Спосіб оцінки ступеня цитотоксичності біологічно активних сполук та фармакологічних препаратів

1. Спосіб оцінки ступеня цитотоксичності біологічно активних сполук та фармакологічних препаратів, що полягає у створенні контакту водних розчинів досліджуваних препаратів у різних концентраціях з тест-клітинами, який відрізняється тим, що як тест-клітини використовують інфузорії Colpoda steinii, а визначення максимально переносимої концентрації досліджуваних біологічно активних сполук здійснюють за показниками їх життєздатності через три години від початку контакту досліджуваної речовини з інфузоріями. 2. Спосіб за п.1, який відрізняється тим, що збереження життєздатності визначають через рухливість інфузорій і їх кількість. (19) (21) u200512542 (22) 26.12.2005 (24) 17.07.2006 (46) 17.07.2006, Бюл. № 7, 2006 р. (72) Лозицький Віктор Петрович, Григорашева Ірина Миколаївна, Федчук Алла Семенівна, Гридіна Тетяна Леонідівна, Бощенко Юрій Анатолійович, Позднякова Людмила Іванівна, Славіна Ніна Георгіївна, Віноходов Дмитро Олегович, Полежаєв Фіал Ібрагімович (73) УКРАЇНСЬКИЙ НАУКОВО-ДОСЛІДНИЙ ПРОТИЧУМНИЙ ІНСТИТУТ ІМ. І.І.МЕЧНИКОВА, ТОВАРИСТВО З ОБМЕЖЕНОЮ ВІДПОВІДАЛЬНІСТЮ "ВІДРОДЖЕННЯ М" 3 15629 4 що суттєво подовжує процес попередньої оцінки ТОВ "Відродження М", Одеса). У флакон з Colpoda цитотоксичності біологічно активних речовин. steinii додавали 2мл живильного середовища, інЗадача способу оцінки ступеня цитотоксичноскубували у термостаті при температурі 28°С проті біологічно активних сполук та фармакологічних тягом 17 годин, після чого витримували 15 хвилин препаратів полягає у спрощенні технології та сков умовах природного освітлення та досліджували роченні часу на дослідження однієї сполуки шляпід світловим мікроскопом при збільшенні 8х10 хом застосування адекватної моделі культури методом висячої краплі. У полі зору виявлено 8 тест-клітин. інфузорій, які активно рухались. Активну культуру Задача вирішується тим, що як тест-клітини Colpoda steinii розділили на 5 флаконів по 0,4мл. У використовують стандартизований препарат інфу4 флакони додали по 0,4мл розчину декаметоксизорії Colpoda steinii, а визначення не цитотоксичної ну на дистильованій воді в концентраціях 8, 6, 4, концентрації досліджуваних біологічно активних та 2мкг/мл (кінцеві концентрації препарату були сполук здійснюють за показниками життєздатності удвічі меншими). В контрольний флакон додали через 10 хвилин, а при збереженні життєздатності 0,4мл дистильованої води. Після 10-хвилинної - додатково через три години. Збереження життєінкубації при температурі 28°С мікроскопічне досздатності визначають через рухливість інфузорій лідження виявило зниження рухливості інфузорій у та їх можливість утворювати цисти. 5 в полі зору при кінцевій концентрації декаметокНовим у корисній моделі є сукупність відмінних сину 4мкг/мл. У інших пробах кількість інфузорій ознак, що є необхідними і достатніми для виріне змінилася. Зразки продовжували інкубувати ще шення поставленої задачі. 3 години. Мікроскопічне дослідження показало Спосіб реалізується наступним чином. Для повну втрату рухливості Colpoda steinii при кінцепроведення досліджень використовують два флавій концентрації декаметоксину 4мкг/мл і відсуткони із сухою культурою інфузорій і один флакон з ність зниження рухливості інфузорій і їх кількості живильним середовищем. У кожен флакон з при інших концентраціях декаметоксину, що виColpoda steinii додають по 2мл живильного серевчались, а також у контролі. Таким чином, МПК довища, інкубують у термостаті при температурі декаметоксину на Colpoda steinii становила 28-29°С протягом 16-18 годин. Перед досліджен3мкг/мл. ням цитотоксичності препарату культуру Colpoda Розробка нового способу оцінки цитотоксичноsteinii витримують 15 хвилин в умовах природного сті біологічно активних сполук і фармакологічних освітлення, після чого досліджують під світловим препаратів дозволяє спростити методику визнамікроскопом при збільшенні 8х10 методом висячої чення цитотоксичності БАВ та фармпрепаратів у або роздавленої краплі. Для підтвердження життєпорівнянні з прототипом та скоротити строки досздатності культури у полі зору має бути не менш лідження більше, ніж у 5 разів. Так, на визначення ніж 5 інфузорій, які активно рухаються. У флакони цитоксичності біологічно активних сполук методом з активною культурою Colpoda steinii вносять розпрототипу витрачається до 5 діб (123-125 годин): чини різних концентрацій досліджуваного препа- 3-5 годин на трипсинізацію тканин для одеррату на дистильованій воді в об'ємному співвідножання первинних культур шенні 1:1 і перемішують. У контрольний флакон з - 48 годин на вирощування первинної культури активною культурою інфузорій вносять аналогічабо перщеплюваної культури клітин та одержання ний об'єм дистильованої води без препарату. Зрамоношару клітин зки термостатують при температурі 28-29°С протя- 72 години - інкубація з препаратом. гом 10,0±1,0хв., після чого досліджують під На визначення цитоксичності біологічно активмікроскопом. У пробі, що досліджується, враховуних сполук заявленим методом витрачається до ють наявність рухливих та нерухливих інфузорій. 21 години: Якщо у пробі, що досліджується, загинула чи пе- 18 годин на одержання активної культури із ретворилась на цисти більшість інфузорій (більше сухого препарату 90%), подальше дослідження припиняють, вважа- 3 години на інкубацію та дослідження. ючи цю концентрацію препарату токсичною. За Бібліографічні посилання наявності більшості живих інфузорій інкубацію 1. Патент України N 61648А, МПК G01N33/15. продовжують до 3 годин з наступною мікроскопією. Спосіб комплексної оцінки токсичності лікарських Найбільшу концентрацію досліджуваного препарапрепаратів / Заявник: Інститут колоїдної хімії та ту, яка не порушує життєздатності інфузорій ввахімії води та Національний фармацевтичний уніжають за максимально переносиму концентрацію верситет. - Бюл. N 11 (17.11.2003). (МПК). 2. Вивчення антивірусної дії потенційних ліПриклад конкретного виконання. карських засобів / Методичні рекомендації. - Київ: Для проведення досліджень використовували Державний фармакологічний центр МОЗ України, суху культуру інфузорій (препарат виробництва 2000. Комп’ютерна верстка В. Мацело Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601