Композиція, яка містить фітоестрогени, селективні по відношенню до естрогенних бета-рецепторів, та харчову клітковину

Реферат: Описані пероральні композиції, які містять комплекс з одного або суміші фітоестрогенів, які є селективними по відношенню до естрогенних β-рецепторів, з харчовими клітковинами. UA 101178 C2 (12) UA 101178 C2 Згадані композиції можуть застосовувати для профілактичного та терапевтичного лікування станів здоров'я ссавців, у тому числі людей, що характеризуються високим ступенем ризику виникнення та рецидивування аденом кишечнику (аденоматозний поліпоз) та прогресування аденоми у колоректальну карциному. У разі присутності передракових пошкоджень у товстій кишці, які характеризуються мутаціями гена АРС, що пригнічує ріст пухлини, та визначаються як поліпи або аденоми, розкриті пероральні композиції в дійсності можуть бути застосовані для зменшення кількості та об'єму поліпів та для запобігання їх прогресуванню до пухлинного перетворення шляхом зменшення ступеня їх дисплазії. UA 101178 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Галузь, до якої належить винахід Цей винахід стосується композицій, які містять один або декілька фітоестрогенів у комплексі з харчовою клітковиною, нерозчинною та стійкою до ферментативного розщеплення, та застосування згаданих композицій для профілактики та/або лікування слизової оболонки кишечнику та, зокрема, аденоматозного поліпозу і його прогресування у колоректальну карциному. Передумови створення винаходу Аденокарцинома або колоректальна карцинома (CRC) є третьою причиною смертності у світі. Патогенез CRC охоплює утворення поліпів на слизовій оболонці кишечнику, які вважаються передраковими пошкодженнями. У разі діагностування шляхом колоноскопії, поліпи кишечнику, як правило, видаляють ендоскопічним шляхом. Частота рецидивування після поліпектомії становить приблизно 10-15% на рік. З-посеред рецидивуючих поліпів 10% припадають на задавнену аденому, яка характеризується діаметром 1 см та, з гістологічної точки зору, є ворсинчастою. Присутність однієї задавненої аденоми або присутність двох новоутворень після поліпектомії, незалежно від їхніх гістологічних характеристик, відрізняють групу населення з максимальним ступенем ризику розвитку CRC (Vogelstein В. et al. Genetic alterations during colorectal-tumor development. NEJM 1988, 319:525-532). Людський родинний аденоматозний поліпоз (FAP) спричинюється ембріональною мутацією пухлиносупресорного гена АРС (аденоматозний поліпоз). FAP характеризується розвитком великої кількості (від сотень до тисяч) аденом у товстій кишці. Незважаючи на те, що генетичний субстрат сприяє стимулюванню онкогенного процесу і не може бути модифікований шляхом впливу лікарськими речовинами або нутрицевтиками, активацію онкогенезу можна контролювати із перешкоджанням, тим самим, прогресування у напрямку дедиференціації клітин та пухлинного перетворення. Головною метою скринінгової колоноскопії є моніторинг аденом та їх прогресування у задавнені форми та CRC. Окрім скринінгової колоноскопії, безсумнівно, високою, але все ще незадоволеною, є клінічна потреба у хіміопревентивних втручаннях, безпечних та ефективних щодо утримання на низькому рівні частоти рецидивування аденом. Пригнічення циклооксигенази-2 (СОХ-2) за допомогою целекоксибу (celecoxib) та рофекоксибу (rofecoxib), незважаючи на ефективність, пов'язується з неприпустимо високим ризиком негативного впливу на серцево-судинну систему (Lance P. Chemoprevention of colorectal cancer: some progress but a long way to go. Gastroenterology 2008, 134:341-343). Більша поширеність CRC серед чоловіків та зменшена кількість випадків захворювання серед жінок, яких піддають гормонозамісній терапії (HRT), підтримує гіпотезу, суть якої полягає у тому, що естрогени відіграють захисну роль у онкогенному процесі у товстій кишці. Як додатковий доказ концепції захисної ролі естрогенів у слизовій оболонці кишечнику, слід навести нещодавно одержані дані щодо регресу аденом у молодої жінки, ураженої FAP, після естрогестагенної терапії з контрацептивними цілями (Giardiello F., Hylind L., Trimbath J. et al. Oral Contraceptives and Polyp Regression in Familial Adenomatous Polyposis. Gastroenterology 2005; 128:1077-1080). На жаль, у разі проведення епідеміологічних досліджень на постклімактеричних жінках, яких піддавали естрогестагенній терапії, спостерігався високий рівень виникнення раку молочної залози та серцево-судинних ускладнень, що потребувало раннього припинення досліджень для збереження здоров'я хворих, які приймали участь у проведенні згаданих досліджень (Writing Group for the Women's Health Initiative Investigators. Risks and benefits of estrogen plus progestin in healthy postmenopausal women. JAMA 2002, 288:321-333). Естрогенні рецептори існують у двох формах: альфа (ER) та бета (ER), які по-різному локалізуються та експресуються на різних анатомічних ділянках. ER локалізується, головним чином, у молочних залозах, серцево-судинній системі, кістках, сечостатевій та центральній нервовій системах, у той час як ER експресується у передміхуровій залозі, слинних залозах, яєчках, яєчнику, у імунній системі і, переважно, у кишечнику. 17-естрадіол (естроген) є неселективним лігандом обох рецепторів, який виявляє проліферативну активність у присутності ER та антипроліферативну у присутності ER (Koehler K.F. et al. Reflections on the discovery and significance of Estrogen Receptor . Endocr. Rev. 2005, 26:465-478). Сприятливі ефекти, що спостерігались у вищезгаданих дослідженнях щодо зменшення частоти захворюваності на CRC, можуть, таким чином, специфічно залежати від активації ER. Участь ER у аденоматозному полілозі та CRC демонструється його зменшеною експресією, порівняно з нормальною слизовою кишечнику, у поліпектомізованих хворих вже на передраковій стадії (Di Leo A. et al. ER expression in large bowel adenomas: implications in colon carcinogenesis. Dig Liver Dis 2008, C40:260-266). Показовим є те, що зменшення експресії ER пов'язується з підвищеною проліферацією та прогресивною дедиференціацією клітин, що є 1 UA 101178 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 демонстрацією того, що пригнічення ER спричиняє розвиток пухлин. Таким чином, колоректальні передракові пошкодження є раннім попередженням про розвиток CRC у відповідної частини населення. Різке зменшення ER спостерігається також на більш задавнених стадіях пухлинного перетворення (Konstantinopoulos P.A. et al. Oestrogen receptor beta (ER) is abundantly expressed in normal colonic mucosa, but declines in colon adenocarcinoma paralleling the tumor's dedifferentiation. Em. J. Cancer 2003, 39:1251-1258). Результати експериментальних досліджень, проведених на трансгенних мишах лінії C57BL/6J-APC Min/+, які несуть мутацію зародкової лінії гена АРС, підтверджують захисну роль естрогенів у запобіганні пухлинного перетворення епітеліальних клітин товстої кишки. Зокрема, Weyant et al. (Weyant M.J. et al. Reciprocal expression of ER and ER is associated with estrogenmediated modulation of intestinal tumorigenesis. Cancer Res. 2001, 61:2547-2551), із застосуванням трансгенних мишей-самиць, продемонстрували, що аденоми кишечнику спонтанно розвиваються після оваріектомії. Оваріектомія спричинила 77% збільшення кількості аденом кишечнику, у той час як подальше введення 17-естрадіолу спричинило зменшення кількості аденом кишечнику. Відомо, що інактивацію обох алелей або соматичну мутацію гена АРС як у разі FAP, так і у разі спорадичної форми, окрім генетичних факторів полегшує епігенетичне явище, яким є дія канцерогенів усередині просвіту кишечнику або дія агентів, потенційно генотоксичних для епітеліальних клітин слизової кишечнику. Ці небезпечні речовини, як правило, споживаються з їжею, або вони можуть утворюватись у просвіті кишечнику як наслідок травлення, зокрема, жирів, або унаслідок розкладу жовчних кислот. З цієї причини раціон, збагачений клітковиною, що, як гадають, чинить захисний вплив на слизову кишечнику або адсорбує потенційно генотоксичні ксенобіотики, вважається корисним для запобігання CRC (Robertson D.J. et al. Fat, fiber, meat and the risk of colorectal adenomas. Am. J. Gastroenterol. 2005, 100:2789-2795). Однак клінічні докази такої ефективності не завжди є переконливими. Причиною цього часто є низький якісний рівень різних експериментальних методик, де очікувані ефекти не зважують проти загального споживання харчової клітковини, яка складається з розчинного та нерозчинного волокна. Таким чином, очікувані ефекти, обумовлені доданням до раціону певної кількості клітковини з визначеною структурою, ступенем розчинності та перетравлюваності, зі своєю власною в'язкістю та желеутворювальною здатністю у просвіті кишечнику, залишаються, у більшості випадків, невстановленими. Усі раніше згадані характеристики клітковини (тобто структура, ступінь розчинності та перетравлюваності, в'язкість та желеутворювальна здатність) значною мірою визначають властивості клітковини, а також її біологічну дію на фізіологію кишечнику складних організмів (Jones J.R. et al. Dietary reference Intake: implication for fiber labeling and consumption: a summary of the International Life Sciences Institute North America Fiber workshop, June 1-2, 2004 Washington, DC. Nutr. Rev. 2006, 64:31-38). Суть винаходу Винахідники вважають, що терапевтична потреба може бути задоволена шляхом місцевої доставки засобів, які здатні до відігравання ролі селективних агоністів естрогенних бетарецепторів, задіяних у прогресуванні аденоматозного поліпозу у колоректальний рак, завдяки значному зниженню інтенсивності системної абсорбції таких засобів і, тим самим, сприянню їх фармакологічної дії на слизову оболонку кишечнику. Композиції для перорального введення, які містять комплекс щонайменше одного фітоестрогену, який є селективним агоністом до естрогенних бета-рецепторів (ER), або декількох фітоестрогенів із вищевказаними властивостями та нерозчинної харчової клітковини, тобто клітковини, стійкої до ферментативного розщеплення у шлунково-кишковому тракті, можуть задовольнити потребу медичної галузі у засобах, придатних для запобігання або лікування аденоматозного поліпозу та його прогресування у колоректальний рак. Таким чином, за першим аспектом, предметом цього винаходу є композиції, які містять щонайменше один фітоестроген або суміш фітоестрогенів, що є селективними агоністами естрогенних бета-рецепторів (ER), та щонайменше одну нерозчинну та неперетравну клітковину або їх суміш, вибрану з групи, яку складають некрохмальні полісахариди. Окрім того, іншим предметом цього винаходу є застосування таких композицій, що вводяться пероральним шляхом, для місцевого лікування слизової оболонки кишечнику і, зокрема, лікування аденоматозного поліпозу, та для запобігання його прогресуванню у колоректальний рак. Як буде легко зрозуміло з докладного опису винаходу, наведеного нижче, у присутності передракових пошкоджень товстої кишки, що характеризуються мутаціями пухлиносупресорного гена АРС, які визначаються як поліпи або аденоми, згадані композиції для 2 UA 101178 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 перорального введення можуть бути корисними у разі застосування для зменшення кількості й об'єму поліпів та для запобігання їх розвитку у напрямку пухлинного перетворення шляхом зменшення ступеня їх дисплазії. Композиції для перорального введення, які є предметом цього винаходу, можуть бути корисними у разі застосування для відновлення експресії ER на слизовій оболонці товстої кишки, за інших обставин у разі присутності кишкових аденом, дефіцитних або пригнічених, та для відновлення співвідношення експресії бета- та альфа-рецепторів естрогенів на користь антипроліферативної активності. Більше того, згаданий комплекс, який складається щонайменше з одного фітоестрогену, який є селективним по відношенню до естрогенних бета-рецепторів, та щонайменше однієї нерозчинної харчової клітковини, які утворюють композиції для перорального введення, що є предметом цього винаходу, являє собою систему, якій віддається перевага, доставки ERселективного фітоестрогену до товстої кишки, де, як правило, локалізується аденоматозний поліпоз, зі збагаченням компонентів на слизовій оболонці кишечнику та колоноцитів. Згадані пероральні композиції, що є предметом цього винаходу, являють собою, таким чином, безпечну та ефективну систему доставки для місцевого лікування слизової оболонки кишечнику за умов високого ступеня ризику розвитку аденом та їх прогресування у аденокарциному, а тому придатну для лікування пацієнтів, уражених аденоматозним поліпозом у родинній та спорадичній формі, яких піддали скринінговій колоноскопії, та після поліпектомії, для запобігання розвитку задавнених аденом та для запобігання їх потенційному пухлинному перетворенню на аденокарциному, відому також як колоректальний рак (CRS). Короткий опис фігур Фіг. 1. Ця фігура показує експресію генів (матрична РНК, мРНК) естрогенних рецепторів у + кишечнику мишей лінії АРС Min/ . Рівні експресії мРНК ER та ER виражаються у одиницях оптичної густини у порівнянні з одиницями оптичної густини конститутивної мРНК (18S) відносно структурного білка, немодифікованого за експериментальних умов цього дослідження. Результати показують: значне підвищення мРНК ER у групі, яка одержувала силімарин -1 (silymarin) у дозі 200 млн (р=0,03), відносно контрольної групи, якій згодовували стандартний раціон; неочікуване значне зниження мРНК ER у групі, якій згодовували лише нерозчинну клітковину (лігнін) (р=0,04); значне підвищення ER у групі, якій згодовували композицію, яка містила комплекс лігнін+силімарин (р=0,04). Фіг. 2. Ця фігура показує співвідношення між матричними РНК естрогенних альфа- та бета+ рецеторів у кишечнику мишей лінії АРС Min/ . У разі порівняння з групою тварин, яким вводили естроген (який, як відомо, не є селективно активним відносно ER та ER) підшкірним шляхом, результати підтвердили селективність силімарину відносно ER, де кількість згаданого рецептора збільшена лігандом. Більше того, результати демонструють, що комплекс силімарину (навіть у низьких дозах) з нерозчинною клітковиною, лігніном, яка сама по собі є несподівано активною щодо зниження експресії проліферативно активного ER, полегшує відновлення співвідношення експресії між рецепторами естрогенів на користь антипроліферативної активності. Фіг. 3. Ця фігура показує співвідношення між рівнем білків альфа- та бета-рецепторів + естрогенів у кишечнику мишей лінії АРС Min/ , визначене за результатами вестерн-блотингу. Стосовно контрольної групи тварин, яким згодовували лише стандартний раціон, підвищення рівня білка ER, порівняно з рівнем білка ER, спостерігається у тварин, яким згодовували різні раціони, при цьому згадане підвищення є більшим у групі, тваринам якої підшкірним шляхом вводили 17-естрадіол; у групі, тваринам якої згодовували силімарин; у групі, тваринам якої згодовували лігнін; у групі, тваринам якої згодовували композицію, яка містить лігнін+силімарин, навіть у низьких дозах. Фіг. 4. На Фіг. 4 показано порівняння співвідношення мРНК ER/ER у тонкому кишечнику + тварин із груп дикого типу (WT) та АРС Min/ , яким згодовували різні раціони. Силімарин (SIL), лігнін (LIG) та силімарин+лігаін (SIL+LIG) відновлювали мРНК ER/ER до рівнів, порівнянних із рівнями здорової слизової групи WT. Рівень білка ER був також підвищеним в усіх групах, які одержували згадані раціони (Фіг. 4В), порівняно з контролями. Фіг. 5. Оцінювання проапоптозної активності за методом TUNEL (А-С) та за методом виявлення розщепленої каспази-3 (СС-3) (D) у неаденоматозній та аденоматозній слизовій + оболонці тварин лінії АРС Min/ , яким згодовували стандартний раціон (Control (контроль)) або різні раціони (SIL, LIG, SIL+LIG), у порівнянні з мишами дикого типу (WT), яким згодовували стандартний раціон. У неаденоматозній слизовій, силімарин, лігнін та комбінаціях двох згаданих засобів відновлювали апоптоз до рівнів, порівняних із здоровою слизовою мишей дикого типу 3 UA 101178 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 (WT). У аденоматозній слизовій лише комплекс силімарину та лігніну відновлював апоптоз до значень, порівнянних зі здоровою слизовою мишей дикого типу (WT). У той час як рівні СС-3 + явно зменшились у мишей лінії АРС Min/ , яким згодовували стандартний раціон, разюче підвищення спостерігалось у групах, яким згодовували різні раціони. Докладний опис Приймаючи до уваги побічні ефекти, які потенційно виявляють неселективні агоністи естрогенних рецепторів, що відомо з наведеного вище опису стану галузі, цим винаходом запропоновані пероральні композиції, які містять щонайменше один фітоестроген, який є селективним агоністом естрогенного бета-рецептора (ER), або суміші таких фітоестрогенів, що базується на широкому застосуванні фітоестрогенів, яке доводить їх явну безпечність та ефективність. Для цілей цього винаходу фітоестрогени, яким віддають перевагу, вибрані з групи, яку складають флаволігнани, а саме силімарин, силібінін (silybinin), ізосилібінін (isosilybinin), силідіанін (silydianin), силікристин (silychristin), ізофлавон геністеїн (isoflavone genistein), флавоноїд ресвератрол (flavonoid resveratrol), куместрол (coumestrol) та їх суміші. Фітоестроген або фітоестрогени, які входять до складу згаданої суміші, можуть бути присутніми у згаданій композиції як у очищеній формі, так і у формі рослинного екстракту. За варіантом, якому віддається більша перевага, фітоестрогеном може бути силімарин як такий або екстракт розторопші плямистої (Milk Thistle), при цьому найбільша перевага віддається згаданому екстракту розторопші плямистої, який містить суміш флаволігаанів силімарину, силібініну, ізосилібініну, силідіаніну та силікристину. Відомо, що силімарин, стандартизована суміш флаволігнанів, екстрагованих із плодів розторопші плямистої, яка широко застосовується у традиційній медицині як гепатопротектор, має підтверджений документальними джерелами профіль безпечності та переносності, а також такі самі властивості, що і селективний агоніст ER, без будь-якої відповідної активності на ER, що описано у (Seidlova-Wuttke D. et al. Silymarin is a selective estrogen receptor  (ER) agonist and has estrogenic effect in the metaphysis of the femur but no or antiestrogenic effects in the uterus of ovariectomized (ovx) rats. J. Steroid Biochem. Моl. Biol. 2003, 86:179-188). "Силімарин" є звичайною назвою, яка застосовується для позначення рослинного екстракту, який містить суміш флаволігнанів: силімарину, силібініну, ізосилібініну, силідіаніну та силікристину у різних концентраціях та співвідношеннях. У композиціях, які є предметом цього винаходу, "силімарин" означає суміш флаволігнанів, які входять до складу екстракту, у різних концентраціях та співвідношеннях, з конкретним посиланням на екстракт розторопші плямистої, з аналітичним профілем, який характеризується вмістом силімарину, більшим ніж 70%, та вмістом силібініну А+В, більшим ніж 30%. Як правило, додатковими компонентами до силімарину та/або його замінниками у композиціях, які є предметом цього винаходу, є інші фітоестрогени, за умови, що вони є селективними по відношенню до ER і мають антиестрогенну активність, тобто не спричиняють значної проліферативної активності у тканинах, що є класичними мішенями для естрогенів, наприклад, вищезгаданих фітоестрогенів, у концентраціях, подібних до концентрації силімарину. Іншою головною складовою композицій для перорального введення за цим винаходом є нерозчинна та неперетравна, тобто стійка до ферментативного розщеплення у шлунково-кишковому тракті, клітковина. Нерозчинна клітковина може бути присутньою у очищеній формі або як складова природного екстракту, за умови, що вміст згаданої нерозчинної клітковини у композиціях становить від 1% до 30%. Таку клітковину вибирають з-посеред рослинних клітковин некрохмальної полісахаридної природи, і з-посеред цих клітковин перевагу віддають клітковинам, вибраним із групи, яку складають поліфенілпропаноїдний лігнін (який у подальшому називають також лігніном), целюлоза, інулін та довголанцюговий інулін і їх суміші. Особлива перевага віддається лігніну. Нерозчинна клітковина може бути присутньою як очищений компонент, а також як складова екстракту. У останньому випадку вищезгадані нерозчинні клітковини можуть бути присутніми як суміші у комплексі з іншими живильними речовинами. Зокрема, згадані клітковини можуть застосовуватись для композицій за цим винаходом таким чином: у разі лігніну - у вигляді лігніну як такого у полідисперсній формі або у вигляді пшеничних висівок; у разі целюлози - у вигляді целюлози як такої або у вигляді сойового екстракту; у разі інуліну - у вигляді довголанцюгового інуліну із ступенем полімеризації 10-65 та середньою довжиною ланцюга 25 як такого, якому віддається перевага, або у вигляді артишокового екстракту, екстракту цикорію або порошку коренів кульбаби. Клітковина, присутня у пероральних композиціях, які є предметом цього винаходу, у будьякому випадку вважається додатком до раціону, але незалежним від загального споживання харчової клітковини. 4 UA 101178 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Композиції за цим винаходом продемонстрували неочікувані біологічні властивості, оскільки згадані композиції, які відрізняються по суті комплексом щонайменше одного фітоестрогену, який є селективним агоністом естрогенних бета-рецепторів (ER), або суміші таких фітоестрогенів, та щонайменше однієї харчової нерозчинної клітковини, вибраної з-посеред клітковин некрохмальної полісахаридної природи або їх сумішей, виявились такими, що виявляють синергічний вплив на параметри, які застосовують для обов'язкового експериментального оцінювання їх корисності. Фактично харчова нерозчинна клітковина (зокрема, лігнін) виявилась активною у підтримці експресії білка ER (дані, невідомі до цього часу) та виявилась синергічною з фітоестрогеном силімарином у суттєвому утримуванні під контролем параметрів, що є маркерами проліферації та розвитку пухлин, таких як об'єм та ступінь дисплазії аденоматозних поліпів. Крім того, подібні несподівані синергічні впливи між фітоестрогенами та клітковинами спостерігались і для інших важливих біологічних параметрів, таких як відновлення проапоптозної активності на аденоматозній слизовій оболонці і, що є ще більш цікавим, на неаденоматозній слизовій оболонці, до рівня, порівнянного з рівнями, які спостерігаються на здоровій слизовій оболонці кишечнику. Незбалансоване співвідношення проліферації/апоптозу, + що спостерігалось на неаденоматозній слизовій оболонці кишечнику мишей лінії АРС Min/ , яким згодовували стандартний раціон, - експериментальна модель, придатна для оцінювання як патобіологічних механізмів, так і ефективності клінічно важливих для людей впливів лікарськими речовинами та/або нутрицевтиками, - може пояснювати клінічно підтверджене рецидивування поліпів у хворих, які були включені до програми скринінгової колоноскопії з причини попереднього виявлення поліпів та поліпектомії і які вважались такими, що належать до групи підвищеного ризику виникнення та розвитку CRC. Одержані результати, наведені вище в узагальненому вигляді, підтверджують передбачуване застосування композицій, які є предметом цього винаходу. Зокрема, у ссавців, людей або тварин, композиція для перорального введення за цим винаходом може спричинювати експресію бета-рецепторів естрогенів безпосередньо на слизовій оболонці кишечнику, коли такий рецептор експресується на низькому рівні або є відсутнім із причини присутності передракових пошкоджень у слизовій оболонці товстої кишки унаслідок мутації пухлиносупресорного гена АРС, наприклад, у разі родинного (FAP) та спорадичного аденоматозного поліпозу. Крім того, пероральні композиції за цим винаходом можуть бути прийнятною системою для переважної спрямованої доставки фітоестрогенів на ділянку кишечнику, уражену розвитком поліпів, де цією ділянкою є тонкий кишечник у разі експериментальної мишачої моделі, та товста кишка у людей, де нерозчинна клітковина частково перетравлюється. Нерозчинна клітковина, яка міститься у композиціях за цим винаходом, і, зокрема, лігнін, відіграє роль захисного екрану у верхньому відділі шлунково-кишкового тракту, де фітоестрогени, за інших умов, переважно абсорбуються. Більше того, ця захисна дія уможливлює пролонговане перебування фітоестрогенів, які містяться у композиціях за цим винаходом, у контакті зі слизовою оболонкою кишечнику та колоноцитами. Як доказ концепції, композиції за цим винаходом і, зокрема, комбінація силімарину у найнижчій ефективній дозі з лігніном, визначили максимальне зменшення кількості та об'єму поліпів, порівнянне з тим, яке спостерігалось у разі додання силімарину до стандартного раціону у найбільшій ефективній дозі, в той час як нерозчинна клітковина і, зокрема, лігнін, були per se неефективними у протидії пухлинам кишечнику, про що свідчить кількість розвинених поліпів та їх об'єм. Композиції за цим винаходом можуть, таким чином, бути придатними для застосування або як фармацевтичні продукти, або як нутрацевтики, при лікуванні пацієнтів, уражених аденомами товстої кишки, діагностованими шляхом колоноскопічного обстеження, з метою зменшення кількості та об'єму поліпів, запобігання їх прогресуванню у задавнені аденоми і, можливо, у аденокарциноми. Композиції за цим винаходом можуть також застосовуватись для запобігання або зменшення розвитку нових поліпів та запобігання їх розвитку до задавненої форми і, можливо, до аденокарциноми, у поліпектомізованих пацієнтів, які на цей момент приймають участь у програмі скринінгової колоноскопії, у період між запланованими скринінговими колоноскопіями. Композиції для перорального введення за цим винаходом можуть бути як у рідкій, так і у твердій, формах. Незалежно від застосованого типу фітоестрогенів та від їх форми (тобто у очищеній формі або у вигляді екстракту), вміст фітоестрогенів та їх сумішей у згаданих композиціях становить від 0,1% (мас.) до 10% (мас), за варіантом, якому віддається більша перевага, від 0,5% (мас.) до 5% (мас), та за варіантом, якому віддається найбільша перевага, від 1% (мас.) до 2% (мас). 5 UA 101178 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Фактично, якщо згаданим фітоестрогеном є силімарин, згадані тверді та рідкі пероральні композиції, за варіантом, якому віддається перевага, містять від 0,1% (мас.) до 10% (мас), за варіантом, якому віддається більша перевага, - від 0,5% (мас) до 5% (мас), і за варіантом, якому віддається найбільша перевага, - від 1% (мас.) до 2% (мас.) силімарину, незалежно від того, який з його екстрактів застосований. У разі застосування геністеїну як фітоестрогену, згадані тверді та рідкі композиції за цим винаходом за варіантом, якому віддається перевага, містять від 0,1% (мас.) до 10% (мас), за варіантом, якому віддається більша перевага, - від 0,5% (мас.) до 5% (мас), і за варіантом, якому віддається найбільша перевага, - від 1% (мас) до 2% (мас) геністеїну, незалежно від того, який з екстрактів застосований. Згадані тверді та рідкі композиції, які є предметом цього винаходу, за варіантом, якому віддається перевага, містять від 0,1% (мас.) до 10% (мас), за варіантом, якому віддається більша перевага, - від 0,5% (мас) до 5% (мас), і за варіантом, якому віддається найбільша перевага, - від 1% (мас) до 2% (мас) куместролу, незалежно від того, який з його екстрактів застосований. Згадані тверді та рідкі композиції, які є предметом цього винаходу, за варіантом, якому віддається перевага, містять від 0,1% (мас.) до 10% (мас), за варіантом, якому віддається більша перевага, - від 0,5% (мас.) до 5% (мас), і за варіантом, якому віддається найбільша перевага, від 1% (мас.) до 2% (мас.) змішаних фітоестрогенів, незалежно від того, який з екстрактів застосований. Що стосується нерозчинного клітковинного компонента, то тверді композиції за цим винаходом за варіантом, якому віддається перевага, містять від 1% (мас.) до 30% (мас), за варіантом, якому віддається більша перевага, - від 5% (мас.) до 25% (мас), і за варіантом, якому віддається найбільша перевага, - від 10% (мас.) до 20% (мас) нерозчинної харчової клітковини, незалежно від типу застосованого екстракту (тобто очищеного або як такого). Рідкі композиції за цим винаходом за варіантом, якому віддається перевага, містять від 1% (мас.) до 20% (мас), за варіантом, якому віддається більша перевага, - від 2% (мас.) до 15% (мас), і за варіантом, якому віддається найбільша перевага, - від 5% (мас.) до 10% (мас.) неперетравної та нерозчинної харчової клітковини, незалежно від типу застосованого екстракту (тобто очищеного або як такого). Тверді композиції можуть бути у формі порошку, шипучого порошку або жувальних таблеток. Згадана порошкова форма може, у свою чергу, бути розфасована у багатодозову (пляшки, банки, широкогорлі склянки) та однодозову (саше) упаковку. Рідким формам може бути наданий вигляд сиропів, розчинів, суспензій або водних дисперсій. Згадані композиції, яким надана така форма, можуть додатково містити прийнятні наповнювачі, розріджувачі, консерванти, ароматизатори, спінювачі, засоби для коригування рН тощо фармацевтичної або харчової чистоти, у залежності від обраної форми, придатної для перорального введення. Більше того, композиції за цим винаходом можуть додатково містити пробіотики, такі як лактобактерії та/або біфідобактерії, як живі, так і тиндалізовані, для сприяння нормалізації мікрофлори кишечнику та для кишкової ферментації клітковини, тобто для здійснення дій, які, як відомо, сприяють утворенню здорового мікросередовища на цій анатомічній ділянці. Пробіотики додають як допоміжну лікарську речовину для підтримування або балансування кишкової фізіології і допомагають метаболізувати неперетравну та нерозчинну клітковину. Композиції за цим винаходом показані у робочих прикладах 1-10. Робочі приклади 1-7 стосуються твердих композицій, а робочі приклади 8-10 стосуються рідких композицій. Якщо не вказується інше, пропорції компонентів, що складають композиції у робочих прикладах, являють собою масові частки відповідних компонентів відносно готового продукту, виражені у відсотках. Наведені нижче приклади також описують і демонструють варіанти здійснення у межах обсягу цього винаходу. Згадані приклади наводяться виключно з ілюстративною метою і не призначені для обмеження обсягу цього винаходу, оскільки зміни цього винаходу є можливими без відходження від суті та обсягу винаходу. Тверді композиції Приклад 1: Шипучий порошок Компонент Кількість, % Сухий екстракт розторопші плямистої, що містить 70% (за результатами високоефективної рідинної хроматографії) силімарину 2 Що відповідає силімарину 1,40 6 UA 101178 C2 Лігнін 20,00 Мальтодекстрини 70,90 Натрію цитрат 4,50 Калію цитрат 0,50 Лимонна кислота 1,00 Кремнію діоксид 0,10 Ароматизатор 1,00 Приклад 2: Шипучий порошок Компонент Кількість, % Сухий екстракт розторопші плямистої, що містить 70% (за результатами високоефективної рідинної хроматографії) силімарину 2,00 Що відповідає силімарину 1,40 Олігосахаридна клітковина (інулін) 20,00 Мальтодекстрини 70,90 Натрію цитрат 4,50 Калію цитрат 0,50 Лимонна кислота 1,00 Кремнію діоксид 0,10 Ароматизатор 1,00 Приклад 3: Шипучий порошок Компонент Кількість, % Сухий екстракт розторопші плямистої, що містить 70% (за результатами високоефективної рідинної хроматографії) силімарину 2,00 Що відповідає силімарину 1,40 Лігнін або довголанцюговий інулін 20,00 Lactobacillus acidophilus, Еквівалент тиндалізована 10 MLD Мальтодекстрини 71,90 Натрію бікарбонат 2,60 Винна кислота 1,40 Кремнію діоксид одо Ароматизатор 2,00 Приклад 4: Вододисперсний порошок Компонент Кількість, % Силімарин 1,40 Порошок коренів кульбаби 35,00 Мальтодекстрини 61,50 Кремнію діоксид 0,10 Ароматизатор 2,00 Приклад 5: Шипучий порошок Компонент Кількість, % Сухий екстракт розторопші плямистої, що містить 70% (за результатами високоефективної рідинної хроматографії) силімарину 1,00 Що відповідає силімарину 0,70 Геністеїн 0,70 Харчова або олігосахаридна клітковина (інулін) 20,00 Мальтодекстрини 70,90 Натрію цитрат 4,50 7 UA 101178 C2 5 Калію цитрат 0,50 Лимонна кислота 1,00 Кремнію діоксид 0,10 Ароматизатор 1,00 Приклад 6: Шипучий порошок Компонент Кількість, % Сухий екстракт люцерни, що містить 10% (за результатами високоефективної рідинної хроматографії) куместролу 7,00 Що відповідає куместролу 0,70 Пшеничні висівки 30,00 Мальтодекстрини 55,90 Натрію цитрат 4,50 Калію цитрат 0,50 Лимонна кислота 1,00 Кремнію діоксид 0,10 Ароматизатор 1,00 Приклад 7: Вододисперсний порошок Компонент Кількість, % Силімарин 0,70 Геністеїн 0,70 Порошок коренів кульбаби 35,00 Мальтодекстрини 61,5 Кремнію діоксид 0,10 Рідкі композиції Приклад 8: Сироп Компонент Кількість у 100 мл (грами) Силімарин 0,90 Лігнін, целюлоза або інулін 10,00 Калію сорбат 0,10 Аскорбінова кислота 0,50 Лимонна кислота, безводна 0,05 Фруктоза 35,00 Ароматизатор 0,35 Вода Достатня кількість Приклад 9: Сироп Компонент Кількість у 100 мл (грами) Силімарин 0,45 Геністеїн 0,45 Лігнін, целюлоза або інулін 10,00 Калію сорбат 0,10 Аскорбінова кислота 0,50 Лимонна кислота, безводна 0,05 Фруктоза 35,00 Ароматизатор 0,35 Вода Достатня кількість Приклад 10: Сироп Компонент Кількість у 100 мл (грами) Сухий екстракт розторопші плямистої, що містить 70% (за результатами 1,38 8 UA 101178 C2 високоефективної рідинної хроматографії) силімарину Що відповідає силімарину Порошок коренів кульбаби Калію сорбат Натрію бензоат Аскорбінова кислота Лимонна кислота Сорбіт Сахарин ( Ароматизатор Дистильована вода 5 10 15 20 25 30 35 40 0,90 20,00 ОДО 1,00 0,5 0,15 20,00 0,013 0,20 Достатня кількість Експериментальна частина Трансгенна миша лінії C57BL/6J АРС Min/+ є надзвичайно доброю тваринною моделлю для FAP, оскільки мутований ген АРС є гомологічним людському гену. Навіть у найбільш поширеній формі CRC, яку називають спорадичною, 85% випадків демонструють соматичну мутацію пухлиносупресорного гена АРС. Таким чином, трансгенна тваринна модель із мутованим пухлиносупресорним геном АРС є найбільш значущим підтвердженням для дослідження патогенетичних механізмів, які характеризують аденоматозний поліпоз у товстій кишці, як у формі FAP, так і у спорадичній формі, і вважається прийнятною тваринною моделлю для визначення дії нутрицевтиків та лікарських речовин, призначених для контролювання розвитку аденом та для запобігання прогресуванню аденом у CRC (Levy D.B. et al. Inactivation of both APC alleles in human and mouse tumors. Cancer Res. 1994, 54:5953-5958; Paulsen J.E. et al. Qualitative and quantitative relationship between dysplastic aberrant crypt foci and tumorigenesis in the Min/+ mouse colon). З цієї причини при розробці пероральних композицій, які є предметом цього винаходу, та при визначенні їх безпечності та ефективності, винахідники скористались вищезгаданою трансгенною мишачою моделлю C57BL/6J АРС Min/+. Нижче наводяться дані, які демонструють лікувальну дію у трансгенних мишей лінії C57BL/6J-APC Min/+, яким згодовували раціони, доповнені силімарином, які містили розчинну та нерозчинну клітковину у різних пропорціях із метою виявлення диференціювальних властивостей нерозчинної та неперетравної клітковини. Три експериментальні раціони, розроблені з метою імітування режиму харчування з підвищеним вмістом жирів, були такими: - раціон 5K20 [Mucedola Sri, Settimo Milanese (MI)], що містив 4,50% загальної клітковини, до складу якої входили розчинна та нерозчинна клітковини; - очищений раціон, що містив 6,24% нерозчинної клітковини, яка являла собою лігнін; - очищений раціон, що містив 6,24% розчинної клітковини, яка являла собою лузгу подорожника (Plantago ovata). До кожного раціону додавали силімарин (до 200 мг/кг). Згадані раціони вводили впродовж 10 тижнів пероральним шляхом 114 трансгенним мишам-самцям лінії C57BL/6J-APC Min/+ віком 56 тижнів. Ці миші мають мутацію гена АРС і є схильними до розвитку аденоматозного поліпозу товстої кишки. Мета цього дослідження полягала у перевірці на тваринній моделі, яка визнана порівнянною з людською патологічною ситуацією, здатності композиції за цим винаходом до значного зниження розвитку поліпів та запобігання їх прогресуванню у тяжкі диспластичні форми та маркери пухлинного перетворення. Статистичний аналіз здійснювали за допомогою однофакторного дисперсійного аналізу та t-критерію Стьюдента, який вважався статистично значущим при р50%). У Таблиці 2 наведено середні значення та середні квадратичні відхилення маси тварин різних кормових груп під час умертвіння. Під час надходження до віварію середня маса тварин дорівнювала 19±1,2 г. Таблиця 2 Середнє значення та середнє квадратичне відхилення маси тіла під час умертвіння -1 + sil 0 млн -1 + sil 10 млн -1 + sil 50 млн -1 + sil 200 млн 1 + sil 600 млн+ естроген (підшкірно, контроль) 15 20 25 30 35 Стандартний раціон 22,0+3,8 26,0±1,9 24,6±3,3 23,5±2,6 24,3+2,4 24,9±2,8 Раціон із лігніном 25,0+1,9 25,2+2,3 26,9+2,1 27,9±1,7 На відміну від груп тварин, яким згодовували раціон, що містив розчинну клітковину (лузга подорожника (Plantago ovata)), у яких спостерігався високий рівень смертності та відсутність зменшення кількості поліпів, комплекс силімарину та лігніну являв собою одну з композицій за цим винаходом, яка виявилась безпечною та добре переносною і високоефективною щодо зменшення кількості, об'єму та ступеня дисплазії аденоматозних поліпів у трансгенній мишачій моделі C57BL/6J-APC Min/+. На додаток до цього, харчова нерозчинна клітковина (у цьому випадку лігнін) виявилась активною у підтримці експресії білка ER (дані, невідомі до цього часу) та виявилась синергічною із силімарином у суттєвому утримуванні під контролем параметрів, які є маркерами проліферації та розвитку пухлин, таких як об'єм та ступінь дисплазії аденоматозних поліпів. Після 10 тижнів обробки тварини одержували внутрішньоочеревинну ін'єкцію бромодеоксиуридину (BrdU) у дозі 0,75 мг, < що є еквівалентом 30 мг/кг, для перевірки міграції клітин слизової оболонки кишечнику вздовж осьових ворсинок (з крипти у нижній частині до верхнього кінця у просвіті). Цей параметр дозволяє перевірити нормальну фізіологію злущування слизової оболонки кишечнику, завдяки чому у складі слизової оболонки залишаються здорові та життєздатні клітини. З цією метою тварин умертвляли через 24 год, 48 год та 72 год після ін'єкції. Від кожної умертвленої тварини відбирали тонкий кишечник та товсту кишку. Тонкий кишечник поділяли на три частини: проксимальну, медіальну та дистальну. Проксимальний відділ тонкого кишечнику додатково поділяли на дві частини, які у подальшому вискоблювали. Одну із згаданих двох частин занурювали у RNAlater® і зберігали при температурі -20°С, а другу частину зберігали у рідкому азоті. Два зразки використали для проведення ПЛР у реальному масштабі часу та вестерн-блотингу, відповідно. Медіальний та дистальний відділи тонкого кишечнику, разом із товстою кишкою, використали для проведення гістологічного аналізу. Після попереднього 10 UA 101178 C2 5 10 фіксування формолом впродовж 3 год, згадані відділи шлунково-кишкового тракту досліджували за допомогою стереомікроскопа STM1 з 3-кратним збільшенням. Два оператори сліпим методом визначали кількість та розміри поліпів. У Таблиці 3 наведено середні значення та середні квадратичні відхилення (SD) кількості поліпів, які спостерігались у тварин, яким згодовували різні раціони. Слід звернути увагу на те, -1 що силімарин, який додавали (200 млн ) до стандартного раціону, значно зменшує кількість поліпів (р=0,005) на рівні, порівняному із зменшенням, що спостерігалось у трансгенних мишей контрольної групи, яким підшкірно вводили естрадіол. Лігнін сам по собі є неефективним за цим параметром, однак комплекс лігніну та силімарину, що є предметом цього винаходу, значно -1 зменшує кількість поліпів при дозі силімарину (50 млн ), яка є у чотири рази меншою за -1 необхідну для одержання таких самих результатів із стандартним раціоном (200 млн ). Таблиця 3 Кількість поліпів кишечнику у тварин, яким згодовували різні раціони -1 + sil 0 млн -1 + sil 10 млн -1 + sil 50 млн -1 + sil 200 млн -1 + sil 600 млн + естроген (підшкірно, контроль) 15 20 Стандартний раціон Раціон з подорожником Раціон з лігніном 54,8±20,2 43,6±9,5 46,8±14,0 44,0±21,8 45,4±23,8 43,8±19,0 55,4±26,2 51,5±20,5 34,0±10,7* 37,2±9,0* 50,0±4,7 48,5±2,5 52,6±24,6 32,33±12,06* У Таблиці 4 наведено вміст силімарину (виражений як мкг/г силібініну у тканині, визначений за допомогою високоефективної рідинної хроматографії (HPLC)) у дванадцятипалій кишці, де, як відомо, силімарин переважно абсорбується, та у клубовій кишці після семи днів згодовування -1 -1 200 млн силімарину або композиції, яка містить 200 млн силімарину та некрохмальну полісахаридну клітковину (лігнін), як додаток до стандартного раціону мишей лінії C57BL/6J (n=6). Комплекс силімарину та нерозчинної клітковини спричинив переважне транспортування фітоестрогену на ділянку клубової кишки, тобто на ділянку кишечнику, на якій у трансгенних мишей, як правило, розвиваються поліпи. Більше того, відомо, що така умова імітує розвиток аденоматозного поліпозу у товстій кишці людини. Таким чином, згадані композиції, які є предметом цього винаходу, можуть бути ефективною системою для місцевого лікування ділянки, ураженої аденоматозними утвореннями. 25 Таблиця 4 Середнє значення та середнє квадратичне відхилення тканинної концентрації силімарину у кишечнику мишей -1 Силімарин, 200 млн , 7 днів -1 Силімарин, 200 млн + лігнін, 7 днів 30 35 Дванадцятипала кишка (мкг/г) 6,54±2,34 2,47±2,38 Клубова кишка (мкг/г) 2,84±2,03 3,13±2,71 У Таблиці 5 наведено середнє значення та середнє квадратичне відхилення (SD) об'єму поліпів кишечнику. Приймаючи форму поліпів за сферу, шляхом визначення їх діаметра можна було обчислити їх об'єм, який виражався у кубічних міліметрах. Несподіваним є те, що лігнін самостійно здатен зменшувати об'єм поліпів (р=0,0001). Комплекс силімарину з лігніном здатен значно зменшувати об'єм поліпів (р=0,0001). Більше того, згаданий комплекс є синергічним для двох компонентів, на що вказує той факт, що у разі застосування менших доз фітоестрогену спостерігається така сама дія, як і у разі застосування більших доз одного компонента. Слід звернути увагу на те, що естрадіол виявився неефективним за цим параметром, що вказує на те, що композиція, що є предметом цього винаходу, яка містить фітоестроген, який є селективним агоністом ER, є ефективною за цим параметром. 11 UA 101178 C2 Таблиця 5 3 Порівняння об'єму поліпів (мм ±SD) у тварин, яким згодовували різні раціони -1 + sil 0 млн -1 + sil 10 млн -1 + sil 50 млн -1 + sil 200 млн -1 + sil 600 млн естроген (контроль) 5 10 Стандартний раціон 242,0±105,1 145,0±100,6 158,4±60,3 120,2±69,0* 162,07±89,35 141,78±79,1 Раціон з лігніном 92,3±61,9* 121,0±72,6 99,00±53,13* 138,0±63,3 Гістологічні препарати довільно вибраних ділянок кишечнику кожної тварини з різних експериментальних груп досліджувались патологом за сліпим методом, який оцінював дисплазію присутніх аденоматозних структур як незначну, легку або тяжку. Поліпи з дисплазією, яка класифікувалась як тяжка, були виявлені у 70% тварин, які одержували естрадіол, на відміну від цього згадані поліпи були виявлені у 21,4% тварин, яким згодовували стандартний -1 раціон, доповнений силімарином (200 млн ), у 30% тварин, яким згодовували раціон із лігніном, -1 та у 20% тварин, яким згодовували раціон із лігніном, доповненим силімарином (50 млн ). У Таблиці 6 наведені результати, які мають відношення до HLC (найвища мічена клітина) у експериментальних групах. Дані показують, що швидкість міграції клітин, а отже і швидкість злущування ентероцитів у просвіті кишечнику, значно підвищилась у групі, яку обробляли лігніном та силімарином (навіть у низьких дозах). Таблиця 6 Міграція колоноцитів (%) з крипти до верхівки ворсинки у трансгенних тварин різних груп 24 год міграція (%) 28±2,6 47,3±10,5* 46,6±7,0* 35±13,8 44,4±11,8* Стандартний раціон + естроген -1 + sil 200 млн + лігнін -1 + (лігнін+sil 50 млн ) 15 20 25 30 35 Стосовно механізму дії комплексу силімарину та лігніну, дані вперше демонструють потенціювання експресії ER на слизовій оболонці кишечнику. Результати RT-PCR (полімеразно-ланцюгова реакція зі зворотною транскриптазою) зображені на Фіг. 1. Рівні експресії матричної РНК ER та ER виражені як середнє співвідношення між оптичною густиною матричної РНК для кожного рецептора та оптичною густиною рРНК (18S) відносно βактину, структурного білка, який не модифікується за експериментальних умов цього дослідження. Результати показують значне підвищення мРНК ER у групі, яка одержувала силімарин (200 -1 млн ) (р=0,03), порівняно із групою, якій згодовували стандартний раціон. Несподівано винахідники вперше продемонстрували, що мРНК ER значно зменшувалась у групі, яку обробляли нерозчинною клітковиною (р=0,04); згадане зменшення є ще більше вираженим у групі, якій згодовували композицію, що містила комплекс силімарин-лігнін (р=0,04). При порівнянні з групою, якій підшкірним шляхом вводили естроген (активний по відношенню як до ER, так і до ER), дані підтверджують, що силімарин є селективним лігандом ER, і демонструють, що комплекс силімарину (навіть у низьких дозах) та лігніну - останній є несподівано активним щодо зниження експресії ER, який, як відомо, проявляє проліферативні властивості - додатково полегшує повторне відновлення співвідношення між двома рецепторами естрогенів на користь антипроліферативної активності, як показано на Фіг. 2 та демонструється даними Таблиць 3-6. Фіг. 3 показує рівень експресії рецепторів естрогенів у кишечнику як співвідношення між білками ER та ER, визначене методом вестерн-блотингу. Порівняно з групою тварин, яким згодовували лише стандартний раціон, спостерігалось підвищення ER як білка у порівнянні з білком ER, і це підвищення є більш вираженим у групі, яку підшкірним шляхом обробляли 17 12 UA 101178 C2 5 10 15 20 25 естрадіолом, що підтверджує гіпотетичну захисну роль естрогенів; у групі, яку обробляли силімарином, що підтверджує його властивості як фітоестрогену, селективного по відношенню до ER; і несподівано у обох групах, які обробляли лігніном та лігніном+силімарин, навіть у низьких дозах. Додаткові експериментальні дані збирали для надання доказів: А) змінених проліферативних та апоптозних активностей навіть на неаденоматозній слизовій оболонці тварин лінії АРС min/+, порівняно зі слизовою оболонкою кишечнику тварин дикого типу (WT), без мутації АРС, лінії C57BL/6J (яка вважається нормальною та здоровою), у разі згодовування обом групам тварин стандартного раціону; В) здатності пероральних композицій, які є предметом цього винаходу, до відновлення експресії ER, проліферативної та апоптозної активності у мишей лінії АРС Min/+, до рівнів, порівнянних із відповідними показниками, які спостерігались на нормальній слизовій оболонці тварин WT, яким згодовували стандартний раціон. Таким чином, ці дані додатково підтверджують застосування таких пероральних композицій, як корисного допоміжного засобу до програми скринінгової колоноскопії у раніше поліпектомізованих хворих, із підвищеним ризиком розвитку нових поліпів (рецидив). Фіг. 4 (А, В) показує співвідношення між мРНК ER та ER і рівень експресії для обох рецепторів як білка на неаденоматозній слизовій оболонці тварин WT і контрольних тварин лінії АРС Min/+, яким згодовували стандартний раціон, або тварин лінії АРС Min/+, яким згодовували різні раціони. Фіг. 5 (A-D) демонструє, що: і) неаденоматозна слизова оболонка мишей лінії АРС Min/+, яким згодовували стандартний раціон, втратила проапоптозний контроль проліферації клітин, при порівнянні з мишами WT, яким згодовували стандартний раціон, на що вказують маркери апоптозу, такі як зменшена кількість позитивних клітин при проведенні аналізу методом TUNEL і експресія розщепленого білка каспази-3, іі) пероральні композиції, що є предметом цього винаходу, які містять комплекс силімарину та лігніну, відновлюють апоптозний контроль проліферації клітин до рівнів, подібних до відповідних показників, які спостерігаються на нормальній здоровій слизовій оболонці кишечнику мишей WT. ФОРМУЛА ВИНАХОДУ 30 35 40 45 50 55 60 1. Композиція, яка містить щонайменше один фітоестроген або суміш фітоестрогенів, які є селективними агоністами естрогенних бета-рецепторів, та щонайменше одну нерозчинну та неперетравну клітковину або їх суміш, вибрану з групи, яку складають некрохмальні полісахариди, для профілактичного або терапевтичного місцевого лікування патологічних станів слизової оболонки кишечнику, вибраних із групи, яку складають аденоматозний поліпоз та його прогресування у задавнені аденоми та аденокарциному, шляхом перорального введення. 2. Композиція за п. 1, яка відрізняється тим, що фітоестрогени, у очищеній формі або у формі екстрактів, вибрані з групи, яку складають силімарин, силібінін, ізосилібінін, силідіанін, силікристин, геністеїн, ресвератрол, куместрол або їх суміші. 3. Композиція за п. 1, яка відрізняється тим, що фітоестрогеном є силімарин з екстракту розторопші плямистої, причому згаданий силімарин являє собою суміш силімарину, силібініну, ізосилібініну, силідіаніну та силікристину. 4. Композиція за п. 1, яка відрізняється тим, що нерозчинні та неперетравні клітковини, у очищеній формі або у формі екстрактів, вибрані з групи, яку складають лігнін, целюлоза, інулін, довголанцюговий інулін або їх суміші. 5. Композиція за будь-яким з пп. 2-4, яка відрізняється тим, що фітоестрогеном є силімарин, а нерозчинною та неперетравною клітковиною є лігнін. 6. Композиція за будь-яким з пп. 1-5, яка відрізняється тим, що фітоестрогени становлять від 0,1 % до 10 % від загальної маси згаданої композиції. 7. Композиція за п. 6, яка відрізняється тим, що фітоестрогени становлять від 0,5 % до 5 % від загальної маси згаданої композиції. 8. Композиція за п. 6, яка відрізняється тим, що фітоестрогени становлять від 1 % до 2 % від загальної маси згаданої композиції. 9. Композиція за будь-яким з пп. 1-5, яка відрізняється тим, що нерозчинні та неперетравні клітковини становлять від 1 % до 30 % від загальної маси згаданої композиції. 10. Композиція за п. 9, яка відрізняється тим, що клітковини становлять від 5 % до 25 % твердих композицій. 11. Композиція за п. 9, яка відрізняється тим, що клітковини становлять від 10 % до 20 % твердих форм. 12. Композиція за п. 9, яка відрізняється тим, що клітковини становлять від 2 % до 15 % рідких форм. 13 UA 101178 C2 5 10 15 20 13. Композиція за п. 9, яка відрізняється тим, що клітковини становлять від 5 % до 10 % рідких форм. 14. Композиція за будь-яким з попередніх пп. 1-13, яка відрізняється тим, що додатково містить пробіотики, живі або тиндалізовані. 15. Композиція за будь-яким із попередніх пп. 1-14, яка відрізняється тим, що додатково містить фармацевтично прийнятні наповнювачі та/або розріджувачі, прийнятні для твердих форм, вибраних із групи, яку складають порошки, шипучі порошки, жувальні таблетки та таблетки. 16. Композиція за будь-яким із попередніх пп. 1-14, яка відрізняється тим, що додатково містить фармацевтично прийнятні наповнювачі та/або розріджувачі харчової чистоти, прийнятні для твердих форм, вибраних із групи, яку складають порошки, шипучі порошки, жувальні таблетки та таблетки. 17. Композиція за будь-яким із попередніх пп. 1-14, яка відрізняється тим, що додатково містить фармацевтично прийнятні наповнювачі та/або розріджувачі, прийнятні для рідких форм, вибраних із групи, яку складають сиропи, розчини, суспензії та водні дисперсії. 18. Композиція за будь-яким із попередніх пп. 1-14, яка відрізняється тим, що додатково містить фармацевтично прийнятні наповнювачі та/або розріджувачі харчової чистоти, прийнятні для рідких форм, вибраних із групи, яку складають сиропи, розчини, суспензії та водні дисперсії. 19. Застосування композиції за будь-яким із попередніх пунктів для профілактики або терапевтичного місцевого лікування патологічних станів слизової оболонки кишечнику, вибраних із групи, яку складають аденоматозний поліпоз та його прогресування у задавнені аденоми та аденокарциному, шляхом перорального введення. 14 UA 101178 C2 15 UA 101178 C2 Комп’ютерна верстка А. Крулевський Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 16