Спосіб виявлення збудників ехінококозу тварин

Спосіб виявлення збудників ехінококозу тварин, що включає виявлення в об'єктах зовнішнього середовища, продуктах харчування та патологічному матеріалі специфічних фрагментів 3 28176 4 Echin 1 5' GTGAGGCGATGTGTGGTGATGGAGA - 3' Echin 2 5'GAAGGC AAGTGGTC AGGGGC AGTAG - 3' Приклад: пробу (ґрун т, вода, проби фекалій, змиви з обладнання тощо) (1гр.) помішують у пластикову пробірку ємністю 1,5см і додають 0,005см 3 дистильованої води. Суміш струшують і центрифугують, після чого проводять виділення ДНК набором реагентів для виділення ДНК. Отриману чисту ДНК (0,003-0,005cм 3) поміщуємо у пробірку ємністю 0,5см 3 і додаємо 0,0015см 3 ПЛРбуфера, 0,0025см 3 dNTP по 0,0025мкл. праймерів, 0,00025мкл Tag-полімерази та 1 краплю мінерального масла. Вміст пробірки струшуємо і центрифугуємо, а потім поміщуємо в ампліфікатор "Терцик", якому задаємо вищевказану програму. Розроблені праймери у процесі полімеразної ланцюгової реакції дозволяють багаторазово копіювати специфічні ділянки ДНК інфекційних агентів при певних температурних і часових параметрах та кількості циклів (таблиця). Таблиця № циклу 1 2 3 4 5 Температура 95°С 95°С 55°С 72°С 95°С 55°С 72°С 72°С Детекція результату проводиться в 1,5% агарозному гелі з барвником - бромистим етидієм. В гелеві лунки вносять 10-12мкл ампліфікованої суміші. Після проведення електрофорезу фрагменти ДНК згруповуються в смужки, які виявлять флуорисцентно. Результат ПЛР може бути оцінений візуально по наявності смужок, що відповідають продуктам реакції. Спосіб перевірено на ефективність. Матеріалом для досліджень були проби фекалій від собак інвазованих збудниками ехінококозу, проби ґрунту, води, трави, змивів із вольєрів, продукти харчування тощо. Із дослідного матеріалу були виділені ДНК за допомогою набору реагентів для виділення ДНК. Проведена ампліфікація отриманого матеріалу та отримання результату. У порівнянні із стандартизованими методами виявлення збудників Echinococcus granulosus та Echinococcus multilocularis розроблений метод має високий відсоток достовірності (90-100%), є специфічним до даного виду збудника та швидким у виконанні (результат за 6-8год.). Спосіб придатний для виявлення яєць цестод Echinococcus granulosus та Echinococcus multilocularis родини Taeniidae у об'єктах довкілля, патологічному матеріалі та продуктах харчування. Час 5хв. 1хв. 1хв. 1хв. 0,45хв. 0,30хв. 0,40хв. 5хв. Зберігання Кількість циклів 1 5 35 1