Середовище для гіпотермічного збереження ізольованих гепатоцитів

Середовище для гіпотермічного збереження ізольованих гепатоцитів, що включає хлористий калій, хлористий магній, хлористий кальцій, фосфорнокислий калій, фосфорнокислий натрій, цукрозу, альбумін і трис – HCl - буфер, яке відрізняється тим, що воно додатково містить тотальний кріоекстракт ембріона людини у концентрації 0,550,60 г/л. (19) (21) 98031160 (22) 05.03.1998 (24) 15.11.2000 (33) UA (46) 15.11.2000, Бюл. № 6, 2000 р. (72) Субота Ніна Павлівна, Пашинський Павло Петрович (73) ІНСТИТУТ ПРОБЛЕМ КРІОБІОЛОГІЇ І КРІОМЕДИЦИНИ HАЦІОНАЛЬНОЇ АКАДЕМІЇ Н АУК УКРАЇНИ 30345 відмивали 3 хв центрифугуванням у середовищі Хенкса при 2,5 тис. об/хв. Результати наведені у табл. 1 у порівнянні з прототипом. Із табл. 1 видно, що після зберігання гепатоцитів у середовищі, яке містить тотальний кріоекстракт ембріона людини, життєздатність їх на 10% вища від прототипу. Інтенсивність включення 14Слейцину і сумарні білки на 15% вища, це свідчить про більш високу можливість збереження систем, які беруть участь у синтезі білка в гепатоцитах. Приклад 2 Спосіб здійснювали аналогічно прикладу 1, за винятком того, що гепатоцити зберігали у середовища х з різною кількістю тотального кріоекстракту ембріона людини. Дослідження життєздатності клітин проводили 0,6%-м розчином трипанового синього. Життєздатними вважалися клітини, що повністю вільні від барвника. Результати подано у табл. 2. Із табл. 2 видно, що зменшення кількості тотального кріоекстракту ембріона людини у середо вищі знижує життєздатність гепатоцитів, а збільшення не впливає на кількість життєздатних клітин, тому введення їх у середовище збереження більше 0,60 г/л недоцільне. Джерела інформації 1. Tarrell R., Lund P. Byosynthetic capacity of hepatocytes after storage at 4ºC. – Bioscience Report, 1983, 3, № 6, p. 539-543. 2. Авт. свид. СССР № 1053803, А01 1/02. Публ. 1983, БИ № 42. 3. Пат. України № 16946 С12 5/00. Публ. 29.08.1997. Бюл. № 4. 4. Грищенко В.И., Суббота Н.П., Галоян А.Р. Получение, хранение и применение криоекстрактов фетальных тканей человека - Метод. рекомендации – 1996 г. – 7 с. 5. Seglen P.O. Preparation of rat liver cells. – Exp. Cell. Res., 1973, v. 82. – p. 391-398. Таблиця 1 Метаболічні параметри ізольованих гепатоцитів до і після 3-х діб гіпотермічного зберігання (п=7) . Після 3-х діб зберігання при 4ºС Свіжовиділені Параметри Запропоноване Відоме гепатоцити середовище середовище Включення 14С-лейцину в 48430±220 26184±145* 22300±160 сумарні білки, імп/хв Життєздатність, % 92±2 75±5* 65±5 * відмінності достовірні у відношенні до прототипу (р