Склад твердого живильного середовища для культивування мікобактерій

Винахід належить до мікробіології і стосується виготовлення живильного середовища для культивування мікобактерій. Згідно діючих в Україні нормативних актів бактеріологічна діагностика туберкульозної інфекції передбачає довготривалі дослідження з використанням традиційних багатовартісних живильних середовищ. Для посіву патологічного матеріалу використовують тверде живильне середовище Льовенштайна-Єнсена, рекомендоване ВООЗ для всіх координаційних лабораторій [1]. Цим середовищем користується більшість лабораторій України. Прототипом запропонованого нового складу є склад твердого середовища 3,5% гліцеринового м'ясопептонного агару, рекомендованого довідником по мікробіологічних та вірусологічних методах досліджень [2]. До складу входять: Гліцерин 35,0г Агар 20,0г М'ясо-пептонний бульйон до 1000,0мл Характерною ознакою даного середовища є те, що для затвердіння гліцеринового м`ясо-пептонного бульйону додають агар, що збігаються із суттєвими ознаками винаходу. Гліцериновий м`ясо-пептонний агар не є елективним, ні селективним щодо мікробактерій, вимагає тривалої інкубації. Суть винаходу полягає в розробці оригінального складу твердого живильного середовища для культивування мікобактерій. Нами пропонується тверде живильне середовище для культивування мікобактерій згідно розробленого нового складу. Тверде живильне середовище для культивування мікобактерій Калій фосфорнокислий однозаміщений 1,5г Калій фосфорнокислий двозаміщений 3,0г Магній сірчанокислий 0,5г Натрій тіогліколевокислий 1,0г Залізоамонійний галун 0,5г Парафін (від С12 до C18) 20,0г Дріжджовий екстракт 10,0г Пептон 20,0г Етиловий спирт 1,0г Борна кислота 0,005г Малахі товий зелений 0,04г Нейтральний червоний 0,04г Альбумін сироватки бика 0,5г Агар 20,0г Вода очищена до 1000,0мл рН після стерилізації 7,0±0,2 Принцип дії. Запропоноване тверде живильне середовище для культивування мікобактерій забезпечує інтенсивний ріст мікобактерій. Включення в рецептур у етилового спирту, борної кислоти, малахітового зеленого та нейтрального червоного підвищує селективність середовища. Пептон та дріжджовий екстракт дозволяють підвищити вихід біомаси мікобактерій. Натрій тіогліколевокислий пришвидшує ріст мікобактерій. Парафін та залізоамонійний галун підвищують чутливість середовища. Агар спрощує приготування та використання середовища. Використання. Запропоноване тверде живильне середовище для культивування мікобактерій рекомендуємо використовува ти для культивування мікобактерій та для бактеріологічної діагностики туберкульозної інфекції. Винахід ілюструється наступним прикладом: штами мікобактерій M.tuberculosis Н37Rv, M.bo vis 8, M.scrofulaceum 526 були паралельно засіяні на класичне середовище Льовенштайна-Єнсена, 3,5% гліцериновий м'ясо-пептонний агар та на середовище, запропоноване нами (таблиця). Таблиця Швидкість появи первинного і інтенсивного росту мікобактерій на різних живильних середовищах (М±m) Характер росту Первинний Інтенсивний Штами M.tuberculosis H37Rv M.bo vis 8 M.scrofulaceum 526 M.tuberculosis H37Rv M.bo vis 8 Живильне середовище 3,5% Льовенштайнагліцериновий Єнсена МП А ріст, доба 12,2±0,53 12,8±0,24 11,8±0,47 12,2±0,46 6,2±0,71 6,5±0,63 18,6±0,34 19,2±0,19 18,8±0,68 19,0±0,32 ТЖС 7,8±0,62 7,6±0,78 5,3±0,42 11,2±0,25 10,8±0,84 M.scrofulaceum 526 10,2±0,29 10,8±0,56 8,3±0,87 Примітки: 1. МП А - м'ясо-пептонний агар. 2. ТЖС - тверде живильне середовище для культивування мікобактерій. В результаті, запропоноване нами середовище дозволяє отримати інтенсивніший ріст за коротший термін, підвищити чутливість, селективність середовища та збільшити вихід біомаси мікобактерій. Література: 1. Збірник нормативно-директивних документів з охорони здоров'я / №2. — 2002 p. — Київ. — С. 63-111. 2. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования / Под редакцией М.О. Биргера. — Москва.: Медицина, 1982. — 461с.