Штам бактерій erysipelothrix rhusiopathiae к для зараження свиней при визначенні імуногенності вакцин проти бешихи свиней

Корисна модель відноситься до ветеринарної мікробіології, зокрема до біотехнології та контролю якості засобів захисту тварин, і може бути використана для зараження свиней з метою визначення імуногенності живих та інактивованих вакцин проти бешихи свиней. Єдиним ефективним методом попередження виникнення бешихи свиней в господарствах є щеплення тварин високоімуногенними живими або інактивованими вакцинами. Найбільш достовірним способом контролю якості вакцин проти бешихи свиней за показником імуногенності є пряме зараження імунізованих тварин попередньо відтитрованим та стабільним за показниками патогенності контрольним штамом Erysipelothrix rhusiopathiae. Контрольний (заражаючий) штам збудника бешихи, що використовується для прямого зараження імунізованих тварин повинен бути стабільно патогенним для тварин, а також мати стійкі морфологічні та культурально-біохімічні властивості. Аналогом корисної моделі є патогенний штам збудника бешихи свиней Erysipelothrix rhusiopathiae 27, який використовується для зараження голубів при визначенні імуногенності інактивованої гідроокисалюмінієвої формолвакцини проти бешихи свиней „Бешиформ” [Ветеринарні імунобіологічні препарати: довідник /За заг. ред. П.І.Вербицького, А.М.Головка. -К.: Реферат, 2004. -400с.]. Вказаний штам патогенний для голубів та мишей і не придатний для визначення імуногенності живих та інактивованих вакцин проти бешихи на свинях. Прототипом корисної моделі є контрольний заражаючий штам Erysipelothrix rhusiopathiae 149, який використовується для визначення імуногенності живих та інактивованих вакцин проти бешихи свиней на мишах. [Ветеринарні імунобіологічні препарати: довідник /За заг. ред. П.І.Вербицького, А.М.Головка. -К.: Реферат, 2004. 400с.]. Вказаний штам Erysipelothrix rhusiopathiae 149, в наслідок тривалого пасажування на мишах, був адаптований до них і на сьогодні є одним із найкращих заражаючих штамів для визначення імуногенності вакцин проти бешихи свиней при проведенні випробувань на мишах у більшості країн світу. Однак він, як було встановлено нами, з причини тривалого пасажування на мишах значно знизив свою патогенність у відношенні до свиней і тільки як виключення може бути використаним для зараження свиней лише в дуже великих дозах - 3 та більше млрд. мікробних клітин. В основу корисної моделі, що представлена, поставлено задачу створити контрольний заражаючий штам Erysipelothrix rhusiopathiae К, який патогенний для свиней у низькій заражаючій дозі при внутрішньодермальному введенні, зі стабільними морфологічними та культурально-біохімічними властивостями і достатньою потенцією росту. Штам Erysipelothrix rhusiopathiae К виділений нами в 1996 році із органів свині, що загинула від захворювання на бешиху, відклонований та селекціонований в лабораторії біотехнології бактерійних препаратів Інституту ветеринарної медицини УААН. Штам Erysipelothrix rhusiopathiae К задепонований в колекції мікроорганізмів Державного науковоконтрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів 14 листопада 2001 року і має реєстраційний номері 159. Морфологічні властивості. Бактерії бешихи штаму Erysipelothrix rhusiopathiae К в мікроскопічних препаратах із добової бульйонної культури, пофарбованих за Грамом, на виявлення спор та капсул, являють собою тонкі, прямі або дещо зігнуті палички розташовані поодиноко або попарно, а в препаратах із старих культур - у вигляді коротких ланцюжків. Спор та капсул не утворюють. В препаратах «роздавлена крапля» - нерухомі. Культуральні властивості. Бактерії добре ростуть в МПБ Хо ттінгера при рН7,4-7,7 та температурі 36,5-37,0°С, утворюючи через 24 години інтенсивне помутніння у вигляді «муарових хвиль», а при стоянні випадають в осад, який при струшуванні піднімається у вигляді косички. На МПА Хоттінгера через 48 годин утворюють дрібні росинчаті прозорі колонії, які через 72-96 годин збільшуються, набувають слабко-блакитного кольору. В звичайних МПБ, МППБ, рідкому середовищі Сабуро та на МПА ріст незначний. Ферментативні властивості. В диференційно-діагностичних середовищах - желатин не розріджують, індол не утворюють, утворюють сірководень, ферментують арабінозу, галактозу, глюкозу, лактозу, левульозу, ксилозу з утворенням кислоти без виділення газу, зброджують молоко, не виділяють каталазу. Патогенні властивості. Бактерії бешихи штаму Erysipelothrix rhusiopathiae К патогенні для тварин (мишей, голубів, свиней) та людини. Мінімальна заражаюча доза для свиней складає - один млн. мікробних клітин введених вн утрішньодермально. Антигенні (серологічні) властивості штаму. Має загальновидові антигенні властивості, дає реакцію аглютинації з аглютинінами видоспецифічної імунної сироватки крові свиней, великої рогатої худоби та кролів в пробі росту та в РА. Дані щодо останнього пасажу на тваринах. Пасажований на свинях 15 червня 1999 року. Спосіб, умови та склад середовища для культивування штаму. Бактерії бешихи штаму К інтенсивно ростуть в МПБ Хотгінгера наступного складу, %: пептону - 0,5; натрію хлориду - 0,3; калію фосфорнокислого однозаміщеного - 0,3; натрію фосфорнокислого двохзаміщеного - 2; твіну 80-0,05; сироватки крові великої рогатої худоби, коней, овець - 8-10; печінкового бульйону - 5; глюкози - 0,4; амінного азоту -180-200мг % при рН7,4-7,7 і температурі 36,5-37°С. Максимальне накопичення біомаси - протягом 24 годин. Для вирощування на МПА Хоттінгера до МПБХ зазначеного складу додають агар-агар в кількості 1,8-2,0% (в залежності від його якості). Одноразове внутрішньодермальне введення свиням тримісячного віку бактерій Erysipelothrix rhusiopathiae штаму К в кількості 1млн. живих мікробних клітин в 1см 3 (в п'ять місць по 0,2см 3) викликає у них захворювання з типовими для бешихи свиней клінічними проявами. Корисна модель ілюструється наступними прикладами: Приклад 1 Трьом свиням тримісячного віку одноразово внутрішньодермально з латеральної сторони на середині умовної лінії від лопатки до стегна вводили культуру бактерій заражаючого штаму Erysipelothrix rhusiopathiae К в загальній кількості 1млн. живих мікробних клітин в 1см 3 (в п'ять місць по 0,2см 3 у ви гляді розетки на відстані 2-3см одна ін'єкція від другої). Через 5-6 годин навколо місць внутрішньодермального введення бактерій заражаючого штаму спостерігали запалення та набряки шкіри, які протягом перших дво х діб зливались з утворенням гарячих затверділих червоно-багряних припухлостей розміром від 3 до 8см в діаметрі. Такі ж враження шкіри виникали через дві доби і на інших ділянках тіла. Захворювання тварин супроводжувалось підвищенням температури тіла до 41-42°С, малорухливістю, постійним лежанням та не поїданням корму. Приклад 2 Трьом свиням тримісячного віку одноразово внутрішньодермально з латеральної сторони на середині умовної лінії від лопатки до стегна вводили культуру бактерій заражаючого штаму Erysipelothrix rhusiopathiae 149 в загальній кількості 1млн. живих мікробних клітин в 1см 3 (в п'ять місць по 0,2см 3 у вигляді розетки на відстані 23см одна ін'єкція від другої). Протягом десяти діб у тварин не реєстрували підвищення температури тіла та інших ознак характерних для бешихи свиней. Приклад 3 Трьом свиням тримісячного віку одноразово внутрішньодермально на середині умовної лінії від лопатки до стегна з двох сторін тіла вводили по 1см 3 культури бактерій контрольного штаму Erysipelothrix rhusiopathiae 149 з вмістом 860млн/см 3 (в п'ять місць по 0,2см у вигляді розетки на відстані 2-3см одна ін'єкція від другої). Одночасно свиням внутрішньом'язово вводили 1,5см 3 такої ж культури бактерій контрольного штаму. Загальна заражаючи доза становила 3,01млрд. живих мікробних клітин Erysipelothrix rhusiopathiae 149. Через 12-18 годин навколо місць внутрішньодермального введення бактерій заражаючого штаму спостерігали запалення та набряки шкіри, які протягом перших двох діб поступово збільшувались з утворенням затверділих червоно-багряних припухлостей розміром від 3 до 4см в діаметрі. Захворювання тварин супроводжувалось підвищенням температури тіла до 41-41,4°С, малорухливістю, та періодичним не поїданням корму. Таким чином, бактерії контрольного (заражаючого) штаму Erysipelothrix rhusiopathiae К при одноразовому внутрішньодермальному введенні свиням тримісячного віку в кількості 1млн. живих мікробних клітин в 1см 3 (в п'ять місць по 0,2см 3) через 5-6 годин спричиняли у тварин захворювання з типовими для бешихи свиней клінічними проявами в противагу штаму Erysipelothrix rhusiopathiae 149, який через 12-18 годин призводив до виникнення у свиней захворювання на бешиху з менш вираженими клінічними ознаками після введення його в 3000 раз більшій дозі (одночасно 1,72млрд. живих мікробних клітин внутрішньодермально та 1,29млрд. живих мікробних клітин внутрішньом'язово).