Спосіб діагностики псоріазу

Спосіб діагностики псоріазу, що включає візуальну характеристику висипки, який відрізняється тим, що додатково в сироватці крові визначають імунологічні показники СДЗ, СД4, СД8, СД22, NK, ЦІК і при зменшенні СДЗ та ЦІК і збільшенні СД4, СД8, СД22 та NK діагностують наявність псоріазу Винахід, що заявляється відноситься до медицини, а саме до дерматології і призначений для діагностики псоріазу з атиповим перебігом, коли внаслідок відсутності типових лентикулярних папул, не вдається виявити псоріатичні феномени (наприклад, псоріатична артропатія, псоріатична еритродермія, пустульозний псоріаз) і може бути використаний для диференційної діагностики псоріазу з червоним плоским лишаєм та вторинним папульозним сифілідом Псоріаз був і залишається актуальною проблемою в дерматології внаслідок великої популяційної розповсюдженості та значною питомою вагою його в загальній дерматологічній захворюваності (до 30% ), а також збільшенням в останній час атипових КЛІНІЧНИХ форм дерматозу, а саме псоріатична артропатія, псоріатична еритродермія та пустульозний псоріаз [1,2] Також продовжує зростати захворюваність червоним плоским лишаєм і сифілісом Несвоєчасний діагноз може швидко призвести до інвалідізацм хворого Несвоєчасна діагностика вторинного папульозого сифілісу може призвести до інфікування значного числа людей, включаючи і медичний персонал ( професійний сифіліс) псоріатичні феномени [3] Однак спосіб має суттєві недоліки при відсутності на шкірі типових лентикулярних папул, при наявності псоріатичної артропатм, еритродермії, згрупованих пустул, а також при бородавчастій формі псоріазу діагностика захворювання значно ускладнюється Задача, яку вирішує винахід, що заявляється, полягає в підвищенні точності діагностики за рахунок визначення імунних комплексів Перевагою даного способу є підвищення точності діагностики, що дозволяє встановити правильний діагноз без застосування складних методів дослідження і дозволяє обрати адекватну тактику лікування Поставлена задача досягається тим, що у відомому способі діагностики псоріазу, згідно винаходу в сироватці крові визначають імунологічні показники CD3, CD4, CD8, CD22, NK, ЦІК При зменшенні CD3 та ЦІК і збільшенні CD4, CD8, CD22 та NK діагностують на наявність псоріазу Спосіб виконується наступним чином 7мл Крові беруть з ліктьової вени в розчин гепарину Мононуклеарні клітини виділяють з гепаринізованоі крові в градієнті ЩІЛЬНОСТІ філол - верографін ( d = 1,078) ЗОхв Для визначення Т-клітин вносили анти CD3 антитіла Мононуклеари відмивали в холодному фосфатному буфері (PBS ), РН - 7,2 При постановці діагнозу псоріазу використовують його КЛІНІЧНІ особливості У більшості випадків на шкірі виникають типові лентикулярні папули при пошкрябуванні яких легко виявляється феномен Ауспітца-стеаринової плями, термінальної плівки та крапкоподібної кровотечі Цей спосіб є найближчім аналогом-прототипом способу, що заявляється Він включає візуальну характеристику висипки (лентикулярні папули, які покриті білісуватими лусочками) та можливість при пошкрябуванні поверхні папул виявити вище зазначені 7,4, підраховували КІЛЬКІСТЬ КЛІТИН, ЩО ВИДІЛИЛИСЯ, в камері Горяєва Мононуклеари реуспендували у PBS так, щоб концентрація клітин була не менше 2,5 х 106/мл Моноклональні антитіла вносили в пластикові пробірки в об'ємі Юмкл Потім в пробірки вносили 2,5 х 106/мл мононуклеарів, перемішували та шкубували ЗО хвилин при 4°С Потім клітини відмивали холодним PBS від надлишка C O го ю 52433 антитіл Об'єм проби після відмивання складав ЮОмкл В кожну пробу вносили 5мкл F (ab) - фрагментів, мічених ФІТЦ (кролячі, атимишині), перемішували, шкубували ЗО хвилин при 4°С Після закінчення інкубації клітини відмивали холодним PBS від надлишка мічених ФІТЦ кролячих антитіл, кінцевий об'єм проби доводили до ЮОмкл Для фіксації клітин використовували 2% параформ ( в кожну пробу додавали ЮОмкл 2% параформа), пробірки закорковували та зберігали в холодильнику Підрахунок реакції проводили на проточному цитофлюориметрі Циркулюючі імунні комплекси, що знаходились в сиворотці визначали за допомогою преципітації ПЕГ 6000 ( поліетіленгліколь з молекулярною вагою 6000 ) Досліджуємі зразки сироваток розводили боратним буфером в співвідношенні 1 2 Склад буфера, 6,7гНЗВОЗ 13,4г Na2B407 10 Н20 розчиняли в 1000мл Н20, РН 8,4 Змішували 200мкл розведеної сироватки з 2мл боратного буфера, в другому сосуді змішували 200мкл Розведено сироватки з 2мл боратного буфера, який містив 4% ПЄГ 6000 Інкубували 45 хвилин при кімнатній температурі Вимірювання проводили на спектрофотометрі СФ-26 ( або лазерному нефелометрі) Значення світороссіювання в пробах, що містять ПЕГ, відповідають концентрації імунних комплексів Результати оцінювали за калібровочною кривою з штучно отриманими комплексами з відомим вмістом білку Згідно представлених в таблиці 1 даних видно, що у хворих на псоріаз при різних КЛІНІЧНИХ формах захворювання має місце зміна концентрації кластерів диференціровки лімфоцитів в сироватці крові Таблиця №1 Імунологічні показники у хворих на псоріаз Показники Тл (CD3) Тх (CD4) Тс (CD8) Вл (CD22) NK ЦІК У хворих на псоріаз 53,54 ± 0,98 49,5 ±1,02 45,84 ±1,12 24,15 ±2,01 22,48 ±2,13 37,77 ± 2,09 Норма 67-76 38-46 31 -40 11 -16 10-19 50-90 Для уточнення специфічності виявлених змін вмісту кластерів диференціровки лімфоцитів та ЦІК в сироватці крові при псоріазі були вивчені ці показники при червоному плоскому лишаю Дані визначення цих показників у хворих червоним плоским лишаєм представлені в таблиці 2 Таблиця № 2 Імунологічні показники у хворих на червоний плоский лишай У хворих на червоний плосНорма кий лишай Тл (CD3) 72,5 ±1,51 67-76 Тх (CD4) 58,5 ±0,9 38-46 Тс (CD8) 13,5 ±1,74 31 -40 Вл (CD22) 20,5 ±1,41 11 -16 NK 5,51 ±0,9 10-19 ЦІК 69 ± 8,76 50-90 Показники Із приведених в таблиці 2 даних видно, що при червоному плоскому лишаї змінюється концентрація кластерів диференціровки лімфоцитів та ЦІК в сироватці крові в іншому напрямку ніж при псоріазі CD4 підвищується до 51, CD2 знижується до 18, NK знижується до 6, а Вл (CD22 ), ЦІК та Тл (CD3 ) знаходяться в межах норми Таким чином при порівнянні показників кластерів диференціровки лімфоцитів і ЦІК в сироватці крові у хворих на псоріаз і червоний плоский лишай та контролем, чітко визначаються особливості змін зазначених показників при псоріазі Для зазначеного дерматозу характерним є зниження CD3 та ЦІК при одночасному підвищенні CD4, CD8, та CD22 Таким чином проведені дослідження, підтверджені конкретним визначенням кластерів диференціровки лімфоцитів свідчать про специфічність виявлених нами змін Ця обставина дозволяє зробити висновок, що заявляє мий спосіб є "новим" Проте достовірність даних зазначених досліджень можлива лише при наявності ВІДПОВІДНИХ КЛІНІЧНИХ даних Ці обстави ни забезпечують заявленому способу ВІДПОВІДНІСТЬ критерію" винахідницький рівень" Спосіб був опробований на базі міського шкірно-венеролопчного диспансеру № 2 і дозволяє рекомендувати його для широкого впровадження Література 1 Довжанский С И , Утц С Р Псориаз или псориатическая болезнь - Саратов Издательство Саратовского университета, 1992 2 Самцов В И Руководство по кожным и венерическим болезням -Л "Медицина", 1990 3 Скрипкин Ю К, Мордовцев В Н Кожные и венерические болезни ( руководство для врачей ) -М "Медицина" 1999г Т2 стр 879 ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна ( 0 4 4 ) 4 5 6 - 2 0 - 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71