Спосіб заморожування ембріонів або яйцеклітин

Предлагаемое изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности те хнике консервирования биологических объектов, например эмбрионов и яйцеклеток млекопитающих, и может быть применено в центрах трансплантации и в биологических лабораториях. Известен способ замораживания эмбрионов в соломинках (Безуглый Н.Д, Осмотическая реакция яйцеклеток и эмбрионов млекопитающих при криоконсервации: Дисс. … канд. биолог. наук, 1984). Заправляют цилиндрический контейнер средой для выведения криопротектора, первым воздушным пузырьком, средой с криопротектором и эмбрионом или яйцеклеткой, вторым воздушным пузырьком, средой для выведения криопротектора, замораживают до -30°C и переносят в жидкий азот. При достижении -7°C камера установки вскрывается, откуда извлекается контейнер с эмбрионом или яйцеклеткой, и оператор, переохлажденным в жидком азоте пинцетом, касается стенки контейнера. Убедившись, что в контейнере образуются первые кристаллы льда, контейнер укладывают на место и проводят посев льда в следующем. К недостаткам данного способа следует отнести сложность процесса замораживания, возможное изменение режима, что может привести к гибели эмбрионов. В основу изобретения поставлена задача усовершенствовать способ замораживания эмбрионов и яйцеклеток путем проведения инициации кристаллизации при температуре не ниже -7°C самопроизвольно, без вмешательства оператора или применения специальных электронных или электронномеханических устройств, что приводит к повышению сохранности зародышей после деконсервации, упрощению технологического режима замораживания и снижению затрат на криоконсервацию. Поставленная задача решается тем, что з известном способе замораживания эмбрионов или яйцеклеток, включающем заполнение цилиндрического контейнера средой для выведения криопротектора, первым воздушным пузырьком, средой с криопротектором и эмбрионом или яйцеклеткой, вторым воздушным пузырьком, средой для выведения криопротектора, замораживание до -30°C и перенос в жидкий азот, согласно изобретению, заполнение цилиндрического контейнера первым воздушным пузырьком осуществляют при условии соотношения диаметра воздушного пузырька к внутреннему диаметру контейнера равному 2 : 1, а замораживание проводят в вертикально расположенном контейнере, причем при замораживании температур у среды с криопротектором и эмбрионом или яйцеклеткой поддерживают выше температуры среды для выведения криопротектора не менее, чем на 15°C. Влияние соотношения диаметра первого воздушного пузырька к внутреннему диаметру контейнера на протекание искусственной инициации кристаллизации показано в табл.1. Для прорастания кристаллов льда при температуре посева льда необходимо, чтобы они уже находились в нижней части. Это достигается тем, что температура там всегда ниже, чем в верхней части контейнера. Вероятность образования кристаллов и их прорастания из нижней части контейнера в верхнюю показана в табл.2. На чертеже (фиг.) показан контейнер для замораживания эмбрионов, для наглядной иллюстрации сущности способа. Пример. Сущность предложенного способа заключается в следующем. Цилиндрический контейнер для замораживания 1 с пробкой 2 заправляют в следующей последовательности: средой для выведения криопротектора 3 на 35мм, воздушным пузырьком 4 на 2 - 3мм (оптимальность такого размера пузырька показана в табл.1), средой с криопротектором 7 на 30мм и эмбрионом 6, воздушным пузырьком 8 - 15 - 10мм, средой для выведения крипротектора 9. Воздушные пузырьки предназначены для разделения сред для выведения криопротектора 3, 9 и замораживания криопротектора 7 с в течении криоконсервации. Первый воздушный пузырек 4 приобретает новое свойство, так как он используется не только для разделения сред 3 и 7, но и для прорастания кристаллов льда. Это достигается разделением сред 3 и 7 в месте касания поверхности воздушного пузырька 4 размером 2 - 3мм с внутренней стенкой контейнера 1. Контакт между двумя средами осуществляется тонким слоем жидкости 5. адсорбированном на внутренней поверхности контейнера 1. Замораживание проводят в вертикально расположенном контейнере. Контейнеры с эмбрионами располагают в горловине сосуда Дьюара в вертикальном положении для того, чтобы замораживание проводилось в вертикальном ингредиенте температур (температура снизу на 15°C ниже средней, средняя - на 15°C ниже верхней). Стандартный диаметр контейнера 1,5мм. Диаметр нижнего пузырька 4 (размер) должен быть в 2 раза больше для того, чтобы разделитьсреды для выведения криопротектора 3 и 9, и замораживание эмбриона 6, позволить прорасти кристалликам льда из нижней части к средине, где находится эмбрион 6. Размер пузырька 4 позволяет разделить среды и обеспечить тонкий слой жидкости с внутренней стенкой контейнера, что сохранит эмбрион 6 от воздействия внутриклеточного льда, а следовательно сохранить зародыш после деконсервации. При снижении температуры среды с криопротектором и эмбрионом, расположенной в центральной части контейнера, температуру среды для выведения криопротектора, находящейся в нижней части контейнера, поддерживают ниже температуры центральной части не меньше, чем на 15°C. Предложенный способ замораживания эмбрионов или яйцеклеток обладает рядом преимуществ: улучшается технологичность режима замораживания, так как не требуется вмешательства оператора и доступа к объекту, и, таким образом, это исключает нарушение режима замораживания, повышает сохранность эмбрионов после замораживания - оттаивания, улучшаются также условия труда технологов.