Застосування штаму гриба trichophyton verrucosum для контролювання імуногенності вакцин проти дерматомікозів тварини

Корисна модель що передбачається, відноситься до ветеринарної біотехнології, а саме до ветеринарної мікробіології і біотехнології, зокрема до отримання штаму Trichophyton verrucosum, що використовується для контролювання імуногенності вакцин проти дерматомікозів тварин, до складу яких в якості антигену входить гриб Trichophyton verrucosum. В колекції Національного центру штамів мікроорганізмів патогенних для тварин і депозитарії Державного науково-контрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів (ДНКІБШМ) є штам Trichophyton verrucosum 153, який використовується для контролю імуногенності вакцини «Триховак», виробництва Ново-Галещинської біологічної фабрики. Даний штам володіє характерними, властивими йому культурально-морфологічними ознаками, спорогенними та вірулентними властивостями. Недоліком даного штаму є зниження його вірулентних властивостей внаслідок переважання в його популяції слабковірулентних варіантів, неоднорідності популяції за морфологічними ознаками та спорогенезом, що приводить до необ'єктивної оцінки імуногенних властивостей вакцин проти дерматомікозів тварин. Метою корисної моделі, що передбачається, є отримання штаму Trichophyton verrucosum, який має високий рівень спороутворення, має однорідний склад популяції, високі вірулентні властивості, що забезпечує об'єктивний контроль імуногенної активності вакцин проти дерматомікозів тварин. Штам Trichophyton verrucosum С-102 отримано від хворої на трихофітію телиці за допомогою методу селекційного відбору за ознаками спороутворення, культурально - морфологічних властивостей та вірулентності для лабораторних і сільськогосподаврських тварин. Штам Trichophyton verrucosum С-102 задепоновано в депозитарії ДНКІБШМ під номером 390. Штам Trichophyton verrucosum С-102 №390 характеризується слідуючими ознаками. Морфологічні ознаки. Міцелій не окрашений, гіфи рівні, розгалужені, секційне розмежовані; діаметр 1,5-3мкм, мікроконідії округлі, овальні, грушоподібні інколи продовгуваті розміром 3,5-5мкм багаточисельні. Макроконідії відсутні. Інколи зустрічаються артроспори, термінальні і інтеркалярні хламідоспори. Культуральні ознаки. На сусло-агарі колонії злегка випуклі, бугристі, округлі, гладкі, бархатисті, радіальне смугасті, міцелій субстратний, ростучій край рівний, білого кольору, зворотня сторона колонії світло жовта. Колонія повільноростуча, ріст на 7-12 добу інкубації. Склад популяції (ступінь дисоціації): не перевищує 2%. На сусло-агарі можуть вирости колонії двох морфологічних типів: - випуклі, бугристі, округлі, гладкі, бархатисті, радіальне смугасті, міцелій субстратний, ростучій край рівний, білого кольору, зворотня сторона колонії світло жовта. - плискі, дископодібні з рівним краєм, незначними радіальними бороздами, злегка пухнасті, бархатисті, сіробілого кольору, зворотна сторона колоній світло-коричневого або світло-жовтого кольору. Споруляція: в усі х типів колоній значне утворення мікроконідій - 120-150млн/см 3. Біохімічні властивості. Штам біохімічно не активний. Дає позитивну рекцію з глюкозою і дульцитом. Вірулентні властивості. При нашкірному зараженні гомогенізованою культурою Trichophyton verrucosum С-102 №390 дослідних кролів у попередньо епільовану і скарифіковану поверхнью шкіри викликає типову клінічну картину трихофі тії. При заражаючій дозі 1-3млн/см 3 мікроконідій на місці аплікації на 8-10 день відмічено виражену ексудативно-запальну реакцію шкіри з появою ерозій, некротичних ділянок, гною, накопиченням товсти х кірочок. Самовиліковування кролів спостерігають на 40-55 день. Приклад 1. Культур у Trichophyton verrucosum С-102 №390 вирощують на сусло-агарі в пробірках або чашках при температурі 26-28°С протягом 15-25 діб. В пробірки з вирощеною культурою добавляють по 5см 3 стерильного фізіологічного розчину і за допомогою мікологічного гачка суспендують культуру гриба. Далі готують послідовні десятикратні розведення суспензії і підраховують кількість мікроконідій за допомогою камери Горяєва. Для проведення досліду готують суспензії гомогенату культури і сусло-агару у співвідношенні 1:1 до кінцевої концентрації мікроконідій 1, 2, 4млн/см 3. Дослід проводять на кролях живою масою 2-3кг, не хворівших на трихофі тію і не щеплених проти неї. Зараження проводять нашкірно за загальноприйнятою методикою на ділянці спини за лопатками. Оцінку вірулентності проводять по терміну перехворювання, характеру і тяжкості інфекційного процесу. Результати досліджень представлені в Таблиці. Таблиця № групи Кількість Заражаюча тварин в доза групі (млн/cм 3) Кількість захворівших тварин 1 4 1 4 2 4 2 4 3 4 4 4 Характер перебігу захворювання виражена ексудативно-запальна реакція шкіри з шелушінням епідермісу і утворенням кірочок виражена ексудативно-запальна реакцію шкіри з накопиченням товстих кірочок, появою ерозій, виразок. виражена ексудативно-запальна реакція шкіри з накопиченням товстих кірочок, появою ерозій, виразок, гнійного ексудату, ділянок некрозу Термін одужання (дні) 28-35 30-40 40-50 Дані, представлені в таблиці, свідчать, що культура Trichophyton verrucosum С-102 №390 є високовірулентною і в дозі 1млн/см 3 мікроконідій і вищій викликає захворювання тварин різного ступеню важкості. Приклад 2. Дослід проводять на 20 кролях живою масою 2-3кг, не хворівших на трихо фітію і не щеплених проти неї. 10 кролів щеплюють вакциною «Триходерм» в дозі 1см 3, яка містить 30-60 млн/см3 мікроконідій двічі, з інтервалом 10-14 діб, 10 інших не щеплюють. Через 25-30 діб проводять зараження 10 імунізованих і 10 контрольних (не щеплених) кролів культурою Trichophyton verrucosum С-102 №390. Культуру готують як вказано в прикладі 1 і вибирають концентрацію 2,5млн/см 3 мікроконідій. Зараження проводять нашкірне за загальноприйнятою методикою на ділянці спини за лопатками. Спостереження за кролями ведуть впродовж 20-25 діб. Через 25 діб у щеплених 8 із 10 тварин клінічні ознаки трихофітії були відсутні, у деяких тварин на місці зараження розвивалася специфічна алергічна реакція, що характеризується гіперемією, появою островків із кірочок засохлого ексудату, що самі відпадали на 15-25 добу. У контрольних тварин через 8-10 діб після зараження з'являлась виражена запальна ексудативна реакція, що супроводжувалась появою щільних масивних кірочок та ерозій, утворенням гнійного ексудату, ділянок некрозу. Клінічні прояви хвороби спостерігали більше 35 діб. Штам Trichophyton verrucosum С-102 №390 має високу ефективність при дослідженні імуногенності вакцин проти дерматомікозів тварин, до складу яких входить Trichophyton verrucosum. Використання штаму Trichophyton verrucosum С-102 №390 на підприємствах-виробниках вакцин проти дерматомікозів тварин та в науководослідних установах дасть змогу більш достовірно і об'єктивно оцінювати якість біопрепаратів цього типу, а також використовува ти його в якості еталону при вивченні властивостей епізоотичних штамів, виділених від хворих тварин і навколишнього середовища.