Спосіб виготовлення універсального індикаторного живильного середовища вс

Спосіб виготовлення універсального індикаторного живильного середовища, який відрізня ється тим, що включає об'ємно-ваговий метод змішування солодового молока з пророщеного зерна пшениці, амінокислотного концентрату з панкреатичного гідролізату м'язової тканини великої рогатої худоби, агар-агару та реверсного індикатору нейтрального червоного, завдяки чому одержане середовище реагує на присутність будьякої живої мікрофлори в посівному матеріалі будьякого ступеня прозорості за зміною кольору. Для визначення присутності живих мікроорганізмів використовують класичний метод інкубування досліджуваного зразку на класичних живильних середовищах /МПБ, МПА, МППБ/. Присутність живих мікроорганізмів на рідких та напіврідких живильних середовищах визначають за помутнінням, на твердих - за появою колоній. Термін інкубування - 10 діб. Останнім часом значними темпами розвивається виробництво вакцин, біологічних препаратів, котрі, в багатьох випадках, мають непрозорий стан /емульговані, тканеві і т. д./. Визначити присутність живої мікрофлори в непрозорих зразках на рідких та напіврідких традиційних середовищах практично неможливо. Актуальним залишається питання створення універсального індикаторного живильного середовища. В наш час існують способи виготовлення індикаторних середовищ таких як Андраде, тіогликолеве, DTM. Способи виготовлення таких середовищ передбачають вміст індикаторів (хімічних сполук), котрі чутливі до змін фізико-хімічних показників середовища, причому, цей процес супроводжується зміною кольору останнього у відповідності до змін показників рН. Спосіб виготовлення середовища Андраде передбачає в своєму складі цукрі (кожен окремо) та індикаторну речовину - фуксин, котрий реагує на показник рН, що є залежний від присутності продуктів метаболізму, котрі утворюються в процесі життєдіяльності мікроорганізмів і змінює заба рвлення живильного середовища в малиново бузковій гамі кольорів. Але фуксин чутливий як індикатор в діапазоні рН від 7,0 до 5,0, тому середовище Андраде неможливо використовувати як індикаторне, при культивуванні мікроорганізмів, у котрих продуктами метаболізму є лужні: речовини (Справочник ветеринарного лаборанта / Ф.З. Андросов, С.74 Н.Я.Беляев, Р.Т. Клочпа и др., Под ред. В.Я. Антонова. - М .: Колос, 1981. - 248с.) Приклад 1. У пробірки з середовищем Андраде висівали по 0,1см3 суспензій Escherichia coli, Streptococus faecalis, Salmonella abortus, Trichophyton verrucosum, Clostridium chauvoei, Erysipelothrix rhusiopathiae, Pasteurella multocida, Bacillus antracis на розчиннику білого кольру емульгованому Diluvac. Посівний матеріал мав стан і колір молока. Інкубували всі пробірки при 37°С, a Trichophyton verrucosum при 28°С. На десяту добу спостережень колір середовища змінився з бузково-малинового до малинового в пробірках з Escherichia coli, Streptococus faecalis, Salmonella abortus, Trichophyton verrucosum, Clostridium chauvoei, Erysipelothrix rhusiopathiae, Pasteurella multocida, Bacillus antracis, а в пробірці і з Trichophyton verrucosum колір не змінився. Спосіб виготовлення тіогліколевого середовища передбачає у своєму складі індикатор резозурин, котрий нерівномірно розповсюджується в об'ємі середовища і локалізується у приповерхне со 4139 вій частині, а це ускладнює спостерігати чітку зміну кольору при невеликих діапазонах зміни рН та при культивуванні анаеробів. (Препараты биологические. Метод: бактериологического контроля стерильности' ГОСТ 28085-89) Приклад 2 У пробірки з тіоглеколевим середовищем висівали по 0,1см Escherichia coli, Streptococus faecahs, Salmonella abortus, Trichophyton verrucosum, Clostridium chauvoei, Erysipelothrix rhusiopathiae, Pasteurella multocida, Bacillus antracis на розчиннику білого кольру емульгованому Diluvac. Посівний матеріал мав стан і колір молока. Інкубували всі пробірки при 37°С, a Trichophyton verrucosum при 28°С. На десяту добу спостережень колір середовища виготовленого за таким і способом ледь змінився на світло бузково-рожевий у приповерхневій частині стовпчика середовища з Escherichia coli, Streptococus faecalis, Salmonella abortus, Erysipelothrix rhusiopathiae, Pasteurella multocida, Bacillus antracis крім і пробірок з Trichophyton verrucosum та Clostridium chauvoei. Недоліком способів виготовлення обох індикаторних середовищ є те, що обидва індикатори /фуксин та резозурин/ не являються реверсними. Також обидва Індикатори є нестійкими речовинами, тому готують індикаторні середовища Андраде та тюгліколеве безпосередньо перед використанням. Спосіб виготовлення середовища DTM передбачає вміст індикатору чутливого до продуктів метаболізму дерматофітів (Taplin D et all. // Archives of Dermatology. 1969, 99.) і нечутливого до продуктів метаболізму іншої мікрофлори, рН середовища становить 6,0. при культивуванні дерматофітів колір середовища має бути малиновим. Недоліком способу виготовлення цього середовища є те, що Індикатор не є реверсним і нечутливим до кислоутворюючих мікроорганізмів. Запропонований спосіб виготовлення дає змогу одержати універсальне індикаторне живильне середовище ВС. Складовим цього середовища є. Комп'ютерна верстка В. Мацело солодове молоко, одержане з пророщеного зерна пшениці; амінокислотний концентрат, одержаний з панкреатичного гідролізату м'язевої тканини ВРХ, фарбника-індикатору - нейтрального червоного та агар-агару Спосіб виготовлення індикаторного живильного середовища ВС передбачає змішування всіх складових об'ємно-ваговим способом з урахуванням кінцевих концентрацій амінного азоту, цукру, індикатору нейтрального червоного та агар-агару. Такий спосіб виготовлення дає змогу корегувати рН середовища в межах 7,0-7,2, встановлювати баланс за основними органогенами, що обумовлює його достатню поживність для культивування багатьох видів мікроорганізмів. Приклад З У пробірки з запропонорваним середовищем висівали по 0,1см3 суспензії Escherichia coli, Streptococus faecaiis, Salmonella abortus, Trichophyton verrucosum, Clostridium chauvoei, Erysipelothrix rhusiopathiae, Pasteurella multocida, Bacillus antracis на емульгованому розчиннику "Diluvac". Посівний матеріал мав стан і колір молока. Інкубували посівний матеріал при 37°С, a Trichophyton verrucosum при 28°С. На другу добу на смужці контакту посівного матеріалу з середовищем спостерігали зміну кольору з червоного на жовтий в пробірках з культурами Escherichia coli, Streptococus faecalis, Salmonella abortus, Clostridium chauvoei, Erysipelothrix rhusiopathiae, Pasteurella multocida, Bacillus antracis, та з червоного на малиновий у побірці з Trichophyton verrucosum Через три доби запропоноване універсальне індикаторне живильне середовище ВС повністю змінило колір у всіх пробірках ВІДПОВІДНО. Присутність, у складі універсального індикаторного живильного середовища ВС збалансованого вмісту амінокислот і вуглеводів, реверсного індикатору (нейтрального червоного), і дає змогу при культивуванні швидко визначити присутність любих живих мікроорганізмів в посівному матеріалі, незалежно від ступеню його прозорості, за зміною кольору. Підписне Тираж 37 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП "Український інститут промислової власності", вул. Глазунова, 1, м. Київ - 4 2 , 01601