Спосіб примусової осциляції pн середовища культивування біологічних мікрооб’єктів.

Спосіб примусової осциляції рН середовища культивування біологічних мікрооб'єктів шляхом періодичної продувки камер газовою сумішшю до одержання потрібного рівня рН, який відрізняється тим, що для утворення осциляції рН використовують властивість напівпроникності матеріалу/силіконової гуми/, який входить до конструкції газових камер Винахід відноситься до області біологи, медицини і сільського господарства і може бути використаний в дослідженнях по культивуванню поза організмом доімплантаційних ембріонів ссавців, клітинної культури тощо Відомо спосіб культивування лімфоцитів при постійному рН, який забезпечують шляхом попередньої продувки камер, що містять рідке середовище, повітрям з 5% СОг і наступного щільного укупорювання камер перед інкубацією або нещільного прикриття останніх і розміщення їх в СОг інкубаторі, який автоматично утримує рН на заданому рівні Відомо також спосіб, за яким ембріони свині культивують в рідкому середовищі, рН якого не змінюється протягом усього періоду культивування Стабілізація рН середовища досягається за рахунок шару мінеральної олії над поживним середовищем і газової фази, використовуваної при нормальному тиску в закритих щільно камерах культивування Найближчим технічним рішенням є спосіб П В Денисюка, 1993 /1/, за яким ембріони ссавців культивують в рідкому середовищі, рН якого піддають примусовій осциляції в діапазоні 7,6 - 6,0 з 24-годинним періодом протягом усього культивування за рахунок автоматичної продувки газовою сумішшю Недоліком прототипу є великі витрати азоту, кисню і вуглекислого газу при ПОСТІЙНІЙ продувці газових камер в перемінному режимі Завдання способу, що пропонується, є зменшення економічних витрат за рахунок обмеження КІЛЬКОСТІ використованого газу при збереженні ефективності культури in vitro мікрооб'єктів Поставлена мета досягається за рахунок включення в конструкцію газових камер трубок із силіконової гуми, завдяки напівпроникності якої до газів створюються умови поступового підвищення рН до необхідного рівня, після чого застосовують однократну продувку камери газовою сумішшю Зміна діапазону осциляції рН досягається шляхом зміни параметрів трубок із силіконової гуми Аналіз співставлення способу, який заявляється, з прототипом показує, що перший відрізняється від відомого тим, що в процесі культивування мікрооб'єктів рН середовища культивування піддають примусовій осциляції в заданому режимі за рахунок використання властивості напівпроникності до газів силіконової гуми, включеної до конструкції газової камери Патентний пошук показав, що жоден з аналогів не має в якості відмінної ознаки створення осциляції рН за рахунок використання властивості напівпроникності матеріалу /силіконової гуми/ газових камер Приклади конкретного виконання способу Приклад 1 Дванадцять одноклітинних ембріонів вимили з яйцепроводів свиноматки №402 Культивування проводили в модифікованому Кребса-Рінгера бікарбонатному розчині, доповненому сироваткою крові плоду корови Ембріони розподілили рандомічно в дві скляні культуральні камери, які містили по 2мл середовища під 2мл вазелінової олії Скляні камери помістили в газові - алюмінієві бюкси з відведеними від них, перекритими затискачами, трубками із силіконової гуми довжиною 150мм, товщиною стінки 1,5мм і внутрішнім (24)15 05 2002 (46) 15 05 2002, Бюл № 5, 2002 р (72) Денисюк Павло Віісторович (73) Інститут свинарства Української академії аграрних наук 00 (О 46189 діаметром 6мм Газові камери продули сумішшю Приклад 2 Дванадцять одноклітинних ембріогазів 7% кисню, 93% азоту - з одного балону і СОг нів одержали від свиноматки №406 Всі умови їх - з другого до досягнення рН середовища 7,3 культивування були такими ж, як у прикладі 1, за Протягом 12год рН поступово підвищувався завинятком параметрів трубок із силіконової гуми, вдяки напівпроникності силіконової гуми Коли рН що відповідали довжині 100мм, товщині стінки досяг рівня 8,3 застосували однократну продувку 2мм і внутрішньому діаметру 4мм За таких умов сумішшю газів при поступовому зниженні рН до рН підвищувався від початкового рівня 7,6 до 8,0 вихідного рівня 7,3 Після цього рН знову підвищупротягом 24год Через 9 діб культивування одервався в режимі синусоїди завдяки поступовій мігжали 88% бластоцист, з яких 55% почали вихід із рації СОг назовні із трубок силіконової гуми І так блискучої оболонки і 40% повністю звільнились від протягом усіх 9 діб культивування, яке завершиоболонки лось досягненням ембріонами стадії бластоцисти Таким чином, використання способу, що заяв/80%/ бластоцисти, що почала вихід із блискусої ляється, забезпечує можливість його промислооболонки /35%/ і такої, що повністю його завервого застосування шила/18%/ ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна (044)456-20- 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71