Спосіб зниження гіпертонічного гемолізу еритроцитів людини

Спосіб зниження гіпертонічного гемолізу еритроцитів людини, що включає введення еритроцитів і антигемолітичної речовини в гіпертонічний розчин, що містить 4,0 М NaCl, і інкубацію протягом 10 хв., який відрізняється тим, що як антигемолітичну речовину використовують речовину амфіфільної природи, яку вносять до гіпертонічного розчину перед додаванням до нього еритроцитів. (19) (21) u200809235 (22) 15.07.2008 (24) 25.11.2008 (46) 25.11.2008, Бюл.№ 22, 2008 р. (72) ШПАКОВА Н АТАЛІЯ МИ ХАЙЛІВН А, U A, ОРЛОВА Н АТАЛІЯ ВІКТОРІВН А, U A, БОНДАРЕНКО ВАЛЕРІЙ АНТОНОВИЧ, U A (73) ІНСТИТУТ ПРОБЛЕМ КРІОБІОЛОГІЇ І КРІОМЕДИЦИНИ НАЦІОНАЛЬНОЇ АКАДЕМІЇ Н АУК УКРАЇНИ, U A 3 37514 4 Використання амфіфільних речовин не вимаСпосіб здійснювали аналогічно прикладу 1 за гає етапу попередньої інкубації еритроцитів, внавинятком того, що як амфіфільну речовину викослідок чого спосіб спрощується і скорочується час ристовували додецил-b,D-мальтозид у кінцевій його здійснення. Амфі фільні речовини знижують концентрації 6мкМ. рівень гіпертонічного гемолізу при використанні в Результати, що були отримані при здійсненні мікромолярних концентраціях, що нижче в порівспособу згідно прикладам 1-4, відображені в табнянні з концентрацією глюкози, яку використовулиці. З даних, представлених у таблиці, видно, що вали в прототипі, на 3-5 порядки. Це дозволяє в присутності амфіфільних речовин рівень гемоліуникнути зміни осмолярності середовища. зу еритроцитів людини в розчині, що містить 4,0М Спосіб здійснюють таким чином. NaCl, зменшується в 3-17 разів, що говорить про Амфі фільну речовину, що приготована на фізначне зниження гіпертонічного гемолізу еритрозіологічному розчині, додають у кількості 10мкл до цитів людини під впливом амфіфільних речовин. 1мл гіпертонічного. розчину, що містить 4,0М NaCl. Еритроцити, тричі відмиті фізіологічним розчином, Таблиця додають до вказаного гіпертонічного середовища (кінцевий гематокрит 0,4%) при температурі 37°С. Значення гемолізу еритроцитів людини в После 10хв інкубації проби центрифугують і вирозчині, що містить 4,0М NaCl, при температурі значають рівень гемолізу спектрофотометрично 37°С у присутності амфіфільних речовин (n = 10) при довжині хвилі 543нм. Приклад 1. Концентрація, Гемоліз, А/Б Речовина Еритроцити донорської крові тричі відмивали мкМ % фізіологічним розчином (150мМ NaCl, 5мМ фосконтроль – 86±7 – фатний буфер, рН 7,4) від плазми і формених хлорпромазин 124 5±2 17,2 елементів шляхом центрифугування при g =1500 децилсульфат натрію 40 14±3 6,1 протягом 3хв і зберігали у вигляді осаду при 0°С 3не більш 2 годин. Вихідну суспензію еритроцитів децилдиметиламмоготували додаванням 100мкл осаду еритроцитів 778 18±5 4,8 ній-1до 1мл фізіологічного розчину. пропансульфонат наЯк амфіфільну речовину використовували трію хлорпромазин, приготований на фізіологічному додецил-b,D6 28±6 3,1 розчині, 10мкл якого додавали до 1мл гіпертонічмальтозид ного середовища, що містить 4,0М NaCl. Концентрація хлорпромазину в гіпертонічному середовищі Примітка: А - гемоліз контрольних еритроцитів, складала 124мкМ. Суспензію еритроцитів (50мкМ) Б - гемоліз еритроцитів у присутності амфіфільної додавали до 1мл гіпертонічного середовища, що речовини містить хлорпромазин (кінцевий гематокрит 0,4%). Контролем служили еритроцити, які перенесені у Джерела інформації: розчин 4,0М NaCl, що не містить хлорпромазин. 1. Рамазанов В.В., Бондаренко В.А. Действие Після 10хв інкубації при 37°С проби центрифугугемина и ДИДС на холодовой и гипертонический вали: Кількість гемоглобіну в надосадку визначали шок эритроцитов// Пробл. криобиологии. - 1996. спектрофотометрично при довжині хвилі 543нм і №2. - С.13-17. виражали у відсотках по відношенню до 100% ге2. Орлова Н.В., Шпакрва Н.М. Действие двухмолізу еритроцитів у присутності детергента тривалентных катионов на чувстви тельность эритротона Х-100 (кінцева концентрація 0,1%). цитов к гиперосмотическому стрессу и холодовому Приклад 2. шоку// Дробл. криобиологии. - 1998. - №1. - С.30Спосіб здійснювали аналогічно прикладу 1 за 35. винятком того, що як амфіфільну речовину вико3. Мельникова О.В., Бондаренко Т.П. Модиристовували децилсульфат натрію в кінцевій конфицирующее действие глюкозы на чувствительцентрації 40мкМ. ность эритроцитов к температурному и осмотичеПриклад 3. скому стрессу// Физико-химические процессы в Спосіб здійснювали аналогічно прикладу 1 за криобиологических системах. Сб. научн. тр удов. винятком того, що як амфіфільну речовину викоХарьков, 1991. - С.68-78. ристовували 3-децилдиметиламмоній-14. Naftalin R.J., Smith P.M., Roselaar S.E. Eviпропансульфоцат натрію в кінцевій концентрації dence for nonuniform distribution of D-glucose within 778мкМ. human red cells during net exit and counterflow// BioПриклад 4. chem.Biophys.Acta. - 1985. - 820, №2. - P.235. Комп’ютерна в ерстка Г. Паяльніков Підписне Тираж 28 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601