Спосіб індукування овуляції із застосуванням неполіпептидного модулятора рівня camp – інгібітора фосфодіестерази-4, та спосіб збирання овоцитів для запліднення in vitro

1. Спосіб індукування овуляції у самки, який включає введення в організм згаданої самки неполіпептидного модулятора рівня сАМР, який є інгібітором ізоформи фосфодіестерази-4. 2. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що неполіпептидний модулятор рівня сАМР вводять в організм самки перед лютеальною фазою овуляторного циклу цієї самки. 3. Спосіб за п. 2, який відрізняється тим, що додатково включає введення в організм самки засобу, який підвищує концентрацію фолікулостимулювального гормону в організмі самки, в період фолікулярної фази овуляторного циклу самки. 4. Спосіб за п. 3, який відрізняється тим, що згаданим засобом є фолікулостимулювальний гормон. 5. Спосіб за п. 3, який відрізняється тим, що згаданим засобом є кломіфен. 6. Спосіб за п. 3, який відрізняється тим, що згаданим засобом є селективний модулятор рецепторів естрогенів. 7. Спосіб за п. 3, який відрізняється тим, що згаданим засобом є інгібітор ароматази. 8. Спосіб за п. 3, який відрізняється тим, що згаданим засобом є інгібітор аналогічних стероїдогенних ферментів, який спричиняє послаблення загального продукування естрогенів. 9. Спосіб за п. 3, який відрізняється тим, що в організм згаданої самки для індукування овуляції перед лютеальною фазою овуляторного циклу самки додатково вводять також лютеїнізуючий гормон. UA (21) 20040705737 (22) 14.12.2001 (24) 25.09.2007 (86) PCT/EP01/14730, 14.12.2001 (46) 25.09.2007, Бюл. № 15, 2007 р. (72) Палмер Стівен , US, Теппер Марк , US, Маккена Шон , US, Макнеймі Майкл К., GB, Ешколь Аліза , CH (73) ЕПЛАЙД РІСЬОРЧ СИСТЕМЗ ЕРС ХОЛДІНГ Н.В., AN (56) WO 0147905 A, 05.07.2001 WO 0187287 A, 22.11.2001 WO 9955357 A, 04.11.1999 ZUSSMAN BARR Y D ET AL: "An overview of the pharmacokinetics of cilomilast (Ariflo(R)), a new, orally active phosphodiesterase 4 inhibitor, in healthy young and elderly volunteers." JOURNAL OF CLINICAL PHARMACOLOGY, vol. 41, no. 9, September 2001 (2001-09), pages 950-958, XP008006551 ISSN: 0091-2700 BRANNSTROM M ET AL: "CYCLIC AMP INDUCED OVUL ATION IN THE PERFUSED RAT OVAR Y AND ITS MEDIATION BY PROSTAGLANDINS" BIOLOGY OF REPRODUCTION, vol. 37, no. 5, 1987, pages 1047-1053, XP008006559 ISSN: 0006-3363 PETERSON C MATTHEW ET AL: "Interleukin-1-beta (IL-1-beta) modulates prostaglandin production and the natural IL-1 receptor antagonist inhibits ovulation in the optimally stimulated rat ovarian perfusion model." ENDOCRINOLOGY, vol. 133, no. 5, 1993, pages 2301-2306, XP008006552 ISSN: 0013-7227 TSAFRIRI A ET AL : "Oocyte maturation involves compartmentalization and opposing changes of cAMP levels in follicular somatic and germ cells: Studies using selective phosphodiesterase inhibitors." DEVELOPMENTAL BIOLOGY, vol. 178, no. 2, 1996, pages 393-402, XP001097137 ISSN: 0012-1606 2 (19) 1 3 80418 4 10. Спосіб за п. 3, який відрізняється тим, що в іл}етиламін (V-11294A; Napp Research Centre Ltd.), організм згаданої самки додатково вводять лютеїатизорам (Pfizer), 5-(3-циклопентилокси-4нізуючий гормон у зниженій концентрації порівняно метоксифеніл)піридин-2-карбоксамід (СР-353164; з відомими схемами для індукування овуляції пеPfizer), метил-3-[2,4-діоксо-3-бензил-1,3ред лютеальною фазою овуляторного циклу самдигідропіридино[2,3-d]піримідиніл]бензоат (CPки. 77059; Pfizer), CP-146523 (Pfizer), CP-293321 11. Спосіб за п. 3, який відрізняється тим, що в (Pfizer), CI-1044 (Pfizer), PD-189659 (Pfizer), CIорганізм згаданої самки для індукування овуляції 1018 (Pfizer), CP-220629 (Pfizer), 1-(3-нітрофеніл)перед лютеальною фазою овуляторного циклу 3-(4-піридилметил)-1,3-дигідропіридино[2,3самки додатково вводять також хоріонічний гонаd]піримідин-2,4-діон (RS-25344-000; Roche дотропін. Bioscience), мезопрам (Schering AG), N-(2,512. Спосіб за п. 3, який відрізняється тим, що в дихлор(3-піридил))(8-метокси(5організм згаданої самки додатково вводять хоріохіноліл))карбоксамід (D-4418; Chiroscience), T-2585 нічний гонадотропін у зниженій концентрації порів(Tanabe Seiyaku), 4-[4-метокси-3-(5няно з відомими схемами для індукування овуляції фенілпентилокси)феніл]-2-метилбензойна кислоперед лютеальною фазою овуляторного циклу та, XT-044 (Hokunku University), XT-611 (Kanzawa самки. University), WAY-126120 (Wyeth-Ayerst 13. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що Pharmaceuticals Inc.), 1-аза-10-(3неполіпептидний модулятор рівня сАМР вводять в циклопентилокси-4-метоксифеніл)-7,8-диметил-3організм згаданої самки в момент часу, який відоксаспіро[4.5]дец-7-ен-2-он (WAY-122331; Wyethповідає моменту введення в організм згаданої Ayerst Pharmaceuticals Inc.), [(3S)-3-(3самки hCG або LH за відомою схемою індукування циклопентилокси-4-метоксифеніл)-2-метил-5овуляції. оксопіразолідиніл]-N-(3-піридилметил)карбоксамід 14. Спосіб за п. 13, де неполіпептидний модулятор (WAY-127093В; Wyeth-Ayerst Pharmaceuticals Inc.), рівня сАМР вводять спільно з hCG або LH. PDB-093 (Wyeth-Ayerst Pharmaceuticals Inc.), 315. Спосіб за п. 13, де неполіпептидний модулятор (1,3-діоксобензо[с]азолін-2-іл)-3-(3рівня сАМР вводять окремо і не вводять спільно з циклопентилокси-4-метоксифеніл)-пропанамід hCG або LH. (CDC-801; Celgene Corp.), CC-7085 (Celgene 16. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що Corp.), CDC-998 (Celgene Corp.), NCS-613 (CNRS), інгібітор фосфодіестерази вибраний з групи, до CH-3697 (Chiroscience), CH-3442 (Chiroscience), якої входять: CH-2874 (Chiroscience), CH-4139 (Chiroscience), роліпрам, арофілін (Almirall), Ariflo® (SmithKline RPR-114597 (Rhône-Poulenc Rorer), RPR-122818 Beecham), рофлуміласт (Byk Gulden), денбуфілін (Rhône-Poulenc Rorer), (7аS,7R)-7-(3(SmithKline Beecham), RS-17597 (Synte x), SDZциклопентилокси-4-метоксифеніл)-7а-метилISQ-844 (Novartis), 4-[2,3-біс(гідроксиметил)-6,72,5,6,7,7а-пентагідро-2-азапіролізин-3-он, GWдіетоксинафтил]-1-(2-гідроксіетил)-гідропіридин-23600 (Glaxo-Wellcome), KF-19514 (Kyowa Hakko он (T-440; Tanabe Seiyaku), метил-3-[6-(2Н-3,4,5,6Kogyo Co Ltd.), CH-422 (CeUtech Group), CH-673 тетрагідропіран-2-ілокси)-2-(3(CeUtech Group), CH-928 (CeUtech Group), D-22888 тієнілкарбоніл)бензо[b]фуран-3-іл]пропаноат (Ва(Asta Medica), AWD-12-232 (Asta Medica), YMуеr), 2-метил-1-[2-(метилетил)(8-гідропіразоло[1,558997 (Yamanouchi), IC-485 (ICOS Corp.), KW-4490 а]піридин-3-іл)]пропан-1-он (ібуділаст; Kyorin), N(Kyowa Hakko Kogyo Co. Ltd.), YM-976 (3,5-дихлор(4-піридил))(3-циклопентилокси-4(Yamanouchi), Sch-351591 (CeUtech Group), AWDметоксифеніл)карбоксамід (RP 73401; Rhône12-343 (Asta Medica), N-(3,5-дихлор(4-піридил))-2Poulenc Rorer), (1Е)-1-аза-2-(3-циклопентилокси-4{1-[(4-фторфеніл)метил]-5-гідроксііндолін-3-іл}-2метоксифеніл)проп-1-еніламіноат (PDA-641; оксоацетамід (AWD-12-281; Asta Medica), ібудиAmerican Home Products), 4-ціан-4-(3ласт (Kyorin Pharmaceutical Co. Ltd.), циломіласт циклопентилокси-4-метоксифеніл)циклогексан(SmithKline Beecham), BAY-19-8004 (Вауеr), метилкарбонова кислота (SB207499; SmithKline 3-{2-[(4-хлорфеніл)карбоніл]-6Beecham), ципамфілін (SmithKline Beecham), 5-[3гідроксибензо[b]фуран-3-іл}пропаноат, 5-метил-4((2S)біцикло[2.2.1]гепт-2-илокси)-4-метоксифеніл][(4-метилтіофеніл)карбоніл]-4-імідазолін-2-он, 5,61,3-діазапергідроїн-2-он (СР-80633; Pfizer), 1-(3діетоксибензо[b]тіофен-2-карбонова кислота нітрофеніл)-3-(3-піридилметил)-1,3(Tibenelast) та 4-(3-бромфеніл)-1-етил-7дигідропіридино[2,3-d]піримідин-2,4-діон (RSметилгідропіридино[2,3-b]піридин-2-он (YM-58897; 25344; Synte x), 4-((1R)-1-феніл-2-(4-піридил)етил)Yamanouchi). 2-циклопентилокси-1-метоксибензол (CDP-840; 17. Спосіб за п. 1, де інгібітор фосфодіестерази Celltech), (3-{[(3-циклопентилокси-4вибраний з групи, до якої входять: метоксифеніл)метил]аміно}піразол-4-іл)метан-1теофілін, ізобутилметилксантин, АН-21-132, Orgол, Ro-20-1724 (Roche Holding AG), пікламіласт, 30029 (Organon), Org-20241 (Organon), Org-9731 доксофілін (Instituto Biologico Chemioterapico ABC (Organon), зардаверин, вінпоцетин, EHNA (МЕР-1), SpA), RPR-132294 (Rhône-Poulenc Rorer), RPRмілринон, сигуазодан, запринаст, SK+F 96231, 117658A (Rhône-Poulenc Rorer), L-787258 (Merck толафентрин (Byk Gulden), філамінаст (WyethFrosst Canada), E-4021 (Eisai Co. Ltd.), GF-248 Ayerst Pharmaceuticals). (Glaxo WeUcome), SKF-107806 (SmithKline 18. Спосіб за п. 1, де інгібітор фосфодіестерази Beecham), IPL-4088 (Inflazyme Pharmaceuticals вибраний з групи, до якої входять: Ltd.), {3-[(3-циклопентилокси-4цис-4-ціано-4-(3-циклопентилокси)-4метоксифеніл)метил]-8-(метилетил)пурин-6метоксифеніл)-циклогексан-1-карбонова кислота; 5 80418 6 3-(циклопентилокси)-N-(3,5-дихлорпіридин-4-іл)-419. Спосіб збирання овоцитів для запліднення in метоксибензамід; гідрохлорид 2-(4-(6,7-діетоксиvitro, який включає збирання овоцитів від самки, у 2,3-біс(гідроксиметил)нафталін-1-іл)піридин-2-іл)якої овуляція була індукована способом за будь4-(3-піридин)фталазин-1(2Н)-ону; 7-бензиламіно-6яким з пп. 1-18. хлор-2-піперазино-4-піролідиноптеридин. Цей винахід стосується способів підвищення фертильності у самок шляхом індукування овуляції із застосуванням неполіпептидного модулятора рівнів сАМР. Овуляція - це процес вивільнення яйцеклітини або яйцеклітин з яєчників. Часовий режим овуляції в межах менструального циклу має першорядне значення для запліднення. Добре відомо, що фолікули набувають здатності до овуляції після росту та визрівання; ці процеси стимулюються гонадотропінами гіпофіза. За ріст фолікула відповідальним є переважно фолікулостимуляційний гормон (FSH), а овуляцію стимулює лютеїнізуючий гормон (LH). Цей координований процес стимульованого гонадотропінами визрівання фолікулів забезпечує нормальний стан яйцеклітин при овуляції. Відповідно підготовлена яйцеклітина придатна до запліднення сперматозоїдом через кілька годин після овуляції. Овуляція є точно визначеним в часі процесом, який регулюється стимуляцією яєчників гонадотропінами гіпофіза і модулюється ростовими та біохімічними реакціями яєчників на стимуляцію гонадотропінами (наприклад, стероїдогенними реакціями, секрецією інгібіну тощо). На протязі нормального менструального циклу у жінок ці гормони вивільнюються та діють у циклічному режимі. Менструальний цикл можна за функціональними ознаками розділити на три фази: фолікулярну, овуляторну та лютеальну. Фолікулярний період починається наприкінці лютеальної фази попереднього циклу, в якому заплінення не мало місця, перед менструацією або одночасно з її початком. Цикл починається з тимчасового підвищення рівня FSH у крові, яке стимулює розвиток групи фолікулів у яєчниках. Розмір фолікулів, стимульованих до росту, становить приблизно 5мм у діаметрі. При нормальному менструальному циклі на протязі фолікулярної фази розвивається звичайно один великий, або домінантний, фолікул, котрий і зростає до визрівання. У людей розмір фолікула, який вважається готовим до овуляції, становить приблизно 15мм у діаметрі або більше. Другою подією великого значення, яка відбувається в яєчниках під час фолікулярної фази, є те, що у зернистих клітинах яєчникових фолікулів утворюються рецептори LH, і ці клітини набувають підвищеної чутливості до LH. Секреція естрадіолу та естрону з яєчників спочатку зростає повільно, паралельно зі збільшенням діаметра фолікула та підвищенням чутливості фолікула до LH. Відносно підвищені рівні естрогену та інгібіну спричиняють пригнічення секреції гормону вивільнення гонадотропіну (GnRH) із гіпоталамуса та секреції гонадотропіну з гіпофіза. Продукування естрогену досягає максимуму за день до піка LH, і нейроендокринною реакцією на підвищений рівень естрогену та поступово зростаючі концентрації прогестерону є преовуляторне виділення гонадотропінів, яке обговорюється нижче. На протязі овуляторної фази має місце зміна нейроендокринної реакції на естрогени та прогестерон. У цей момент циклу підвищений рівень естрогенів спричиняє різке зростання рівнів FSH та LH у сироватці крові; внаслідок позитивного зворотного зв'язку з гіпоталамусом, естроген тепер стимулює швидке зростання рівня GnRH та подальшого вивільнення FSH та LH з гіпофіза. Цей викид гонадотропінів викликає завершення визрівання фолікулів та спричиняє розрив домінантного, або граафового, фолікула та вивільнення яйцеклітини через приблизно 16-24год після піка LH. В період після преовуляторного викиду рівень естрадіолу в сироватці крові поступово знижується, а рівень прогестерону в плазмі починає підвищува тися. Після овуляції постовуляторні яєчникові фолікули під впливом LH зазнають лютеїнізації і утворюють жовте тіло (лютеальна фаза). Діагностичними маркерами лютеальної фази менструального циклу є помітне підвищення секреції прогестерону жовтим тілом, та перетворення матки як реакція на прогестерон. З продукуванням прогестерону в лютеальній фазі пов'язане менш виразне підвищення рівнів естрогенів у сироватці крові. В той час як рівні прогестерону та естрогенів зростають, рівні LH та FSH знижуються на протязі більшої частини лютеальної фази. Наприкінці лютеальної фази менструального циклу, в якому запліднення не мало місця, відбувається регрес жовтого тіла, і рівень FSH починає зростати для ініціювання росту фолікулів у наступному циклі. FSH та LH відрізняються один від одного здатністю стимулювати відповідно розвиток фолікулів та овуляцію. Відомо, що обидва гормони стимулюють підвищення концентрації внутрішньоклітинного циклічного аденозинмонофосфату (сАМР). Показано, що агенти, які імітують сАМР, наприклад, форсколін або стабільні аналоги сАМР, в дослідженнях in vitro спричиняють ефекти, подібні до ефектів FSH, у зернистих клітинах із незрілих фолікулів та ефекти, подібні до ефектів LH, у клітинах зі зрілих фолікулів. Хоча як для FSH, так і для LH запропоновані альтернативні внутрішньоклітинні механізми дії, вважається, що реакцією на обидва гонадотропіни є стимуляція виділення сАМР. В такому разі підвищення рівня сАМР пов'язане з розвитком та визріванням фолікулів, а індукування овуляції залежить від типу клітин та присутності або відсутності відповідних рецепторів. Дійсно, було показано, що у мишей з дефіцитом конкретної фосфодіестерази овуляція порушується, і чутливість зернистих клітин до гонадотропінів 7 80418 8 знижена. За другим аспектом, цей винахід пропонує заСпособи лікування неплідності, які застосовустосування непептидного модулятора рівня сАМР, ються на даний час у клініці, включають вплив на за варіантом, якому віддається перевага, інгібітора деякі з регуляторних подій, описаних вище. Одним PDE, за варіантом, якому віддається більша переіз засобів, які стимулюють ріст фолікулів та застовага, інгібітора PDE4, для індукування овуляції у совуються для лікування ановуляції, є кломіфен. пацієнтки. Кломіфен є нестероїдним антиестрогеном, який За третім аспектом, цей винахід пропонує законкурує з естрогенами на їхніх паратопах. Вважастосування непептидного модулятора рівня сАМР, ється, що кломіфен зв'язується з рецепторами за варіантом, якому віддається перевага, інгібітора естрогенів у гіпоталамусі та гіпофізі та блокує неPDE, за варіантом, якому віддається більша перегативний зворотній зв'язок, на який діють яєчникові вага, інгібітора PDE4, для виготовлення лікарськоестрогени. Результатом є підвищений вихід гонаго засобу для індукування овуляції у пацієнтки в дотропінів (FSH та LH) на ранній стадії фолікулярсхемі лікування, за якою перед індукуванням овуної фази. Дія кломіфену полягає в підвищенні рівляції індукується визрівання фолікулів кломіфеном ня ендогенного FSH у сироватці крові та або інгібітором ароматази, за варіантом, якому покращенні росту та визрівання фолікулів. Подавіддається перевага, інгібітором ароматази, вибльший вплив або ендогенного LH, або екзогенного раним із групи, до якої входять YM-511, летрозол, LH/CG (хоріонічного гонадотропіну) індукує овуляфадрозол та анастрозол, за варіантом, якому відцію у пацієнток. дається більша перевага, з групи, до якої входять Окрім кломіфену, жінок лікують, застосовуючи летрозол та анастрозол. схеми індукування овуляції, які включають викориЗа четвертим аспектом, цей винахід пропонує стання комерційно доступних препаратів людських застосування непептидного модулятора рівня гонадотропінів, в тому числі фолікулостимуляційсАМР, за варіантом, якому віддається перевага, ного гормону (FSH) та лютеїнізуючого гормону інгібітора PDE, за варіантом, якому віддається (LH) або хоріонічного гонадотропіну (CG). Усі ці більша перевага, інгібітора PDE4, для індукування засоби вперше були одержані шляхом очищення з овуляції у пацієнтки в схемі лікування, за якою сечі вагітних жінок, а більш сучасним способом їх перед індукуванням овуляції індукується визріванодержання є рекомбінантна технологія. Як правиня фолікулів кломіфеном або інгібітором ароматало, таке лікування має високу ефективність віднози, за варіантом, якому віддається перевага, інгібісно стимулювання фолікулогенезу та стероїдогетором ароматази, вибраним із групи, до якої незу. Ускладнення при такому лікуванні виникають входять YM-511, летрозол, фадрозол та анастровнаслідок того, що згадані препарати та схеми зол, за варіантом, якому віддається більша перездатні гіперстимулювати розвиток фолікулів та вага, з групи, до якої входять летрозол та анастроїхнє визрівання. У деяких пацієнток може виникати зол. гіперстимуляція яєчників, наслідком якої може буЗа п'ятим аспектом, винахід пропонує комти множинна овуляція та подальша багатоплідплект для застосування при індукуванні овуляції, ність. Гіперстимуляція яєчників не тільки може який включає в себе дозу непептидного модулятозагрожувати життю матері, але й, як правило, прира рівня сАМР, за варіантом, якому віддається зводить до народження дітей зі зниженою масою перевага, інгібітора PDE, за варіантом, якому відтіла, які потім потребують інтенсивного догляду. дається більша перевага, інгібітора PDE4, та інВважається, що основні ускладнення, які приписуструкції з його застосування для індукування овуються індукованій гонадотропінами гіперстимуляції ляції. та багатоплідною вагітністю, виникають внаслідок За шостим аспектом, винахід пропонує комдовготривалого ефекту hCG (хоріонічного гонадоплект для застосування при індукуванні овуляції тропіну людини). Крім того, застосування гонадотта/або в технології сприяння репродукції (ART), ропінів в схемах індукування овуляції може після який включає в себе достатні добові дози FSH ін'єкцій спричинити побічні реакції, які можуть мати та/або сполуки, що має ефект, подібний до ефекту як локальний, так і системний характер. Таким FSH, за варіантом, якому віддається перевага, чином, розроблення схем індукування овуляції із кломіфену або інгібітора ароматази, за варіантом, застосуванням пероральних активних речовин із якому віддається більша перевага, інгібітора аропом'якшеною активністю, подібною до дії гонадотматази, вибраного з групи, до якої входять YMропінів, мало б значний позитивний ефект у порів511, летрозол, фадрозол та анастрозол, для спринянні зі способами лікування, при яких застосовучинення визрівання фолікулів, та достатню для ються високоактивні препарати для ін'єкцій. Ще індукування овуляції дозу непептидного модулятобільше значення мало б розроблення схем індукура рівня сАМР, за варіантом, якому віддається вання овуляції, при яких досягалася б менша інтеперевага, інгібітора PDE, за варіантом, якому віднсивність гіперстимуляції яєчників і, отже, забездається більша перевага, інгібітора PDE4, та інпечувалася б більша безпека для матері та струкції із застосування комплекту при індукуванні кращий стан здоров'я новонароджених. овуляції або в ART. За першим аспектом, цей винахід пропонує За сьомим аспектом, цей винахід пропонує зазастосування непептидного модулятора рівня стосування непептидного модулятора рівня сАМР, сАМР, за варіантом, якому віддається перевага, за варіантом, якому віддається перевага, інгібітора інгібітора PDE (фосфодіестерази), за варіантом, PDE, за варіантом, якому віддається більша переякому віддається більша перевага, інгібітора вага, інгібітора PDE4, для індукування овуляції у PDE4, для виготовлення лікарського засобу для пацієнтки в схемі лікування, за якою для індукуіндукування овуляції у пацієнтки. вання овуляції застосовуються також hCG або LH, 9 80418 10 та hCG або LH застосовуються у зменшеній дозі Таким чином, цей винахід передбачає застопорівняно з кількістю hCG або LH, нормально несування неполіпептидного модулятора рівня сАМР обхідною для індукування овуляції у тієї самої паяк низькомолекулярного лікарського засобу (націєнтки. приклад, інгібітора фосфодіестерази), який ввоЦей винахід стосується способу підвищення диться в організм перорально, а не шляхом ін'єкфертильності у самок, який включає введення в ції, яка є необхідним способом введення протеїнів організм самки неполіпептидного модулятора рівв існуючи х схемах індукування овуляції. Перораня циклічного аденозинмонофосфату (сАМР). В льне введення виключає гострі та системні побічні іншому аспекті, винахід передбачає конкретне ефекти, пов'язані з такими ін'єкціями. В першу червведення в організм неполіпептидного модулятора гу, згаданий низькомолекулярний лікарський засіб рівня сАМР для індукування овуляції домінантного є ефективним при індукуванні овуляції і може зазрілого фолікула перед лютеальною фазою овулястосовуватися окремо або в комбінації чи без комторного циклу. До неполіпептидних модуляторів бінації з LH або CG, і, альтернативно, з нижчими рівня сАМР, яким віддається перевага, належать концентраціями LH або CG порівняно з використоінгібітори фосфодіестерази, зокрема, інгібітори вуваними на цей час, і, отже, зменшує імовірність ізоформ фосфодіестерази-4. гіперстимуляції яєчників та пов'язаних із нею ризиХоча вплив інгібіторів PDE на стимульоване ків. Таким чином, можна запобігти багатоплідності LH вивільнення стероїдів із зернистих клітин in та ускладнень, загрозливих для матері та новонаvitro є відомим, цей винахід розкриває два нових роджених. Крім того, цей винахід передбачає мовиявлених факти. По-перше, інгібітори PDE не жливість більш раннього діагностичного тестуванпокращують стимульований FSH ріст in vivo, неня на вагітність у порівнянні з існуючими схемами зважаючи на загальновизнану роль сАМР в мехаіндукування овуляції, які включають застосування нізмах дії як FSH, так і LH у клітинах. Крім того, CG. наведено свідоцтва, що інгібітори PDE покращуСпособи лікування за цим винаходом корисні ють стимульоване гонадотропінами вивільнення для лікування неплідності у людей, але також у стероїдів in vitro, що додатково ілюструє новий інших ссавців (наприклад, у коней та сільськогосвплив інгібіторів PDE на овуляцію, яка залежить подарьких тварин, наприклад, у великої рогатої від LH. По-друге, інгібітори PDE збільшують коефіхудоби, овець, корів тощо), та в інших видів, націєнт овуляції in vi vo у відсутності доданих LH або приклад, риб та птахів (наприклад, курей тощо). hCG. З урахуванням активності інгібіторів PDE при Короткий опис фігур пероральному застосуванні, цей другий виявлений На Фіг.1 схематично зображена узагальнена факт забезпечує основу для першої потенціально схема індукування овуляції у людей. безін'єкційної схеми індукування овуляції, оскільки На Фіг.2 показано у вигляді стовпчастої діагінгібітори PDE можуть застосовуватися в поєднанрами вплив інгібіторів фосфодіестерази (тобто ні з відомими схемами, як описано нижче. сполуки 1 та сполуки 2) на підвищення внутрішЦей винахід також передбачає стимуляцію ньоклітинного рівня сАМР у зернистих клітинах in розвитку фолікулів перед застосуванням неполіvitro. пептидного модулятора рівня сАМР, яка включає На Фіг.3 показано у вигляді стовпчастої діагвведення в організм пацієнтки засобу, який підвирами вплив інгібітора фосфодіестерази (тобто щує концентрацію FSH на протязі фолікулярної сполуки 1) на визрівання фолікулів у пацюків in фази овуляторного циклу пацієнтки. Підвищення vi vo. рівня FSH за цим винаходом стосується тільки На Фіг.4 у вигляді стовпчастої діаграми покарозвитку та визрівання фолікулів, але не індукузано вплив інгібітора фосфодіестерази (тобто сповання овуляції. До засобів, яким віддається перелуки 1) на овуляцію у пацюків in vivo у присутності вага, належать сам FSH, кломіфен, селективні CG. модулятори рецепторів естрогенів, інгібітори ароНа Фіг.5 у вигляді стовпчастої діаграми покаматази та селективні модулятори нейроендокринзано вплив інгібітора фосфодіестерази (тобто споного регулювання продукування FSH. луки 1) на овуляцію у пацюків in vivo у присутності За ще одним аспектом, винахід передбачає та у відсутності CG. спільне введення в організм неполіпептидного На Фіг.6 у вигляді стовпчастої діаграми покамодулятора рівня сАМР та LH або хоріонічного зано вплив інгібітора фосфодіестерази (тобто спогонадотропіну (CG) перед лютеальною фазою луки 2) на овуляцію у пацюків in vivo у присутності овуляторного циклу самки. Таке спільне введення та у відсутності CG. можна здійснювати послідовно або одночасно, а На Фіг.7 у вигляді стовпчастої діаграми покатакож однаковими або різними способами (напризано вплив інгібітора фосфодіестерази (тобто споклад, парентерально та/або перорально). Крім луки 2) на овуляцію після перорального та підшкітого, винахід передбачає застосування нижчих рного введення. концентрацій LH або CG у порівнянні з концентраНа Фіг.8 у вигляді стовпчастої діаграми покаціями, які застосовуються за існуючими схемами зано вплив інгібітора PDE сполуки 3 на овуляцію in індукування овуляції, і зниження, таким чином, vi vo після перорального та підшкірного введення. імовірності гіперстимуляції яєчників. На Фіг.9 у вигляді стовпчастої діаграми покаКрім того, цей винахід передбачає застосузано вплив інгібітора PDE сполуки 4 на овуляцію in вання неполіпептидного модулятора рівня сАМР vi vo у присутності та у відсутності субефективної як лікарського засобу для заміни LH або hCG при дози hCG. збиранні овоцитів для запліднення in vitro або для На Фіг.10 у вигляді стовпчастої діаграми покапідвищення ефективності дії LH або hCG. зано вплив інгібітора PDE сполуки 2 на овуляцію 11 80418 12 та фертильність. радіолу та інгібіну В під впливом граафова фоліІ. Визначення кула, що розвивається. Як правило, подані нижче слова або вирази Термін "перед лютеальною фазою" означає вживаються в описі, прикладах та формулі винаперіод менструального циклу перед переходом від ходу у значеннях, що відповідають поданим вифолікулярної фази, котра регулюється естрогеназначенням. ми, до лютеальної фази, що регулюється прогес"Введення в організм" означає доставку лікартероном. Рівні естрогенів перед лютеальною фаського засобу в організм самки. В контексті цього зою, як правило, перевищують або дорівнюють винаходу цей термін охоплює доставку неполіпеп150пг/мл на фолікул для фолікула діаметром тидного модулятора рівня сАМР та/або засобу, 16мм, при цьому діаметр фолікула, як правило, не який підвищує концентрацію FSH. Більш детально менше ніж 14мм. Ці критерії не є абсолютними і значення цього терміну описані в розділі "Фармаваріюють від пацієнтки до пацієнтки. В контексті цевтичні композиції" цього опису. цього винаходу та з точки зору моменту введення Термін "овуляція" стосовно до цього винаходу неполіпептидного модулятора рівня сАМР, неполіозначає процес вивільнення яйцеклітини або яйпептидний модулятор рівня сАМР можна вводити цеклітин з яєчників. При наближенні середини цив організм самки в момент часу, який відповідає клу відбувається різкий зріст рівня естрогенів, пісвідомій схемі індукування овуляції, за якою в оргаля якого відбувається викид LH та, меншою мірою, нізм згаданої самки звичайно вводяться hCG або FSH. Ці зміни індукують овуляцію домінантного LH. фолікула. Овуляція полягає в швидкому збільшенТермін "овуляторний цикл" або "менструальні розміру фолікула з подальшим висуванням фоний цикл" означає циклічну послідовність подій, які лікула над поверхнею кори яєчника. Нарешті, розвідбуваються протягом характерного для даного рив фолікула спричиняє викид овоцитного виду періоду часу, яка включає ріст та розвиток комплексу. Потім залишок домінантного фолікула фолікулів, їх активізацію, селекцію, домінування, перетворюється в жовте тіло. овуляцію та утворення й вмирання жовтого тіла. Термін "ановуляція" означає відсутність овуФункційно згаданий цикл можна підрозділити на ляції. три фази: фолікулярну, овуляторну та лютеальну. Термін "неполіпептидний модулятор рівня Цей цикл може зватися також менструальним циксАМР" стосується сполук, які в повному обсязі не лом. складаються з амінокислот, незалежно від глікозиТермін "індукування овуляції" означає процес, дування, і прямим або непрямим шляхом спричив якому поліпептид(и) та/або синтетична хімічна няють зростання внутрішньоклітинного рівня речовина застосовуються з метою викликати овусАМР. Такі сполуки можуть спричинити підвищенляцію у самок, які в іншому разі є ановуляторними; ня рівня сАМР шля хом стимуляції синтезу сАМР результатом цього процесу є індукування розриву або пригнічення його розкладу, або ж обома цими фолікула та овуляція здатних дозапліднення овошляхами. Прикладами модуляторів, які інтенсифіцитів. Індук ування овуляції не охоплює попередніх кують синтез сАМР, є активатори аденілциклази, подій на протязі овуляторного циклу, які включанаприклад, форсколін. Прикладами модуляторів, ють визрівання та розвиток фолікулів. які послаблюють розклад сАМР, є інгібітори фосТермін "гіперстимуляція яєчників" стосується фодіестерази, наприклад, теофілін. фармакологічного втручання в овуляторний або Термін "самка" означає особу або особину жіановуляторний менструальний цикл. Це втручання ночої статі певного виду, в організм якої вводяться викликає визрівання множинних фолікулів, наслідлікарські засоби за цим винаходом. Це визначення ком якого є кодомінування кількох фолікулів та охоплює людей, інших ссавців та інші види, напринаявність кількох здатних до запліднення овоцитів. клад, риб та свійських птахів. Термін "фолікул" означає заповнений рідиною Термін "інгібітор фосфодіестерази" стосується пухирець, що оточує яйцеклітину; цей пухирець хімічних сполук, які блокують або пригнічують фомістить також зернисті клітини. сфодіестерази (PDE), які інактивують відповідні Термін "розвиток фолікула" означає поступоциклічні нуклеотиди-мішені (тобто сАМР та cGMP) вий ріст та розвиток яєчникових фолікулів, зокрешляхом гідролітичного розщеплення зв'язку 3'ма, під час фолікулярної фази овуляторного цикфосфодіефір у, результатом чого є пасивне нагролу, результатом якого є активізація та домінування мадження специфічних циклічних нуклеотидів. фолікула, призначеного для овуляції. Інгібітори можуть бути неселективними і діяти на Термін "фолікулостимуляційний гормон (FSH) всі ізоформи фосфодіестерази або селективними та його ізоформи" стосується гормону, який видівідносно конкретних ізоформ. Ці сполуки описані ляється гіпофізом та стимулює ріст яєчникових нижче. фолікулів, та ізоформ FSH, описаних, наприклад, в Термін "ізоформи фосфодіестерази" стосуєтьпатенті США №5,087,615, включеного до цього ся сімейства ізоферментів або ізоформ, відповідаопису шляхом посилання. льних за метаболізм або розклад внутрішньокліТермін "селективні модулятори рецепторів естинних вторинних месенджерів, сАМР та cGMP. трогенів" стосується хімічних сполук або поліпепСпецифічні ізоформи можуть мати високоселектитидів, які діють як антагоністи рецепторів естрогевну клітинну та субклітинну локалізацію. Прикланів на рівні гіпоталамуса та гіпофіза та як агоністи дами ізоформ фосфодіестерази є PDE3 та PDE4. на рівні матки. Прикладами таких модуляторів моТермін "фолікулярна фаза" означає першу чажуть бути тамоксифен, ралоксифен, тореміфен, стину менструального циклу, яка характеризується кломіфен та дролоксифен. Джерело - Endocrinolпоступовим підвищенням рівнів циркулюючих естogy, 1999, 138(12):5476-5484 - включено до цього 13 80418 14 опису шляхом посилання. Термін "засіб, що підвищує концентрацію FSH" Термін "інгібітори ароматази" стосується хімічозначає будь-яку композицію речовин, протеїн або них сполук або поліпептидів, які блокують або присинтетичну хімічну сполуку, яка, будучи введена в гнічують активність ароматази, котра є ферменорганізм самки, підвищує рівень концентрації FSH том, що перетворює андрогени в естрогени. у сироватці крові прямим або непрямим шляхом, Прикладами інгібіторів ароматази є летрозол, анатобто шляхом введення FSH як такого або засобу, строзол та ворозол. Джерела: 1) J. of Endocrinolякий стимулює ендогенне продукування FSH або ogy, 2000 Feb., 164(2):225-238; і 2) J. of Steroid Bioпригнічує його ендогенний розклад. Визначення chemistry and Molecular Biology, 1997 April, 61(3-6): цього виразу та такого засобу охоплює сполуки, які 157-166, включено до цього опису шля хом посиможуть не підвищувати концентрацію FSH, але лання. мають біологічну функцію та активність фолікулосТермін "аналогічні стероїдогенні ферменти" тимуляційного гормону. охоплює будь-який фермент, який бере участь у II. Принципи індукування овуляції каталізі біохімічних реакцій, результатом яких є Проблеми неадекватності або невідповідності синтез естрогенів та прогестерону, в тому числі 3рівнів гонадотропінів як причини овуляторної дисфункції відомі з 1960-х років. Клінічна ефективність b-гідроксистероїд-дегідрогенази; до інгібіторів цьозастосування різноманітних препаратів гонадотрого ферменту належать даідзеїн, геністеїн, біочанін А та формононетин. Джерело, J. of Steroid Bioпінів була пропорційна до кількості введеного FSH. Перші одержані результати свідчили, що екзогенchemistry and Molecular Biology, 1996 April, ний LH не є необхідним для адекватного фолікуло58(1):95-101, включено до цього опису шляхом генезу при індукуванні овуляції. Проте виявилося, посилання. що жінки, які одержували тільки екзогенний FSH, Термін "кломіфен" означає 2-[4-(2-хлор-1,2діфенілетеніл)фенокси]-N,N-діетилетанамін та не здатні продукувати фолікулярний естрадіол в адекватній кількості для індукування овуляції. Вийого солі. явилося, що присутність щонайменше деякої кільТермін "лютеїнізуючий гормон" означає горкості екзогенного або ендогенного LH має важливе мон, який виділяється гіпофізом і виконує подвійну значення для індукування овуляції у людей. На функцію: викликає вивільнення яйцеклітини з домінантного фолікула та стимулює секрецію прогеФіг.1 схематично зображено узагальнену схему індукування овуляції. Пацієнтці вводять препарат стерону з жовтого тіла. FSH в кількості 75МО на добу протягом перших 7 Термін "знижені концентрації" означає конценднів. В кінці 7-го дня виконують ультразвукове скатрації введеного засобу, знижені у порівнянні зі нування для оцінки діаметра фолікулів та вимірюстандартними концентраціями введених засобів. В контексті цього винаходу в організм пацієнтки ввоють рівень естрадіолу в сироватці крові. Якщо діаметр фолікулів менше ніж 12мм, то подвоюють дять нижчі концентрації LH або CG, ніж за відомидозу FSH і повторно виконують ультразвукове ми схемами індукування овуляції. сканування через інші 5-7 днів. Пацієнтки з фоліТермін "відомі схеми індукування овуляції" означає сучасні способи індукування овуляції, які кулами діаметром ³15мм одержують овуляторну включають застосування кломіфену, гонадотропідозу hCG у вигляді болюса. нів (тобто FSH, LH або CG) або комбінації цих заIII. Узагальнена схема індукування овуляції собів для сприяння фолікулогенезу та індукованій Індукування овуляції являє собою рівною міовуляції у ановуляторних самок. Ці схеми варіюрою мистецтво та науку. Незважаючи на значну ють стосовно до часового режиму, частоти ввекількість систематизованих методик лікування, дення та концентрації введених засобів. Це визнажодний з підходів або конкретних способів не є чення охоплює модифікації відомих схем, якщо однозначно правильним. Проте застосовуються вони вимагають введення hCG або LH у певний деякі принципи, які забезпечують основу безпечмомент часу в період застосування схеми індукуного та ефективного лікування. Слід зазначити, вання овуляції. До цього опису включено шляхом однак, що описані нижче критерії індукування овупосилання способи лікування жіночої неплідності, ляції подано тільки як приклади і можуть варіювастимуляції фолікулогенезу та індукування овуляції, ти в широких межах залежно від клініки, стану паописані в таких монографіях: "Репродуктивна енцієнтки та мети лікування. докринологія, хірургія та технологія" [Reproductive Перший цикл включає, як правило, щоденне Endocrinology, Surgery, and Technology, Vol.1 and введення FSH, починаючи з 4-7-го дня після при2, Editors: E.Y. Adashi, J.A. Rock and Z. Rosenwaks, пинення кровотечі. Виконується моніторинг росту Lippincott-Raven Publ., Philadelphia, 1996] та "Сута реакції фолікулів шляхом ультразвукового дочасна практика терапії жіночої неплідності" [Feслідження та визначення рівня естрогенів. Адекваmale Infertility Therapy Current Practice, Editors: Z. тна стимуляція фолікулів досягається звичайно за Shogam, CM. Howies and H.S. Jacobs, Martin Dunitz 7-14 днів безперервного застосування FSH. ЛікуLtd., London, 1999]. вання FSH протягом менше ніж 8 днів пов'язане з Термін "хоріонічний гонадотропін" означає гліпідвищенням коефіцієнта спонтанного викидня у копротеїновий гормон, біологічно та імунологічно вагітних пацієнток. подібний до гіпофізного LH. При нормальній вагітПісля досягнення достатнього ступеня розвитності CG продукується плацентою і може бути вику фолікулів (два фолікули діаметром 16-18мм у користаний як діагностичний маркер вагітності за сукупності з поступовим зростанням рівня естроознакою його підвищеної концентрації у сироватці генів у сироватці крові до 500-1000пг/мл) вводять крові. Абревіатура hCG означає хоріонічний гонаhCG (5000 або 10000МО). Момент введення hCG дотропін людини. має важливе значення, оскільки основні усклад 15 80418 16 нення, що пов'язані з індукованою гонадотропінагія, хірургія та те хнологія" [Reproductive Endocriми гіперстимуляцією та багатоплідною вагітністю, nology, Surgery, and Technology, Vol.1 and 2, Ediймовірно, виникають внаслідок надмірної тривалоtors: E.Y. Adashi, J.A. Rock and Z. Rosenwaks, сті дії hCG. Хоча період напіввиведення hCG стаLippincott-Raven Publ., Philadelphia, 1996] та "Суновить приблизно 8год, його можна виявити в крочасна практика терапії жіночої неплідності" [Feві пацієнтки протягом 7-10 діб після ін'єкції і на цій male Infertility Therapy Current Practice, Editors: Z. основі поставити неправильний діагноз вагітності Shogam, CM. Howies and H.S. Jacobs, Martin Dunitz як успішного результату лікування. Після введення Ltd., London, 1999]. hCG партнерам повідомляють, що вони повинні IV. Способи за цим винаходом мати статеві стосунки найближчої ночі та ще один Цей винахід стосується способу індукування або два рази протягом наступних 48год. овуляції, який включає введення в організм самки Фундаментальне правило відносно введення неполіпептидного модулятора рівня сАМР у схемі гонадотропіну полягає в тому, що кожний цикл індукування овуляції, де згаданий модулятор залікування має бути індивідуалізованим, контролюстосовують для підвищення ефективності або для ватися та коригуватися відповідним чином. Монізаміни введення hCG (або LH), які звичайно ввоторинг необхідний не тільки для підвищення коедять перед лютеальною фазою індукованого або фіцієнтів овуляції та вагітності, але й для природного овуляторного циклу. зменшення ризику сильної гіперстимуляції яєчниМодулятор можна вводити окремо або спільно ків та її потенціальних наслідків та багатоплідних з hCG (або LH), одночасно або послідовно з цими вагітностей. засобами, а також однаковими або різними шляЦя мета досягається шляхом частого визнахами (наприклад, парентерально або перорально). чення рівня естрадіолу в плазмі та сироватці крові За іншим аспектом, винахід передбачає спільта ультразвуковим дослідженням яєчників. Рівні не одночасне або послідовне введення неполіпепестрадіолу, як правило, корелюють із кількістю тидного модулятора рівня сАМР та LH або CG фолікулів, що ростуть, але не обов'язково з кількіперед лютеальною фазою овуляторного циклу стю зрілих фолікулів. Застосування рівнів естрадісамки. Крім того, оскільки вважається, що основні олу як маркера зрілості фолікулів може в разі приускладнення, що пов'язані з індукованою гонадотсутності великої кількості дрібних фолікулів ропінами гіперстимуляцією та багатоплідною вагіпризвести до невірного висновку про зрілість фотністю, ймовірно, виникають внаслідок надмірної лікулів, наслідком чого може стати передчасне тривалості дії hCG, винахід передбачає введення введення hCG. Оскільки ріст фолікула безпосерев організм пацієнтки знижених концентрацій LH дньо корелює з визріванням яйцеклітини, то оцінка або CG у порівнянні з концентраціями, які застососереднього діаметра фолікулів ультразвуковим вуються у відомих схемах індукування овуляції, і, методом може бути кращим індикатором зрілості таким чином, зниження ймовірності гіперстимуляфолікулів при визначенні моменту введення hCG. ції яєчників і, отже, запобігання негативним ефекТому рівні естрогенів мають застосовуватися для там, пов'язаним із таким станом: багатоплідності, оцінки ранніх стадій розвитку фолікулів як індикамалій масі тіла новонароджених та ускладненням тор реакції на гонадотропін, а для оцінки кількості зі здоров'ям матері. та розміру фолікулів, що визрівають, слід застосоСлід відзначити, що введення в організм невувати ультразвук. поліпептидного модулятора рівня сАМР не сприМетою лікування в більшості випадків є забезчиняє терапевтичного впливу на визрівання та печення максимальної можливості одноплідної розвиток фолікулів на протязі овуляторного циклу. вагітності при одночасному зниженні ризику виниТаким чином, цей винахід стосується способу кнення синдрому гіперстимуляції. Виявлено, що індукування овуляції, який включає введення в оптимальними є рівні естрадіолу в межах від організм самки неполіпептидного модулятора рів1000пг/мл до 1500пг/мл, проте реальні рівні моня циклічного аденозинмонофосфату (сАМР). Нежуть варіювати залежно від використовуваного поліпептидні модулятори рівня сАМР прямим або лабораторного методу та досвіду лікаря. Ризик непрямим шляхом спричиняють зростання внутрігіперстимуляції збільшується при підвищених рівшньоклітинного рівня сАМР. Такі сполуки можуть нях естрадіолу. Як правило, якщо рівень естрадіоспричинити підвищення рівня сАМР шляхом стилу в сироватці крові перевищує 2000пг/мл, hCG муляції синтезу сАМР або пригнічення його розслід вводити дуже обережно або відкласти і дати кладу, або ж обома цими шляхами. Прикладами фолікулам регресувати. При гіпогонадотропному модуляторів, які інтенсифікують синтез сАМР, є гіпогеніталізмі ризик тяжкої гіперстимуляції при активатори аденілциклази, наприклад, форсколін. рівні естрадіолу понад 2400пг/мл становить 5% у Прикладами модуляторів, які послаблюють розциклах із завагітнінням та 1% у циклах без завагітклад сАМР, є інгібітори фосфодіестерази, наприніння. Крім того, оскільки гіперстимуляція має тенклад, теофілін. До неполіпептидних модуляторів денцію корелювати з присутньою кількістю фолірівня сАМР, яким віддається перевага, належать кулів, рішення про відкладення застосування hCG інгібітори фосфодіестерази, зокрема, інгібітори може базуватися на виявленні 10 або більше фоізоформ фосфодіестерази-4. лікулів, що розвиваються, при ультразвуковому За ще одним аспектом, винахід передбачає дослідженні. конкретне введення в організм неполіпептидного До цього опису включено шляхом посилання модулятора рівня сАМР перед лютеальною фазою способи лікування жіночої неплідності, стимуляції овуляторного циклу як засобу для підвищення фолікулогенезу та індукування овуляції, описані в ефективності hCG або для заміни hCG за схемою таких монографіях: "Репродуктивна ендокринолоіндукування овуляції, в якій hCG вводять, як пра 17 80418 18 вило, наприкінці фолікулярної фази, але перед лютеальною фазою овуляторного циклу. Моментом введення неполіпептидного модулятора рівня сАМР, якому віддається перевага, є час перед лютеальною фазою овуляторного циклу. Винахід передбачає також стимуляцію розвитку фолікулів перед застосуванням неполіпептидде R1 є циклопентил або циклогексил, R2 є ного модулятора рівня сАМР перед індукуванням етил, R3 є гр упа карбонової кислоти, складного овуляції, яка включає введення в організм пацієнтефіру або первинного аміду, гідроксиметил або ки засобу, який підвищує концентрацію фолікулоскарбоніл, і R4 є ціаногрупа; тимуляційного гормону (FSH) на протязі фолікуляСполуки, розкриті в патентах США №5,710,160 рної фази овуляторного циклу пацієнтки. До та №5,710,170 [Merck Frost Canada, Inc.]: засобів, яким віддається перевага, належать сам FSH, кломіфен, селективні модулятори рецепторів естрогенів, інгібітори ароматази та засоби, які не є FSH, але мають біологічну функцію та активність FSH. Таким чином, введення описаних у цьому документі засобів у певний момент часу відносно росту та визрівання фолікула заявлено як спосіб удосконалення процесу овуляції та подальшого де R вибраний з групи, до якої входять Н, СОзапліднення, яке має відбутися для забезпечення (4-мепіперазиніл), СО-(4-піролідиніл), CHNOH, 5вагітності. тетразоліл, (СН)ОНСН3, СОСН3, CONHSO2CH3, Слід відзначити, що в разі, коли неполіпептидCONHSO2Ph, CONHSO2CF3, CONHSO2C6H 4CH3(o), ний модулятор рівня сАМР застосовується окремо, CH2CONHSO2Ph, CH2CONHSO2CF3, COH(CF3) 2 та а не спільно з hCG, цей винахід передбачає можSO2NHCOC6H4CH3(o). ливість більш раннього діагностичного тестування Сполуки, розкриті в WO 98/2007 (Darwin на вагітність у порівнянні з існуючими схемами Discovery), прикладами яких є: індукування овуляції, які включають застосування CG. V. Інгібітори фосфодіестерази Як інгібітори фосфодіестерази, придатні для застосування як неполіпептидні модулятори рівня Сполуки, розкриті в WO 98/14432 (Janssen сАМР, в способах за цим винаходом можуть бути Pharm NV): застосовані практично будь-які нетоксичні інгібітори PDE, в тому числі селективні та неселективні інгібітори PDE4. До придатних неселективних інгібіторів PDE4 та комбінованих інгібіторів PDE3/PDE4 належать теофілін, ізобутилметилксантин, АН-21-132, Org-30029 (Organon), Org-20241 де R1 є Η або CH3, R2 є СН3 або CHF2, R3 є ци(Organon), Org-9731 (Organon), зардаверин, вінпоклопентил, інданіл, циклопропілметил, Ph(CH2)5, цетин, EHNA (MEP-1), мілринон, сигуазодан, заТГФ. принаст, SK+F 96231, толафентрин (Byk Gulden), Сполуки, розкриті в WO 98/18796 (Novartis): філамінаст (Wyeth-Ayerst Pharmaceuticals). Особлива перевага віддається селективним інгібіторам, специфічним щодо PDE4. Численні відомі селективні інгібітори PDE4 належать до одного із шести класів хімічних структур: аналогів роліпраму, ксантинів, нітраквазонів, бензофуранів, де X є ΝΗ2, ОН, NHPh, NPh2, Ph, C6H4CO 2H та нафталінів та хінолінів. Прикладами аналогів ролΥ є СІ, CN, NO 2. Сполуки, розкриті в WO 97/49702 шраму є імідазолідинони та піролізидинони - міме(Pfizer, Inc.), прикладом яких є: тики ролшраму та Ro 20-1724, а також бензамідні похідні роліпраму, наприклад, RP 73401 (Rhone Poulenc Rorer). До аналогів ксантину належать денбуфілін (SmithKline Beecham) та арофілін (Almirall). Аналогами нітраквазону є, наприклад, СР77,059 (Pfizer) та ряд пірид[2,3(і]піридазин-5-онів (Synte x). До аналогів бензофурану належить ЕРСполуки, розкриті в WO 97/48697 (Rhone 685479 (Bayer). До аналогів нафталіну належить ТPoulenc Rorer): 440 (Tanabe Seiyaku); до аналогів хіноліну належить SDZ-ISQ-844 (Novartis). Більша перевага віддається переліченим нижче сполукам: Сполуки, розкриті в WO 97/42174 (Pfizer, Inc.): 19 80418 20 алкоксикарбоніл або аміногрупа; R55 є водень, галоген, аміногрупа або С 1-С4-алкіл; R56 є водень або галоген; R57 є водень або галоген; n є 1 або 2; m є 1 або 2, причому сума n та m може мати тільки значення 2 або 3; солі цих сполук та N-оксиди піридинів або їхні солі. Сполуки, розкриті в патенті США №6,316,472 1 (Merck Frost Canada): де R є циклопентан, циклопропіл, Рh(СН2)3, бензил або Н, R2 є СН3, бензил, тозил або Н, R3 є СН3 або СІ, А є СН, С-алкіл, О або N, і В є С або N. Сполуки, розкриті в WO 98/02440 (Bayer AG): де R1 є СН3, ОН, О-аліл, ОСН3, С2Н5, пропіл або ацетил, R2 є 3-Сl, 2,4-Сl2, 3-NO2, 3-Вr, 4-F, 4-Cl, 2,4-(СН3)2 або 2,4-(СН3О)2. Сполуки, розкриті в WO 97/44337, WO 97/44036, WO 97/44322 (Chiroscience Ltd.): де R1 є СН3, етил або пропіл, R2 та R3 незалежно один від одного вибрані з групи, до якої входять Н, факультативно заміщений арил або гетероарил, і R4 та R5 незалежно один від одного вибрані з групи, до якої входять ацил, алкіл (факультативно заміщений ОН або галогеном), арил, гетероарил та ацил, заміщений арилом або гетероарилом. Сполуки, розкриті в патенті США №6,303,789 (Byk Gulden Lomberg Chemical Fabrik GmbH): де R1 є С1-C6-алкокси-, С3-С7-циклоалкокси-, С3-С7-циклоалкілметокси-, бензилоксигрупа або С1-С4алкоксигрупа, повністю або переважно заміщена фтором; R2 є водень; R3 є водень; або R2 та R3 спільно утворюють метиленову гр упу; R4 є водень, C1-C8-алкіл, С1-С6-алкокси-С 1-С4-алкіл, С1С6-алкілтіо-С 1-С4-алкіл, С1-С6-алкілсульфініл-С 1С4-алкіл, С1-С6-алкілсульфоніл-C1-С4-алкіл, C1-C8алкілкарбоніл, С3-С7-циклоалкіл, С3-С7циклоалкілметил, феніл-С 1-С4-алкіл або С1-С4алкіл, повністю або переважно заміщений фтором; R5 є феніл, піридил, феніл, заміщений R51, R52 та R53, або піридил, заміщений R54, R55, R56 та R57, де R51 є гідроксил, галоген, ціаногрупа, карбоксил, трифторметил, С1-С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупа, С1-С4-алкоксикарбоніл, С1-С4-алкілкарбоніл, С1-С4алкілкарбонілокси-, аміно-, моно- або ди-С 1-С4алкіламіно- або С1-С4-алкілкарбоніламіногрупа; R52 є водень, гідроксил, галоген, аміногрупа, трифторметил, С1-С4-алкіл або C1-С4-алкоксигрупа; R53 є водень, галоген, С1-С4-алкіл або С 1-С4алкоксигрупа; R54 є гідроксил, галоген, ціаногрупа, карбоксил, С1-С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупа, С1-С4 або їхні фармацевтично прийнятні солі або гідрати, де: Υ означає N або N-оксид; у є 0, 1 або 2; R1 та R2 незалежно один від одного вибрані з групи, до якої входять Н, С1-С6-алкіл та галоген-С 1С6-алкіл; R3 та R4 незалежно один від одного вибрані з групи, до якої входять Η та С 1-С6-алкіл, або R3 та R4, приєднані до одного й того самого атому вуглецю, спільно являють собою карбонільний атом кисню, або R3 та R4, приєднані до різних атомів вуглецю, в комбінації з атомами вуглецю, до яких вони приєднані, разом із будь-якими атомами, розташованими між ними, утворюють насичену 5-, 6або 7-членну карбоциклічну гр упу; R5 та R6 незалежно один від одного вибрані з групи, до якої входять Н, С1-С6-алкіл, галоген-С 1С6-алкіл та CN; n є ціле число від 0 до 6; Аr1 є ароматична група. Особлива перевага віддається переліченим нижче сполукам: роліпрам, арофілін (Almirall), Ariflo® (SmithKline Beecham), рофлуміласт (Byk Gulden), денбуфілін (SmithKline Beecham), RS-17597 (Synte x), SDZ-ISQ-844 (Novartis), 4-[2,3біс(гідроксиметил)-6,7-діетоксинафтил]-1-(2гідроксіетил)-гідропіридин-2-он (T-440; Tanabe Seiyaku), метил-3-[6-(2Н-3,4,5,6-тетрагідропіран-2ілокси)-2-(3-тієнілкарбоніл)бензо[b]фуран-3іл]пропаноат (Bayer), 2-метил-1-[2-(метилетил)(8гідропіразоло[1,5-а]піридин-3-іл)]пропан-1-он (ібуділаст; Kyorin), N-(3,5-дихлор(4-піридил))(3циклопентилокси-4-метоксифеніл)карбоксамід (RP 73401; Rhöne-Poulenc Rorer), (1Е)-1-аза-2-(3циклопентилокси-4-метоксифеніл)проп-1еніламінооат (PDA-641; American Home Products), 4-ціан-4-(3-циклопентилокси-4метоксифеніл)циклогексан-карбонова кислота (SB207499; SmithKline Beecham), ципамфілін (SmithKline Beecham), 5-[3-((2S)біцикло[2.2.1]гепт2-ілокси)-4-метоксифеніл]-1,3-діазапергідроїн-2-он (СР-80633; Pfizer), 1-(3-нітрофеніл)-3-(3піридилметил)-1,3-дигідропіридино[2,3d]піримідин-2,4-діон (RS-25344; Syntex), 4-((1R)-1феніл-2-(4-піридил)етил)-2-циклопентилокси-1метоксибензол (CDP-840; Celltech), (3-{[(3циклопентилокси-4метоксифеніл)метил]аміно}піразол-4-іл)метан-1 21 80418 22 ол, Ro-20-1724 (Roche Holding AG), пікламіласт, для ініціювання овуляції після росту та визрівання доксофілін (Instituto Biologico Chemioterapico ABC фолікулів, індукованого FSH. В межах обсягу виSpA), RPR-132294 (Rhöne-Poulenc Rorer), RPRнаходу знаходиться також застосування інгібітора 117658A (Rhöne-Poulenc Rorer), L-787258 (Merck PDE, за варіантом, якому віддається перевага, Frosst Canada), E-4021 (Eisai Co. Ltd.), GF-248 інгібітора PDE4, для ініціювання овуляції після (Glaxo Wellcome), SKF-107806 (SmithKnne росту та визрівання фолікулів, індукованого сполуBeecham), IPL-4088 (Inflazyme Pharmaceuticals кою або препаратом, що діє як FSH. Замісником Ltd.), {3-[(3-циклопентилокси-4або підсилювачем ефективності лікування FSH, метоксифеніл)метил]-8-(метилетил)пурин-6яким віддається особлива перевага, є інгібітор іл}етиламін (V-11294A; Napp Research Centre Ltd.), ароматази, наприклад, YM-511 (Yamanouchi), летатізорам (Pfizer), 5-(3-циклопентилокси-4розол (Novartis), анастрозол (AstraZeneca) або метоксифеніл)піридин-2-карбоксамід (CP-353164; фадрозол (Novartis). У схемі технології сприяння Pfizer), метил-3-[2,4-діоксо-3-бензил-1,3продуктивності (ART), якій віддається перевага, де дигідропіридино[2,3-d]піримідиніл]бензоат (CPбажано одержати множинні овоцити для заплід77059; Pfizer), CP-146523 (Pfizer), CP-293321 нення in vitro, пацієнткам вводять інгібітор арома(Pfizer), CI-1044 (Pfizer), PD-189659 (Pfizer), CIтази (наприклад, 2,5-5мг/добу або приблизно таку 1018 (Pfizer), CP-220629 (Pfizer), 1-(3-нітрофеніл)кількість летрозолу або анастрозолу) в період від 3-(4-піридилметил)-1,3-дигідропіридино[2,33-го до 7-го дня (або приблизно в такий період) d]піримідин-2,4-діон (RS-25344-000; Roche або в період від 3-го до 8-го дня (або приблизно в Bioscience), мезопрам (Schering AG), N-(2,5такий період) менструального циклу в комбінації дихлор(3-піридил))(8-метокси(5спільно з приблизно 50-225МО/добу, за варіантом, хіноліл))карбоксамід (D-4418; Chiroscience), T-2585 якому віддається перевага, 50-150МО/добу, FSH, (Tanabe Seiyaku), 4-[4-метокси-3-(5починаючи в період від приблизно 3-го до приблифенілпентилокси)феніл]-2-метилбензойна кислозно 7-го дня менструального циклу, і продовжують та, ХТ-044 (Hokuriku University), XT-611 (Kanzawa застосування FSH до наявності щонайменше двох University), WAY-126120 (Wyeth-Ayerst домінантних фолікулів середнього діаметра приPharmaceuticals Inc.), 1-аза-10-(3близно 16мм або більше. В цей момент вводять циклопентилокси-4-метоксифеніл)-7,8-диметил-3інгібітор PDE, за варіантом, якому віддається пеоксаспіро[4.5]дец-7-ен-2-он (WAY-12233 l; Wyethревага, інгібітор PDE4, в дозі, достатній для ініціюAyerst Pharmaceuticals Inc.), [(3S)-3-(3вання овуляції. циклопентилокси-4-метоксифеніл)-2-метил-5За альтернативним варіантом, інгібітор аромаоксопіразолідиніл] -N-(3-піридилметил)карбоксамід тази можна застосовувати як єдиний засіб стиму(WAY-127093В; Wyeth-Ayerst Pharmaceuticals Inc.), ляції росту фолікула (тобто у відсутності FSH) із PDB-093 (Wyeth-Ayerst Pharmaceuticals Inc.), 3використанням підвищеної дози інгібітора арома(1,3-діоксобензо[с]азолін-2-іл)-3-(3тази (наприклад, 2-10мг/добу летрозолу або анациклопентилокси-4-метоксифеніл)-пропанамід строзолу) та/або подовження періоду застосуван(CDC-801; Celgene Corp.), CC-7085 (Celgene ня (наприклад, у дні 3-8, 3-9 або 3-10). При Corp.), CDC-998 (Celgene Corp.), NCS-613 (CNRS), виявленні достатньої зрілості фолікула за даними CH-3697 (Chiroscience), CH-3442 (Chiroscience), ультразвукового дослідження вводять інгібітор CH-2874 (Chiroscience), CH-4139 (Chiroscience), PDE, за варіантом, якому віддається перевага, RPR-114597 (Rhone-Poulenc Rorer), RPR-122818 інгібітор PDE4, в дозі, достатній для ініціювання (Rhone-Poulenc Rorer), (7aS,7R)-7-(3овуляції. Ця схема дозволяє відбирати множинні циклопентилокси-4-метоксифеніл)-7а-метиловоцити при уникненні ін'єкцій, оскільки всі засто2,5,6,7,7а-пентагідро-2-азапіролізин-3-он, GWсовані засоби можна вживати перорально. 3600 (Glaxo-Wellcome), KF-19514 (Kyowa Hakko При індукуванні овуляції бажано забезпечити Kogyo Co Ltd.), CH-422 (Celltech Group), CH-673 вивільнення лише однієї яйцеклітини. Ця мета, (CeUtech Group), CH-928 (Celltech Group), D-22888 згідно з винаходом, досягається застосуванням (Asta Medica), AWD-12-232 (Asta Medica), YMFSH для стимуляції росту та визрівання фолікулів 58997 (Yamanouchi), IC-485 (ICOS Соrp.), KW-4490 із подальшим введенням інгібітора PDE, за варіан(Kyowa Hakko Kogyo Co. Ltd.), YM-976 том, якому віддається перевага, інгібітора PDE4, (Yamanouchi), Sch-351591 (Celltech Group), AWDдля ініціювання овуляції. В межах обсягу винаходу 12-343 (Asta Medica), N-(3,5-дихлор(4-піридил))-2знаходяться також схеми індукування овуляції, де {1-[(4-фторфеніл)метил]-5-гідроксііндолін-3-іл окрост та визрівання фолікулів індукуються заміннисоацетамід (AWD-12-281; Asta Medica), ібуділаст ком FSH, наприклад, інгібітором ароматази. (Kyorin Pharmaceutical Co. Ltd.), циломіласт За схемою індукування овуляції, якій віддаєть(SmithKHne Beecham), BAY-19-8004 (Bayer), меся перевага, пацієнтці вводять дозу інгібітора аротил-3-{2-[(4-хлорфеніл)карбоніл]-6матази (наприклад, 2,5-5мг/добу летрозолу або гідроксибензо[b]фуран-3-іл}пропаноат, 5-метил-4анастрозолу) в період приблизно від 3-го до при[(4-метилтіофеніл)карбоніл]-4-імідазолін-2-он, 5,6близно 7-го дня або з приблизно 5-го до приблиздіетоксибензо[b]тіофен-2-карбонова кислота но 9-го дня менструального циклу (у відсутності (Tibenelast), та 4-(3-бромфеніл)-1-етил-7FSH). Альтернативним варіантом є введення одніметилгідропіридино[2,3-b]піридин-2-он (YM-58897; єї дози інгібітора ароматази (наприклад, 5-30мг Yamanouchi). летрозолу або анастрозолу, за варіантом, якому За одним варіантом здійснення, винахід певіддається перевага, 10мг або 20мг) на 3-й або 4-й редбачає застосування інгібітора PDE, за варіандень менструального циклу. Овуляцію ініціюють том, якому віддається перевага, інгібітора PDE4, відповідною дозою інгібітора PDE, за варіантом, 23 80418 24 якому віддається перевага, інгібітора PDE4. Така дисперсій для ін'єкцій. До носіїв, придатних для схема забезпечує методику індукування овуляції, внутрішньовенного введення, належать фізіологіщо не вимагає ін'єкцій. чний сольовий розчин, бактеріостатична вода, VI. Фармацевтичні композиції Cremophor EL™ (BASF, Parcipany, N.J.) та сольоНеполіпептидні модулятори рівні сАМР та завий розчин із фосфатним буфером (PBS). У всіх соби, що підвищують концентрацію FSH в організвипадках композиція має бути стерильною та домі самки (які звуться також "активними сполукасить текучою для легкого введення за допомогою ми"), за цим винаходом, а також їхні похідні, шприца. Вона має бути стабільною в умовах вигофрагменти, аналоги та гомологи можна включати товлення та зберігання та захищеною від забрудв фармацевтичні композиції, придатні для застонення мікроорганізмами, наприклад, бактеріями та сування. Такі композиції містять, як правило, актигрибками. Носієм може бути розчинник або диспевні сполуки та фармацевтично прийнятний носій. У рсійне середовище, що містить, наприклад, воду, значенні, вживаному в цьому описі, термін "фаретанол, поліол (наприклад, гліцерин, пропіленглімацевтично прийнятний носій" охоплює будь-які коль та рідкі поліетиленгліколі тощо) та відповідні розчинники, дисперсійні середовища, покриття, суміші цих речовин. Відповідну текучість можна бактерицидні та фунгіцидні засоби, ізотонізуючі забезпечити, наприклад, шляхом застосування засоби та засоби для затримання поглинання топокриттів, наприклад, лецитину, забезпечення що, сумісні з фармацевтичним застосуванням. необхідного розміру частинок у випадку дисперсії Придатні розчинники описані в останньому виданні та застосування поверхнево-активних речовин. монографії "Фармацевтичні науки" (Remington's Запобігання впливу мікроорганізмів досягається Pharmaceutical Sciences), що є стандартним довідзастосуванням різноманітних антибактеріальних ником у галузі, який включено до цього опису шлята протигрибкових засобів, наприклад, парабенів, хом посилання. Прикладами таких носіїв або розхлорбутанолу, фенолу, аскорбінової кислоти, тиріджувачів, яким віддається перевага, є вода, меросалу тощо. В багатьох випадках доцільно сольовий розчин, розчин Рінгера, розчин декстровводити в композиції ізотонізуючі засоби, напризи та 5-процентний розчин сироваткового альбуміклад, цукри, поліспирти, наприклад, маніт, сорбіт, ну людини, але не тільки ці речовини. Можна вихлорид натрію. Пролонговане поглинання компокористовувати ліпосоми, а також неводні носії, зицій для ін'єкцій можна забезпечити введенням в наприклад, нелеткі олії. Застосування таких серекомпозицію засобу, що сповільнює всмоктування, довищ та засобів для фармацевтично активних наприклад, моностеарату алюмінію та желатину. речовин добре відомі в галузі. Мається на увазі їх Стерильні розчини для ін'єкцій можна виготовзастосування в композиціях, за винятком випадків, ляти шляхом введення активної речовини в необколи будь-яке звичайне середовище або засіб є хідній кількості у відповідний розчинник, в разі ненесумісними з активною сполукою. Композиції мообхідності спільно з одним або кількома жуть містити також додаткові активні сполуки. інгредієнтами, переліченими вище, з подальшою Фармацевтичні композиції за цим винаходом стерилізацією фільтруванням. Дисперсії, як правиготовляють у формах, сумісних з обраним шлявило, виготовляють шляхом введення активної хом введення в організм. Прикладами шляхів вверечовини у стерильний носій, який містить основне дення є парентеральний (наприклад, внутрішньодисперсійне середовище та інші необхідні інгредівенний, внутрішньошкірний, підшкірний), єнти з числа речовин, перелічених вище. У випадпероральний, інгаляційний, черезшкірний (місцеку стерильних порошків для приготування стеривий), черезоболонковий та ректальний. Розчини льних розчинів для ін'єкцій способами або суспензії, застосовувані для парентерального, виготовлення є вакуумне сушіння та сублімаційне внутрішньошкірного або підшкірного застосування, сушіння, при цьому порошок активного інгредієнта можуть містити такі компоненти: стерильний розз домішкою будь-якого бажаного додаткового інгріджувач, наприклад, воду для ін'єкцій, сольовий редієнта одержують із попередньо стерилізованорозчин, нелеткі олії, поліетиленгліколі, гліцерин, го фільтруванням розчину відповідних речовин. пропіленгліколь або інші синтетичні розчинники; Композиції для перорального застосування, як протимікробні засоби, наприклад, бензиловий правило, містять інертний розріджувач або їстівспирт або метилпарабен; антиоксиданти, наприний носій. Вони можуть бути вміщені в желатинові клад, аскорбінову кислоту або бісульфіт натрію; капсули або спресовані в таблетки. Для пероралькомплексоутворювачі, наприклад, етилендіамінтеного терапевтичного застосування активну сполутраоцтову кислоту; буфери, наприклад, ацетати, ку можна поєднати з наповнювачами та вживати у цитрати або фосфати, та засоби для встановленформі таблеток, пастилок або капсул. Пероральні ня тонічності, наприклад, хлорид натрію або деккомпозиції можна також виготовляти з використанстрозу. Значення pH можна встановлювати за доням рідкого носія для застосування у формі рідин помогою кислот або основ, наприклад, для полоскання рота, при цьому сполуку в рідкому хлористоводневої кислоти або гідроксиду натрію. носії вводять у порожнину рота, ополіскують рот і Парентеральні препарати можуть бути вміщені в випльовують або ковтають композицію. Композиампули, одноразові шприци або багатодозові флація може містити фармацевтично сумісні в'яжучі кони, виготовлені зі скла або пластмаси. засоби та/або допоміжні речовини. Таблетки, піДо фармацевтичних композицій, придатних люлі, капсули, пастилки тощо можуть містити для введення шляхом ін'єкцій, належать стерильні будь-які нижчевказані інгредієнти або сполуки водні розчини (якщо активні речовини є водорозаналогічного характеру: в'яжучу речовину, напричинними) або дисперсії та стерильні порошки для клад, мікрокристалічну целюлозу, трагантову канегайного виготовлення стерильних розчинів або медь або желатин; наповнювач, наприклад, крох 25 80418 26 маль або лактозу, дезінтегратор, наприклад, альякі не впливають негативно на активні сполуки гінову кислоту, Примогель або кукурудзяний крохвнаслідок реакцій з ними та не є шкідливими для маль; змащувальний засіб, наприклад, стеарат пацієнта, що їх вживає. До придатних фармацевмагнію або Стеротекс; ковзний засіб, наприклад, тично прийнятних носіїв належать вода, сольові колоїдний діоксид кремнію: підсолоджувач, наприрозчини, спирт, рослинні олії, поліетиленгліколі, клад, сахарозу або сахарин; або смакоароматичну желатин, лактоза, амілоза, стеарат магнію, тальк, домішку, наприклад, м'ятну, апельсинову або мекремнієва кислота, в'язкий парафін, парфумерні тилсаліцилат. олії, моно- та дигліцериди жирних кислот, складні Для введення способом інгаляції сполуки поефіри мінеральних жирних кислот, гідроксиметилстачаються у формі аерозольних спреїв із контейцелюлоза, полівінілпіролідон тощо, але не тільки нерів або розподілювачів, що знаходяться під тисці речовини. Фармацевтичні композиції можна стеком, які містять відповідний пропелент, наприклад, рилізувати та, за бажанням, змішувати з допоміжгаз, як-от, діоксид водню, або розпилювачів. ними речовинами, наприклад, змащувальними Системне застосування можна здійснювати засобами, консервантами, стабілізаторами, змочутакож черезоболонковим або черезшкірним сповачами, емульгаторами, солями для впливу на собами. Для черезоболонкового або черезшкірноосмотичний тиск, буферами, барвниками, смакоаго введення в композиції використовують пенетрароматичними речовинами та/або ароматизаторанти, придатні для подолання відповідного бар'єру. ми тощо, які не впливають негативно на активні Такі пенетранти, як правило, відомі в галузі. До сполуки внаслідок реакцій з ними. них належать, наприклад, для черезоболонкового Особливо доцільним є виготовлення пероразастосування - детергенти, солі жовчних кислот та льних або парентеральних композицій у формі похідні фузидової кислоти. Черезоболонкове введозованих одиниць для спрощення застосування дення можна здійснювати шляхом застосування та додержання рівномірності дозування. Термін назальних спреїв або супозиторіїв. Для черезшкір"дозована одиниця" у значенні, вживаному в цьому ного введення активні компоненти вводять до описі, означає фізично дискретну одиницю, придаскладу мазей, бальзамів, гелів або кремів, загальтну як одинична доза для пацієнта, котрий підляновідомих у галузі. гає лікуванню. Кожна одиниця містить заздалегідь Для неполіпептидних модуляторів рівня сАМР , визначену кількість активної сполуки, розраховану в тому числі інгібіторів фосфодіестерази, а також на досягнення бажаного терапевтичного ефекту, в кломіфену, селективних модуляторів рецепторів поєднанні з необхідним фармацевтичним носієм. естрогенів, інгібіторів ароматази та інгібіторів стеТехнічні вимоги до форм дозованих одиниць за роїдогенних ферментів, шляхом застосування, цим винаходом визначаються конкретними харакякому віддається перевага, є пероральний. Ці актеристиками активної сполуки та необхідного контивні сполуки можна вводити в організм також кретного терапевтичного ефекту і прямо залежать підшкірно шляхом ін'єкції, внутрішньовенно або від цих характеристик, а також від обмежень, привагінально (для локального застосування). Для таманних галузі виготовлення композицій даної FSH, LH або hCG способом введення, якому відактивної сполуки для лікування певних пацієнтів. дається перевага, є підшкірна ін'єкція, але можна Мається на увазі, що конкретні кількості активзастосовувати також внутрішньовенне введення. них сполук, застосовуваних у даній терапії, яким Сполуки можна виготовляти у формі супозитовіддається перевага, варіюють залежно від конкріїв (наприклад, зі звичайними основами супозиторетної застосовуваної сполуки, конкретних компоріїв, наприклад, какаовою олією та іншими гліцезицій, способу введення в організм, конкретного ридами) або затримуючих клізм для ректального місця введення тощо. Оптимальні характеристики або вагінального введення. застосування для даної методики легко визначити За одним варіантом здійснення винаходу, акфа хівцю шляхом проведення звичайних тестів для тивні сполуки поєднують із носіями, які запобігавизначення дозування, які виконуються з урахують швидкому виведенню сполук з організму, наванням вищезазначених рекомендацій. Дивись приклад, у формі композицій пролонгованої дії, в також Remington's Pharmaceutical Sciences. Як тому числі імплантатів та мікрокапсульованих теправило, придатна ефективна доза однієї або кірапевтичних систем. При цьому можна застосовулькох сполук за цим винаходом, особливо при вивати біосумісні полімери, що піддаються біорозккористанні сполуки (сполук) підвищеної ефективладу, наприклад, етилен-вінілацетат, ності, лежить у межах від 0,01мг до 100мг на поліангідриди, полігліколеву кислоту, колаген, кілограм маси тіла пацієнта на добу, за варіантом, складні поліортоефіри та полімолочну кислоту. якому віддається перевага, від 0,01мг до 20мг на Способи виготовлення таких композицій є очевидкілограм маси тіла пацієнта на добу, за варіантом, ними для фахівців. Такі матеріали можна також якому віддається більша перевага, від 0,05мг до одержати на комерційних засадах від фірм Alza 4мг на кілограм маси тіла пацієнта на добу. БажаCorporation та Nova Pharmaceuticals, Inc. ну дозу вводять один раз на добу або у вигляді Сполуки за цим винаходом можна застосовукількох часткових доз, наприклад, 2-4 часткових вати окремо або в комбінації з одним або кількома доз, які вводять через відповідні інтервали часу іншими терапевтичними засобами, як вказано випротягом доби або за іншою відповідною схемою. ще, у формі фармацевтичної композиції в суміші зі Такі часткові дози можна застосовувати у формі звичайним наповнювачем, тобто фармацевтично дозованих одиниць, кожна з яких містить, наприприйнятними органічними або неорганічними носіклад, від 0,05мг до 10мг сполуки (сполук) за цим ями, придатними для перорального, парентеральвинаходом. ного, ентерального або місцевого застосування, Фармацевтичні композиції можна вміщува ти в 27 80418 28 контейнер, упаковку або розподілювач разом з норазову овуляторну дозу hCG (20МО). Інгібітори інструкцією із застосування. PDE застосовували в поєднанні із субоптимальВинахід ілюстровано поданими нижче необними дозами FSH. Усі ін'єкції виконували підшкірмежувальними прикладами. но. Овуляцію визначали через 18год після введенVII. Приклади ня hCG шляхом рахування овоцитів у фалопієвих Розроблено модель овуляції in vi vo, в якій FSH труба х. Результати виражені у формі середнього вводять незрілим пацюкам двічі на день протягом значення плюс/мінус стандартне відхилення. По2-3 днів для індукування визрівання фолікулів, казані на Фіг.3 дані характеризують середню кільпісля чого вводять одноразову овуляторну дозу кість овоцитів у трубах усіх пацюків кожної групи та hCG. Одноразова ін'єкція неполіпептидного модукількість овулюючих пацюків. Як видно з Фіг.3, інгілятора рівня сАМР (наприклад, Сполуки 1, Сполубітор PDE (Сполука 1) пригнічує (а не стимулює) ки 2 тощо), застосована в комбінації із субовуляовуляцію при введенні в дозі 50мг/кг. Ці результаторною дозою hCG або окремо, викликала ти свідчать, що підвищені дози інгібітора PDE не індукування овуляції. Ці результати узгоджуються посилюють здатність субоптимальної дози FSH з моделлю, в якій підвищені рівні сАМР підвищуготувати фолікули до овуляції. ють ефективність hCG або замінюють hCG, але не Приклад 3. Вплив інгібітора PDE - Сполуки 1 FSH. Роль FSH в будь-якій схемі індукування овуна овуляцію в присутності субефективної дози ляції полягає в сприянні розвитку та визріванню hCG in vivo фолікулів, але не в індукуванні овуляції. Овуляцію зрілих яєчникових фолікулів, утвоСполуки за Прикладами 1-9 ідентифіковано, як рення яких у статевонезрілих самок пацюків було вказано нижче: стимульоване дією ефективної дози FSH Сполука 1 цис-4-ціано-4-(3(2,16МО/ін'єкцію для кожної тварини; двічі на день циклопентилокси)-4-метоксифеніл)-циклогексан-1протягом 2 днів) індукували одноразовою ін'єкцією карбонова кислота; hCG. Останній вводили в субефективній дозі (3 Сполука 2 - 3-(циклопентилокси)-N-(3,5МО) з одночасним введенням Сполуки 1 (50мг/кг, дихлорпіридин-4-іл)-4-метоксибензамід; 10мг/кг та 1мг/кг) в момент останнього введення Сполука 3 2-(4-(6,7-діетокси-2,3FSH або без такого введення. Овуляцію визначали біс(гідроксиметил)нафталін-1-іл)пірвдин-2-іл)4-(3через 18год після введення hCG шляхом рахуванпіридин)фталазин-1(2Н)-он, гідрохлорид; і ня овоцитів у фалопієвих тр уба х. Як видно з Фіг.4, Сполука 4 7-бензиламіно-6-хлор-2одноразова ін'єкція Сполуки 1, введена спільно з піперазино-4-піролідиноптеридин. субовуляторною дозою hCG, спричиняла індукуПриклад 1. Вплив Сполуки 1 та Сполуки 2 на вання овуляції. Усі ін'єкції виконували підшкірно. рівень сАМР в зернистих клітинах яєчників пацюків Результати виражені у формі середнього значення при застосуванні окремо або в комбінації з гонадоплюс/мінус стандартне відхилення. Ці дані свідтропінами in vitro. чать, що неполіпептидний модулятор рівня сАМР, У статевонезрілих пацюків лінії Spragueв даному разі інгібітор PDE, посилює стимульоваDawley у віці 25 днів після видалення гіпофіза та ну hCG овуляцію при застосуванні субоптимальної оброблення діетилстильбестролом видаляли яєчдози hCG. Таким чином, показано ефект Сполуки ники. Яєчники кілька разів проколювали голками 1, яка є відомим інгібітором PDE. 27 калібру для вивільнення зернистих клітин із Приклад 4. Вплив інгібітора PDE - Сполуки 1 фолікулів. Клітини промивали та повторно суспенна овуляцію в присутності та у відсутності субе федували в середовищі McCo ys 5А з домішкою 0,1% ктивної дози hCG in vivo BSA та 2мкМ андростендіону. Життєздатні клітини Після індукованого FSH визрівання фолікулів в кількості 100,000 висівали в 6-лункові культиву(2,16МО/ін'єкцію для кожної тварини; двічі на день вальні чашки в 1,0мл середовища (зі Сполукою 1 протягом 2 днів) вводили Сполуку 1 із застосуванта Сполукою 2 в концентрації 25мкМ окремо або в ням або без застосування субефективної дози комбінації з малою дозою гонадотропіну, 0,1пМ). hCG. Овуляцію визначали через 18 год після ввеКультури інкубували при 37°С при 100% вологості дення hCG/Сполуки 1 шляхом рахування овоцитів в атмосфері 5% СО2 протягом 48год. Кондиціоноу фалопієвих труба х. Одержані дані характеризувані середовища аналізували методом сАМРють середню кількість овоцитів у трубах усі х пацюспецифічного радіоімунного аналізу (RIA). Резульків кожної групи та кількість овулюючих пацюків. Як тати виражені у формі середнього значення видно з Фіг.5, одноразова ін'єкція Сполуки 1, викоплюс/мінус стандартне відхилення. Як видно з нана окремо, без субовуляторної дози hCG, сприФіг.2, Сполуки 1 та 2 викликають значне підвичинила індукування овуляції у пацюків, котрі попещення рівня сАМР у присутності субефективних редньо одержували FSH. Результати виражені у концентрацій гонадотропіну. формі середнього значення плюс/мінус стандартПриклад 2. Вплив інгібітора PDE - Сполуки 1 не відхилення. Ці дані свідчать, що неполіпептидна визрівання фолікулів in vi vo ний модулятор рівня сАМР, в даному разі інгібітор Зрілі яєчникові фолікули, утворення яких у PDE - Сполука 1, здатний індукувати овуляцію у статевонезрілих самок пацюків було стимульоване відсутності введеного hCG. Попередні експеримедією субоптимальної дози FSH (1,08МО/ін'єкцію нти, а також експеримент за цим Прикладом, покадля кожної тварини; двічі на день протягом 3 днів) зують, що фолікули, підготовлені такими дозами з одночасним застосуванням Сполуки 1 (0,1мг/кг; FSH, не овулюють спонтанно, а вимагають пода1мг/кг, 10мг/кг та 50мг/кг за одну ін'єкцію, двічі на льшого введення hCG. день протягом 3 днів) або без такого застосуванПриклад 5. Вплив інгібітора PDE - Сполуки 2 ня. Разом з останньою ін'єкцією FSH вводили одна овуляцію в присутності та у відсутності субе фе 29 80418 30 ктивної дози hCG in vivo застосуванням або без застосування субефективПісля індукованого FSH визрівання фолікулів ної дози hCG. Овуляцію визначали через 18год (2,16МО/ін'єкцію для кожної тварини; двічі на день після введення hCG/Сполуки 4 шляхом рахування протягом 2 днів) вводили Сполуку 2 із застосувановоцитів у фалопієвих тр убах. Одержані дані ханям або без застосування субефективної дози рактеризують середню кількість овоцитів у трубах hCG. Овуляцію визначали через 18год післяввеусі х пацюків кожної групи та кількість овулюючих дення hCG/Сполуки 2 шляхом рахування овоцитів пацюків. Як видно з Фіг.9, одноразова ін'єкція Споу фалопієвих труба х. Одержані дані характеризулуки 4, виконана в комбінації із субовуляторною ють середню кількість овоцитів у трубах усі х пацюдозою hCG, спричинила індукування овуляції у ків кожної групи та кількість овулюючих пацюків. пацюків, котрі попередньо одержували FSH. СпоРезультати виражені у формі середнього значення лука 4, введена окремо, не індукувала овуляції плюс/мінус стандартне відхилення. Як видно з або індукувала її в дуже слабкому ступені. РезульФіг.6, одноразова ін'єкція Сполуки 2, виконана тати виражені у формі середнього значення окремо, без субовуляторної дози hCG, спричинила плюс/мінус стандартне відхилення. Ці дані свідіндукування овуляції у пацюків, котрі попередньо чать, що неполіпептидний модулятор рівня сАМР, одержували FSH. Ці дані свідчать, що неполіпепв даному разі інгібітор PDE - Сполука 4, сам по тидний модулятор рівня сАМР, в даному разі інгісобі недостатній для індукування овуляції, здатний бітор PDE - Сполука 2, здатний індукувати овуляіндукувати овуляцію у присутності субефективної цію у відсутності введеного hCG. дози hCG. Приклад 6. Вплив інгібітора PDE - Сполуки 2 Приклад 9. Вплив інгібітора PDE - Сполуки 2 на овуляцію in vivo після перорального та підшкірна овуляцію та фертильність Визрівання фолікулів ного введення у статевонезрілих пацюків індукували FSH Після індукованого FSH визрівання фолікулів (4,33МО/ін'єкцію для кожної тварини; двічі на день (2,16МО/ін'єкцію для кожної тварини; двічі на день протягом 2 днів) та сироватковим гонадотропіном протягом 2 днів) вводили Сполуку 2 або підшкірно вагітних кобил (PMSG) (1,5МО/ін'єкцію для кожної (subcutis), або перорально шляхом згодовування. тварини; двічі на день протягом 2 днів). ПопереОвуляцію визначали через 18 год після введення днім дослідженням було виявлено, що ця комбінаСполуки 2 шляхом рахування овоцитів у фалопієція індукує визрівання фолікулів та сприяє поведівих тр уба х. Одержані дані характеризують середнці, характерній для готовності до парування, при ню кількість овоцитів у труба х усі х пацюків кожної низькому ступені спонтанної овуляції у відсутності групи та кількість овулюючих пацюків. Результати додаткової ін'єкції hCG. Потім пацюки, індуковані виражені у формі середнього значення плюс/мінус FSH та PMSG, одержували Сполуку 2 (12 тварин) стандартне відхилення. Як видно з Фіг.7, підшкірне або носій (12 тварин) шляхом підшкірного введенабо пероральне введення Сполуки 2 спричинило ня. В одній підгрупі пацюків (6 тварин в кожній груіндукування овуляції у пацюків, котрі попередньо пі) визначали овуляцію через 18год після введенодержували FSH. Ці дані свідчать, що неполіпепня Сполуки 2 або носія рахування овоцитів у тидний модулятор рівня сАМР, в даному разі інгіфалопієвих тр убах. Для оцінки фертильності іншу бітор PDE - Сполука 2, здатний індукувати овуляпідгрупу тварин (по 6 з кожної групи) залишали на цію при пероральному застосуванні. ніч поодинці в клітці з одним дорослим пацюкомПриклад 7. Вплив інгібітора PDE - Сполуки 3 самцем, фертильність якого була перевірена. Нана овуляцію in vivo після перорального та підшкірступного дня самця видаляли, а самок вміщували ного введення в спільні клітки по групах до дня пологів. РеєструПісля індукованого FSH визрівання фолікулів вали кількість живих доношених дитинчат, що спо(2,16МО/ін'єкцію для кожної тварини; двічі на день стерігалися при пологах. Як видно з Фіг.10, однопротягом 2 днів) вводили Сполуку 3 або підшкірно разова ін'єкція Сполуки 2 спричиняла індукування (subcutis), або перорально шляхом згодовування. овуляції у пацюків, які попердньо одержували FSH Овуляцію визначали через 18год після введення та PMSG. Крім того, пацюки, які одержували СпоСполуки 3 шляхом рахування овоцитів у фалопієлуку 2, мали більшу кількість живих дитинчат на вих тр уба х. Одержані дані характеризують середмомент пологів. Результати як для овуляції, так і ню кількість овоцитів у труба х усі х пацюків кожної для кількості дитинчат виражені у формі середньогрупи та кількість овулюючих пацюків. Результати го значення плюс/мінус стандартне відхилення. Ці виражені у формі середнього значення плюс/мінус дані свідчать, що неполіпептидний модулятор рівстандартне відхилення. Як видно з Фіг.8, підшкірне ня сАМР, в даному разі інгібітор PDE - Сполука 2, або пероральне введення Сполуки 3 спричинило індукує овуляцію яйцеклітин, які здатні до заплідіндукування овуляції у пацюків, котрі попередньо нення in vivo. одержували FSH. Ці дані свідчать, що неполіпепОбсяг винаходу не обмежується конкретними тидний модулятор рівня сАМР, в даному разі інгіваріантами здійснення, описаними в цьому докубітор PDE - Сполука 2, здатний індукувати овуляменті. Дійсно, різноманітні модифікації винаходу, цію при пероральному застосуванні. окрім описаних, є очевидними для фахівців із виПриклад 8. Вплив інгібітора PDE - Сполуки 4 щенаведеного опису та фігур, що додаються. Такі на овуляцію в присутності та у відсутності субе фемодифікації слід вважати такими, що охоплюються ктивної дози hCG in vivo обсягом винаходу. Повний зміст усі х публікацій, Після індукованого FSH визрівання фолікулів патентів та опублікованих заявок на патенти, які (2,16МО/ін'єкцію для кожної тварини; двічі на день цитуються в цій заявці, включено до неї шляхом протягом 2 днів) вводили підшкірно Сполуку 4 із посилання. 31 80418 32 33 Комп’ютерна в ерстка В. Мацело 80418 Підписне 34 Тираж 26 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601