Іі-кабетоксифенілаконітімід, який виявляє активність відносно вірусу везикулярного стоматиту та вірусу простого герпесу

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, а именно - веществам, обладающим противовирусной активностью. Известно, что вирусные заболевания составляют более 90% всей регистрируемой инфекционной патологии, а существующие в настоящее время противовирусные препараты высокотоксичны и малоактивны. Известны такие противовирусные препараты, как оксолин [Першин Г.Н., Богданова Н.С. Химиотерапия вирусных инфекций. М,: Медицина, 1973, с. 13-18] и бонафтон [Стебаева Л.Ф. и др. О механизме противогерпетического действия бонафтона.//Фар-макол. и токсикол., 1980. № 5, с.609-614]. Они мало активны против вируса герпеса (0,01 мг/мл и 0,06 мг/мл) и везикулярного стоматита, а также высокотоксичны (0,02мг/кг и 0,08 мг/мл соответственно) и могут применяться только местно. Задачей изобретения является создание нового вещества, обладающего противовирусной активностью в отношении вирусов простого герпеса и везикулярного стоматита. Поставленная задача решается путем получения II-карбэтоксифенилаконитимида формулы проявляющего активность в отношении вируса везикулярного стоматита и вируса простого герпеса. Пример 1. Синтез противовирусного вещества идет в 2 этапа. Сперва получают трансаконит-пкарбэтоксианиловую кислоту (далее ААК). В 10 мл ледяной уксусной кислоты растворяют 0,02 моля (3,12 г) трансаконитового ангидрида. Туда же по каплям вливают раствор 0,02 молей анестезина в ледяной уксусной кислоте и перемешивают до полного растворения выпавшего осадка. В колбу устанавливают мешалку и перемешивают в течение 1,5 часа. Выпавший осадок ААК отфильтровывают, промывают на фильтре 10 мл диэтилового эфира, сразу перекристаллизовывают из этанола. Выход продукта 75%. Температура плавления 181— 182°С. Далее ААК в количестве 0,02 моля вносят в 10 мл ледяной уксусной кислоты, перемешивают до полного растворения и оставляют стоять сутки. Затем коричневый раствор выливают в выпарительную чашку и оставляют до полного испарения уксусной кислоты. Выпавший порошок или маслянистую жидкость переносят в 15 мл кипящей дистиллированной воды. Кипятят раствор до полного растворения капель масла или частичек порошка. При медленном охлаждении раствора выпадает осадок АИ. Имид перекристаллизовывают из этанола. Выход реакции 65%. Температура плавления продукта 19В-199°С. Структура соединения подтверждена ИК-, ПМР-спектрами, элементарным анализом. Хроматографирование для подтверждения индивидуальности соединения осуществлено на пластине "Silufol-uv-254" Rf=5,2 в системе вода-этанол (1:4), проявитель -0.5% раствор натрия гидрооксида. Полученное вещество представляет собой серый порошок, плохо растворимый в воде, хорошо в диоксане, ДМСО, ДМФА, этаноле и метаноле. Пример 2. Определение токсичности заявляемого вещества проводили в культуре клеток трахеи эмбриона КРС (Тr), для чего к питательной среде 199 добавляли различный количественный АИ от 6 до 100 мг/мл среды (см.табл.1). Наблюдение за культурой клеток вели на протяжении 4 суток с ежедневным просмотром. За максимальную переносимую дозу (МПД) АИ принимали его наибольшее количество, которое не вызывало дегенерации клеток. Рабочая доза (РД) составляла 1 /2 МПД испытуемого АИ. Пример 3. Определение противовирусной активности к РНК-содержащим вирусам везикулярного стоматита (Indiana) и ДНК-содержащему вирусу простого герпеса I типа (штамм Л-2) проводили на культурах клеток Тr и Нер-2 в условиях одноциклового опыта (один цикл репродукции вируса в клетке начинается с заражения вирусом клетки, появлением признаков цитопатиче-ского действия вируса на клетки и заканчивается гибелью клетки). При смене среды в культуре клеток к 0,8 мл среды 199 добавляли РД исследуемого АИ в объеме 0,1 мл и 100 ТЦД50I0,1 мл (ТИТР цитопатического действия, определяется тем минимальным количеством вируса, способным вызвать цитопатическое действие на клетку) соответствующего тест-вируса. Каждый опыт сопровождается контролем тест-вируса, взятого в той же дозе (см.табл. 1). Все пробирки с культурой клеток инкубировали при 37°С в течение одного цикла репродукции каждого тест-вируса. Затем после промораживания при -10°С проводили титрование проб. Снижение титра вируса под влиянием АИ на 2,0 lg по сравнению с контролем оценивали как проявление активности испытуемого АИ. Данные по определению МПД и антивирусной активности приведены в табл.1. Как следует из полученных данных, АИ в 10 раз менее токсичен в сравнении с известными веществами, имеет нейтральное значение pH в растворах, стабилен, активен в сверхнизких дозах как против РНКсодержащих вирусов, так и против ДНК-содержащих. Учитывая отсутствие малотоксичных препаратов с широким спектром действия данное соединение может применяться в экспериментальной и клинической терапии герпеса, везикулярного стоматита и др. вирусных инфекций. Изученный препарат имеет МПД =6 мг/мл и обладает противовирусной активностью в отношении VVS и HSV-1 в следующи х концентрациях: 12,5 мг/мл и 6 мг/мл, соответственно. По сравнению с известными противовирусными соединениями оксолином и бонафтоном, предлагаемое соединение менее токсично и более эффективно в отношении HSV-1 (табл.1 и 2).