Спосіб діагностики наявності бактерій helicobacter pylori /нр/ в слизовій оболонці шлунка та дванадцятипалої кишки

Спосіб діагностики наявності бактерій Helicobacter pylori у слизовій оболонці шлунка та двана 32762 діагностують наявність HP в біопсійному матеріалі (A.S. Arvind, R.C. Cook, S. Tabachli, M. Farthing One-minute endoscopy room test for Campylobacter pylori, Zancet, 1988, v. 1, p. 704). У цьому способі як розчин сечовини використовують 10% розчин сечовини, що не відповідає ідеальній концентрації сечовини в тесті, бо сечовина знаходиться в значному надлишку. У зв'язку з цим надлишок субстрату (сечовини) пригнітить дію уреази, що позначиться на реакції гідролізу сечовини і тест не спрацює. Чітко не враховано рН середовища, в якому діє уреаза та повинен працювати індикатор. Оптимум дії уреази знаходиться в середовищі з рН 8,2 (Л.И. Аруин, П.Я. Григорьев, В.А. Исаков, Э.П. Яковенко. Хронический гастрит. – Амстердам, 1993. - С. 303). Уреаза при рН 8,0 та t° 20°С прискорює гідроліз сечовини в 10 14 разів (В.А. Овчинников. Биоорганическая химия. - M.: Просвещение, 1987. - С. 177). Як індикатор вибрано фенол-poт з діапазоном рН-переходу 6,8-8,4. Враховуючи оптимум дії уреази при рН 8,0-8,2, видно, що в прототипі індикатор може змінювати свій колір ще без дії уреази. Крім цього, фенол-рот закінчує свої властивості індикатора при рН 8,4, якраз в зоні оптимальної дії уреази. Тому фенолрот як індикатор може давати недостовірні результати, зміна забарвлення якого від жовтого до червоного малоінформативна при однохвилинному тесті. Тестова система готується безпосередньо перед його дослідженням у ендоскопічному кабінеті. Все це впливає на точність способу, його інформативність та умови виконання. В основу винаходу поставлено завдання створити спосіб діагностики наявності бактерій HP у слизовій оболонці шлунка чи дванадцятипалої кишки, в якому нові складові тестової системи дозволили б проводити найбільш оптимальний гідроліз сечовини під дією уреази і таким чином підвищити точність, інформативність та зручність у використанні. Поставлене завдання вирішується так, що в способі діагностики наявності бактерій HP в слизовій оболонці шлунка чи дванадцятипалої кишки, в якому біопсійний матеріал вміщують у середовище тестової системи, що складається з розчину сечовини у воді та індикатора, за зміною забарвлення якого діагностують наявність HP в біопсій ному матеріалі, згідно з винаходом, як розчин сечовини у воді вибирають 16-32 г/л розчин сечовини у бідистильованій воді, як індикатор – 0,1% розчин фенолфталеїну, а наявність HP у біопсійному матеріалі діагностують при зміні забарвлення індикатора від рожевого кольору до фіолетового. Кількість сечовини вибирають з урахуванням діапазону ідеальної концентрації 16-32 г/л, бо уреаза HP має значення Км 0,32 г/л, а оптимальна дія уреази при рН 8,0-8,2. Використання 0,1% розчину фенолфталеїну як індикатор, діапазон рН-переходу якого 8,0-10,0, дозволяє виявити наявність HP у діапазоні, найбільш близькому до оптимуму дії уреази, вже на початку реакції гідролізу сечовини, до початку дії уреази індикатор не змінює кольору, в зоні оптимальної дії уреази свої властивості як індикатора не закінчуються, змінюючи колір від рожевого до фіолетового, який легко візуально зафіксувати, що дозволяє діагностувати наявність бактерій HP з високою точністю, підвищеною інформативністю, зручністю у виконанні. Спосіб діагностики наявності бактерій HP в слизовій оболонці шлунка чи дванадцятипалої кишки здійснюють так. Готують тестову систему в кількості 1 мл з 16-32 г/л розчину сечовини в бідистильованій воді, додають індикатор – 0,1% розчин фенолфталеїну. В середовище тестової системи вносять біопсійний матеріал слизової шлунка чи дванадцятипалої кишки при кімнатній температурі. Через 1 хвилину спостерігають результат. У випадку зміни забарвлення індикатора від рожевого кольору до фіолетового діагностують наявність HP в біопсійному матеріалі. Тестову систему можна попередньо приготувати у дво х пробірках чи ампулах. У одній - бідистильована вода з індикатором, у другій сечовина. Таку тест-систему можна приготува ти на підприємстві фармацевтичної промисловості, термін придатності ампул до 5 років. Робота з заводською тестовою системою не потребуватиме особливих навиків, зручна при зберіганні впродовж тривалого часу, дешева. Спосіб діагностики наявності бактерій HP в біопсійному матеріалі, використовуючи тестові ампули, можна виконувати не лише в умовах стаціонару, але і при масових оглядах пацієнтів в умовах поліклінік, діагностичних центрів. __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2001 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 50 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 2