Склад рідкого живильного середовища для культивування мікобактерій

Винахід належить до мікробіології і стосується виготовлення живильного середовища для культивування мікобактерій. Згідно діючих в Україні нормативних актів бактеріологічна діагностика туберкульозної інфекції передбачає довготривалі дослідження з використанням традиційних багатовартісних живильних середовищ. Для посіву патологічного матеріалу використовують рідке напівсинтетичне живильне середовище Школьнікової, рекомендоване ВООЗ для всіх координаційних лабораторій. Цим середовищем користується більшість лабораторій України. Суть винаходу полягає в розробці оригінального складу рідкого живильного середовища для культивування мікобактерій. Прототипом запропонованого нового складу є склад напівсинтетичного середовища Школьнікової, рекомендованого інструкцією з бактеріологічної діагностики туберкульозної інфекції [1, 2]. До складу входять: Калій фосфорнокислий однозаміщений 1,5г Натрій фосфорнокислий двозаміщений 2,5г Магній сірчанокислий 0,5г Натрій лимоннокислий 1,5г Лимоннокислоаміачне залізо 0,05г L-аспарагін 1,0г Гліцерин 30,0мл Вода дистильована до 1000,0мл Нативна бичача сироватка 0,2 мл на пробірку Пеніцилін 10-20 од на 1,0мл середовища Характерними ознаками даного середовище є те, що як джерело вуглецю, ві тамінів, біологічно активних речовин в нього входять гліцерин, нативна бичача сироватка, для забезпечення селективності – пеніцилін. За складом солей для забезпечення мікробактерій мікро- та мікроелементами середовище збігається з суттєвими ознаками винаходу. Для середовища Школьнікової характерні низька чутливість та селективність, необхідність тривалої інкубації. Нами пропонується рідке живильне середовище для культивування мікобактерій згідно розробленого нового складу. Рідке живильне середовище для культивування мікобактерій Калій фосфорнокислий однозаміщений 1,5г Калій фосфорнокислий двозаміщений 3,0г Магній сірчанокислий 0,5г Натрій тіогліколевокислий 1,0г Залізоамонійний галун 0,5г Парафін (від С12 до C18) 20,0г Дріжджовий екстракт 10,0г Пептон 20,0г Етиловий спирт 1,0г Борна кислота 0,005г Малахі товий зелений 0,04г Нейтральний червоний 0,04г до Вода очищена 1000,0мл рН після стерилізації 7,0±0,2 Принцип дії. Запропоноване рідке живильне середовище для культивування мікобактерій забезпечує інтенсивний ріст мікобактерій. Включення в рецептур у етилового спирту, борної кислоти, малахітового зеленого та нейтрального червоного підвищує елективність середовища. Пептон та дріжджовий екстракт дозволяють підвищити вихід біомаси мікобактерій. Натрій тіогліколевокислий пришвидшує ріст мікобактерій. Парафін та залізоамонійний галун підвищують чутливість середовища. Використання. Запропоноване рідке живильне середовище для культивування мікобактерій рекомендуємо використовувати для культивування мікобактерій та для бактеріологічної діагностики туберкульозної інфекції. Винахід ілюструється наступним прикладом: штами мікобактерій M.tuberculosis Н37Рv, M.bo vis 8, M.scrofulaceum 526 були паралельно засіяні на класичне середовище Школьнікової та на середовище, запропоноване нами (таблиця 1). Таблиця 1 Швидкість появи первинного і інтенсивного росту мікобактерій на різних живильних середовищах (М±m) Характер росту Штами мікобактерій Первинний M.tuberculosis Н37Rv M.bo vis 8 M.scrofulaceum 526 M.tuberculosis Н37Rv M.bo vis 8 M.scrofulaceum 526 Інтенсивний Живильне середовище Рідке живильне середовище для Середовище Школьнікової культивування мікобактерій ріст, доба 6,2±0,24 4,6±0,74 6,6±0,46 4,8±0,63 3,2±0,63 3,3±0,47 11,2±0,19 7,4±0,68 11,0±0,32 7,2±0,37 5,8±0,56 5,6±0,45 В результаті, запропоноване нами середовище дозволяє підтримати інтенсивніший ріст за коротший термін, підвищити чутливість, селективність середовища та збільшити вихід біомаси мікобактерій. Література: 1. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования / Под редакцией М.О. Биргера. - Москва.: Медицина, 1982.-461с. 2. Збірник нормативно-директивних документів з охорони здоров'я / №2.- 2002 р. - Київ. - С.63-111.