Спосіб підвищення радіозахисної активності гемопоетичних стовбурових клітин, отриманих з різних джерел

Спосіб підвищення радіозахисної активності гемопоетичних стовбурових клітин, отриманих з різних джерел, що включає культивування клітин при певних умовах, який відрізняється тим, що гемопоетичні стовбурові клітини, які отримані з різних джерел, активують шляхом спільної інкубації та культивування з культурою мезенхімальних стовбурових клітин. (19) (21) u200900839 (22) 05.02.2009 (24) 25.11.2009 (46) 25.11.2009, Бюл.№ 22, 2009 р. (72) НІКОЛЬСЬКИЙ ІГОР СЕРГІЙОВИЧ, НІКОЛЬСЬКА ВАЛЕНТИНА ВАСИЛІВНА, ЗУБОВ ДМИТРО ОЛЕКСАНДРОВИЧ, ТАРАНУХА ЛЮБОВ ІВАНІВНА, ГАЛИЦЬКА СВІТЛАНА МИКОЛАЇВНА (73) ДЕРЖАВНА УСТАНОВА "ІНСТИТУТ ГЕНЕТИЧНОЇ ТА РЕГЕНЕРАТИВНОЇ МЕДИЦИНИ АКАДЕМІЇ МЕДИЧНИХ НАУК УКРАЇНИ" 3 45641 вання з культурою мезенхімальних стовбурових клітин. До даного рішення автори дійшли шляхом проведення експериментальних робіт та досліджуючи вплив спільно культивованих ГСК та мезенхімальних стовбурових клітин (МСК) на відновлення імунної та кровотворної систем в опромінених мишей. Виявлено, що під дією МСК здійснюється активація ГСК отриманих із різних джерел. Перевага наведеного способу активації ГСК при спільній інкубації та культивуванні з МСК полягає в тому, що МСК за допомогою клітинних та гуморальних взаємодій сприяють активації ГСК, достовірно збільшуючи виживаність детально опромінених мишей до 4-х місяців. Спосіб здійснюють таким чином. Культуру отримують зі строми тимусу, кісткового мозку, дерми, жирової тканини механічним способом та культивують в культуральних флаконах з використанням ростового середовища RPMI 1640 з 10% ембріональної телячої сироватки (надалі ETC). Після утворення колоній або моношару МСК на 15-ту добу культивування додають 2,4x107 свіжих ізольованих або розморожених регіональних ГСК кісткового мозку або ембріональної печінки розчинених в 12 мл свіжого середовища RPMI 1640 з 10% ETC. Культури розміщують в СО2інкубаторі з 7,5 % СО2 при 37°С. Статистичні показники контрольних М ±т п p1 p2 p3 15,0 1,6 38 Спільна інкубація та культивування МСК та ГСК виконується протягом 20-ти год., після чого ГСК із супернатанту концентрують центрифугуванням при 1000 об./хв. протягом 10 хв., осад ресуспендують в ростовому середовищі RPMI 1640 з 10 % ETC до концентрації 2,5х106/мл. Мишей, лінії СВА, масою 20-25г, напередодні введення клітин (за 24 год.), піддавали загальному g - опроміненню 60Со в летальній дозі 9 Гр, потужність дози - 1,5 Гр/хв. Отримані клітини в об'ємі 0,2 мл вводили в хвостову вену опроміненим мишам. Після трансплантації, активованих за нашим способом ГСК, миші виживали до 4-х місяців, що підтверджує високу радіозахисну активність даних клітин. Підвищення радіозахисної активності ГСК, отриманих з різних джерел підтверджується дослідженням радіопротекторної властивості таких клітинних культур: клітини строми тимусу мишей (надалі СКТ) 2,5x106/мл; клітини ембріональної печінки мишей, інкубовані з СКТ (ЕПм+СКТ) - 2,5х106/мл; клітини ембріональної печінки людини (надалі ЕПл) 2,5x106/мл; клітини ембріональної печінки людини, інкубовані з СКТ (ЕПл+СКТ) -2,5х10б/мл. Порівняльні дані радіозахисної активності клітин отриманих з різних джерел та тривалість життя детально опромінених мишей, що отримували РГК з різних джерел представлені у таблиці. Середня тривалість життя тварин, діб що отримували клітини ЕПл ЕПл+СКТ ЕПм+СКТ 40,0 70,0 83,4 5,1 8,9 8,7 16 16 14