Спосіб приготування референтного матеріалу для контролю якості визначення креатиніну в сироватці крові

Спосіб приготування референтного матеріалу для контролю якості визначення креатиніну в сироватці крові, який відрізняється тим, що спосіб здійснюється шляхом додавання до сироватки крові антимікробного біохімічного стабілізатора фенолу в кінцевій концентрації 25-100 ммоль/л. (19) (21) 2000020828 (22) 15.02.2000 (24) 16.04.2001 (33) UA (46) 16.04.2001, Бюл. № 3, 2001 р. (72) Пішак Василь Павлович, Пішак Ольга Василівна, Ярмольчук Станіслава Георгіївна, Ярмольчук Георгій Мартинович 36841 вживання і не потребує розведення і інших підготовчи х маніпуляцій перед використанням для контролю точності визначення креатиніну в сироватці крові біохімічними лабораторіями; г) не розкладається мікроорганізмами і не потребує заходів щодо попередження мікробного забруднення. Приклад здійснення винаходу Під референтним (контрольним) матеріалом розуміють оброблену спеціальним способом сироватку крові людини і тварин з точно відомим вмістом креатиніну, який не змінюється протягом тривалого зберігання цього матеріалу. З метою контролю точності визначення креатиніну в сироватці крові пропонують визначити вміст креатиніну в референтному матеріалі і порівнюють одержані показники з величиною вмісту креатиніну, яка вказана в паспорті контрольного матеріалу [1, 2]. Під біохімічним стабілізатором розуміють хімічну сполуку, додавання якої до сироватки крові і інших біологічних об'єктів стабілізує (зберігає незмінним) вміст креатиніну в них протягом тривалого часу. Оскільки біологічні об'єкти швидко розкладаються мікроорганізмами, то біохімічний стабілізатор повинен мати антимікробну дію, тобто він повинен бути антимікробним біохімічним стабілізатором [4]. В результаті проведеного нами первинного скринінгу антимікробного біохімічного стабілізатора встановлено, що з метою приготування референтного матеріалу можна використати фенол [5] в концентрації 25-100 ммоль/л (табл. 2), який забезпечує стабільність (незмінність) вмісту креатиніну в сироватці крові протягом 50 діб зберігання її при температурі навколишнього середовища (табл. 2, 3) і протягом цього часу вона може використовуватися як референтний матеріал для контролю точності визначення креатиніну в сироватці крові співробітниками біохімічних лабораторій. Приготування референтного матеріалу Реактиви та обладнання 1. Сироватка крові людини або тварин. 2. Дистильована вода, насичена фенолом. До 50 г карболової кислоти кваліфікації "ЧДА" приливали 0,5 л дистильованої води, закривали корком, інтенсивно збовтували 15 хвилин і центрифугува ли або відстоювали протягом 3 діб. При цьому суміш розділялась на дві фази, верхня з яких є водою, насиченою карболовою кислотою. Концентрація фенолу в ній дорівнює 763 ммоль/л при 20°С [6]. 3. Магнітна мішалка, піпетки. 1 л сироватки крові інтенсивно перемішували на магнітній мішалці і повільно з піпетки, носик якої занурений у біологічну рідину, приливали 34-150 мл дистильованої води, насиченої карболовою кислотою. Кінцева концентрація фенолу в одержаній суміші буде дорівнювати 25-100 ммоль/л. В даній суміші з максимальною точністю визначали вміст креатиніну, вказували його в паспорті, після чого вона може служити референтним матеріалом для контролю якості визначення даного показника медичними, ветеринарними і науковими лабораторіями. Креатинін кількісно визначали за методикою [1]. Середня відносна помилка визначення креатиніну в референтному матеріалі, що заявляється, в дослідах дорівнювала ±1,85% (табл. 4). Джерела інформації 1. Лабораторные методы исследования в клинике: Справ. / В.В. Меньшиков, Л.Н. Делекторская, Р.П. Золотницкая и др.; Под. ред. В.В. Меньшикова. - М.: Медицина, 1987. - 368 С. - С. 19-23, 23-24, 219-221. 2. Гаранина Е.Н., Лихтенштейн И.В. Контроль качества - один из путей повышения точности лабораторных исследований // Ошибки в лабораторной диагностике / Под ред. Л.Л. Громашевской. К.: Здоровье, 1990. - С. 229-255. 3. Меньшиков В.В. На XIX конгрессе Всемирной ассоциации обществ патологов (WASP) // Клин. лаб. диагн. - 1998. - № 3. - С. 45-48. 4. Пішак В.П., Ярмольчук Г.М, Первинний скринінг антифунгальних біохімічних стабілізаторів // Мікробіол. журн. - 1997. - Т. 59. - № 5. - C . 41-46. 5. Тринус Ф.П. Фармакотерапевтический справочник. - 7-е изд., испр. - К.: Здоровье, 1993. С. 430-440. 6. Гороновский И.Т., Назаренко Ю.П., Некряч Е.Ф. Краткий справочник по химии. - К.: Наук. думка, 1987. - С. 688. 2 36841 Таблиця 1 Показники вмісту креатиніну (в мікромолях на 1 л) в нестабілізованих зразках сироватки крові донорів в динаміці зберігання їх при кімнатній температурі № сироватки 1 2 3 4 5 M ±m t P %* В день забору сироватки 99 81 63 95 77 83 6 100 Дні після забору сироватки 5 7 10 84 73 59 68 59 43 47 41 38 75 70 59 60 52 47 67 59 49 6 6 4 1,79 2,74 4,36 >0,1 0,05 0,001 81 71 59 3 96 77 53 86 68 76 7 0,71 >0,25 92 15 29 21 17 26 17 22 2 8,82 0,001 27 * - Відсотки вирахувані з величин "M". Таблиця 2 Вміст креатиніну в сироватках крові, стабілізованих різними концентраціями фенолу, які зберігалися 50 діб при кімнатній температурі № сироватки крові 1 2 3 Середнє арифметичне Відсотки* Вміст креатиніну через 50 діб після стабілізації Концентрації фенолу в мілімолях на 1 л 15 25 50 75 100 51 73 70 72 71 63 90 87 91 93 68 82 85 82 83 До стабілізації 72 90 84 82 100 61 74 82 100 81 100 82 100 82 100 150 55 71 59 62 76 * - Відсотки вирахувані із середніх арифметичних величин. Таблиця 3 Вміст креатиніну в референтних матеріалах, стабілізованих фенолом в концентрації 50 ммоль/л, в динаміці зберігання їх при кімнатній температурі № реф. матеріалу 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 M ±m t P %* До стабілізації 87 75 66 74 68 79 98 68 71 66 75 3 100 Концентрація креатиніну в мікромолях на 1 л Дні після стабілізації 2 5 10 15 20 30 88 93 90 85 88 92 72 72 75 80 74 76 64 64 63 70 69 61 70 77 70 75 71 72 66 64 69 69 67 65 75 74 82 87 80 76 96 95 101 95 99 96 64 64 67 72 69 65 70 68 73 70 70 68 64 68 65 68 65 68 73 74 76 76 75 74 3 4 4 3 3 4 0.48 0,27 0,06 0,14 0.0 0,26 >0,5 >0,5 >0,5 >0,5 >0,5 >0,5 97 99 101 101 100 99 * - Відсотки вирахувані з величин "M". 3 40 83 70 68 75 70 75 92 72 73 62 74 3 0,29 >0,5 99 50 90 78 70 77 70 83 103 72 73 70 79 3 0,72 >0,5 105 36841 Таблиця 4 Середня відносна помилка визначення креатиніну в референтному матеріалі № 1 на 50-й день зберігання його при кімнатній температурі № проби Екстинкції* 1 0,070 2 0,075 3 0,072 4 0,074 5 0,075 6 0,073 Середнє арифметичне Вміст креатиніну в мкМ/л 88 94 90 93 94 92 92 Відхилення від середнього арифметичного Середня відносна помилка 4 2 2 1 1 0 1,7 ±1,85% * - Екстинкції стандартного розчину креатиніну з концентрацією 100 мкмоль/л дорівнювали 0,081, 0,080, 0,077, 0,082, 0,080, 0,078. Середнє арифметичне дорівнює 0,079666666. __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2001 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 50 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 4