Спосіб визначення концентрації оксипроліну в сечі

Спосіб визначення концентрації оксипроліну в сечі, що включає гідроліз і окислення його хлораміном в пірол та вимірювання інтенсивності забарвлення, який відрізняється тим, що проводять гідроліз 1мл сечі з 3мл 7н соляної кислоти в запаяних скляних ампулах протягом 8 годин при 105°С з наступним центрифугуванням гідролізату, нейтралізацію надосадової рідини здійснюють 7% розчином хлораміну Б та фарбування розчином диметиламінобензальдегіду в ізопропіловому спирті з наступним вимірюванням інтенсивності забарвлення, за ступенем якого розраховують вміст оксипроліну. (19) (21) u200806810 (22) 19.05.2008 (24) 25.11.2008 (46) 25.11.2008, Бюл.№ 22, 2008 р. (72) КАРТАШОВ МИКОЛА ІВАНОВИЧ, U A, ЛЕОНТЬЄВА ФРИДА СОЛОМОНІВН А, U A, ТИМОШЕНКО ОЛЬГА П АВЛІВН А, U A, КІБКАЛО ДМИТРО ВІКТОРОВИЧ, U A, ТУЛЯКОВ ВЛАДИСЛАВ ОЛЕКСАНДРОВИЧ, U A, БОРОВКОВ СЕРГІЙ БОРИСОВИЧ, UA, ГУЛІДА ТЕТЯН А ІВАНІВН А, U A, МОРОЗЕНКО ДМИТРО ВОЛОДИМИРОВИЧ, U A, ПАСІЧНИК В'ЯЧЕСЛАВ АН АТОЛІЙОВИЧ, U A (73) ХАРКІВСЬКА ДЕРЖАВН А ЗООВЕТЕРИНАРНА АКАДЕМІЯ , U A 3 37271 ливають в пробірки для центрифугування і центрифугують 10 хвилин при 3000 обертів в хвилину. Після центрифугування відбирають 1мл надосадової рідини і до неї додають 3мл 1,75н розчину NaOH, pH нейтралізату, який утворився, доводять до нейтрального по лакмусовому папірцю шляхом додавання 1н NaOH або 1н HCL. В три пробірки вносять по 0,5мл нейтралізату (дослід пробірка №1, контроль №2, стандарт №3) в першу та др угу пробірку додають 1мл ізопропілового спирту, в третю додають 1мл стандартного розчину оксипроліну 5мг/л перемішують. В першу та третю пробірки додають по 0,5мл окислюючого розчину на основі 7% водного розчину хлораміна Б та цитрат ацетатного буфера, залишають пробірки при кімнатній температурі на 4 хвилини, по проходженню 4 хвилин в другу пробірку також додають 0,5мл окислюючого розчину на основі 7% водного розчину хлораміна Б та цитрат ацетатного буфера. До всіх пробірок додають по 1мл розчину ДАБА в ізопропиловому спирті та хлорній кислоті та нагрівають на водяній бані при температурі 60°С протягом 20хв., розчин забарвлюється в рожево-червоний колір, після чого пробірки охолоджують в льоді відстоюють 20 хилин і калориметрують при довжині хвилі світофільтру 540нм в кюветі товщиною 5мм напроти холостої проби яка не містить гідролізату для визначення інтенсивності забарвлення (екстинції), яке відповідає певній кількості оксипроліну в сечі. Розрахунок кількості оксипроліну проводять по формулі [В.В. Гапузов Определение оксипролина в суточной моче// Лаб. дело - 1990. - №12. - С.43-45]. E1-E2/E 3-E1 ´5´32´Д де: Е1 - екстинція пробірки №1 Е2 - екстинція пробірки №2 Е3 - екстинція пробірки №3 5 - стандарт оксипроліну в мг/л Комп’ютерна в ерстка О. Рябко 4 32 - розведення Д - добовий діурез в літрах. Приготування робочих розчинів: - окислюючого розчину на основі 7% водного розчину хлораміна Б та цитрат ацетатного буфера - змішують, безпосередньо перед проведенням досліджень, в пропорції 1:4 7% водний розчин хлораміна Б (тиждень може зберігатися в холодильнику) та цитрат ацетатний буфера рН 6,0 (57г ацетату натрію, 37,5 трьох заміщеного лимоннокислого натрію, 5,5г лимонної кислоти та 385мл ізопропілового спирту розчиняють дистильованою водою в колбі ємністю 1л , розчин можна зберігати в холодильнику). - розчину ДАБА, - 2г диметиламінобензальдегіда розчиняють в 3мл 57% хлорній кислоті перед застосуванням змішують з ізопропіловим спиртом в співвідношенні 3:13. Приклад Е1 становить 0,24; Е2 становить 0,2; Е3 становить 0,75; Д становить 1,3 літри за сутки. Розрахунок. 0,24-0,2/0,75-0,24´5´32´1,3=0,04/0,51´5´32´ ´1,3=0,078´5´32´1,3=16,2мг/л Тобто вміст оксипроліну в сечі становить 16,2мг\л У нормі в дорослих людей вміст оксипроліну в сечі становить від 11,0-39мг/л, у дітей та осіб молодше 18 років від 11,0-44,0мг/л У клінічно здорових тварин різних видів: щури 6-7,5мг/мл, коти 18,0-22,0мг/л, велика рогата худоба 7-25мг/л. Таким чином запропонований спосіб дозволяє більш швидко та безпечно визначати вміст оксипроліну в сечі в нормі та при різних патологічних станах. Підписне Тираж 28 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601