Спосіб прогнозування індивідуальної радіочутливості до малих доз іонізуючого опромінення

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологическим способам исследования, и может применяться для прогноза индивидуальной радиочувствительности при действии низких доз радиации в лечебно-профилактических и научноисследовательских учреждениях при обследовании и лечении лиц, пострадавших в результате аварий на атомных станциях, подводных лодках, проживающих на территориях, загрязненных радионуклидами, лиц, отбираемых для работы в условия х действия низких уровней радиации и у онкологических больных для прогноза их чувствительности к лучевой терапии. Известны способы оценки индивидуальной радиочувствительности при воздействии ионизирующего воздействия путем исследования хромосомных аберраций [1]. Однако эти способы сложны и трудоемки, требуют значительных затрат времени и квалифицированных специалистов-цитологов. Ме тод подсчета хромосомных аберраций включает взятие образцов костного мозга, что является трудоемкой процедурой, окраску этих мазков, от качества которой зависит результат исследования, а затем много часов напряженной и утомительной для глаз работы - подсчета хромосомных аберраций. Результаты оценки хромосомных аберраций сложно стандартизовать, они часто зависят от условий культивирования клеток, качества их окраски и квалификации исследователя. Хромосомные аберрации могут наблюдаться и при других воздействиях, не связанных с радиационным фактором, что может искажать результаты и снижает точность способа. Наиболее близким к предлагаемому техническому решению является иммуногенетический способ определения индивидуальной радиочувствительности, который осуществляют путем подсчета микроядер в лимфоцитах крови [2]. Однако этот способ эффективен, только при высоких "костномозговых" дозах облучения, вызывающих указанные изменения. Кроме того, способ включает много этапов, требует культивирования лимфоцитов in vitro, использование митогенов, действие которых дозозависимо, что снижает точность и усложняет исследование. Главным отличием и недостатком аналогов и прототипа от предлагаемого нами способа является то, что они позволяют только констатировать изменения в лимфоцитах, наступающие после радиационного воздействия, но предсказать индивидуальную радиочувствительность до действия радиации в малых дозах этими способами не удается. В основе изобретения была поставлена задача создать способ, который бы позволил прогнозировать индивидуальную радиочувствительность к малым дозам ионизирующего облучения независимо от времени воздействия радиационного фактора как до, так и после воздействия. Задача достигается тем, что, согласно изобретению, в предлагаемом способе оценивают наследуемые HLA-иммуногенетические маркеры индивида, постоянно присутствующие на мембранах лимфоцитов и кодирующие его радиочувствительность при встрече с радиационным фактором. Сравнение заявляемого способа с прототипом позволяет установить его соответствие критерию "новизна", поскольку использование иммуногенетических маркеров HLA при прогнозе индивидуальной радиочувствительности проводится впервые. При изучении других известных те хнических решений в данной области иммуногенетические признаки HLA, позволяющие прогнозировать индивидуальную радиочувствительность до радиационного воздействия и отличающие заявляемый способ от прототипа, небыли заявлены и поэтому они обеспечивают заявляемому способу соответствие критерию "новизна". В отношении соблюдения критерия "существенные отличия" можно сказать, что предлагаемый способ предусматривает, вопервых, возможность именно прогноза индивидуальной радиочувствительности, вовторых, возможность прогноза по отношению к повреждающему действию именно малых доз радиации и, в-третьих, использование для этих целей иммуногенетических стабильных маркеров индивида - антигенов гистосовместимости HLA. Целесообразность использования HLA критериев определяется необходимостью унифицирования, упрощения, повышения точности и создания экспресс-метода прогноза и оценки индивидуальной радиочувствительности обследуемого, особенно к малым дозам ионизирующего облучения, потребностью не только констатировать и выявлять изменения в радиочувствительном организме, но предвидеть эти изменения с целью их своевременной профилактики и лечения. Экспресс диагностика в нашем способе обеспечивается наличием HLA генетических маркеров на мембранах лимфоцитов и простотой их выявления. Методика не требует дорогостоящих и импортных реактивов, время на ее проведение 2 - 3 часа. Этапы процесса - забор и выделение лимфоцитов крови у пациента, проведение реакции лимфолизиса со специфическими типирующими сыворотками и учет результатов. Выявление определенных HLA маркеров свидетельствует о повышенной радиочувствительности индивида к ионизирующему облучению в малых дозах. Таким образом, предлагаемый способ представляет собой новый подход к решению поставленной задачи прогнозированию индивидуальной радиочувствительности к малым дозам ионизирующего облучения. Он действительно имеет преимущества по сравнению с аналогом и прототипом и позволяет не только оценить степень повреждений в организме при действии радиационного фактора в малых дозах, но предвидеть эти изменения и своевременно принимать соответствующие меры, предотвращая развитие заболеваний, что определяет медикосоциальный и экономический эффект. Способ перспективен при прогнозе индивидуальной радиочувствительности и состояния здоровья в целом у жителей контролируемых территорий Украины, при отборе лиц для работы в условиях действия малых доз радиационного фактора, при радиотерапии онкобольных и др. Способ осуществляется следующим образом. Из 2мл гепаринизированной крови пациента выделяют лимфоциты, доводят их концентрацию средой 199 с 5% AB-сывороткой до 2млн/мл и раскапывают микрошприцем по 1мкл в планшеты Терасаки, содержащие типирующие HLA антисыворотки, и инкубируют при 22°C 30 минут. Затем в каждую лунку добавляют 5мкл кроличьего комплемента и инкубируют при комнатной температуре 1 час. После инкубации в каждую лунку добавляют 1мкл трипанового синего и через 10 минут учитывают реакцию [3]. Подсчитывают процент клеток "убитых" антителами (окрашенных в синий цвет). В лунках с положительной реакцией присутствуют лимфоциты, несущие соответствующие типирующей сыворотке антигены HLA. При выявлении у индивида на лимфоцитах антигенов A2, A10, B8, B35 прогнозируют повышенную чувствительность к малым дозам ионизирующего облучения. Преимущества предлагаемого технического решения по сравнению с прототипом: При проведении сравнительных исследований выявления индивидуальной радиочувствительности с помощью нашего способа и способа прототипа получены следующие результаты. В результате у лиц, подвергавшихся действию ионизирующей радиации в малых дозах с нарушениями в системе иммунитете при. определении по способу прототипа только в небольшом проценте случаев выявляются критерии повышенной радиочувствительности. При определении нашим способом получена высокая конкордантность предлагаемых генетических критерием с повышенной радиочувтвительностью, что позволяет прогнозировать индивидуальную радиочувствительность нашим способом с более высокой точностью, чем в прототипе, проводить оценку до воздействия радиации и таким образом своевременно назначать соответствующие лечебные и профилактические мероприятия. Преимущества предлагаемого изобретения: 1) сокращение времени исследования; 2) упрощение исследования; 3) повышение точности исследования; 4) оценка генетической предрасположенности чувствительности к радиации до ее воздействия на организм человека.