Beta- d- глюкозамонійна сіль alрha-бромізовалеріанової кислоти, яка має противірусну активність відносно вірусу везикулярного стоматиту, вірусу простого герпесу та коронавірусу

Изобретение относится к медицине, а именно к веществам, обладающим противовирусной активностью и может быть использовано в качестве средства для лечения везикулярного стоматита, простого герпеса и коронавирусной инфекции. Известно, что вирусные заболевания составляют более 90% всей регистрируемой инфекционной патологии, а существующие в настоящее время противовирусные препараты высокотоксичны и малоактивны. Известно такое противовирусное вещество, как 2-дезоксиглюкоза. К недостаткам указанного вещества можно отнести то, что 2-дезоксиглюкоза хотя и активна в отношении вируса осповакцины, весьма токсична (0,034 мг/кг) для клеток мозга [Schwartz R.T., Schmidt M.F., Michael F.Gm Datemа R. Inhibition of glycosylation of viral glycoproteins.// Biochem.Soc.Trans., 1979, 7, N 2, 322-326], мало активна против вируса герпеса и везикулярного стоматита, кроме того синтез его дорогостоящий и проходит в 5 этапов, весьма продолжительных по времени (48 часов). В качестве прототипа предлагаемого вещества выбран глюкозамин [Лемешко H.H., Школина Т.В., Лукашевич Н.С. Влияние глюкозамина на репродукцию вируса Мачупо в клетках ВНК-21 //Антивирусные вещества ; - Минск: Беларусь, 1984. - С. 115-119], который получают из хитина крабов, раков или креветок, его синтез дешевый, он проявляет противовирусное действие на осповакцину и вирус Мачупо. К его недостаткам можно отнести то, что соли глюкозамина с минеральными кислотами не активны, при растворении в воде глюкозамин нестабилен, имеет щелочную реакцию среды, токсичен (LD50 0,062 мг/кг), окисляется на воздухе. По этим причинам глюкозамин до нашего времени применялся только в биохимических и вирусологических исследованиях. Целью изобретения является, создание нового вещества, обладающего противовирусной активностью в отношении вирусов простого герпеса, везикулярного стоматита и коронавируса. Поставленная цель решается путем получения b-D-глюкозаммонийной соли a-бромизовалериановой кислоты (БГ) формулы проявляющей активность в отношении вируса везикулярного стоматита, вируса простого герпеса 1 типа (штамма Л-2) и коронавируса, Пример 1. Синтез БГ ведут из a-бромизовалериановой кислоты и глюкозамина в среде безводного метанола. Выход 95% т.пл. 190-195° С с разл.: брутто формула: С11Н22NО2Вr. В 15 мл абсолютного метанола, содержащего 0,23 г (0,01 моль) металлического натрия, растворяют 2,16 г (0,01 моль) солянокислого глюкозамина. При умеренном размешивании хлористый натрий отфильтровывают, осадок промывают небольшим количеством метанола. В фильтрат вливают 1,81 г (0,01 моль) раствора aбромизовалериановой кислоты, оставляют на сутки. Затем осадок отфильтровывают, сушат. Кристаллизуют из воды при te +1° С. Выход 3,42 г. Найдено, %: С 36,4; Н 6,3; N 4,0. Вычислено, %: С 36,7; Н 6,16; N 3,9. Rf = 1,4 (изопропанол, диоксан, вода 1:3:1). Хроматографирование осуществлено на пластине "Silufol-uv-254". Структура полученного вещества подтверждена данными ИК-спектров в таблетке калия бромида. Полученное вещество представляет собой желтоватый порошок, хорошо растворимый в воде, диоксане, ДМСО, ДМФА и нерастворимый в этаноле и метаноле. Пример 2. Определение токсичности заявляемого вещества проводили в культуре, клеток трахеи эмбриона КРС (Тr), для чего к питательной среде 199 добавляли различные количества БН от 6 до 100 мг/мл среды (см. табл.1). Наблюдение за культурой клеток вели на протяжении 4 суток с ежедневным просмотром. За максимальную переносимую дозу (МПД) БГ принимали его наибольшее количество, которое не вызывало дегенерации клеток. Рабочая доза (РД) составляла 1/2 МПД испытуемого БГ. Пример 3. Определение противовирусной активности к РНК-содержащим вирусам везикулярного стоматита (Indiana), коронавирусу (KB) и ДНК-содержащему вирусу простого герпеса 1 типа (штамм Л-2) проводили на культурах клеток Тr и Нер-2 в условиях одноциклового опыта (один цикл репродукции вируса в клетке начинается с заражения вирусом клетки, появлением признаков цитопатического действия вируса на клетки и заканчивается гибелью клетки). При смене среды в культуре клеток к 0,8 мл среды 199 добавляли РД исследуемого БГ в объеме 0,1 мл и 100ТЦД (титр цитопатического действия, определяется тем минимальным количеством вируса, способным вызвать цитопатическое действие на клетку). 50/0,1 мл соответствующего тест-вируса. Каждый опыт сопровождался контролем тест-вируса, взятого в той же дозе (см. табл.1). Все пробирки с культурой клеток инкубировали при 37°С в течение одного цикла репродукции каждого тест-вируса. Затем после промораживания при -10 С проводили титрование проб. Снижение титра вируса под влиянием БГ на 2,0 lg по сравнению с контролем оценивали как проявление активности испытуемого БГ. Данные по определению МПД и антивирусной активности приведены в табл.1. Пример 4. Определение величины химиотерапевтического индекса (ХТИ) по отношению к вирусам проводили следующим образом. Тест-вирус в дозе 100 ТЦД 50/0,1 мл вносили в культур у клеток и инкубировали 1 час при 37°С. Непосредственно после адсорбции среду с оставшимися вирусами сливали, клетки отмывали средой 199 и в пробирки вносили среду 199, содержащую различные концентрации исследуемого препарата. Наблюдение вели на протяжении 72 часов с ежедневным просмотром. Отсутствие цитопатического действия вируса в опыте при "срабатывании" его в контроле, позволяло считать препарат в указанной концентрации активным. XTИ VSV - 8; XTИ HSV- 1 = 4; ХТИ КV - 4. Как следует из полученных данных, БГ на 4 порядка (в 10000 раз) менее токсичен в сравнении с известными веществами, имеет нейтральное значение pH в растворах, стабилен, активен в низких дозах как против РНК-содержащих вир усов, так и против ДНК-содержащих. Учитывая отсутствие малотоксичных препаратов с широким спектром действия данное вещество может применяться в экспериментальной и клинической терапии герпеса, везикулярного стоматита и др. вирусных инфекций. Изученный препарат имеет МПД = 50 мг/мл и обладает противовирусной активностью в отношении VVS, HSV-1, коронавируса в следующих концентрациях: 25 мг/мл, 50 мг/мл, 25 мг/мл соответственно. По сравнению с известным противовирусным соединением - глюкозамином, предлагаемое вещество обладает большей эффективностью в отношении HSV-1.