Спосіб виявлення збудників токсокарозу м’ясоїдних тварин

Спосіб виявлення збудників токсокарозу м'я соїдних тварин, що включає виявлення в об'єктах зовнішнього середовища, продуктах харчування та патологічному матеріалі специфічних фрагментів 3 25130 Поставлене корисною моделлю завдання досягається тим, що у способі виявлення збудників токсокарозу м'ясоїдних тварин, який включає виявлення в об'єктах зовнішнього середовища, продуктах харчування та патологічному матеріалі специфічних фрагментів нуклеїнових кислот (ДНК) за допомогою полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР), згідно корисній моделі для проведення ПЛР використовують штучно синтезовані олігонуклео 4 тиди (праймери) для збудників токсокарозу м'ясоїдних тварин (Toxocara canis, Toxocara cati): Тох 1 5’ - ТСА CCG AGC ТСТ GTT GAC АА - 3' Тох 2 5’ - СС А С АС ТТС ТСТ ТТТ TGG CG - 3' Розроблені праймери у процесі полімеразної ланцюгової реакції дозволяють багаторазово копіювати специфічні ділянки ДНК інфекційних агентів при певних температурних і часових параметрах та кількості циклів (табл.). Таблиця № циклу 1 2 3 4 5 Температура 95°С 94°С 64°С 74°С 94°С 62°С 73°С 72°С Час 5хв. 1хв. 1хв. 1хв. 0,5хв. 0,5хв. 0,5хв. 5хв. Зберігання Приклад: Пробу (ґрунт, вода, проби фекалій, змиви з обладнання тощо) в кількості 1 гр. поміщають у пластикову пробірку ємністю 1,5см 3 і додають 0,005см 3 дистильованої води. Суміш струшують і центрифугують, після чого проводять виділення ДНК набором реагентів для виділення ДНК. Отриману чисту ДНК (0,003-0,005см 3) поміщають у пробірку ємністю 0,5см 3 і додають 0,0015см 3 ПЛР-буфера, 0,0025см 3 dNTP по 0,0025мкл. праймерів, 0,00025мкл Tag-полімерази та 1 краплю мінерального масла. Вміст пробірки струшуємо і центрифугуємо, а потім поміщуємо в ампліфікатор „Терцик", якому задаємо вищевказану програму. Для перевірки ефективності розробленого способу було проведено науковий дослід. Матеріалом для досліджень були проби фекалій від собак інвазованих збудниками токсокарозу, проби ґрунту, води, трави, змивів із вольєрів, де утримують собак, продукти харчування тощо. Із дослідного матеріалу були виділені ДНК за допомогою набору реагентів для виділення ДНК. Комп’ютерна в ерстка В. Мацело Кількість циклів 1 5 35 1 Потім була проведена ампліфікація отриманого матеріалу та отримання результату. Детекція результату проводиться в 1,5% агарозному гелі з барвником - бромистим етидієм. В гелеві лунки вносять 10-12мкл ампліфікованої суміші. Після проведення електрофорезу фрагменти ДНК згруповуються в смужки, які виявлять флуорисцентно. Результат ПЛР може бути оцінений візуально по наявності смужок, що відповідають продуктам реакції. Промислове застосування способу може бути використано для виявлення яєць гельмінтів Toxocara canis та Toxocara cati роду Ascarididae у об'єктах навколишнього середовища, патологічному матеріалі. У порівнянні із стандартизованими методами виявлення збудників Toxocara canis та Toxocara cati розроблений метод має високий відсоток достовірності (90-100%), є специфічним до даного виду збудника та швидким у виконанні (результат отримують за 6-8год.). Підписне Тираж 26 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601