Спосіб виготовлення антигену для серологічної діагностики сетаріозу великої рогатої худоби

Спосіб виготовлення антигену для серологічної діагностики сетаріозу великої рогатої худоби, 3 50425 Спосіб здійснюється наступним чином: відбираємо (при кастрації бугайців та великої рогатої худоби, що була забита) статевозрілих сетарій Setaria labiatopapillosae, зібраних гельмінтів гомогенізуємо в гомогенізаторі протягом 60хв. Після проведеної гомогенізації до отриманої суспензії додаємо фізіологічний розчин в співвідношенні 2:1 та центрифугуємо 15хв при 6000об/хв, консервуємо азидом натрію з розрахунку 1:10000 і проводимо гомогенізування суспензії паразитів вручну струшуванням протягом однієї години. Отриману суспензію перевіряємо на чистоту методом мікроскопії виготовлених з неї мазків. Флакони з виготовленим антигеном щільно закриваємо кришками, наклеюємо етикетку і зберігаємо в камері побутового холодильника при температурі +2-4°С. Всі роботи проводили з дотриманням стерильності і при постійному контролі пофарбованих мазків під мікроскопом (ок. 7-10 х об. 20-40). Виготовлений антиген перевіряли на активність, відсутність антикомплементарних властивостей, гемотоксичність. Також визначали робочий титр в РТЗК в об'ємі 0,2см3 з завідомо позитивними сироватками високого (не нижче 1:80) та низького (не менше 1:5) титрів, отриманих від хворих тварин та з завідомо негативними сироватками (в тирі 1:5). Перевіряли антиген на специфічність з сироватками крові великої рогатої худоби, що перехворіли на інші паразитарні хвороби в титрі 1:5. Антиген розводили в титрі 1:5, 1:10, 1:25, 1:50, 1:75, 1:100. Позитивні та негативні сироватки крові розводили, як зазначено вище, та інактивували 30хв при температурі +58-59°С. Позитивні сироватки розводили до їх граничних титрів. Комплемент і гемолізин використовували у їх робочих титрах. Комп’ютерна верстка М. Ломалова 4 Облік реакції проводили за співвідношенням гемолізованих еритроцитів (у відсотках) та виражали у хрестах за схемою: 4 хрести – відсутність гемолізу: надосадова рідина прозора і безбарвна; 3 хрести - гемоліз 25% еритроцитів; 2 хрести - гемоліз 50% еритроцитів; 1 хрест - гемоліз 75% еритроцитів; мінус - повний гемоліз еритроцитів, осад відсутній, рідина інтенсивно забарвлена гемоглобіном. Для контролю антигену використовували ряд пробірок з фізіологічним розчином замість сироваток, в які додавали ті ж самі компоненти. Проводили контроль гемолітичної системи (фізіологічний розчин з гемолітичною системою). Проведеними дослідженнями на антикомплементарність встановлено, що виготовлений нами антиген не володіє антикомплементарними властивостями. Так, з комплементом, гемолізином у робочих титрах та 3% еритроцитів барана він викликав повний гемоліз гемолітичної системи. Антиген не гемотоксичний (викликав повну затримку гемолізу з 3% розчином еритроцитів барана та фізіологічним розчином) та специфічний (з сироватками, отриманими від великої рогатої худоби, хворої не на сетаріоз, відмічали повний гемоліз еритроцитів барана). Титр антигену (найменша його доза - найбільше розведення), при якому припинялась затримка гемолізу і наставав повний гемоліз в нашому досліді і становив від 1:25 до 1:100. Отже, отриманий за запропонованою нами методикою антиген виявився специфічним, не гемотоксичним, не володів антикомплементарними властивостями. Він може використовуватись для серологічної діагностики сетаріозу великої рогатої худоби (ВРХ), спричиненому Setaria labitopapillose, в титрах від 1:25 до 1:100. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601