Спосіб корекції апоптозу

Спосіб корекції апоптозу шляхом використання коригуючого засобу, який відрізняється тим, що як коригуючий засіб використовують алогенну нативну або кріоконсервовану плаценту. Корисна модель належить до експериментальної біології і медицини, зокрема, імунології і гематології, і може бути використана для спрямованої регуляції процесів апоптозу в імунокомпетентних клітинах Відомий спосіб впливу на апоптоз шляхом використання глюкокортикоїдів [1]. Однак застосування глюкокортикоідів викликає розвиток побічних ефектів, таких як синдром Кушинга, гіперкортицизм, гіпертензія, порушення зору [2, 3]. Це обмежує сферу їхнього застосування. В основу винаходу поставлена задача створити такий спосіб корекції апоптозу, який би, за рахунок використання біопрепарату, дозволив виключити можливість виникнення побічних ефектів. Ця задача вирішується тим, що в способі корекції' апоптозу шляхом використання коригуючого засобу, відповідно до корисної моделі, як такий засіб застосовують алогенну нативну або кріоконсервовану плаценту Плацента регулює міжсистемні взаємозв'язки і здійснює надсистемну регуляцію нейроімуноендокринної сфери, що сприяє корекції апоптозу Застосування плаценти, що є природним бюстимулятором, виключає можливість виникнення побічних ефектів. Приклад здійснення способу Дослідження проводили на мишах-самцях лінії СВА масою 1820г, що містяться в стандартних умовах віварію. Тварини були розділені на 4 групи (у кожній групі п=20) Як контроль була узята 1-а група здорових тварин (для зручності інтерпретації результатів показники цієї групи були прийняті за 100%). У мишей 2-ї, 3-і і 4-ї груп індукували адьювантний артрит Після цього тваринам 3-ї і 4-і групи внутрівенно вводили, відповідно, нативну і кріоконсер вовану плаценту 19 діб гестації. Для виявлення апоптотичних клітин у тимусі і лімфоцитах, регіональних до місця введення повного адьюванта Фрейнда лімфовузлів, клітини інкубувалися з ДНК-тропним барвником - Хехст 33342 [4] Для кількісної оцінки клітин, що знаходяться в апоптозі, використовували індекс апоптозу (ІА), що розраховували по формулі: ІА= (Кількість апоптотичних клітин/ Загальна кількість клітин)х100%. Експресію антиапоптотичного білка ВсІ-2 визначали методом люмінісцентної мікроскопії з використанням антимишачих моноклонольних антитіл [5] Оцінку досліджуваних показників проводили на 7 (гостра фаза) і на 14 (хронічна фаза) добу після індукції патології. Результати наведені в таблиці. З таблиці видно, що у тварин 2-ї групи відзначається достовірне в порівнянні з контролем зниження кількості Хехст* - клітин у тимусі на 7 і 14 добу в 2 рази; у лімфовузлах - на 7 добу в 3 рази, на 14 - у 1,5 рази. При цьому на фоні зниження Хехст+ - клітин відзначається підвищення рівня вмісту клітин, що експресують білок ВсІ-2 у тимусі на 7 добу в 1,5 рази, на 14 добу в 1,3 рази; у лімфовузлах, відповідно, у 2-1,2 рази. Даний факт свідчить про те, що пригнічення апоптозу в клітинах, що тестуються при адьювантному артриті відбувається на фоні активації антиапоптотичного каскаду, що підтверджується збільшенням вмісту в них антиапоптотичного білка ВсІ-2. Після введення як нативної, так і кріоконсервованої суспензії плаценти протягом усього терміну спостереження відзначається стимуляція апоптотичних процесів, що виражається в підвищенні вмісту Хехст+ - клітин у досліджуваних органах. Після лікування тва Ю О CM 4205 рин нативною суспензією плаценти КІЛЬКІСТЬ Хехст+ - клітин, у порівнянні з тваринами, яких не лікували, у тимусі на 7 добу спостереження збільшилося на 64%, а на 14 добу на 40%; у лімфовузлах, відповідно, на 42% І 64% Після введення кріоконсервованої суспензії плаценти в тимусі як на 7, так і на 14 добу - на 27%, а в лімфовузлах, відповідно, на 15% і 84%. 4 Отримані результати свідчать про те, що застосування суспензії плаценти забезпечує посилення апоптозу імунокомпетентних клітин і виключає можливість виникнення побічних ефектів. Динаміка кількості Хехст+ - клітин і клітин, що експресують ВсІ-2 при адьювантному артриті до і після введення нативної і кріоконсервованої суспензії плаценти. Таблиця 7 доба 14 доба Кількість Хехст* - клітин, Кількість ВсІ-2+ клітин, Кількість Хехст+ - клітин, Кількість ВС1-2 - клітин, % % % % Тимоцити Лімфоцити Тимоцити Лімфоцити Тимоцити Лімфоцити Тимоцити Лімфоцити 1 група 100+4,6 100+5,1 100±7,4 100+3,2 100±5,4 100±2,5 100±4,8 100±3,2 2 група 56±2,3* 33+1,2* 150±11,2* 178±7,4* 53±2,4* 66±3,8* 125±2,6* 118±5,4* 3 група 120±5,4* 75±4,3* 93±4,4 102+3,1 92±4,7 130+9,2* 110±6,3 98±2,5 4 група 83±3,8 90±8,8 120±5,3 89+7,6 80±5,6 150±7,1* 110±7,8 95±6,2 * - розходження достовірні (Р