Похідні інданону (варіанти), придатні для інгібування проліферації клітин

1 ПОХІДНІ інданону формули 'D, де кожен з Di та D2 незалежно вибрано з групи сполук, до якої входять водень, галоїд, гідроксил, тіол, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, алкініл, алкілалкеніл, алкілалкініл, алкоксигрупа, алкілтюгрупа, ацил, арилоксигрупа, аміногрупа, амідогрупа, карбоксил, арил, заміщений арил, гетероцикл, гетероарил, заміщений гетероцикл, гетероалкіл, циклоалкіл, заміщений циклоалкіл, алкілциклоалкіл, алкілциклогетероалкіл, або він є відсутнім, де Е — сполука, яку вибрано з групи, до якої входять R де кожен з R1-R4 незалежно вибрано з групи сполук, до якої входять водень, галоїд, гідроксил, тіол, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, алкеніл, алкініл, алкілалкеніл, алкілалкініл, алкоксигрупа, алкілтюгрупа, ацил, арилоксигрупа, аміногрупа, амідогрупа, карбоксил, арил, заміщений арил, гетероцикл, гетероарил, заміщений гетероцикл, гетероалкіл, циклоалкіл, заміщений циклоалкіл, алкілциклоалкіл, алкілциклогетероалкіл, нітрогрупа і ціаногрупа, кожен з R5-R9 незалежно вибрано з групи сполук, до якої входять водень, галоїд, гідроксил, тіол, оксогрупа, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, алкеніл, алкініл, алкілалкеніл, алкілалкініл, алкоксигрупа, алкілтюгрупа, ацил, арилоксигрупа, аміногрупа, амідогрупа, карбоксил, арил, заміщений арил, гетероцикл, гетероарил, заміщений гетероцикл, гетероалкіл, циклоалкіл, заміщений циклоалкіл, алкілциклоалкіл, алкілциклогетероалкіл, нітрогрупа і ціаногрупа, X вибрано з групи сполук, до якої входять водень, -D-i, -D2, -Е, -D1-D2, -Di-Ei, -D2-E і сполука формули водень, галоїд, гідроксил, тіол, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, алкініл, алкілалкеніл, алкілалкініл, алкоксигрупа, алкілтюгрупа, ацил, арилоксигрупа, аміногрупа, амідогрупа, карбоксил, арил, заміщений арил, гетероцикл, гетероарил, заміщений гетероцикл, гетероалкіл, циклоалкіл, заміщений циклоалкіл, алкілциклоалкіл або алкілциклогетероалкіл, де кожен з R-io-R-14 незалежно вибрано з групи сполук, до якої входять водень, галоїд, гідроксил, тіол, оксогрупа, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, алкеніл, алкініл, алкілалкеніл, алкілалкініл, алкоксигрупа, алкілтюгрупа, ацил, арилоксигрупа, аміногрупа, амідогрупа, карбоксил, арил, заміщений арил, гетероцикл, гетероарил, заміщений гетероцикл, гетероалкіл, циклоалкіл, заміщений циклоалкіл, алкілциклоалкіл, алкілциклогетероалкіл, нітрогрупа і ціаногрупа, Ji та J 2 - N-R15, CR16R17, О, S-(O)0 2, P-(0)o 3, та кожен з R15-R17 незалежно вибрано з групи сполук, до якої входять водень, галоїд, гідроксил, оксогрупа, тіол, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, О ю СО О ю 57035 алкшіл, алкілалкеніл, алкілалкініл, алкоксигрупа, алкілтюгрупа, ацил, арилоксигрупа, аміногрупа, амідогрупа, карбоксил, арил, заміщений арил, гетероцикл, гетероарил, заміщений гетероцикл, гетероалкіл, циклоалкіл, заміщений циклоалкіл, алкілциклоалкіл, алкілциклогетероалкіл і ціаногрупа 2 ПОХІДНІ за П 1, де кожен з R1-R4 незалежно вибрано з групи, до якої входять водень, галоїд, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, арил, арилоксигрупа, заміщений арил, аміногрупа, амідогрупа, алкоксигрупа, тюгрупа, алкілтюл, гідроксил, ціаногрупа, нітрогрупа, ацил, карбоксил та алкшіл, і де кожен з R5-R9 незалежно вибрано з групи, до якої входять водень, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, арил, заміщений арил, аміногрупа, амідогрупа, алкоксигрупа та алкініл О 12 ПОХІДНІ за п 11,деЕ — сполука, яку вибрано з групи, до якої входять водень, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, арил, заміщений арил, аміногрупа, циклоалкіл, заміщений циклоалкіл, алкоксигрупа або алкілциклоалкіл 13 ПОХІДНІ інданону формули 3 ПОХІДНІ за п 1,деХ Di-E або-D2-E 4 ПОХІДНІ за п 3, де кожен з - Di та - D2 — 5 ПОХІДНІ за п 4, де J1 - N-R15, кожен з R5-R11 та R-I5 незалежно вибрано з групи сполук, до якої входять водень, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, арил та заміщений арил, і Е вибрано з групи, до якої входять нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, арил, заміщений арил, алкоксигрупа та аміногрупа 6 ПОХІДНІ за п 5, де кожен з R5-R11 та Ris незалежно вибрано з групи, до якої входять водень, нижчий алкіл та заміщений нижчий алкіл, і Е вибрано з групи, до якої входять нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, арил, заміщений арил, алкоксигрупа та аміногрупа 7 ПОХІДНІ за п 6, де Е вибрано з групи, до якої входять алкоксигрупа та аміногрупа, a R1-R4 вибрано з групи, до якої входять водень, галоїд, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, алкоксигрупа, аміногрупа, нітрогрупа, гідроксил, ціаногрупа, алкініл, тюгрупа та алкілтюгрупа 8 ПОХІДНІ за П 7, де Е - NR'R", де кожен з R' та R" незалежно вибрано з групи, до якої входять водень, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, арил, заміщений арил та циклоалкіл, і кожен з R1-R4 незалежно вибрано з групи, до якої входять водень, галоїд, нітрогрупа, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, аміногрупа, алкілтюгрупа, тюгрупа, пдроксигрупата алкоксигрупа 9 ПОХІДНІ за п 8, де кожен з R1-R4 незалежно вибрано з групи, до якої входять водень, алкоксигрупа та нижчий алкіл, кожен з R5-R11 та Ris незалежно вибрано з групи, до якої входять водень, нижчий алкіл та заміщений нижчий алкіл, та кожен з R' та R" незалежно вибрано з групи, до якої входять водень, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл та циклоалкіл 10 ПОХІДНІ за п 2, деХ 11 ПОХІДНІ за П 10, де кожен з -Di та -D2 де кожен з Ri-Rg незалежно вибрано з групи, до якої входять водень, галоїд, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, алкоксигрупа, аміногрупа, нітрогрупа, гідроксил, ціаногрупа, алкшіл, тюгрупа та алкілтюгрупа, X — сполука формули •D: де кожен з ^1Q f*11 та D2, незалежно, де Ji - N-R15, де кожен з R-іо, Rn незалежно вибрано з групи сполук, до якої входять водень, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, арил та заміщений арил, та Е вибрано з групи, до якої входять нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, арил, заміщений арил, алкоксигрупа, аміногрупа, амінокислота, та NR'R", де J2 вибрано з групи сполук, до якої входять N-Ri5, -CRi6Ri7, О, S-(O)02, P-(0)o з, де кожен з R12-R17 може незалежно бути вибрано з групи сполук, до якої входять водень, галоїд, гідроксил, оксогрупа, тіол, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, алкініл, алкілалкеніл, алкілалкініл, алкоксигрупа, алкілтюгрупа, ацил, арилоксигрупа, аміногрупа, амідогрупа, карбоксил, арил, заміщений арил, гетероцикл, гетероарил, заміщений гетероцикл, гетероалкіл, циклоалкіл, заміщений циклоалкіл, алкілциклоалкіл, та де кожен з R' та R" незалежно вибрано з групи, до якої входять водень, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, арил, заміщений арил та циклоалкіл 14 ПОХІДНІ за п 13, де кожен з Ri-Rg незалежно вибрано з групи, до якої входять водень, галоїд, 57035 нітрогрупа, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, аміногрупа, алкілтюгрупа, тюгрупа, гідрокси та алкоксигрупа 15 ПОХІДНІ за п 13, де кожен з R1-R2 та R4-R9 є воднем 16 ПОХІДНІ за п 13, де R3 О-СН3 17 ПОХІДНІ за п 13, де кожен з R-io-Rn та Ris незалежно вибрано з групи, до якої входять водень, нижчий алкіл та заміщений нижчий алкіл, а Е вибрано з групи, до якої входять нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, арил, заміщений арил, алкоксигрупа та амінокислота 18 ПОХІДНІ за п 13, fleJi — NR'R", де кожен з R'та R" незалежно вибрано з групи, до якої входять водень, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл та циклоалкіл 19 ПОХІДНІ за п 13, де Е — сполука, яку вибрано з групи, до якої входять водень, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, арил, заміщений арил, аміногрупа, амінокислота, циклоалкіл, заміщений циклоалкіл, алкоксигрупа або алкілциклоалкіл 20 кожен з X R4-R9— водень, і R3 ОСН; де кожен з Di та D2 є амінокислотою, та Е — амінокислота або -N-R-is, де R15 вибрано з групи сполук, до якої входять водень, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, арил, заміщений арил та аралкіл 24 ПОХІДНІ за п 23, де кожен з Di та D2 — -leu або D-leu 25 ПОХІДНІ за п 23, де Е вибрано з-посеред glyNH2, водню, бензилу, дибензилу, індану, пбензилпдроксамшу, 2,6-дифторбензилу та піперонілу 26 ПОХІДНІ інданону формули О Leu-D-Leu-NRjR;, ПОХІДНІ за П 13, де Е — амінокислота або NR'R", де кожен з R' та R" незалежно вибрано з групи сполук, до якої входять водень, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, арил, заміщений арил та циклоалкіл 21 ПОХІДНІ за П 13, де кожен з Ji та J2 — -N-R15, де кожен з R-IO-R-ІЗ та Ris незалежно вибрано з групи, до якої входять водень, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, арил та заміщений арил, а RM вибрано з групи, до якої входять нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, арил, заміщений арил, аміногрупа та алкоксигрупа 22 ПОХІДНІ за П 13, де кожен з R5-R13 незалежно вибрано з групи, до якої входять водень, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, арил та заміщений арил, a R H вибрано з групи сполук, до якої входять алкоксигрупа та аміногрупа, a Ris вибрано з групи сполук, до якої входять водень, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, арил та заміщений арил 23 ПОХІДНІ інданону формули МеО де Ri — ізопропіл, бензил, пдроксіетил, адамантил, феніл, фенетил або циклогексилметил та R2 — водень або метил 27 ПОХІДНІ за п 26, де Ri — бензил та R2 — во день 28 ПОХІДНІ за п 26, де кожен з Ri та R2 вибрано з групи, до якої входять водень, 1-шданіл, піпероніл, 2,6-дифторбензил, індан, бензил, дибензил, 4метоксибензил, 4-нітробензил, пентафторбензил, фурфурил, дифеніл метил, 4-фенілбензил, 2фенілбензил, 4-бензилоксибензил та бензофурфурил 29 ПОХІДНІ інданону формули О Leu-D-Leu-NHR МеО де R — 1-шданіл, піпероніл, 2,6-дифторбензил, індан, бензил, дибензил, 4-метоксибензил, 4нітробензил, пентафторбензил, фурфурил, дифеніл метил, 4-фенілбензил, 2-фенілбензил, 4бензилоксибензил або бензофурфурил ЗО ПОХІДНІ за п 29, де R є 2,6-дифторбензил Цей винахід є способом шпбірування проліферації клітин за допомогою класу інданонових композицій, застосування яких з цією метою ніколи доти не розглядалось Як інгібітори проліферації клітин, згадані композиції є придатними для лікування раку, серцевосудинних хвороб, наприклад, рестенозу, реакції відторгнення трансплантату, подагри та інших проліферативних захворювань, а також є потенційними лікарськими засобами для лікування автоімунних захворювань, наприклад, ревматоїдного артриту, вовчака, діабету типу І, розсіяного склерозу і тому подібних розладів та захворювань Мультикаталітична протеїназа або протеосома представляє собою висококонсервативну клітинну структуру, яка несе відповідальність за АТФзалежний протеоліз більшості клітинних білків Згадана 20S (700КДа) протеосома включає, як 57035 мінімум, пять різних протеолітичних активностей, які мають механізм нового типу, що залучає треоніновий залишок на активній ДІЛЯНЦІ (Кукс О (Coux О), Танака К (Tanaka К) та Гольдберг A (Goldberg A), 1996 Ann Rev Biochem 65 801-47) Згадану 20S протеосому було кристалізовано з археобактерм Thermoplasma acidophilum (Лоув Дж (Lowe J ), Сток Д (Stock D ), Джеп Б (Jap В ), Цвікл П (Zwickl Р), Баумінстер В (Baummster W ) та Губер Р (Huber R ) 1995 Science 268 533-539) Археобактеріальна 20S протеосома включає сорок копій субодиниць двох різних типів, с та р, які с утворюють циліндричну структуру, яка складається з чотирьох штабельованих кілець До складу кожного з верхнього та нижнього кілець входить сім ос субодиниць, у той час, як внутрішні кільця включають сім р субодиниць Середня частина згаданої структури має отвір у формі каналу, який вміщує протеолітичні активні ділянки та білки, призначені для розщеплювального проходження через згаданий канал Еукарютична 20S протеосома є більш складною, аніж протеосома згаданих археобактерій, оскільки КІЛЬКІСТЬ різних субодиниць зросла під час еволюційного розвитку, однак, згадані субодиниці все ще можна класифікувати за номенклатурою ос та р археобактерм ВІДПОВІДНО до їх гомології Таким чином, четвертинна структура згаданого еукарютичного комплексу є подібною до четвертинної структури згаданої археобактерм, яка складається з двох с та двох р кілець Однак с на відміну від археобактеріальної протеосоми, яка демонструє, головним чином, хімотрипсиноподібну протеолітичну активність (Дальманн Б (Dahlmann В), Копп Ф (Корр Р), Кун Л (Kuehn L), Нідель Б (Niedel В), Пфайфер Г (PfeiferG) 1989 FEBS Lett, 251 125-131, Сімаллер E (Seemuller E), Лапас А (Lupas A ), Цаль Ф (Zuhl R), Цвікль П (Zwickl P ) та Баумайстер В (BaumeisterW ) FEBS Lett 359173, та Лоув Дж (Lowe J), Сток Д (Stock D), Джеп Б (Jap В), Цвікль П (Zwickl Р), Баумайстер В (Baumeister W ) та Губер Р (Huber R) 1995 Science 268 533-539) Згадана еукарютична протеосома включає, як мінімум, п'ять протеазних активностей, які піддаються ідентифікуванню Вони називаються хімотрипсиноподібною, трипсиноподібною та пептид ілглутамілпептидопд рол ізувальною Було описано також дві ІНШІ активності, одна з яких віддає перевагу розщепленню пептидних зв'язків на карбоксильній стороні розгалуженого ланцюгу амінокислот, у той час як інша віддає перевагу зв'язкам між невеликими нейтральними амінокислотами (Орловські М (Orlowski M) 1990 Biochemistry 29 10289-10297) Незважаючи на те, що згадана 20S протеосома включає протеолітичну центральну частину, вона може розщеплювати білки in vivo тільки у комплексі з 19S "шапочкою" на будь-якому КІНЦІ цієї структури, яка, сама по собі, включає численні АТФ-азні активності Згадана більша структура є відомою як 26S протеосома, і вона швидко розщеплює білки, які було визначено як мішень для розщеплення, шляхом додання численних молекул 8,5КДа поліпептиду, убіквітину Перший етап у напрямку убіквітинування білку відбувається шляхом активації молекули убіквітину на м карбоксильному кінцевому гліциновому 8 залишку шляхом додання АТФ, завдяки чому утворюється високоенергетична тіоефірна проміжна сполука Цей етап каталізується ферментом активації убіквітину, Е1 Після цього убіквітин переноситься до активного цистешового залишку убіквітин-зв'язувального ферменту, Е2 Фермент Е2 зв'язує убіквітин з Е-амшогрупами лізинових залишків на субстратному білку, який призначено до розщеплення Цей процес, у деяких випадках, потребує також убі квіти нл і гази, ЕЗ Наслідком повторного зв'язування убіквітину з лізиновими залишками попередньо зв'язаних убіквітинових складових є утворення мультиубіквітинових ланцюгів та утворення убіквітинового каркасу довкола згаданого субстратного білку Мультиубіквітиновані субстратні білки розпізнаються 26S протеосомою та розщеплюються, згадані мультиубіквітинові ланцюги відокремлюються від згаданого комплексу та убіквітин поновно включається до метаболічного циклу Механізм процесу, який спричинює убіквітинування білку і, внаслідок цього, його розщеплення, все ще досліджується Зрозуміло, що це повинна бути високорегульована серія явищ, оскільки точна часова схема розщеплення певних білків є критичною для багатьох функцій клітинного циклу Було запропоновано декілька сигналів, які зосереджуються головним чином на внутрішніх структурних послідовностях у межах самого субстрату Однією З таких пропозицій є "правило N-кшцевоі ділянки", за яким амінокінцевий залишок білку визначає період його напіврозпаду До складу інших білків, наприклад, ЦИКЛІНІВ, входить коротка ПОСЛІДОВНІСТЬ висококонсервативних амінокислот, яку називають "блоком знищення", яка, безсумнівно, є необхідною для розщеплення Крім того, ПОСЛІДОВНОСТІ "PEST", які складаються з ділянок, багатих на пролін, аспартат, глутамат, серин та треонін, також, здається, діють, як сигнали розщеплення Гадають, що такі внутрішні ПОСЛІДОВНОСТІ ДІЮТЬ, ЯК елементи розпізнавання між білковим субстратом та його специфічним комплексом убіквітинування Було описано інгібітори двох типів, які інпбірують протеолітичну активність протеосоми Повідомлялось, що певні альдегіди пептидів шпбірують хімотрипсиноподібну активність, пов'язану з протеосомою (ВІНІЦКІ A (Vmitsky А ), Мічод К (Michaud С), Пауерс Дж (Powers J) та Орловські М (Orlowski М) 1992 Biochemistry 31 9421-9428, Цубукі С (Tsubuki S), Хіроші К (Hiroshi К) 5 Сайто І (Saito Y), Міяшита H (Miyashita N), Іномата М (Inomata М ) та Кавашима С (Kawashima S) 1993 Biochem Biophys Res Commun 196 1195-1201, Рок К Л (Rock К L), Грамм К (Gramm С), Ротстайн Л (Rothstem L), Кларк К (Clark К), Стайн Р (Stem R ), Дік Л (Dick L ), Хванг Д (Hwang D ) та Гольдберг А Л (Goldberg A L) 1994 Cell 78 761-771) Це ІЧ-ацетил^-лейциніл^-лейцинал^-норлейцинал (ALLN) та тісно споріднена сполука, М-ацетил-Lлейциніл^-лейциніл-метюнал (LLM) з К,, що дорівнює 0,14мкМ Найбільш активним інгібітором цього типу є структурно споріднена сполука, Nкарбобензоксил^-лейциніл^-лейциніл^норвалінал (MG 115), яка має К,, що дорівнює 0,021 мкМ Незважаючи нате, що ці альдегіди пептидів є найефективнішими проти хімотрипсинопо 57035 дібної протеолітичної активності протеосом, результати докладних досліджень показали, що вони є неспецифічними інгібіторами протеаз У більш свіжих повідомленнях наведено опис ряду активних інгібіторів дипептидів, значення ICso яких знаходиться у межах 10-100нМ діапазону in vitro (Ікбал М (Iqbal М), Чаттерджі С (Chatterjee S), КауерДж К (KauerJ С), ДасМ (Das М ), Мессіна П (Messina P), Фрід Б (Freed В), Біаццо В (Віazzo W ) , Зімен Р (Siman R) 1995 J Med Chem 38 2276-2277) та ряду інгібіторів з числа дипептидів, які є похідними сс-кетокарбонільного та борного ефірів, які мають подібну ж активність in vitro (Ікбал М (Iqbal М), Чаттерджі С (Chatterjee S), Кауер Дж К (Kauer J С ), Малламо Дж П, (Mallamo J P ) , Мессіна ПА (Messina P A ) , Рейболдт А (Reiboldt А) та Зімен P (Siman R) 1996 Bioorg Med Chem Lett 6 287-290) У іншому повідомленні наведено опис класу сполук, які демонструють специфічність відносно шпбірування активності протеосом (Фентені Г (Fenteany G ), Стандерт Р Ф (Standaert R F ), Лейн В С (Lane W S ), Чі С (Choi S ), Корі Е Дж (Corey E J)Ta Шрайбер С Л (SchreiberS L) 1995 Science 268 726-731) Лактацистин є метаболітом Streptomyces який, зокрема, пригнічує протеолітичну активність протеосомного комплексу Цю молекулу, початкове, було відкрито завдяки и здатності до індукування розростання невриту у лінії нейробластомних клітин (Омура (Omura) та ІНШІ, 1991 J Antibiot 44 113), пізніше була показана її здатність до шпбірування проліферації клітин декількох типів (Фентені (Fenteany) та ІНШІ, 1994 Proc Nat11 Acad Sci USA 91 3358) Шляхом проведення досліджень зв'язування з застосуванням лактацистину з радіоактивною міткою (Фентені (Fenteany) та ІНШІ, 1995 Science 268 726-731) було встановлено ділянку зв'язування та механізм дії Результати цих досліджень показали, що лактацистин необоротно зв'язується з треоншовим залишком, який знаходиться на амінокінцевіи ДІЛЯНЦІ р-субодиниці згаданих протеосом Було досліджено також ряд аналогів, які базуються на структурі лактацистину (Фентені (Fenteany) та ІНШІ, 1995 Science 268 726731) Результати згаданих досліджень вказують на те, що р-лактонова структура була обов'язковою для їх шпбіторної активності Зараз точно встановлено, що протеосома є головною позалізосомальною протеолітичною системою, яку залучено до розщеплювальних шляхів, наслідком чого є численні та різноманітні КЛІТИННІ функції, наприклад, поділ клітин, обробка антигену та розщеплення регуляторних білків скороченого строку існування, наприклад, транскрипційних факторів, онкогенних продуктів та ЦИКЛІНІВ (див огляд Січановера A (Ciechanover A 1994 Cell 79 13-21) Головною функцією протеосоми є каталіз протеолізу білків до невеликих пептидів Однак було продемонстровано також, що згаданий убіквітинпротеосомний шлях може каталізувати регульоване протеолітичне перетворення великого неактивного попередника на активний білок Найкраще задокументованим подібним випадком є активація транскрипційного фактору NF-кВ (Паломбелла ВДж (Palombella V J ), Рандо О Дж (Rando О J ), 10 Гольдберг А Л (Goldberg A L ) та МаніатісТ (Мапіatis T) 1994 Cell 78 773-785) Активною формою NF-кВ Є гетеродимер, який складається з р65 та р50 субодиниць Останні є присутніми у цитозолі клітини у вигляді неактивного попереднику, зокрема, р105, який представляє собою 105КДа поліпептидний попередник р50 Протеолітичне перетворення р105 з утворенням р50 відбувається убіквітин-протеосомним шляхом На додаток до цього, перетворені р50 та р65 зберігаються у цитозолі у вигляді неактивного комплексу з інпбірувальним білком ІкВ Сигнали запалення активують NF-кВ ініціюванням сигнального шляху для повного розщеплення ІкВ, а також стимулюють перетворення р105 на р50 Таким чином, для індукованої сигналом активації NF-кВ необхідними є два протеолітичних явища, причому обидва з них регулюються убіквітин-протеосомним шляхом Невідомо, чим викликається закінчення протеолізу р105 з подальшим утворенням р50, однак було запропоновано, що конформація р50 робить його стійким до подальшого перетворення і викликає його відокремленням від 26S комплексу Той факт, що протеосома відіграє критичну роль у активації NF-KB, може знайти клінічне застосування шляхом використання інгібіторів, спрямованих на протеосомний протеоліз Під час деяких захворювань нормальне функціонування активного NF-кВ може бути шкідливим для здоров'я людини, що спостерігається під час запальних реакцій після бактеріальної, грибкової або вірусної інфекції Таким чином, інгібітори активації NF-кВ, внаслідок своєї здатності до запобігання секретуванню ЦИТОКІНІВ, можуть мати потенційну придатність при лікуванні гострого респіраторного дистрес-синдрому (ARDS) та СНІД'у Оскільки активація NF-кВ Є також необхідною умовою анпогенезу, протеосомні інгібітори можуть бути придатними для лікування хвороб, які пов'язані з аномальною неоваскуляризацією р53 вперше було описано, як онкобілок, однак, з того часу було показано, що він є залученим до багатьох клітинних процесів (див огляд Ко Л Дж (Ко L J ) та Провза К (Proves С) 1996 Genes Dev 10, 1054-1072) Було показано, до р53 індукує апоптоз у декількох ЛІНІЙ гематопоетичних клітин (Орен М (Огеп М ) 1994 Semm Cancer Biol 5, 221227) за посередництвом дії багатьох різних стимулів, у тому числі, пошкодження ДНК, вірусної інфекції та видалення факторів росту Важливо, однак, прийняти до уваги те, що апоптоз може бути індуковано незалежним від р53 шляхом, наприклад, дією глюкокортикоідів Наслідком індукування р53 є припинення росту клітини на етапі G1 клітинного циклу, а також загибель клітини внаслідок апоптозу Обидві згадані функції дозволяють р53 контролювати пошкодження ДНК, внаслідок чого зменшується поширення мутацій ДНК під час поділу клітин р53 затримує клітини на етапі G1 шляхом індукування циклін-залежного інгібітору кінази, р21, що, у свою чергу, викликає накопичення ппофосфорильованої форми продукту ретинобластомного гену Гадають, що р53 виконує роль фактору перевірки у КЛІТИНІ після пошкодження ДНК Він першим викликає припинення поділу клітини та апоптоз Відомо, ЩО розщеплення р53 відбувається убіквітин-протеосомним шляхом, і припинення 11 57035 розщеплення р53 є можливим способом індукування апоптозу Іншу потенційну придатність протеосомних інгібіторів може становити їх використання для лікування хвороб, які є наслідком аномальної проліферації клітин Добре задокументованим є той факт, що убіквітин-протеосомний шлях є критичним для регульованого руйнування ЦИКЛІНІВ, які керують виходом з мітозу та забезпечують перехід клітини до наступної фази клітинного циклу Таким чином, шпбірувальне розщеплення ЦИКЛІНІВ ШЛЯХОМ за стосування протеосомних інгібіторів викликає припинення росту Іншу потенційну придатність протеосомних інгібіторів, таким чином, може становити їх придатність для лікування хвороб, які є наслідком прискореного поділу клітин До таких хвороб належить рак, серцевосудинні хвороби, наприклад, міокардит, рестеноз, який є наслідком пластичної операції на судинах, хвороби нирок, наприклад, вовчак, полікістозна хвороба нирок, грибкові інфекції, дерматологічні хвороби, наприклад, псоріаз, аномальне загоєння ран, келощи, імунологічні хвороби, наприклад, аутоімунітет, астма та алергії, гостра алергічна реакція та алергічна реакція уповільненого типу, реакції "трансплантат проти хазяїна", реакції відторгнення трансплантату та нейроімунолопчні хвороби, наприклад, розсіяний склероз та гострий розсіяний енцефаломієліт Ціллю ЦЬОГО винаходу є надання способу шпбірування проліферації клітин у ссавців, який включає використання терапевтичне ефективної КІЛЬКОСТІ композиції, властивості якої щодо інпбірування проліферації клітин раніше були невідомими Ціллю ЦЬОГО винаходу є надання способу ефективного лікування хвороб, які є наслідком прискореного поділу клітин Іншою ціллю цього винаходу є надання способу лікування проліферативних хвороб, суть якого становить шпбірування розщеплення протеосомних інгібіторів Іншою ціллю цього винаходу є застосування терапевтичне ефективної КІЛЬКОСТІ згаданої композиції для шпбірування розладів проліферації клітин у людей За одним з варіантів втілення цей винахід є способом шпбірування проліферації клітин у ссавців, який включає введення згаданому ссавцю терапевтичне ефективної КІЛЬКОСТІ сполуки, яка має формулу Й7 О У згаданої сполуки кожен з R1-R4 індивідуально вибирають з групи, до складу якої входить водень, галоген, гідроксил, тіол, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, алкеніл, алкшіл, алкілалкеніл, алкілалкініл, алкокси, алкілтю, ацил, арилокси, амшо, амідо, карбоксил, арил, заміщений арил, гетероцикл, гетероарил, заміщений гетероцикл, гетероалкіл, циклоалкіл, заміщений циклоалкіл, 12 алкілциклоалкіл, алкілциклогетероалкіл, нітро або ціано Кожен з R5-R9 індивідуально вибирають з групи сполук, до складу якої входить водень, галоген, гідроксил, тіол, оксо, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, алкеніл, алкініл, алкіл алкеніл, алкілалкініл, алкокси, алкілтю, ацил, арилокси, аміно, амідо, карбоксил, арил, заміщений арил, гетероцикл, гетероарил, заміщений гетероцикл, гетероалкіл, циклоалкіл, заміщений циклоалкіл, алкілциклоалкіл, алкілциклогетероалкіл, нітро або ціано X вибирають з групи сполук, до складу якої входить водень, -D-i, -D2, -Е, -Di-E, -D2-E, -D1-D2 або сполука, яка має формулу де кожен з Di та D2 індивідуально вибирають з групи сполук, до складу якої входить сполука, яка має формулу Rio Ви або водень, галоген, гідроксил, тіол, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, алкшіл, алкілалкеніл, алкілалкініл, алкокси, алкілтю, ацил, арилокси, амшо, амідо, карбоксил, арил, заміщений арил, гетероцикл, гетероарил, заміщений гетероцикл, гетероалкіл, циклоалкіл, заміщений циклоалкіл, алкілциклоалкіл або алкілциклогетероалкіл, де Е вибирають з групи сполук, до складу якої входить X И4 О або водень, галоген, гідроксил, тіол, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, алкшіл, алкілалкеніл, алкілалкініл, алкокси, алкілтю, ацил, арилокси, амшо, амідо, карбоксил, арил, заміщений арил, гетероцикл, гетероарил, заміщений гетероцикл, гетероалкіл, циклоалкіл, заміщений циклоалкіл, алкілциклоалкіл або алкілциклогетероалкіл У разі, якщо Di D2 та/або Е вибирають зпосеред сполук, які включають замісників R-ю Ru, J1 та J2, тоді кожен з R10R14 індивідуально вибирають з групи сполук, до складу якої входить водень, галоген, гідроксил, тіол, оксо, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, алкеніл, алкшіл, алкілалкеніл, алкілалкініл, алкокси, алкілтю, ацил, арилокси, амшо, амідо, карбоксил, арил, заміщений арил, гетероцикл, гетероарил, заміщений гетероцикл, гетероалкіл, циклоалкіл, заміщений циклоалкіл, алкілциклоалкіл, алкілциклогетероалкіл, нітро або ціано та кожен з Ji та J2 індивідуально вибирають з групи сполук, до складу якої входить NRi 5 l CR16R17, О, S-(0)o2, Р-(0)оз, де кожен з RisR17 може індивідуально вибиратись з групи, до складу якої входить водень, галоген, гідроксил, оксо, тіол, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, алкшіл, алкілалкеніл, алкілалкініл, алкокси, алкілтю, ацил, арилокси, аміно, амідо, карбоксил, арил, заміщений арил, гетероцикл, гетероарил, заміще 57035 14 13 ний гетероцикл, гетероалкіл, циклоалкіл, заміщеде кожен з Di та D2 індивідуально вибирають з ний циклоалкіл, алкілциклоалкіл, алкілциклогетегрупи сполук, до складу якої входить роалкіл або ціано Rio R Згадані композиції є придатними, у разі введення у терапевтичних кількостях, для лікування ссавців, і, переважно, для лікування людей, які страждають на КЛІТИННІ проліферативні розлади, інфекційні хвороби та імунологічні захворювання водень, галоген, гідроксил, тіол, нижчий алкіл, Опис фігур заміщений нижчий алкіл, алкініл, алкілалкеніл, На фігурах, які додаються алкілалкініл, алкокси, алкілтю, ацил, арилокси, Фіг 1 - аналіз імунореактивності за допомогою аміно, амідо, карбоксил, арил, заміщений арил, вестерн-блотингу з застосуванням анти-ІкВа антигетероцикл, гетероарил, заміщений гетероцикл, тіл екстракту клітин лінії RAW, які було піддано гетероалкіл, циклоалкіл, заміщений циклоалкіл, обробці сполуками 173 та 187, опис яких наведено алкілциклоалкіл або алкілциклогетероалкіл, та у Таблицях 1 та 2, де Е вибирають з групи сполук, до складу якої Фіг 2 - аналіз імунореактивності за допомогою входить вестерн-блотингу з застосуванням анти-Р50 антитіл екстрактів клітин лінії RAW, які, перед обробкою ліпополісахаридами, було піддано обробці сполукою 187, опис якої наведено у Таблицях 1 та 2, Фіг 3 - аналіз зсуву рухливості у гелі з викорисводень, галоген, гідроксил, тіол, нижчий алкіл, танням ядерного екстракту, який було одержано з заміщений нижчий алкіл, алкініл, алкілалкеніл, клітин лінії RAW, які, перед обробкою ліпополісаалкілалкініл, алкокси, алкілтю, ацил, арилокси, харидами, було піддано обробці сполукою 187, алкілтю, ацил, арилокси, аміно, амідо, карбоксил, опис якої наведено у Таблицях 1 та 2, арил, заміщений арил, гетероцикл, гетероарил, Цей винахід є способом шпбірування клітинзаміщений гетероцикл, гетероалкіл, циклоалкіл, них проліферативних розладів, інфекційних хвозаміщений циклоалкіл, алкілциклоалкіл або алкілроб та імунологічних захворювань у ссавців і, зокциклогетероалкіл рема, у людей, з застосуванням композицій, які У сполук, які було визначено перед тим, кожен мають наведену далі загальну формулу з R5-R9 індивідуально вибирають з групи сполук, Re «7 У згаданої сполуки кожен з R1-R4 індивідуально вибирають з групи, до складу якої входить водень, галоген, гідроксил, тіол, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, алкеніл, алкініл, алкілалкеніл, алкілалкініл, алкокси, алкілтю, ацил, арилокси, аміно, амідо, карбоксил, арил, заміщений арил, гетероцикл, гетероарил, заміщений гетероцикл, гетероалкіл, циклоалкіл, заміщений циклоалкіл, алкілциклоалкіл, алкілциклогетероалкіл, нітро або ціано У згаданій композиції кожен з R5-R9 індивідуально вибирають з групи сполук, до складу якої входить водень, галоген, гідроксил, тіол, оксо, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, алкеніл, алкініл, алкілалкеніл, алкілалкініл, алкокси, алкілтю, ацил, арилокси, аміно, амідо, карбоксил, арил, заміщений арил, гетероцикл, гетероарил, заміщений гетероцикл, гетероалкіл, циклоалкіл, заміщений циклоалкіл, алкілциклоалкіл, алкілциклогетероалкіл, нітро або ціано X вибирають з групи сполук, до складу якої входить водень, -D-i, -D2, -Е, -D1-D2, -Di-E-i, -D2-E або сполука, яка має формулу до складу якої входить водень, галоген, гідроксил, тіол, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, алкеніл, алкініл, алкілалкеніл, алкілалкініл, алкокси, алкілтю, ацил, арилокси, аміно, амідо, карбоксил, арил, заміщений арил, гетероцикл, гетероарил, заміщений гетероцикл, гетероалкіл, циклоалкіл, заміщений циклоалкіл, алкілциклоалкіл, алкілциклогетероалкіл, нітро або ціано У разі, якщо D-i, D2 та/або Е вибирають зпосеред сполук, які включають замісників RIO-RM, J1 та J2, тоді кожен з RIO-RM індивідуально вибирають з групи сполук, до складу якої входить водень, галоген, гідроксил, тіол, оксо, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, алкеніл, алкініл, алкілалкеніл, алкілалкініл, алкокси, алкілтю, ацил, арилокси, аміно, амідо, карбоксил, арил, заміщений арил, гетероцикл, гетероарил, заміщений гетероцикл, гетероалкіл, циклоалкіл, заміщений циклоалкіл, алкілциклоалкіл, алкілциклогетероалкіл, нітро або ціано, та кожен з Ji та J2 індивідуально вибирають з групи сполук, до складу якої входить NRi5, C R i 6 R i 7 , О, S - ( 0 ) o 2 , Р-(О)0 3 ДЄ КОЖеН 3 Ri5-Ri7 індивідуально заміщується компонентом, який вибирають з групи, до складу якої входить водень, галоген, гідроксил, оксо, тіол, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, алкініл, алкілалкеніл, алкілалкініл, алкокси, алкілтю, ацил, арилокси, аміно, амідо, карбоксил, арил, заміщений арил, гетероцикл, гетероарил, заміщений гетероцикл, гетероалкіл, циклоалкіл, заміщений циклоалкіл, алкілциклоалкіл, алкілциклогетероалкіл або ціано Наведені далі терміни використовують для опису різних складових згаданої хімічної композиції, придатної у способі за цим винаходом Згадані терміни визначаються таким чином 16 15 57035 Згаданий термін "галоген" означає атоми фтоЗгаданий термін "арилокси" означає групи ру, брому, хлору або йоду ОАг, де Аг - арил, заміщений арил, гетероарил або заміщена гетероарильна група, як визначається Згаданий термін "гідроксил" означає групу далі ОН Згаданий термін "оксо" означає групу =0 Згаданий термін "аміно" означає групу NRR', де RTa R' незалежно можуть бути воднем, нижчим Згаданий термін "тіол" або "меркапто" означає алкілом, заміщеним нижчим алкілом, арилом, загрупу -SH та -S(O)0-2 міщеним арилом, гетероарилом, циклоалкіл ом Згаданий термін "нижчий алкіл" означає цикліабо заміщеним гетероарилом, як визначається чну алкільну групу з розгалуженим або прямим далі, або ацилом ланцюгом, який складається з одного-десяти атомів вуглецю Як додаткові приклади до пояснення Згаданий термін "амідо" означає групу цього терміну, наводяться такі групи, як метил, C(O)NRR', де R та R' незалежно можуть бути водетил, n-пропіл, І-пропіл, п-бутил, t-бутил, І-бутил нем, нижчим алкілом, заміщеним нижчим алкілом, (або 2-метилпропіл), циклопропілметил, І-аміл, парилом, заміщеним арилом, гетероарилом, заміаміл, гексил і т ін щеним гетероарилом, як визначається далі Згаданий термін "заміщений нижчий алкіл" Згаданий термін "карбоксил" означає групу означає нижчий алкіл, опис якого було наведено C(O)OR, де R може бути, незалежно, воднем, нищойно перед тим, який включає одну або декілька жчим алкілом, заміщеним нижчим алкілом, аритаких груп, як гідроксил, тіол, алкілтюл, галоген, лом, заміщеним арилом, гетероарилом, заміщеалкокси, аміно, амідо, карбоксил, циклоалкіл, заним гетероарилом і т ш , як визначено міщений циклоалкіл, гетероцикл, циклогетероалЗгаданий термін "арил" або "Аг" означає арокіл, заміщений циклогетероалкіл, ацил, карбоксил, матичну карбоциклічну групу, яка має як мінімум арил, заміщений арил, арилокси, гетарил, заміщеодне ароматичне кільце (наприклад, феніл або ний гетарил, аралкіл, гетероаралкіл, алкілалкеніл, дифеніл), або численні сконденсовані кільця, залкілалкініл, алкілциклоалкіл, алкілциклогетероалпосеред яких як мінімум одне кільце є ароматичкіл, ціано Ці групи можуть приєднуватись до будьним (наприклад, 1,2,3,4-тетрапдронафтил, нафякого атому вуглецю нижчої алкільної складової тил, антрил або фенантрил) Згаданий термін "алкеніл" означає групу Згаданий термін "заміщений арил" означає CR'=CR"R"', де кожен з R', R", R'" вибирають зарил, факультативно заміщений однією або декіпосеред водню, галогену, нижчого алкілу, заміщелькома функціональними групами, наприклад, ганого нижчого алкілу, ацилу, арилу, заміщеного логеном, нижчим алкілом, нижчим алкокси, нижарилу, гетероарилу, заміщеного гетероарилу або чим алкілтю, трифторметилом, аміно, амідо, т п , як визначено карбоксилом, гідроксилом, арилом, арилокси, гетероциклом, гетероарилом, заміщеним гетероариЗгаданий термін "алкініл" означає групу -С=Слом, нітро, ціано, алкілтю, тіолом, сульфаміде і R', де R' вибирають з-посеред водню, галогену, тш нижчого алкілу, заміщеного нижчого алкілу, ацилу, арилу, заміщеного арилу, гетероарилу, заміщеного Згаданий термін "гетероцикл" означає насичегетероарилу або т п , як визначено ну, ненасичену або ароматичну карбоциклічну групу, яка має одне кільце (наприклад, морфоліно, Згаданий термін "алкілалкеніл" означає групу піридил або фурил) або численні сконденсовані R-CR'=CR"'R"", де R - нижчий алкіл або заміщений кільця (наприклад, нафтопіридил, хіноксаліл, хінонижчий алкіл, кожен з R', R'", R"" може незалежно ЛІНІЛ, ІНДОЛІЗИНІЛ або бензо[Ь]тієніл) та як мінімум обиратись з-посеред водню, галогену, нижчого один гетероатом, наприклад, N, О або S у згадаалкілу, заміщеного нижчого алкілу, ацилу, арилу, ному КІЛЬЦІ, який може, факультативно, бути незазаміщеного арилу, гетарилу або заміщеного гетаміщеним або заміщеним, наприклад, галогеном, рилу, як визначено далі нижчим алкілом, нижчим алкокси, нижчим алкілтю, Згаданий термін "алкілалкініл" означає групу трифторметилом, аміно, амідо, карбоксилом, гідRC=CR', де R - нижчий алкіл або заміщений нижроксилом, арилом, арилокси, гетероциклом, гетечий алкіл, R' - водень, нижчий алкіл, заміщений роарилом, заміщеним гетероарилом, нітро, ціано, нижчий алкіл, ацил, арил, заміщений арил, гетеалкілтю, тіолом, сульфаміде і т ін роарил або заміщений гетероарил, як визначено далі Згадані терміни "гетероарил" або "гетар" означають гетероцикл, у якому як мінімум одне гетероЗгаданий термін "алкокси" означає групу -OR, циклічне кільце є ароматичним де R - нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, Згаданий термін "заміщений гетероарил" ацил, арил, заміщений арил, аралкіл, заміщений означає гетероцикл, факультативно, моно або аралкіл, гетероалкіл, гетероарилалкіл, циклоалкіл, полізаміщений однією або декількома функціоназаміщений циклоалкіл, циклогетероалкіл або зальними групами, наприклад, галогеном, нижчим міщений циклоалкіл, циклогетероалкіл або заміалкілом, нижчим алкокси, нижчим алкілтю, трищений циклогетероалкіл, як визначається далі фторметилом, аміно, амідо, карбоксилом, гідроЗгаданий термін "алкілтю" означає групу -SR, ксилом, арилом, арилокси, гетероциклом, гетероS(O)n=i 2-R, де R - нижчий алкіл, заміщений нижчий арилом, заміщеним гетеролом, нітро, ціано, алкіл, арил, заміщений ариларалкіл або заміщеалкілтю, тіолом, сульфаміде і т ін ний аралкіл, як визначено далі Згаданий термін "аралкіл" означає групу -R-Ar, Згаданий термін "ацил" означає групи -C(O)R, де Аг - арильна група та R - нижчий алкіл або заде R - водень, нижчий алкіл, заміщений нижчий міщена нижча алкільна група Арильна група моалкіл, арил, заміщений арил і т ш , як визначається же, факультативно, бути незаміщеною або замідалі 18 17 57035 щеною, наприклад, галогеном, нижчим алкілом, сульфаміде і т ін алкокси, алкілтю, трифторметилом, аміно, амідо, Згаданий термін "алкілциклоалкіл" означає карбоксилом, гідроксилом, арилом, арилокси, гегрупу -R-циклоалкіл, де циклоалкіл є циклоалкільтероциклом, гетероарилом, заміщений гетероариною групою, a R - нижчий алкіл або заміщений лом, нітро, ціано, алкілтю, тіолом, сульфамідо і нижчий алкіл Циклоалкільні групи можуть бути, тш факультативно, незаміщеними або заміщеними, наприклад, галогеном, нижчим алкілом, нижчим Згаданий термін "гетероалкіл" означає групу алкокси, нижчим алкілтю, трифторметилом, аміно, R-Het, де Het -гетероциклічна група та R - нижча амідо, карбоксилом, гідроксилом, арилом, арилокалкільна група Гетероалкільні групи можуть, фаси, гетероциклом, гетероарилом, заміщеним гетекультативно, бути незаміщеними або заміщеними, роарилом, нітро, ціано, алкілтю, тіолом, сульфамінаприклад, галогеном, нижчим алкілом, нижчим до і т ш алкокси, нижчим алкілтю, трифторметилом, аміно, амідо, карбоксилом, гідроксилом, арилом, арилокЗгаданий термін "амінокислота" означає Dси, гетероциклом, гетероарилом, заміщеним гетеабо L- ізомер природних або синтетичних альфароарилом, нітро, ціано, алкілтю, тіол, сульфамідо і амінркислот, у переважному варіанті, згаданими тш амінокислотами є природні амінокислоти аланін, аргінін, аспарагін, аспарагінова кислота, цистеїн, Згаданий термін "гетероарилалкіл" означає глутамш, глутамшова кислота, гліцин, гістидин, групу -R-HetAr, де HetAr -гетероарильна група та R ізолейцин, лейцин, лізин, метіонін, фенілаланін, - нижчий алкіл або заміщений нижчий алкіл Гетепролін, серин, треонін, триптофан, тирозин або роарилалкільні групи можуть, факультативно, бути валін незаміщеними або заміщеними, наприклад, галогеном, нижчим алкілом, заміщеним нижчим алкіУ типовому випадку D-i, D2 та Е, у разі їх прилом, алкокси, алкілтю, арилом, арилокси, гетеросутності у згаданій композиції, можуть бути аміноциклом, гетероарилом, заміщеним гетероарилом, кислотами Перевага, як правило, надається ліпонітро, ціано, алкілтю, тіолом, сульфамідо і т ш фільним амінокислотам Взагалі, скорочення амінокислот відповідають визначенням Згаданий термін "циклоалкіл" означає двовалентну циклічну або поліциклічну алкільну групу, Об'єднаної Комісії ПО БІОХІМІЧНІЙ Номенклатурі до складу якої входить від 3 до 15 атомів вуглецю ІЮПАК-ІЮБ, як описано у Eur J Biochem , 158, 9 У разі поліциклічних груп, це можуть бути численні (1984) сконденсовані кільця, у яких одне зі згаданих дисУ переважному варіанті R3 - метокси, -Di тальних кілець може бути ароматичним (наприлейцин, -D2 - лейцин, Е - NR'R" У найпереважніклад, інданил, тетрапдронафталш і т ін ) шому варіанті, -Di - 1-лейцин, -D2 - d-лейцин, Е вибирають з групи сполук, до складу якої входить Згаданий термін "заміщений циклоалкіл" ознабензиламш, 1-інданіламш, г\І,г\Г-дибензиламін, 2,6чає циклоалкільну групу, яка включає один або дифторбензиламш, 4-метоксибензиламін, піперодекілька замісників, наприклад, галоген, нижчий ніламін, ІЧНгта гліцинамід алкіл, заміщений нижчий алкіл, алкокси, алкілтю, арил, арилокси, гетероцикл, гетероарил, заміщеУ одній з переважних композицій R3 - метокси, ний гетероарил, нітро, ціано, алкілтю, тіол, сульDi - лейцин, D2 - лейцин, Е - бензиламш У ІНШІЙ фаміде і т ш переважній композиції R3 - метокси, Di - лейцин, D2 - лейцин, Е - 1-шданиламін У ще ІНШІЙ переваЗгаданий термін "циклогетероалкіл" означає жній композиції R3 - метокси, Di - лейцин, D2 - лейциклоалкільну групу, де один або декілька атомів цин, Е - N.N-дибензиламін У ІНШІЙ переважній вуглецю кільця заміщено гетероатомом (наприкомпозиції, R3 - метокси, Di - лейцин, D2 - лейцин клад, N, О, S або Р) та Е -2,6-дифторбензиламш Згаданий термін "заміщений циклогетероалкіл" означає циклогетероалкільну групу, визначення У цих переважних композиціях додаткова пеякої наведено у цьому описі, до складу якої вхоревага надається тому, що Di - L-лейцин, D2 - Dдить один або декілька замісників, наприклад, галейцин ВІДОМІ сполуки, які можуть бути придатлоген, нижчий алкіл, нижчий алкокси, нижчий алкіними у згаданому терапевтичному способі за цим лтю, трифторметил, аміно, амідо, карбоксил, винаходом, розкриваються у Таблиці 1, яка навогідроксил, арил, арилокси, гетероцикл, гетероарил, диться безпосередньо після цього заміщений гетероарил, нітро, ціано, алкілтю, тіол, 19 57035 20 Таблиця І Rl R2 a R3 R4 OMe OMe a OMe F R5 Me R? R2 R9 Dl OH OMe Me OEt OH OMe NH2 NHEt OH OH OH OH OH OMe R9 Dl OH =N-OH =N-OH Me F Me R8 Ph Me Ph F Rl M OMe =CHPh Me Me Ph R3 K4 OMe R5 =N-OH R6 К7 R8 =CH~(4ДІВДЄТШІ UMe ашнофеніл =N-OH COOEt -N-OH Ph Me Me a F OMe OMe F Me Me Ph Me OMe OMe Me Ph OMe OMe =N-OH Ph OMe OMe =N-OH Ph Me Me NHCOCOOEt Me OMe Me F OMe OMe OMe F NHAc Ph Ph COO Me OMe OMe a NHCOCOOEt N02 Me Me Me =N-OH 4 Me OMe Me OEt OMe OH OEt OH Me OH NHMe OH OMe | OH OMe OH NHumtno" пропіл OH OH OMe OMe OMe OEt OMe OH OEt NH-n-щюпІл OH Cl OMe OMe OMe OMe OH OH МЄТОКСИ -феніл OMe Cl Ph Me CN =N-OH COOEt OMe Me NH2 OMe OEt OH OMe 4H4-Uметилетил)--1піперазиніл]ка р-боніл] фенокси OEt 57035 21 Ю Me R1 R4 R5 R6 22 R9 R8 Me F Ph ОМе =N-0H 2нафтил ОМе Me Ph Ph Me Ph ОМе СІ ОМе ОМе Ph Me SH Me Me і N02 ОМе F Ph ОМе Me Me Me ОМе ОМе ОМе Ph Ph Me COOEt Ph COO Me Фахівцю у цій галузі відомо, що стереоізомери згаданих композицій, опис яких наведено тут, а також ізомери та стереоізомери компонентів, які складають згадані композиції, які визначено у цьому описі, входять до об'єму композицій, які є придатними у згаданому терапевтичному способі за цим винаходом У разі, якщо до складу сполуки, придатної для згаданого способу за цим винаходом, входить основна група, може бути одержана сіль згаданої сполуки, яку одержують шляхом додання кислоти Солі згаданих сполук за цим винаходом, які одержують доданням кислоти, одержують стандартним шляхом у відповідному розчиннику з вихідної сполуки та надлишку кислоти, наприклад, хлористоводневої, бромистоводневої, сірчаної, фосфорної, оцтової, малеїнової, бурштинової або метансульфонової У разі, якщо до складу згаданої кінцевої сполуки входить кислотна група, можуть бути одержані катіонні солі згаданої сполуки У типовому випадку вихідну сполуку обробляють надлишком лужного реактиву, наприклад, гідроксиду, карбонату або алкоксиду, до складу якого входить ВІДПОВІДНИЙ катіон Прикладами катіонів, присутніх у фармацевтичне прийнятних солях, є такі катіони, як Na+, КГ, Са +2 та NH 4+ Певні зі згаданих сполук утворюють внутрішньокомплексні солі або цвітерюни, які також можуть бути прийнятними Згадані сполуки, опис яких наведено перед тим, є придатними для лікування клітинних проліферативних розладів, інфекційних хвороб та імунологічних захворювань у ссавців, зокрема, у людей, які потребують такого лікування До клітинних проліферативних розладів, які можуть лікуватись за допомогою композиції, опис якої наведено пе D! OH OH Cl OMe OH OMe OH OMe OMe NH-я-оропіл OMe =N~QH OH I =N-OH OMe COOEt OH OH OMe OH NH2 OEt NH-n-Sjmn OH NH2 Me OH OH OMe 3~пропанова 3-пропанова OH кислота кислота OMe OH NHMe OMe =N~OH OEt COOEt OMe Ph ред тим, належать рак, серцевосудинні захворювання, наприклад, міокардит та рестеноз, який є наслідком пластичної операції на судинах, хвороби нирок, наприклад, вовчак та полікистозна хвороба нирок, реакція відторгнення трансплантату, подагра та ІНШІ проліферативні розлади До автоімунних захворювань, які можуть лікуватись за допомогою композиції, опис якої було наведено перед тим, належить ревматоїдний артрит, вовчак, діабет типу І, розсіяний склероз та тому подібні розлади та захворювання До інфекційних хвороб, які можуть лікуватись за допомогою композиції, опис якої було наведено перед тим, належить запальна хвороба прямої кишки, хвороба Крона, СНІД, гострий респіраторний дистрес-синдром і тому подібні розлади Згадані композиції, опис яких наведено перед тим, можуть також бути використані для лікування грибкових інфекцій, дерматологічних захворювань, наприклад, псоріазу, аномального загоювання ран, келодів, імунологічних захворювань, наприклад, автоімунітету, астми, алергії, гострої алергічної реакції, алергічної реакції уповільненого типу, реакції "трансплантат проти хазяїна", відторгнення трансплантату та нейроімунолопчної хвороби, наприклад, розсіяного склерозу та гострого розсіяного енцефаломієліту Згаданий спосіб лікування цих хвороб та розладів включає парентеральне або пероральне введення ефективної КІЛЬКОСТІ обраної сполуки або їх комбінації, у переважному варіанті, диспергованої у фармацевтичному носи Стандартні дозовані форми згаданого активного інгредієнту взагалі вибирають у діапазоні від 0,01 мг/кг до 10Омг/кг, однак вони будуть легко визначатись фахівцем у цій галузі у залежності від шляху вве 23 дення, віку та стану пацієнта Згадані стандартні дози можуть вводитись від одного до десяти разів на день у разі гострого або хронічного захворювання НІЯКІ неприйнятні ТОКСИКОЛОГІЧНІ ефекти не очікуються у разі, якщо сполуки за цим винаходом вводяться у ВІДПОВІДНОСТІ до цього винаходу Фармацевтичні композиції, до складу яких входять згадані сполуки за цим винаходом або їх ПОХІДНІ, можуть виготовлятись у вигляді розчинів або ліофілізованих порошків для парентерального введення Порошки можуть відновлюватись шляхом додання придатного розчинника або іншого фармацевтичне прийнятного носія перед використанням Рідка лікарська форма, взагалі, представляє собою забуферений ІЗОТОНІЧНИЙ ВОДНИЙ роз чин Прикладами придатних розріджувачів є нормальний ІЗОТОНІЧНИЙ фізіологічний розчин, стандартний 5% розчин декстрози у воді або забуферений розчин ацетату натрію або амонію Така лікарська форма є особливо придатною для парентерального введення однак м можна використовувати також для перорального введення Може виникнути необхідність додання наповнювачів, наприклад, полівінілпіролідону, желатини, пдроксицелюлози, аравійської камеді, поліетиленгліколю, маніту, хлориду натрію або цитрату натрію У альтернативному варіанті згадані сполуки можуть шкапсулюватись, таблетуватись або виготовлятись у формі емульсії або сиропу для перорального введення Фармацевтичне прийнятні тверді або рідкі носи можуть додаватись для підсилення або стабілізування згаданої композиції або для полегшення виготовлення згаданої композиції До рідких носив належать сироп, арахісова олія, оливкова олія, гліцерин, фізрозчин, спирти та вода До твердих носив належать крохмаль, лактоза, сульфат кальцію, дипдрат, сульфат кальцію (гипс), стеарат магнію або стеаринова кислота, тальк, пектин, аравійська камедь, агар або желатина Згадані носи можуть включати також матеріал уповільненого виділення, наприклад, моностеарат гліцерилу або дистеарат гліцерилу, самостійно або у суміші з воском КІЛЬКІСТЬ твердого носія змінюється але у переважному варіанті становить від приблизно 20мг до приблизно 1 граму на стандартну дозу Фармацевтичні дозовані форми виготовляють за допомогою традиційних способів, які застосовують у фармації, до яких належать помел, змішування, гранулювання та пресування, за потребою, до таблетованих форм, або помел, змішування та заповнення до твердих желатинових капсульованих форм У разі використання рідкого носія згадана лікарська форма буде мати вигляд сиропу, еліксиру, емульсії або водної або неводної суспензії Така рідка лікарська форма може вводитись безпосередньо per os або заливатись до м'якої желатинової капсули Приклад 1 Згадані сполуки, придатні для використання у згаданому терапевтичному способі за цим винаходом, одержують традиційними методами органічної хімії Реактиви сполучення є добре відомими у цій галузі техніки, наприклад, DCC (дициклогексилкарбодиімід) та ІНШІ карбодиіміди, EDC (етилдиметиламшопропілкарбодиіміду пдрохлорид), ВОР (бензилоктилфталат) та РРА (поліпарабанова ки 57035 24 слота), і вони можуть, факультативно, бути застосованими з іншими реактивами, наприклад, НОВТ (пдроксибензотриазиду дипдрат), NMM (нітрометилметакрилат), DMAP (диметиламшопіридин), які можуть полегшити проходження згаданої реакції Одержання сполук згаданої формули (1), де D-i, D2 та Е є амінокислотами, є добре відомим у цій галузі і здійснюється за допомогою традиційних розчинних або твердофазних методів, як описано у Боданскі (Bodanszky), "The Practice of Peptide Synthesis", видавництво Sprmger-Verlag, перше видання, 1984 Придатними захисними групами для згаданої аміногрупи є групи, розкриті Гріном (Greene) та іншими, "Protective Group in Organic Synthesis", друге видання, видавництво John Wiley and Sons, Нью-Йорк, 1991 Особливо придатними амінозахисними групами є бензилоксикарбоніл, tбутоксикарбоніл та фторенілметоксикарбонільні групи Твердофазний синтез пептидів здійснюється таким чином Амідну смолу (компанія Rink) вміщують до шприца, спорядженого фритовим фільтром Згадану смолу позбавляють захисту за допомогою 20% розчину піперидину у DMF Через 20 хвилин згадану смолу промивають п'ять разів DMF, п'ять разів метанолом, потім п'ять разів DMF Розчин амінокислоти (Е), карбодиіміду та НОВТ у DMF втягують до згаданого шприца і згадана реакційна суміш перемішується впродовж 4-20 годин Після ЦЬОГО реакційний розчин випускають зі згаданого шприцу і одержану суміш промивають п'ять разів DMF, п'ять разів метанолом, потім п'ять разів DMF Згаданий цикл повторювали доти, доки не було приєднано необхідну ПОСЛІДОВНІСТЬ ЯК кінцевий реактив сполучення було використано суміш 5-метокси-1-шданон-3-оцтовоі кислоти, карбодиіміду та НОВТ Після кінцевих промивань згаданої смоли пептидний фрагмент було відщеплено від згаданої смоли за допомогою суміші 95% TFA/5% води Концентрація згаданої відщеплювальної суміші забезпечила одержання твердої речовини білого кольору Приклад 2 Сполуки за цим винаходом, які було одержано за способом Прикладу 1, було піддано випробуванням таким чином 20S каталітичну субодиницю згаданої протеосоми (відому також, як мультикаталітичний протеїназний комплекс) очищали до однорідного стану з головного мозку великої рогатої худоби за методами, наведеними у літературних джерелах (Вілк С (Wilk S) та Орловські М (Orlowski М), 40 842 J Neurochem (1983)) Хімотриптична активність згаданого комплексу визначається підвищенням флуоресценції після відщеплення згаданого субстратного білку сукциніллейцин-лейцин-валш-тирозин-7-амшо-4-метил кумарину До складу стандартної суміші для аналізу in vitro входить 2мкг 20S протеосоми, 0,1100мкг/мл інгібітору протеосоми у 200мкл 50мм ГЕПЕС-буферу, до складу якого входить 0,1% додецилсульфату натрію, рН 7,5 Згадану протеолітичну реакцію започатковують додаванням 50мм флюорогенного пептидного субстрату з подальшим проходженням впродовж 15 хвилин при температурі 37°С 3 гадану реакцію припиняли доданням ЮОмкл 100мм ацетатного буферу, рН 4,0 25 57035 26 Швидкість протеолізу є прямо пропорційною до скопи (ЕХ 370 нм, ЕМ 430 нм) Структуру перевіКІЛЬКОСТІ вивільненого амінометилкумарину, яка рених сполук, а також результати ІСПИТІВ наведено визначається засобами флуоресцентної спектроу Таблиці 2, яку представлено далі Таблиця 2 Сполука R3 D1 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 3S 39 40 41 42 43 44 45 46 47 МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО d-ieu-NH2 d-ieu leu-NH2 d-ieu leu d-leu leu Nle-NH2 d-Nle-NH2 Nva-NH2 d-ieu d-phe-NH2 СНА phe NSe NIe leu d-ieu d~leu МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО leu d-Nle d-Nle phe-NH2 Tfc-NH2 Tic d-phe leu CHA-NH2 d-vai d-pro d-cha d-leu d-vai d-cha d-phs-NH2 d-phg бензил дибензшіамін ЙУ !eu giy вів nva phe cha val D2 E d-leu-NH2 his-NH2 leibNH2 leu-NH2 d-leu-NH2 Aib-NH2 Leu-NH2 Ieu-NH2 d-Leu-NH2 Ieu-NH2 leu leu d-leu d-leu d~leu-NH2 leu-NH2 g!y-NH2 ;*iy-NH2 gly-NH2 gly-NH2 d-leu-NH2 d-leu-NH2 AIb-NH2 d-leu-NH2 d-leu-NH2 d~leu-NH2 d-va!-NH2 d-val-NH2 d-cha-NH2 d~ieu-NH2 ЙУ $У d-!eu d-ieu d-ieu d-ieu tj-leu d-leu glv-NH2 gly-NH2 ЯІУ-Ш2 gly-NH2 gly-NH2 gly-NH2 gly-NH2 gly-NH2 ICso мкг/ мл 5 і >Ю >10 >ї0 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >ІО >10 5 >!0 0,1 >І0 >І0 >І0 >1О >І0 10 >І0 >ї0 > 10 >10 >10 >10 > ш >0 1 >10 >0 1 >10 >0 1 >0 1 >0 1 >0 1 >0 1 >10 >0 1 >0 1 27 Сполука 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 бо 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 7S 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 57035 R3 ш МеО МеО МеО МеО Іеи МеО d-leu d-leu МеО МеО d-leu МеО d-pro-NH2 МеО d-ieu МеО d-nva МеО nva МеО d-ala МеО d-tic d-sei МеО МеО дшопроіил МеО морфолш МеО пірощдин МеО фенетиламін МеО фенпропшамш МеО пшеридан МеО діетиламін МеО циклобутиламш МеО гептияамш МеО 3-метоксипропіламш МеО 3,4-диметоксифенілетил-амш МеО N-метилбензилашн МеО циклопентиламш МеО диметилпіпервдин МеО N-бензияетанояамін МеО шдолш МеО диметиламін МеО б]с(2-метоксиетил>амш МеО пшероніламш МеО 4-гщроккипшеридин МеО 3~йодоаншін МеО і~амшоівдан МеО етаноламш МеО 4-метоксибешиламін МеО іеи МеО Іеи МеО Іеи МеО Іеи МеО іеи МеО іеи МеО Іеи МеО d-arg МеО d-asp МеО d-asn pg h pro leu 28 D2 E d-Іеи d-leu d-leu d-leu ala-NH2 d-ala-NH2 d-pro-NH2 g!y-NH2 g!y-NH2 gly-NH2 ^Y-NH2 d-phe-NH2 d-!eu-NH2 d-teu-NH2 d-leu-NH2 d-leu-NH2 d-leu~NH2 d-nie d-nva d-phe d-cha d-val d-phg d-pro d-leu-NH2 d-leu-NH2 d-leu-NH2 gly-NH2 gly-NH2 g!v~NH2 gly-NH2 gly-NH2 gly~NH2 giy-NH2 lC5o мкг/ мл >10 >10 0,5 0,5 >10 >10 >10 >10 >I0 >10 >10 >10 >30 >10 >lt) >10 >10 >O 1 >10 >10 >I0 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >IO >I0 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >!0 >10 >10 >10 10 29 57035 ЗО Сполука R3 D1 D2 96 97 98 99 100 101 102 103 104 МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО d-asn d-ieu-NH2 d-ieu-NH2 d~Ieu-NH2 d-ieu-NH2 d-leu-NH2 d-leu-NH2 d-leu-NH2 d-leu-NH2 105 106 107 108 109 ПО Ш 112 МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО МеО 113 114 E МеО МеО ЇС 5 0 мкг/ МЛ d-кіи d-gln d-his d-iys d-thi d-tyr d-trp >10 >10 >10 >10 >10 >I0 >i0 >10 4(амінометил) піридин 1,2-діамшопропан тюморфолш 2-метоксибзнзиламін 4-мегилгапервдин >I0 >10 >10 >10 >10 3-ШрШГИДІШОЯ >10 4-аміно-1 -бензшшшеридош 3-2мшо-1,2-пропандіол І-(2~амшоетая) >10 >10 >10 ПїрОЛЩИН 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 2-амшо-2-мегал-1-пропанол 2-(амшометші) піридин МеО 2-(метиламшо)етанол МеО 3~(3-пірвдилметшіамшо) пропюнітрил МеО 2-метоксйетііламш МеО 2-амшо-1 -феніл-1,3пропандіол МеО 2-піроящинонетанол МеО 3-фсніл-1 -протламін МеО р-ашзидш МеО анілін МеО leu МеО leu МеО leu МеО leu МеО leu МеО leu МеО d-leu d-leu МеО d-leu МеО МеО d-ieu МеО d-leu МеО d-leu МеО d-leu МеО d-leu МеО d-leu d-leu МеО МеО d-ku >10 >w >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 d-leu d-leu d-leu d-leu d-leu d-leu d-aig-NH2 d-asp-NH2 d-asn-NH2 d-cha-NH2 d-Rlu-NH2 d-nlc-NH2 d-tyr-NH2 d-tip-NH2 d-idn-NH2 d-lys-NH2 d-nva-NH2 d-val-NH2 val-NH2 d-ala-KH2 a!a-NH2 d-phe-NH2 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >I0 31 32 57035 Сполука R3 D1 D2 140 141 142 143 144 МеО МеО МеО МеО МеО d-phg-NH2 d-ser-NH2 d-thi-NH2 d-tic-NH2 145 МеО 146 МеО 147 148 149 МеО МеО МеО 150 151 152 153 154 МеО МеО МеО МеО МеО 155 МеО 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 МеО МеО МеО Н МеО МеО МеО МеО МеО МеО d-leu d-leu d-leu d-leu ЬЇ-ІО >Ш >ІО >І0 >10 >10 >10 >10 >10 >ю >.о >0 1 d-leu glv-NH2 1ВД0ЛШ фенпропіл р-анізидин шпергаїл 2-шролщин-метанол 2-амшо-1 -феніл-1,3пропандюл N- бензилетанолашн диметиламш анілін біс-2-метоксиетшіамін leu ieu leu leu leu eu eu eu eu eu eu амінометшщ иклогексанамш мкг/ мл >10 >10 >10 >0 1 >0 1 >ю >0 1 >10 >50 >5в >50 >50 >50 d- eu d-leu-OH d-leu-OH d-leu d-leu d- eu d- eu d- eu dd- eu d- eu aib-NH2 >50 >50 >50 >50 >10 >Ш >ЇО бензил ПШерИДИНіЛ >10 _>І0_ дибензші 1 N-метилбензил N-метилбензил 33 57035 D2 Сполука R3 DI !82 183 МеО МеО leu 184 185 1Вб 137 188 МеО МеО МеО !еи Іеи Іеи МеО МеО Іеи Іеи 189 МеО іеи 190 191 МеО Іеи МеО їси 192 193 МеО МеО leu leu 194 195 196 19? 198 199 200 МеО МеО МеО МеО МеО МеО leu leu leu leu d-leu d-leu d-ieu їси МеО Приклад З Сполуки, які було одержано за способом Прикладу 1, було піддано випробуванням проти декількох різних ЛІНІЙ клітин КЛІТИННІ моношари було культивовано у присутності експериментальної сполуки впродовж 18 годин з метою визначення їх здатності до шпбірування проліферації клітин Проліферацію клітин визначали колориметричне за допомогою методу водного нерадюактивного визначення проліферації клітин Celltiter 96 (компанія Promega), за яким проліферація клітин є прямо пропорційною поглинанню на 490нм Результати представленно, як ICso У мкг/мл для шпбірування проліферації клітин різного типу Сїюлтеа 173 1S7 194 196 197 KAW 20 10 і 1 12 MCF7 m 6 OVCAR z 5 3 2 2 CaCo n 8 Panc-I 17 7 8 S S Приклад 4 Сполуки, які було одержано за способом Прикладу 1, було піддано випробуванням на шпбірування синтезу фактору некротизацм пухлин, індукованого ліпополісахаридами Клітини лінії RAW піддавали попередній обробці різними концентраціями експериментальної сполуки за 1 годину до введення ліпополісахариду (100нг/мл) Супернатанти клітинних культур збирали через 1 годину і аналізували на концентрацію фактору некротизацм пухлин (TFA) за допомогою твердофазного імуноферментного аналізу (ELISA) Сполука 173 187 194 196 197 ІС50 (мкг/мл) 5 5 3 3 3 34 E амінаметшщиклогексанамід амінометйлшкло gly-NH2 гексанамщ d-leu феніл d-leu фенетил d-leu фенпропіл d-leu шдан d-leu ашнометилциюгогексан d-leu амінометилпіридин d-ieu адамантил d-ieu тетрагідроїзохінолш d-leu 4~піридилметил N-бензилd~leu гідроксамід 4~метокси-бензил d-leu d-leu 4-нітробензил d-leu 2,6~дифтор-бензил d-leu пшероніл бензил дибензил ізоаміл 1С» мкг/ мл >10 >10 >10 >10 >10 0,5 >10 >І0 >10 >10 10 0,4 >10 1!) 0,08 0,2 >І0 >І0 >10 Приклад 5 У цьому Прикладі перевіряється здатність сполуки 173 і, зокрема, сполуки 187, опис яких наведено у Таблицях 1 та 2, які було наведено перед тим, до шпбірування протеосомної активності, яка вказується, частково, присутністю ІкВ та/або р105 у пригнічених клітинах Для переміщення NF-кВ ДО ядра у ВІДПОВІДЬ на стимулювання ліпополісахаридом та активації транскрипції повинні відбутись два протеолітичні явища, зокрема, розщеплення шпбіторного білку ІкВ та перетворення попередника р105 на зрілий продукт р50 Ці протеолітичні явища служать для демаскування сигналу локалізації NF-кВ у ядрі Інпбірування індукованого ліпополісахаридами розщеплення ІкВ Клітини ЛІНІЇ RAW піддавали попередній обробці різними концентраціями експериментальної сполуки за 1 годину до введення ліпополісахариду (100нг/мл) Через 1 годину збирали суцільні КЛІТИННІ лізати, Юмкг білку було відокремлено за допомогою електрофорезу у поліакриламідному гелі у присутності додецилсульфату натрію (SDSPAGE), перенесено до нітроцелюлози та проаналізовано на імунореактивність за допомогою антиІкВ антитіл Вестерн-блотам (див Фіг1) було надано видимої форми за допомогою набору Воеhnnger Mannheim Chemiluminescent detection kit Результати блотинг-аналізу показують присутність ІкВ у клітинах, які було піддано обробці всього 5мкг/мл сполук 173 та 187 Інпбірування індукованого ліпополісахаридами перетворення попереднику р105 на зрілий продукт р50 Сполуку 187, опис якої наведено у Таблицях 1 та 2, які було наведено перед тим, було використано для попередньої обробки клітин лінії RAW, як описано перед тим, і суцільні КЛІТИННІ лізати, які було одержано, як описано перед тим, аналізували на імунореактивність за допомогою анти-р50 антитіл Результати, які наведено на Фіг 2, вказують на присутність як р50, так і р105 у клітинах, які 35 57035 було оброблено всього 5мкг/мл сполуки 187, у той час, як у необроблених клітин більшу частину р105 було перетворено на р50 Інгібірування індукованого ліпополісахаридами переміщення NF-кВ ДО ядерної фракції клітин Клітини ЛІНІЇ RAW обробляли впродовж 1 години сполукою 187 (20мкг/мл), після чого інкубували з ліпополісахаридом (ІООнг/мл) впродовж додаткової години Ядерні фракції було одержано за стандартними процедурами Реакційні суміші 36 зв'язування для аналізу зсуву рухливості у гелі включали 5мкг ядерного екстрагованого білку, 50000 cpm (КІЛЬКІСТЬ імпульсів на хвилину) мічено32 го Р NF-кВ консенсусного зв'язувального олігонуклеотиду у присутності та відсутності п'ятидесятикратного надлишку неміченого олігонуклеотиду Результати аналізу зсуву рухливості у гелі, які наведено на Фігурі 3, показують, що сполука 187 є ефективною щодо інгібірування накопичення NFкВ у ядрі згаданих клітин Сьсч* ка С !т>ы IV WJHM Комп'ютерна верстка Е Ярославцева М Ш [ Підписано до друку 05 07 2003 Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ТОВ "Міжнародний науковий комітет", вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна