Спосіб визначення молочної кислоти в рослинних кормах для сільськогосподарських тварин

12748 УКРАЇНА 03) C1 (5і)5 Л 23 К 1/00 ДЕРЖАВНЕ ПАТЕНТНЕ ВІДОМСТВО ОПИС ДО ПАТЕНТУ НА ВИНАХІД (54) СПОСІБ ВИЗНАЧЕННЯ МОЛОЧНОЇ КИСЛОТИ В РОСЛИННИХ КОРМАХ ДЛЯ СІЛЬСЬКОГОСПОДАРСЬКИХ ТВАРИН 1 (20) 94322363, 23.07.93 (21J4854479/SU (22)04.07.90 (24)28.02.97 (46)28.02.97. Бюл. N* 1 (56) Митрук Б.М. Применение газовой хроматографии в микробиологии и медицине. М., "Медицина", 1979. с.349. (72) Малінін Олег Олексійович, Шевцова Га лина Миколаївна, Ткаченко Андрій Мико лайович (73) Інститут експериментальної І клінічної ветеринарної медицини (UA) (57) Способ определения молочной кислоты в растительных кормах для сельскохозяйственных животных, включающий перевод в эфирную форму и идентификацию ее на газовом хроматографе с пламенно-ионизационным детектором, отличающийся тем, что молочную кислоту превращают в этиловый эфир путем нагревания раствора в этиловом спирте в присутствии серной кислоты (уд, вес 1.84) в соотношении 7,5:1-15:1, при температуре 60-80°С, в течение 5-20 минут, затем добавляют дистиллированную воду и хлороформ всоотношении 1:1,5-3:1 с последующим отделением хлороформенного экстракта для хроматографирования. С > Изобретение относится к области кормопроизводства и может быть использовано при ветеринарно-санитарной оценке кормов и других биологических объектов. Цель изобретения - упрощение и удешевление способа определения, сокращение сроков исследования, улучшение санитарно-гигиенических условий труда. Поставленная цель достигается тем, что в процессе определения молочная кислота превращается в этиловый эфир, а не в метиловый, т.е. проводится процесс этилирования в присутствии серной кислоты при соотношении 7,5:1-15:1, температуре 6080°С в течение 5-20 мин. Способ осуществляется следующим образом: к 4-6 мл 0,2-1% раствора молочной кислоты в этиловом спирте добавляют 0,40,6 мл концентрированной серной кислоты (х.ч., ГОСТ42С4-77, уд.вес 1,84) и нагревают смесь на водяной бане при температуре 60 80°С, в течение 5-20 мин. Затем пробирки со смесью охлаждают под струей водопроводной воды, переносит ее в делительную воронку, смывают остатки 7,5-10 мл дистиллированной воды и 5 мл хлороформа (соотношение спирт:вода:хлороформ - 1:1,5:1-1:3:1). Эфир молочной кислоты перераспределяют на в хлороформ в течение 3-5 мин, осторожно перемешивая смесь в делительной воронке. Хлороформ сливают в чистую воронку и промывают 4 мл дистиллированной воды затем его собирают в чистую пробирку и сушат 0,5 г безводного натрия сульфата. Количество этилового эфира молочной кислоты определяют на газовом хроматографе с пламенно-ионизационным детектором, температура испарителя ~ 150°С, температура термостата колонок - 120°С, колонка диаметром 4 мм, длиной - 1 м, заполнена хроматоном с 10% полиэтиленгли ю 00 О 12748 коль-сукцината. Расчет ведется способом общепринятым в газовой хроматографии. П р и м е р 1. К 4 мл 0,2% раствора молочной кислоты в этиловом спирте добавляли 0,6 мл концентрированной серной кислоты (уд.вес. 1,84) и нагревали смесь на водяной бане 70°С 10 мин. Избыток серной кислоты не оправдано ухудшает условия работы и воспроизводимость. П р и м е р 2. Кб мл 0,2% раствора молочной кислоты в этиловом спирте добавляли 0,4 мл концентрированной серной кислоты (уд.вес.1.84) и нагревали смесь на водяной бане при 70°С 10 мин. Уменьшение количества серной кислоты начинает сказываться на воспроизводимости метода. П р и м е р з . КБ мл 0,2% раствора молочной кислоты в этиловом спирте добавляли 0,5 мл концентрированной серной кислоты (уд.вес. 1.84) и нагревали смесь на водяной бане при 70°С 10 мин. Образуется достаточное количество эфира и отмечается хорошая воспроизводимость результатов П р и м е р 4. К 5 мл 0,2% раствора молочной кислоты в этиловом спирте добавляли 0,5 мл концентрированной серной киспоты (уд.вес. 1.84) и этиливание проводили на водяной бане при температуре 60-69°С в течение 10 мин. В этом случае эфир образуется в недостаточном количестве. П р и м е р 5. Молочную и серную кислоты смешали, как в примере 4, Этилироеание проводили при температуре 70-75°С. В этом случае образуется наибольшее количество этилового эфира молочной кислоты. П р и м е р 6. Смесь молочной и серной кислот, как в примере 4, этилировали при температуре 70-80°С. Отмечали значительные потери этилового эфира, что связано с кипением этилового спирта при температуре 78,4°С. Упорядник Замовлення 4081 10 15 20 25 30 35 40 Техред М.Моргентал П р и м е р 7. Смесь молочной и серной кислот как в примере 4 этилировали при температуре 70-75°С в течение 2-5 мин. Эфир молочной кислоты образуется в недостаточном количестве. П р и м е р е . Молочную кислоту как в примере 5 этилировали при температуре 7075°С а течение 10-15 мин. Образуется небольшое количество этилового эфира. П р и м е Р 9. Молочную кислоту, как в примере 5 этилировали при температуре 7075°С в течение 20 мин. Отмечали потери этилового эфира. ПримерЮ. Молочную кислоту в смеси с серной, как в примере 5, этилировали при температуре 70-75°С в течение 10-15 мин. Следующая стадия-извлечение этилового эфира. Извлечение этилового эфира проводили при соотношении компонентов - спирта:водьгхлороформа - 1:1,5:1. Отмечали недостаточно полный выход этилового эфира. Пример 11- После обработки молочной кислоты, как в примере 10, этиловый эфир извлекли при соотношении компонентов спирт:вода:хлороформ - 1:2:1. Происходило наиболее полное извлечение эфира. Пример 12. После обработки молочной кислоты, как в примере 10, этиловый эфир извлекали при соотношении компонентов спирт:вода:хлороформ - 1:3:1. Этиловый эфир извлекался неполно. Заявляемый способ определения молочной кислоты обладает высокой чувствительностью, более прост и дешевле, так как осуществим без использования специального оборудования, необходимого для работы с ядовитыми веществами. При применении данного способа сроки исследования сокращаются на 10-20%, а санитарно-гигиенические условия труда повышаются за счет применения этилового спирта вместо метилового. Коректор Н. Король Тираж Підписне Державне патентне відомство України, 254655. ГСП, Київ-53. Львівська пл., 8 Відкрите акціонерне товариство "Патент", м. Ужгород, вул Гагаріна 101