Спосіб виділення l-форм мікобактерій з проб патологічного матеріалу

Спосіб виділення L-форм мікобактерій з проб патологічного матеріалу, що включає обробку проб 3% розчином сірчаної кислоти, триразове відмивання, висів на щільне та напівсинтетичне середовище Школьникової, який відрізняється тим, що гомогенізують патологічний матеріал стерильним піском та додаткового фільтрують надосадову рідину через стерильні мембранні фільтри з діаметром пор 0,45мкм. (19) (21) u200810981 (22) 08.09.2008 (24) 10.02.2009 (46) 10.02.2009, Бюл.№ 3, 2009 р. (72) ЗАВГОРОДНІЙ АНДРІЙ ІВАНОВИЧ, UA, ТАРАСОВА ОЛЕНА ВОЛОДИ МИРІВН А, U A (73) НАЦІОН АЛЬНИЙ НАУКОВИЙ ЦЕНТР "ІНСТИТУТ ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЇ І КЛІНІЧНОЇ ВЕТЕРИНАРНОЇ МЕДИЦИНИ", UA 3 39178 ром пор 0.45мкм досліджуваних проб та висів фільтрату на середовища. Спосіб виконується таким чином: Проби тканини подрібнюють в стерильній ступці ножицями і заливають 3% розчином сірчаної кислоти та залишають на 10 хвилин. Кислоту зливають та трьохразово відмивають стерильним розчином. Засипають стерильним піском та розтирають, отриману завісь відстоюють 5 хвилин, надосадкову рідину відбирають стерильною піпеткою та фільтрують за допомогою стерильних мембранних фільтрів з діаметром пор 0.45мкм. Отриманий фільтрат висівають на середовище Школьникової та на щільне яєчне середовище для культивування мікобактерій (по 10 пробірок на пробу) і культивують в термостаті при температурі 37°С протягом трьох місяців. Облік росту проводять кожні 5-7 діб. З метою збільшення фільтрату об'єм дослідної проби збільшують до 100см 3. Приклад 1. Проби патологічного матеріалу подрібнювали в стерильні ступки ножицями, додавали 3% розчин сірчаної кислоти з експозицією 10 хвилин та трьохразово відмивали стерильним фізіологічним розчином, розтирали з стерильним піском. Осад фільтрували за допомогою стерильних мембранних фільтрів з діаметром пор 0.45мкм. Отриманий фільтрат висівали на середовище Школьникової 4 та на щільне яєчне середовище для культивування мікобактерій. Приклад №2. Теж, що і в прикладі 1 при застосуванні 5% розчину сірчаної кислоти та експозиції також 10 хвилин. Приклад №3. Теж, що і в прикладі 1, 2 при застосуванні 10% розчину сірчаної кислоти та експозиції також 10 хвилин. При передпосівній обробці запропонованим способом проб патологічного матеріалу від великої рогатої худоби, з застосуванням 3% розчин сірчаної кислоти (приклад 1) було виділено 18 культур L-форм мікобактерій, та у проб відмічений ріст банальної мікрофлори 2%. При обробці патматеріалу 5% розчинам сірчаної кислоти (приклад 2) виділено 7 культур L-форм мікобактерій та відмічений ріст банальної мікрофлори 1%.. При обробці патматеріалу 10% розчином сірчаної кислоти ріст L-форм мікобактерій та секундарної мікрофлори не виявляли на живильному середовищі. Результати досліду наведені у таблиці. Запропонований спосіб, передпосівної обробки патологічного матеріалу дозволяє виділити більше культур L-форм мікобактерій із патологічного матеріалу, відповідає сучасним вимогам при роботі з заразним матеріалом, безпечний і ефективний при роботі. Таблиця Розчин кислоти Кількість проб Приклад 1 3% Приклад 2 5% Приклад 3 10% Найближчий аналог Комп’ютерна в ерстка Л. Купенко 32 32 32 32 Виділено культур L-форм мкб. кількість відсоток 18 % 7 % 0 % 4 % Підписне Кількість проросту 2% 1% 0% 24% Тираж 28 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601