (+ / - ст откл ) из результатов шается приблизительно на 50% Кумулятивная до5 измерений Производное ВАР и другие клеточза введенного ФБН для достижения 50%-ной заные источники являются важным определяющим щиты как минимум в 4 раза выше количества соефактором инициирования и развития АД динения 1, требуемого для 70%-ной защиты Таким образом, соединение 1 значительно превосхоКак показывает фиг 4, С и Д, каждое из соедидит ФБН по возможности защиты на крысиной монений 1 и ФБН демонстрирует способность защидели фокальной ишемии, вызванной МСАО щать GS и СК от действия фрагментов ВАР Фиг 4, С и Д, представляет защитное действие коинкубаПример 13 ции цитозольных фракций с ВАР 25 - 35 (0,4мг/мл) В этом примере проводят оценку соединения в сочетании с различными концентрациями ФБН настоящего изобретения (соединение 1) на его (не заштрихованные кружки) или соединением 1 способность уменьшать вызванные окислением (заштрихованные кружки) Каждая точка представпобочные действия при противораковой терапии ляет собой среднее (+ / - ст откл ) из результатов Эксперименты с адриамицином 3 измерений Как можно видеть на фиг 4, С и Д, Адриамицин является широко применяемым соединение 1 дает полную защиту и фактически противораковым средством Известно, что он явдаже может реверсировать действие окисления ляется весьма эффективным, но также известно, Напротив, эффективность ФБН является весьма что он дает тяжелые побочные эффекты, проявляограниченной, асимптотически выравниваясь, по ющиеся в силу его склонности вызывать окислитесуществу, при неполной степени защиты льное нарушение К таким побочным эффектам относятся серьезные нарушения сердечной деятеПример 12 льности при высоких уровнях дозировки Такие поПроводят эксперименты, чтобы показать еще 22 21 45964 бочные действия часто ограничивают применение правлении уменьшенной летальности) Таким обэтого средства или ограничивают уровни дозировразом, сочетание соединения 1 с адриамицином ки, которые можно использовать, до уровней, кодает в результате заметное увеличение максиматорые ниже требуемых для достижения максимально переносимой дозы Такие более высокие дольной эффективности при опухолевом заболевазы находятся в интервале, в котором будут эффении ктивно уничтожаться опухоли, резистентные ко многим лекарственным средствам Осуществляют эксперименты, чтобы показать, что соединение настоящего изобретения является Сравнительные испытания эффективным для снижения побочного действия Предварительная обработка ФБН приводит в таких противораковых средств, как адриамицин, и результате к небольшому сдвигу вправо на диагпозволяет животным переносить более высокие рамме зависимости действия от дозы адриамицидозы адриамицина на В то время как дозу соединения 1 в сочетании с адриамицином можно увеличить до 300мг/кг, для Для проверки острого летального действия такого сочетания с ФБН существует верхний предадриамицина и предупреждения острой летальноел Доза ФБН в 100мг/кг дает небольшой седативсти посредством предварительной обработки доный эффект, и доза в 300мг/кг дает заметный сезами соединения 1 используют самцов мышей дативный эффект и некоторую общую токсичность C57BL / 6J и ДВА / 2J (35 - 40г) Мышам дают инъ(летальность 10 - 20%) Соединение 1 с адриамиекции либо солевого раствора, либо соединения цином не дает никакой токсичности при дозе сое1, за 30 минут до введения адриамицина Все инъдинения 1 до 300мг/кг екции интраперитонеальные Острая летальность адриамицина находится в интервале от 10 до Пример 14 Испытания на безопасность 30мг/кг В этих испытаниях находят, что Lflso для Проверяют соединение 1 и ФБН на их острую адриамицина составляет 25мг/кг для обоих родов токсичность на самцах крыс Sprague Dawley (200 Соединение 1 при дозе до 300мг/кг без лечения 300г) Соединения вводят і р при дозе 1000мг/кг адриамицином не влияет на выживаемость мыгруппам крыс по 6 особей Через 3 суток проверяшей того и другого рода ют летальность Соединение 1 летальности не вызывает, в то время как ФБН является летальным Предварительное введение от 30 до 100мг/кг для 5 из 6 крыс, используемых при этом испытанисоединения 1 дает соотнесенные с дозой сдвиги и Эти данные подтверждают те результаты, полуна диаграмме зависимости летальности от дозы ченные для песчанок, что соединение 1 намного адриамицина Рис б показывает результаты, побезопаснее ФБН лученные на мышах ДВА / 2J Доза соединения 1 в 100мг/кг вызывает 5-кратный сдвиг вправо (в насн 3 I Zn пыль, EtOH O2N-C-CH3 Уксусная кислота СН3 2-Метия-2-нитропропан ™/ сн 3 т-Бутилгидроксиламин И О н сн 3 I I но-м~с~сн а СН3 I I HO-N-e~CH3 сн 3 \-C-H МеОН, кипячение SO3Na Н NoOTS і 0 CH-i I Г С = N-C-СНз SO3Na a-ь 4-Формия-1,3-6ензолсульфоновая кислота 2,4-д исул ьфонил-а-фенил третбутил нитрон Фиг. 1 23 24 45964 Салин 40.0 о 38.0 с 38.0 ш ь 34.0 32.0 і і і 1 і і ЗО Є0 90 120 150 180 210 240 ВРЕМЯ (мин) Фиг. 2А 38.0 ЮОмг/кгФБН мышь 33.0 32.0 і і І і ! 1 1 f ЗО 60 90 120 150 180 210 240 ВРЕМЯ (мин) Фиг. 2В 38.0 мышь 0 ЮОмг/кг Соединение і 1 Г І ЗО 80 90 120 150 180 210 240 ВРЕМЯ (мин) Фіг. 2С Фиг. ЗА 25 26 45964 Фиг. ЗВ Взрослое животное (Y) 38.0 36.0 о с: 34.0 Ч 32.0 500 мг/кг Соединение I 30.0 28.0 1 І і I I \ ї ї і I -60-30 0 30 60 90120150180210 240 ВРЕМЯ (мин) Фиг. 3 С Взрослое животное (Y) 38.0 36.0 о 34.0 32 1 І "° ~ ЗОЛ 28.0 1ССЮмг/кг СоедимекиеI Т—| !—І—I 1 1 ГИ 60-30 0 30 60 90 120150180210 ВРЕМЯ (мин) Фиг. 3D АКТИ АКТИВНОСТЬ КРЁАТИНКИНАЗЫ