Спосіб виготовлення антигену для серологічної діагностики сетаріозу коней

Спосіб виготовлення антигену для серологічної діагностики сетаріозу коней, що включає виготовлення антигену для діагностики сетаріозу, який відрізняється тим, що сетарій коней Setaria equine гомогенізують протягом 40-60 хв., проводять центрифугування суспензії гомогенізованих збудників з фізіологічним розчином 15 хв. при 6000 об/хв., у отриману суспензію додають натрію азид з розрахунку 1:10000. (19) (21) u200912533 (22) 03.12.2009 (24) 10.06.2010 (46) 10.06.2010, Бюл.№ 11, 2010 р. (72) СОРОКА НАТАЛІЯ МИХАЙЛІВНА, СЕМЕНКО ОЛЕНА ВАЛЕНТИНІВНА (73) НАЦІОНАЛЬНИЙ УНІВЕРСИТЕТ БІОРЕСУРСІВ І ПРИРОДОКОРИСТУВАННЯ УКРАЇНИ 3 50424 гомогенізування суспензії паразитів вручну струшуванням протягом однієї години. Отриману суспензію перевіряємо на чистоту методом мікроскопії виготовлених з неї мазків. Флакони з виготовленим антигеном щільно закриваємо кришками, наклеюємо етикетку і зберігаємо в камері побутового холодильника при температурі +2-4 °С. Всі роботи проводили з дотриманням стерильності і при постійному контролі пофарбованих мазків під мікроскопом (ок. 7-10 об. 20-40). Виготовлений антиген перевіряли на активність, відсутність антикомплементарних властивостей, гемотоксичність. Також визначали робочий титр в РТЗК в об'ємі 0,2 см3 з завідомо позитивними сироватками високого (не нижче 1:80) та низького (не менше 1:5) титрів, отриманих від хворих тварин та з завідомо негативними сироватками (в титрі 1:5). Перевіряли антиген на специфічність з сироватками крові коней, що перехворіли на інші паразитарні хвороби в титрі 1:5. Антиген розводили в титрі 1:5, 1:10, 1:25, 1:50, 1:75, 1:100. Позитивні та негативні сироватки крові розводили, як зазначено вище, та інактивували 30 хв при температурі +58-59 °С. Позитивні сироватки розводили до їх граничних титрів. Комплемент і гемолізин використовували у їх робочих титрах. Облік реакції проводили за співвідношенням гемолізованих еритроцитів (у відсотках) та виражали у хрестах за схемою: 4 хрести - відсутність гемолізу: надосадова рідина прозора і безбарвна; 3 хрести - гемоліз 25 % еритроцитів; 2 хрести гемоліз 50 % еритроцитів; 1 хрест - гемоліз 75 % Комп’ютерна верстка Л.Литвиненко 4 еритроцитів; мінус - повний гемоліз еритроцитів, осад відсутній, рідина інтенсивно забарвлена гемоглобіном. Для контролю антигену використовували ряд пробірок з фізіологічним розчином замість сироваток, в які додавали ті ж самі компоненти. Проводили контроль гемолітичної системи (фізіологічний розчин з гемолітичною системою). Проведеними дослідженнями на антикомплементарність встановлено, що виготовлений нами антиген не володіє антикомплементарними властивостями. Так, з комплементом, гемолізином у робочих титрах та 3 % еритроцитів барана він викликав повний гемоліз гемолітичної системи. Антиген не гемотоксичний (викликав повну затримку гемолізу з 3 % розчином еритроцитів барана та фізіологічним розчином) та специфічний (з сироватками, отриманими від коней, хворих не на сетаріоз, відмічали повний гемоліз еритроцитів барана). Титр антигену (найменша його доза - найбільше розведення), при якому припинялась затримка гемолізу і наставав повний гемоліз в нашому досліді і становив від 1:25 до 1 :100. Отже, отриманий за запропонованою нами методикою антиген виявився специфічним, не гемотоксичним, не володів антикомплементарними властивостями. Він може використовуватись для серологічної діагностики сетаріозу коней, спричиненому Setaria equina, в титрах від 1:25 до 1:100. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601