Спосіб отримання препарату з плаценти

Спосіб отримання препарату з плаценти шля хом відбору плаценти і подальшого відмивання, гомогенізації і стерилізації, який відрізняється тим, що плаценту заздалегідь охолоджують до температури +4°С - + 10°С, яку підтримують постійно, потім відмивають стерильним фізіологічним розчином, після чого здійснюють гомогенізацію з доданням багатокомпонентного сольового розчину з рН, близьким до нейтрального (розчин "Квартасоль"), а подальшу стерилізацію отриманої суміші виконують фільтруванням Спосіб отримання препарата з плаценти, що заявляється, відноситься до медицини, зокрема до клінічної імунологи та може бути використаний для корекції імунобюлопчного статусу хворих Відомий спосіб отримання препарата з плаценти [1 Алтунян Н М Новий гомобілковий гідролізат з плаценти // Автореферат к м н , Баку, 1972 С 7 - 9] шляхом денатурації та гідролізу тканини плаценти Недоліком відомого способу є те, що в результаті денатурації та гидролізу отримували препарат плаценти, який містив розщеплені білкові поліпептиди, а не високомолекулярні складні білки, що мають різні біологічні функції, необхідні для ефективної корекції імунологічного статусу хворих Найбільш близьким по технічній суті способу, що заявляється, є спосіб отримання препарата з плаценти [2 Шитов А Г Основи антиСНІДозахисноі та гепатозахисної технології у виробництві бюглобину Фармакотерапевтична ефективність бюглобину як бионормалізатору С 50 - 51], шляхом відбору плаценти і подальшого її охолоджування, відмиття, гомогенізації і стерилізацій При цьому здійснюють обробку дюксидом хлору та ХІМІЧНОЮ модифікацією гидролізу (тепловою денатурацією) Недоліком відомого способу, є те, що в процесі обробки і приготування препарата отримують низькомолекулярні пептиди, які руйнують гормони та ІНШІ біологічно активні речовини, що містяться в плаценті В основу винаходу поставлена задача створення способу отримання препарата з плаценти шляхом охолоджування плаценти, потім відмиття стерильним фізіологічним розчином, подальшої гомогенізації з доданням сольового розчину з рН, близької до нейтральної, потім стерилізацією фільтруванням, що дає можливість максимального збереження біологічно активних речовин, що містяться в плаценті Суть способу полягає в тому, що для отримання препарата з плаценти здійснюють послідовно відбір плаценти, и охолоджування до температури +4 - +10°С з постійною и підтримкою на цьому рівні, відмиття стерильним фізіологічним розчином, гомогенізацію з доданням багатокомпонентного сольового розчину з рН, близької до нейтральної (розчин "Квартасоль"), передстерілізаційну підготовку проводять шляхом просвітлення та 2-х ступінчастого центрифугування, потім проводять стерилізацію методом фільтрації Новим в способі, що заявляється, є те, що відмиття здійснюють стерильним фізіологічним розчином, подальшу гомогенізацію - з доданням багатокомпонентного сольового розчину з рН, близької до нейтральної (розчин "Квартасоль"), а стерилізацію виконують фільтруванням, що дає можливість максимального збереження білків, гормонів та інших біологічно активних речовин, що містяться в плаценті Основною проблемою в приготуванні препаратів з плаценти є руйнування біологічно активних речовин, що містяться в плаценті, в процесі її обробки, що знижує ефект імунокоррекцм Для можливо кращого збереження лікувальних властивос о> ю 54249 тей плаценти необхідно збереження цих речовин У зв'язку з цим проводять відмиття початкового матеріалу плаценти стерильним фізіологічним розчином, що дає можливість запобігти можливому руйнуванню еритроцитів і тканин посліду, проводять гомогенізацію і подальшу обробку у присутності багатокомпонентного сольового розчину з рН, близької до нейтральної, що дозволяє уникнути можливих змін біологічно активних речовин плаценти, зокрема, білків, а виконання стерилізації фільтрацією запобігає денатурації білків, яка можлива при інших способах стерилізації (фізичних, ХІМІЧНИХ) Д Л Я запобігання денатурації фільтрування проводять під позитивним тиском Внаслідок використання фізіологічного розчину і багатокомпонентного сольового розчину з рН, близькою до нейтральної, з'являється можливість отримання препарата з плаценти з максимальним збереженням гормонів плаценти і інших біологічно активних речовин Спосіб реалізують таким чином Плаценту відбирають у стерильний контейнер, охолоджують до температури +4 - +10°С, яку підтримують постійно, охолоджену плаценту вміщують у стерильний бокс, після чого багато разів відмивають стерильним фізіологічним розчином у 10-кратному об'ємі від крові, потім механічно подрібнюють на гомогенізаторі типу "РТ 1" з доданням рівного по об'єму розчину "Квартасоль", після чого відстоюють в холодильнику при температурі +4°С на протязі 8 годин, потім рідку фазу центрифугують зі швидкістю 4000 ± 300об/хв при температурі +4°С протягом 60 хвилин Отриманий надосад відбирали в окремий стерильний флакон і піддавали центрифугуванню при 16000 ± 500об/хв при температурі +4°С протягом 60 хвилин, а потім фільтрували через мембраний фільтр з діаметром пір 0,45Мк, після чого фільтрат піддавали стерилізуючій фільтрації через фільтри з діаметром пір 0,22Мк Отриманий таким чином фільтрат зберігали у холодильнику при температурі +4°С і тестували на стерильність (ВІДПОВІДНО ДО Наказу №60 МЗ СРСР від 17 01 1979р) з використанням тюгліколевої середи, середи Сабуро, цукрового бульйону Відмиття початкового матеріалу плаценти стерильним фізіологічним розчином дає можливість запобігти можливий гемоліз еритроцитів і руйнування тканин посліду Проведення гомогенізації і подальшої обробки у присутності розчину "Квартасоль" дозволяє уникнути можливих змін біологічно активних речовин плаценти, зокрема, білків, а виконання стерилізації фільтрацією запобігає денатурації білків, яка можлива при інших способах стерилізації (фізичних, ХІМІЧНИХ) Д Л Я запобігання денатурації фільтрування проводиться під позитивним тиском Внаслідок використання фізіологічного розчину і розчину "Квартасоль" з'являється можливість отримання препарата з плаценти з максимальним збереженням гормонів плаценти та інших біологічно активних речовин ПРИКЛАД 1 Послід отримали після нормальних термінових родів після фізіологічних вагітностей у породілль, кров яких заздалегідь тестували на відсутність інфекції ВІЛ, гепатиту В і С, сифілісу Послід відбирали у стерильний контейнер і транспортували при зниженій температурі (+4 +10°С), у стерильних боксових умовах послід виділяли з контейнера, тричі відмивали стерильним фізіологічним розчином в 10-кратному об'ємі від крові, механічно подрібнювали на гомогенізаторі типу "РТ 1" з доданням рівного по об'єму розчину "Квартасоль", після чого відстоювали при температурі +4°С на протязі 8 годин, рідку фазу центрифугували при 4000 + 300об/хв при температурі +4°С - +10°С протягом 60 хвилин, потім отриманий надосад піддавали центрифугуванню при 16000 + 500об/хв при температурі +4°С +10°С протягом 60 хвилин, після чого надосад фільтрували крізь мембранний фільтр з діаметром пір 0,45Мк, потім фільтрат піддавали стерилізуючій фільтрації через фільтри з діаметром пір 0,22Мк Отриманий фільтрат зберігався при температурі +4°С і тестувався на стерильність (ВІДПОВІДНО до Наказу №60 МЗ СРСР від 17 01 1979р) з використанням тюгліколевої середи, середи Сабуро, цукрового бульйону ПРИКЛАД 2 Послід отримали після нормальних термінових родів у породілль після вагітностей, що фізіологічно протікали, кров яких заздалегідь тестували на відсутність інфекції ВІЛ, гепатиту В і С, сифілісу Послід відбирали у стерильний контейнер і транспортували при зниженій температурі (+4 - +10°С ), у стерильних боксових умовах послід витягували з контейнера, тричі відмивали стерильним фізіологічним розчином в 10-кратному об'ємі від крові, механічно подрібнювали на гомогенізаторі типу "РТ 1" у присутності розчину "Квартасоль" в об'ємі, що склав 1/2 від об'єму тканини плаценти, після чого відстоювали при температурі +4°С на протязі 18 годин, рідку фазу центрифугували при 4000 + 300об/хв при температурі +4°С +10°С протягом ЗО хвилин, потім отриманий надосад піддавали центрифугуванню при 16000 + 500об/хв при температурі +4°С - +10°С протягом 60 хвилин, після чого надосад фільтрували крізь мембранний фільтр з діаметром пір 0,45Мк, потім фільтрат піддавали стерилізуючій фільтрації через фільтри з діаметром пір 0,22Мк Отриманий фільтрат зберігали при температурі +4°С і тестували на стерильність (ВІДПОВІДНО ДО Наказу №60 МЗ СРСР від 17 01 1979р) з використанням тюгліколевої середи, середи Сабуро, цукрового бульйону ПРИКЛАД 3 Послід отримали після нормальних термінових родів у породілль після вагітностей, що фізіологічно протікали, кров яких заздалегідь тестували на відсутність інфекції ВІЛ, гепатиту В і С, сифілісу Послід відбирали у стерильний контейнер і транспортували при зниженій температурі (+4 - +10°С), у стерильних боксових умовах послід витягували з контейнера, тричі відмивали стерильним фізіологічним розчином у 10-кратному об'ємі від крові, механічно подрібнювали на гомогенізаторіц типу "РТ 1" з доданням рівного об'єму розчину "Квартасоль", після чого відстоювали при температурі +4°С на протязі 8 годин, рідку фазу центрифугували при 5000 + 300об/хв при температурі +4°С - +10°С протягом 90 хвилин, потім отриманий надосад піддавали центрифугуванню при 16000 + 500об/хв при температурі +4°С +10°С протягом 60 хвилин, після чого надосад фільтрували крізь мембранний фільтр з діаметром 54249 пір 0,45Мк, потім фільтрат піддавали стерилізуючій фільтрації через фільтри з діаметром пір 0,22Мк Отриманий фільтрат зберігали при температурі +4°С і тестували на стерильність (ВІДПОВІДНО до Наказу №60 МЗ СРСР від 17 01 1979р) з використанням тюгліколевої середи, середи Сабуро, цукрового бульйону Використання способу отримання препарата з плаценти, що заявляється, дає можливість максимального збереження біологічно активних речовин плаценти, що дозволяє провести ефективну імунокоррекцію внаслідок впливу на нейроімуноендок ринний статус, нормалізації функцій і взаємодій у вказаних системах за рахунок поліпшення стану у системі імунітету і відновлення імунного гомеостазу ДЖЕРЕЛА ІНФОРМАЦІЇ 1 Алтунян Н М Новий гомобілковий гідролізат з плаценти // Автореферат к м н , Баку, 1972 - С 7 9 2 Шитов А Г Основи антиСНІДозахисної та гепатозахисної технології у виробництві біоглобину Фармакотерапевтична ефективність біоглобину як бюнормалізатору С 50-51 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)236-47-24