Спосіб визначення коліфагів у воді

Спосіб визначення коліфапв у воді, який включає посів проби води, інкубацію та облік результатів, який відрізняється тим, що інкубацію проводять у два етапи, перший з яких здійснюють при температурі 35-37°С протягом 4 - 6 годин, а другий - при температурі 18 - 22°С протягом 16 18 годин Винахід відноситься до санітарної вірусологи, переважно до способів вимірювання за допомогою бактеріофагів і може бути застосованим для опосередкованого визначення забруднення води вірусами Відомим Є спосіб визначення коліфапв у воді, який включає обробку проби води хлороформом, и посів та інкубування при ЗО - 37°С протягом 16-18 годин [Kennedy J , Bitton G , Oblmger J Comparison of selective media for assay of cohphages in sewage effluent and lake water//Appl Environm Microbiol 1984 - Vol 49, №1 - P 33 - 36] та спосіб, який включає посів проби та інкубування при 36 ± 2°С протягом 1 8 + 2 години [ISO 10705 - 2 2000 Water quality - detection and enumeration of bactenophages Part 2 Enumeration of somatic cohphages Geneva, Switzerland -16p] Недоліками вказаних способів являється застосування хлороформу для зняття негативного впливу на підрахунок супутньої мікрофлори, який є високотоксичною сполукою та шактивує близько 60% бактеріофагів Крім того об'єм проби(1мл), який використовується для посіву, зменшує чутливість методу Найбільш близьким до заявленого способу за технічною суттю являється спосіб визначення коліфапв у воді, який включає посів проби води, її інкубування при 37°С протягом 4 - 6 годин [Wentsel R S , O'Neill Р Е , Kitchens J F Evaluation of coliphage detection as rapid indicator of water quality // Appl Environm Microbiol -1982 -Vol 43 -P 430434] До недоліків цього способу відноситься термін інкубації, який є недостатнім, оскільки не всі присутні в пробі коліфаги встигають зформувати ПОМІТНІ зони лізісу, які можна врахувати при проведенні обліку результатів В основу створення способу, який пропонується, поставлено завдання створення більш вірогідного і чутливого способу підрахунку КІЛЬКОСТІ коліфапв у воді шляхом двохетапної інкубації, яка дозволяє при дотриманні максимально ефективного терміну шкубацп(20 - 24 години) зняти негативний вплив супутньої мікрофлори та вторинного росту бактеріального хазяїна при підрахунку зон лізісу Для досягнення поставленого завдання у способі визначення коліфапв у воді, який включає посів проби води, інкубацію та облік результатів, згідно винаходу, який пропонується, інкубацію проводять в два етапи, перший з яких здійснюють при температурі 35 - 37°С протягом 4 - 6 годин, а другий - при температурі 18 - 22°С протягом 16 18 годин Протягом першого етапу інкубації на чашці з посівом встигає зформуватися повноцінний бактеріальний газон Е соїі і відбутися інфекція бактеріофагами цих клітин, оскільки відомо, що найбільш ефективно цей процес протікає у середній(3 - 3,5 години) та ПІЗДНІЙ Іод-фазі(5 - 6 години) росту бактерій при 35 ± 2°С Протягом другого етапу інкубації відбувається формування помітних для обліку зон лізису бактеріофагом бактеріального газону, на яке температурний фактор вже не має значного впливу Спосіб здійснюється наступним чином попередньо розливають у 4 стерильні чашки Петрі по 15 - 20мл 3% м'ясо-пептонного агару(МПА) та у 4 стерильні пробірки по 5мл 1,5%МПА, який має бути охолоджений до температури 45°С В готові пробірки з 1,5%МПА вносять по 5мл проби води, попередньо нагрітої до кімнатної температури, та по 1мл Ecoh C Обережно 00 о ю 52018 перемішують вміст пробірок, застерегаючись утворення бульбашок повітря, і виливають на поверхню 3%МПА Агар рівномірно розподіляють і залишають до застигання на горизонтальній прохолодній поверхні Підсушують чашки шляхом інкубування з частково відкритими кришками, після чого їх закривають і шкубують чашки вверх дном в термостаті ТС-80(не складати більше ніж 6 чашок) при 35 - 37°С протягом 4 - 6 годин, після чого чашки з посівами виймають з термостату і залишають у темному МІСЦІ при температурі 18 - 22°С на 16 18 годин Облік результатів проводять наступним шляхом при наявності зон лізісу підраховують їх КІЛЬКІСТЬ на 4-х чашках і помножують на 50, що у підсумку дає вміст коліфапв віл-проби В натурних умовах було проведено визначення у пробах води(р Десна) концентрацій коліфапв наступними методами посів проби води, и інкубування при 35 - 37°С протягом 4 - 6 годин та облік результатів, посів проби води, и інкубування при 35 - 37°С протягом 16-18 годин та облік результатів, посів проби води, інкубація у два етапи, перший з яких здійснюють при температурі 35 - 37°С протягом 4 - 6 годин, а другий - при температурі 18 - 22°С протягом 16-18 годин, та облік результатів Статистична обробка даних виконувалася шляхом обрахунку середніх арифметичних(М), їх помилок(т) та вірогідності різниці за критерієм Стьюдентаф Результати досліджень наведено у таблиці 1 З наведених даних видно, що при подовженні терміну інкубації чітко спостерігається достовірне збільшення КІЛЬКОСТІ коліфапв і, особливо, при застосуванні двохетапної інкубації Для більшої наглядності в таблиці 2 продемонстрована різниця у КІЛЬКОСТІ супутньої мікрофлори при застосуванні двохетапної інкубації у порівнянні з інкубуванням протягом 20 - 24 годин при 35 -37°С Висновок з результатів досліджень видно, що спосіб визначення коліфапв у воді, який пропонується, можна вважати більш чутливим і вірогідним у порівнянні із базовими способами ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна ( 0 4 4 ) 4 5 6 - 2 0 - 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71