Спосіб газорідинної хроматографії токоферолів

1 Спосіб газорідинної хроматографії токоферолів, який полягає у тому, що здійснюють розділення плазми крові на фракції, очищення токоферолів від домішок за допомогою сорбенту, дериватизацію і газорідинний хроматографічний аналіз на твердому сорбенті з нерухомою фазою, який відрізняється тим, що при очищенні токоферолів від домішок як сорбент використовують кремнієву кислоту, здійснюють додаткове очищення шляхом виморожування, дериватизацію виконують шляхом метилування, а для газорідинного хроматографічного аналізу як твердий сорбент використовують Інертон-супер, а як нерухому фазу - З % OV-225 2 Спосіб за п 1, який відрізняється тим, що газорідинний хроматографічний аналіз проводять за наступним режимом температура нагріву колонки - 200°С, випарника - 230°С, детектора - 250°С Винахід відноситься до біохімії, а саме, до способів хроматографічних досліджень біологічноактивних речовин, зокрема, токоферолів, та може бути використаним у медицині, біологи, ветеринари, рослинництві Відомий спосіб газорідинної хроматографії токоферолів (Osterlof G, Nuheim A, J Chromatogr Biomed Appl 1980, 183, №4, 487 - 491 - прототип, який полягає у розділенні плазми крові на фракції, при цьому використовують гексан та етанол Далі здійснюють очищення токоферолів від домішок на колонці, яка заповнена сорбентом - целітом 545 з іптоніном та дереватизацію, шляхом ацетилування (з використанням піридину і оцтового ангідриду) Газорідинний хроматографічний аналіз здійснюють на твердому сорбенті Газохром Q з нерухомою фазою 3 % метилсіліконом JXR на колонці довжиною 1,8 м Аналіз проводять за таким режимом температура нагріву колонки - 260 °С, випарника та детектора - 280 °С Тривалість газорідинного хроматографічного аналізу - 45 хвилин Недоліком прототипу є складність та тривалість проведення способу газорідинного хроматографічного аналізу токоферолів Це обумовлено тим, що у відомому способі процес очищення проводять з використанням сорбенту целіту 545 з діптоніном -очищувачем, тривалою умовою його приготування (сорбент сушать 16 годин) Крім цього, процес дереватизацп здійс нюють з використанням шкідливого сухого піридину Газорідинний хроматографічний аналіз проводять на твердому сорбенту Газохром Q з нерухомою фазою 3 % метилсіліконом JXR, що збільшує тривалість аналізу більш, ніж на півгодини Задача винаходу розробка такого способу газорідинного хроматографічного аналізу токоферолів, у якому вибір та підготовка сорбенту для процесу очищення токоферолів дозволить спростити спосіб у цілому, зменшити тривалість його проведення Поставлена задача вирішена у способі газорідинного хроматографічного аналізу токоферолів, який полягає у розділенні плазми крові на фракції, очищенні токоферолів від домішок за допомогою сорбенту, дереватизацм та газорідинної хроматографії токоферолів на твердому сорбенті з нерухомою фазою ВІДМІННИМИ ознаками способу згідно винаходу є - при очищенні токоферолів від домішок у якості сорбенту використовують кремнієву кислоту, - додаткове очищення здійснюють шляхом виморожування, - дереватизацію здійснюють шляхом метилування, - газорідинний хроматографічний аналіз проводять з використанням твердого сорбенту - Інертону супер, (О ю 54796 - у якості нерухомої фази використовують - З пробірку, у якій випарюють насухо в потоці газопо% OV - 225 дібного азоту при 60 °С Додатковими ознаками є те, що, газорідинний 6 Сухий залишок розчиняють у 0,1 - 0,3 мл гехроматографічний аналіз проводять за наступним ксану для газорідинного хроматографічного аналірежимом температура нагріву колонки - 200 °С, зу токоферолів, який проводять на колонці довживипарника - 230 °С, детектора - 250 °С ною 2 м, що заповнена сорбентом Інертоном супер з нерухомою фазою 3 % OV - 225 ТемператуОчищення токоферолів від домішок з викорисра нагріву колонки - 200 °С, випарника - 230 °С, танням кремнієвої кислоти (завдяки її фізикодетектора - 250 °С Тривалість розділення токоХІМІЧНИМ властивостям) та виморожуванням доферолів-10 хв Похибка аналізу - 7 % зволяє скоротити процес підготовки сорбенту і очищення токоферолів з 16 до 2-х годин, що взаМожливість здійснення способу, який заявлягалі підвищує якість аналізу ється підтверджується наведеним прикладом Проведення дереватизацм шляхом метанолізу Приклад Проводять розділення плазми на та використанням колонки з твердим носієм Інерфракції Для цього до плазми крові у КІЛЬКОСТІ 1 мл тон супер і нерухомою фазою OV - 225 дає мождодають 1 мл абсолютного етанолу, струшують, ливість зменшити тривалість газорідинного хромадодають 2 мл гексану та центрифугують 10 хв при тографічного аналізу з 45 до 10 - ти хвилин 3000 об/хв Здійснюють очищення токоферолів від домішок Для цього піпетку об'ємом 5 мл запоДослідження за заявленним способом провевнюють 0,5 мл кремнієвою кислотою, яку перед дені у ВІДДІЛІ біохімічних, імунологічних та імуноцим висушують на протязі двох годин при 150 °С ферментних методів досліджень Інституту терапії АМН України на 20 - ти пробах, що дозволило Через цю колонку пропускають гексановий встановити оптимальний режим екстракції та анашар Екстракцію токоферолів з колонки проводять лізу токоферолів 10 мл 10 % етилацетату в ізооктані Запропонований спосіб виконують таким чиЗгідно З винаходом, для додаткового очищенном ня від стероїдів елюат ставлять у морозильник на одну год при - 10 °С Після ЦЬОГО верхній шар (як1 Здійснюють розділення плазми крові на що такий є) видаляють, а нижній переносять у рефракції Для цього до 0,5 - 1 мл плазми або сироакційну пробірку, де випарюють насухо ватки додають 1 мл абсолютного етанолу, перемішують, а потім додають 2 мл гексану, струшують Проводять дереватизацію Для цього до сухоі центрифугують 10 хв при 3000 об /хв го залишку додають 5 мл 1 % сірчаної кислоти у метанолі і ставлять на баню при 80 °С на 20 хв 2 Для очищення токоферолів від домішок гекПісля ЦЬОГО ДО розчину додають 3 мл дистильовасанову суміш пропускають через колонку, що заної води та 3 мл суміші гексан-хлороформповнена кремнієвою кислотою, яку перед цим суметанол у співвідношенні 10 10 1 Струшують і шать при 150 °С на протязі 2-х годин нижній шар переносять у центрифужну пробірку, у 3 Токофероли екстрагують з колонки 10 мл 10 якій і випарюють насухо в потоці газоподібного % етилацетату в ізооктані азоту 4 Для допоміжної очистки від стерощів елюат ставлять у морозильник на 1 год при - 10 °С ПісДля проведення газорідинного хроматографіля цього верхній шар стероїдів (якщо такий є) вічного аналізу додають у пробірку 0,1 - 0,3 мл гекдокремлюють, а нижній випарюють насухо в потоці сану газоподібного азоту при 60 °С Газорідинний хроматографічний аналіз виконують за умовою викладеною в п 6 5 Здійснюють дереватизацію Для цього до сухого залишку додають 5 мл 1 % сірчаної кислоти Технічний результат Використання способу в метанолі і витримують на бані ЗО хв при 80 °С газорідинної хроматографії токоферолів у медичПісля ЧОГО додають 3 мл води, струшують і екстраній практиці, у порівнянні з прототипом, дозволяє гують токофероли трьома мл суміші гексанспростити спосіб у цілому за рахунок спрощення хлороформ-метанол у співвідношенні 1 0 1 0 1 операції очищення токоферолів та знизити триваХлороформений шар переносять у центрифужну лість аналізу з 45 до 10 хв Підписано до друку 03 04 2003 р Тираж 39 прим ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)236-47-24