Спосіб функціональної оцінки макрофагальної трансформації мононуклеарів

1. Спосіб функціональної оцінки макрофагальної трансформації мононуклеарів, який включає виділення мононуклеарів з гепаринізованої крові досліджуваної тварини, відмивання клітин і культивування їх в поживному середовищі з додаванням препарату крові, антибіотиків, фунгіцидного антистатика на покривних скельцях, в термостаті 3 16638 товують відстояну плазму крові досліджуваної тварини, а інкубування клітин здійснюють на цілих покривних склах, занурюючи їх у чашку Петрі діаметром чотири сантиметри з середовищем Хенкса власного приготування з додаванням антибіотика і фунгіцидного антистатика. Використання у заявленому способі виділення клітин мононуклеарів відстоюванням в поживному середовищі на холоді з наступним зливанням, замість тривалого центрифугування, в прототипі попереджує деформацію і руйнування відмитих клітин мононуклеарів, що підвищує якість одержуваних препаратів та ефективність способу. Введення в поживне середовище в якості препарата крові відстояної плазми досліджуваних тварин дає можливість відмовитись від застосування стандартизованої сироватки крові ВРХ, як протектора живих клітин, а заміна дорогого середовища 199 середовищем Хенкса власного приготування суттєво здешевлює витрати на здійснення способу. Використання в якості ємності для інкубування клітин на цілих покривних скельцях чашок Петрі замість пеніцилінових флаконів, в які занурюють четвертинки покривних скелець забезпечує зручність виконання способу, покращує якість препаратів клітин, а відтак, ефективність способу. Отже, заявлений нами спосіб забезпечує зручне і надійне виготовлення препаратів та об'єктивну і швидку оцінку стану макрофагальної трансформації мононуклеарів. Виявлене технічне рішення, в якому є ряд суттєвих ознак, спільних із заявленим ["Методика функціональної оцінки попередників макрофагів (А 4 клітин)". Собко А.Й., Квачов В.Г., Український науково-дослідний ветеринарний інститут, Москва. 1987р. 13с.]: виділення мононуклеарів з гепаринізованої крові досліджуваної тварини, відмивання клітин, культивування їх в поживному середовищі з додаванням препарату крові, антибіотиків, фунгіцидного антистатика на покривних склах в термостаті при температурі 37°С з наступним вилученням їх з ємності із поживним середовищем після інкубування, фіксацією, фарбуванням і мікроскопією одержаних препаратів та визначенням на них кількості трансформованих макрофагів. Однак, наявність зазначених спільних з найближчим аналогом ознак недостатня для отримання технічного результату, який забезпечує заявлена корисна модель. Заявлений спосіб належить до галузі ветеринарної імунології, зокрема до способів визначення імунологічного потенціалу тварин, а саме до способів оцінки стану макрофагальної трансформації мононуклеарів в крові досліджуваних тварин і, може бути використаний у тваринницьких господарствах з різними формами власності та установах ветеринарної медицини для визначення інтенсивності формування системи імунного захисту тварин. Ефективність заявленого способу і його переваги перед найближчим аналогом підтверджені прикладом конкретного виконання в умовах лабораторії імунології ІБТ УААН. Схема і результати досліджень наведені в таблиці 1. Таблиця 1 Схема досліду № п/п 1 1 2 2.1 2.2 2.3 2.4 Показники 2 Способи оцінки Відомий (прототип) 3 Не менше десяти Новий 4 Не менше десяти Проведено досліджень Етапи виконання Гепаринізована перефирична кров + + Виділення мононуклеарів Центрифугування 2х1500об/хв відстоювання Культивування в поживному середовищі, що містить: препарат крові Стандартизована сироватка ВРХ Відстояна плазма крові досліджуваної - антибіотики + тварини - фунгіцидний антистатик + + - середовище 199 + + - середовище Хенкса + Культивуванння в термостаті В пеніцилінових В чашках Петрі при t 37°C: флаконах - на покривних скельцях 1/4 розрізаних цілих - вилучення скелець + + - промивання + + - висушування + + - фіксація + + - фарбування за Романовським-Гімза + + - фіксація покривного скельця на предметне скло - мікроскопіювання + + - одержано якісних препаратів + + 9 10 Наведені дані свідчать про перевагу заявленого способу. Комп’ютерна верстка А. Рябко Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601