Спосіб вилучення днк з архівного гістологічного матеріалу, який поміщений в парафін

Спосіб вилучення ДНК з архівного гістологічного матеріалу, який заключений в парафін, що включає теплову обробку гістологічного матеріалу, який відрізняється тим, що застосовують нагрівання зразка в розчині лізуючого буфера з гуанідинтіоціанатом протягом 12 год., проводять центрифугування при 4000 об./хв. та охолодження на льоду і видалення парафіну, з подальшою депротеїнізацією та зупинкою реакції при 80 °С, виділяють ДНК методом нуклеосорбції. (19) (21) u200910659 (22) 22.10.2009 (24) 26.04.2010 (46) 26.04.2010, Бюл.№ 8, 2010 р. (72) ГОРОВЕНКО НАТАЛІЯ ГРИГОРІВНА, ДОВЖЕНКО СВІТЛАНА ПЕТРІВНА, РОССОХА ЗОЯ ІВАНІВНА, ПОДОЛЬСЬКА СВІТЛАНА ВОЛОДИМИРІВНА (73) ДЕРЖАВНА УСТАНОВА "ІНСТИТУТ ГЕНЕТИЧНОЇ ТА РЕГЕНЕРАТИВНОЇ МЕДИЦИНИ АМН УКРАЇНИ" 3 49246 4 охолодження на льоду і видалення парафіну, з Наступний процес нуклеосорбції проводять подальшою депротеінізацію та зупинкою реакції додаючи 25 мкл сорбенту (сілікагель) до зразка при 80 °С, виділяють ДНК методом нуклеосорбції. (супернатант). Струшують зразок на вертексі двічі До даного рішення автори прийшли досліджуз інтервалом 5 хв. І знову центрифугують 2 хв. при ючи тканини архівного гістологічного матеріалу 5000 об/хв., надалі продовжують виділення нуклепухлин молочної залози, який заключений в параїнових кислот набором для виділення ДНК. фін. Доведено, що застосування лізуючого буферу Використання запропонованого способу, за з гуанідінтІоціанатом при температурі 65 °С протярезультатами проведеної ПЛР 3 наступною детекгом 12 год та центрифугуванням при 4000 об/хв 10 цією ампліфікованих фрагментів методом електхв. дозволяє розділити фракції та проводити екстрофорезу в агарозному гелі, дозволяє підвищити ракцію нуклеїнових кислот одночасно, без викориефективність виділення ДНК у порівнянні з вищестання органічних розчинників. згаданими способами. Спосіб виконується наступним чином: Таким чином, спосіб вилучення ДНК з архівноДосліджуваний зразок товщиною 10 мкм поміго гістологічного матеріалу, який заключений в щають в мікроцентрифужну пробірку типу Епенпарафін, дозволяє проводити вилучення нуклеїнодорф об'ємом 1,5 мл. Додають 400 мкл розчину вих кислот з парафінового зрізу без обробки оргалізуючого буферу з гуанідінтіоціанатом (гуанідінтінічними розчинниками, не спричиняє значних оціанат – 18 г, дітіотрейтол – 95 мг, ЕДТА - 1мг ушкоджень біологічного матеріалу, не впливає на розчиняють в 30 мл дистильованої води) та виздоров'я персоналу, не потребує додаткового обтримують при температурі 65 °C 12 год. Під час лаштування робочого місця і пропонується до експозиції, протягом останніх 2 год. зразки періовпровадження в роботу молекулярно-генетичних дично, обережно струшують на вертексі. Одразу лабораторій, які проводять дослідження архівного після термостатування зразки поміщають у матеріалу методом полімеразної ланцюгової реацентрифугу та центрифугують протягом 10 хв. при кції. 4000 об/хв. Викладають зразки на лід на 7-10 хв. Література: та видаляють парафін, що утворив пластинку над 1. Молекулярная клиническая диагностика. супернатантом. Далі проводять процес депротеініМетоды / под редакцией Херрингтон С., Макги Дж.зації. Для цього додають розчин протеінази К у М. // «Мир» - 1999. - С.404-408. розрахунку 500 мкг/мл 1 обережно струшують на 2. Diaz-Cano SJ, DNA extraction from formalinвертексі. Поміщають у термостат та нагрівають 15 fixed, paraffin-embedded tissues: protein digestion as хв. при 37 °С. Зупиняють реакцію нагріванням при a limiting step for retrieval of high-qualiti DNA / Diaz80 °C 5 хв. і знову центрифугують 1хв. при 5000 Cano SJ., Brady SP. // Diagn. Мої. Pathol. - 1997. об/хв. №6. - P.342-346. Комп’ютерна верстка Г. Паяльніков Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601