Спосіб визначення плоїдності селери і салату, вирощених у культурі in vitro, за кількістю хромосом

Спосіб визначення плоїдності селери і салату, вирощених у культурі in vitro, за кількістю хромосом, який відрізняється тим, що включає попередню холодову обробку рослин протягом 12-16 годин за температури 4-6 °С, скорочення хромосом під дією 0,03 % розчину ортооксихіноліну протягом 6-7 годин, після фіксації і мацерації фарбування 3 % розчином оцтовокислого орсеїну протягом 5-6 хвилин. (19) (21) u201011834 (22) 06.10.2010 (24) 10.05.2011 (46) 10.05.2011, Бюл.№ 9, 2011 р. (72) УЛЯНИЧ ОЛЕНА ІВАНІВНА, БЕХ НАТАЛЛЯ СТЕПАНІВНА, РЕДЬКО ВІРА ІВАНІВНА, ВОЙТОВСЬКА ВІКТОРІЯ ІВАНІВНА, МЕЛЬНИЧЕНКО ТЕТЯНА ВІКТОРІВНА, КАПУСТЯН ГАННА АНДРІЇВНА, НЕДЯК ТЕТЯНА МИКОЛАЇВНА (73) ІНСТИТУТ ЦУКРОВИХ БУРЯКІВ УКРАЇНСЬКОЇ АКАДЕМІЇ АГРАРНИХ НАУК 3 59210 ортооксихіноліну протягом 3 годин при кімнатній температурі для скорочення хромосом, промивання декілька разів водою і занурення у фіксуючомацеруючу суміш (2 частини 96% спирту і 1 частина концентрованої соляної кислоти) на 4-5 хвилин, промивання водою, фарбування 3% оцтовокислим орсеїном на предметному склі протягом 15-30 хвилин під покривним склом, забирання зайвої фарби фільтрувальним папером, утворення рівномірного мазка легким надавлюванням кінчиком сірника на покривне скло і підрахунок хромосом під мікроскопом. Відомий і пропонований спосіб мають спільні ознаки: скорочення хромосом під дією 0,03% розчину ортооксихіноліну, одночасна фіксація і мацерація у суміші, яка складається з 2 частин 96% спирту і 1 частини концентрованої соляної кислоти, фарбування 3% оцтовокислим орсеїном. Але відомий спосіб не забезпечує необхідного скорочення довгих хромосом селери і салату, яке необхідне для визначення їх кількості. В основу корисної моделі поставлена задача розробити спосіб визначення кількості хромосом у рослин салату і селери, вирощених в умовах in vitro, шляхом обробки культуральних рослин холодом для синхронізації поділів у клітинах, зменшенням часу фарбування 3 % розчином оцтовокислого орсеїну, до 5-6 хвилин, щоб отримувати не перефарбовані світлі препарати. Поставлена задача вирішується тим, що відомий спосіб включає обробку молодих зачаткових листочків буряків першого року життя довжиною 23мм або ж точок росту стеблових пагонів насінників, вилучених з 5 до 9 годин ранку, 0,03% розчином ортооксихіноліну протягом 3 годин при кімнатній температурі, промивання декілька разів водою, одночасну фіксацію і мацерацію у суміші, що складається з 2 частин 96% спирту і 1 частини концентрованої соляної кислоти протягом 4-5 хвилин, промивання водою, фарбування 3% оцтовокислим орсеїном на предметному склі протягом 15-30 хвилин під покривним склом, збирання зайвої фарби фільтрувальним папером і утворення рівномірного мазка легким надавлюванням кінчиком сірника на покривне скло. А згідно корисної моделі об'єктом для визначення кількості хромосом у селери і салату є меристематичні клітини бруньок рослин, вирощених у культурі in vitro, для уповіль Комп’ютерна верстка Л. Ціхановська 4 нення процесу ділення клітин і синхронізації поділів колби з рослинами ставлять на 12-16 годин у холодильник при температурі 4-6°С з наступним освітленням протягом 2,5-3 годин, виділяють точки росту і розміщують у 0,03% розчині ортооксихіноліну на 6-7 годин при кімнатній температурі, що забезпечує необхідне скорочення довгих хромосом. Фарбування препарату проводять на предметному склі під покривним 3% розчином оцтовокислого орсеїну протягом 5-6 хвилин. Новими суттєвими ознаками корисної моделі є: - дія на культуральні рослини холодом 4-6°С протягом 12-16 годин для синхронізації поділів у меристематичних клітинах; - обробка 0,03% розчином ортооксихіноліну протягом 6-7 годин для достатнього скорочення хромосом; - фарбування 3% розчином оцтовокислого орсеїну протягом 5-6 хвилин, в результаті чого клітини не перефарбовуються, цитоплазма залишається світлою і можна легко рахувати хромосоми. Спосіб визначення плоїдності селери і салату, вирощених у культурі in vitro, за кількістю хромосом здійснюється таким чином: у культуральних рослин, вирощених за температури 22±2°С, освітленні 3000-3500люкс, фотоперіоді 16 годин, відносній вологості 70-80%, через 1-2 тижні після пасажу і попередньої обробки холодом 4-6°С протягом 12-16 годин, у ламінарній камері вилучають точки росту бруньок, розміщують їх у 0,03% розчині ортооксихіноліну на 6-7 годин при кімнатній температурі, промивають 4-5 разів водою по 5-7 хвилин, мацерують протягом 4-5 хвилин у суміші, що складається з 2 частин 96% спирту і 1 частини концентрованої соляної кислоти, промивають 4-5 разів водою по 5-7 хвилин, на предметному склі препарувального голкою із точки росту відділяють найменший листочок, на нього наносять 1 краплю 3% розчину оцтовокислого орсеїну і закривають покривним склом, зайву фарбу забирають фільтрувальним папером і витримують 5-6 хвилин, легким надавлюванням кінчиком сірника отримують рівномірний мазок, при збільшенні окуляра 15 об'єктива 90 здійснюють підрахунок хромосом не менш ніж у 10 різних клітинах, що дозволяє визначити плоїдність рослин селери і салату. Підписне Тираж 24 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601