Напівсинтетичні ектеїнасцидини, фармацевтична композиція та спосіб лікування пухлин

1 Сполука Et 757, яка має структуру ось, АсЭО S 2 Сполука Boc-Et 729, яка має структуру З Сполука Iso-Et 745, яка має структуру но. 4 Сполука Et 875, яка має структуру v_o о V Y O eO a M M 5 Сполука Et 1560, яка має структуру ovc 6 Фармацевтична композиція, яка містить сполуку Et 757 і фармацевтично прийнятні розріджувач, носій або наповнювач 7 Фармацевтична композиція, яка містить сполуку Boc-Et 729 і фармацевтично прийнятні розріджувач, носій або наповнювач 8 Фармацевтична композиція, яка містить сполуку Iso-Et 757 і фармацевтично прийнятні розріджувач, носій або наповнювач 9 Фармацевтична композиція, яка містить сполуку Et 875 і фармацевтично прийнятні розріджувач, носій або наповнювач 10 Фармацевтична композиція, яка містить сполуку Et 1560 і фармацевтично прийнятні розріджувач, носій або наповнювач 11 Спосіб лікування пацієнта, що страждає від пухлини ссавців, яка належить до групи, утвореної лейкемією ссавців, меланомою ссавців і карциномою легенів ссавців, який включає уведення зазначеному пацієнту ефективної протипухлинної КІЛЬКОСТІ суттєво чистої сполуки, позначеної тут Et 757, разом з фармацевтично прийнятними носієм, розріджувачем або наповнювачем 12 Спосіб лікування пацієнта, що страждає від пухлини ссавців, яка належить до групи, утвореної лейкемією ссавців, меланомою ссавців і карциномою легенів ссавців, який включає уведення зазначеному пацієнту ефективної протипухлинної КІЛЬКОСТІ суттєво чистої сполуки, позначеної тут Boc-Et 729, разом з фармацевтично прийнятними носієм, розріджувачем або наповнювачем 13 Спосіб лікування пацієнта, що страждає від пухлини ссавців, яка належить до групи, утвореної лейкемією ссавців, меланомою ссавців і карциномою легенів ссавців, О со ю 59439 цевтично прийнятними носієм, розріджувачем або який включає уведення зазначеному пацієнту наповнювачем ефективної протипухлинної КІЛЬКОСТІ суттєво чис15 Спосіб лікування пацієнта, що страждає від тої сполуки, позначеної тут Iso-Et 729, разом з фапухлини ссавців, яка належить до групи, утвореної рмацевтично прийнятними носієм, розріджувачем лейкемією ссавців, меланомою ссавців і карциноабо наповнювачем мою легенів ссавців, 14 Спосіб лікування пацієнта, що страждає від пухлини ссавців, яка належить до групи, утвореної який включає уведення зазначеному пацієнту лейкемією ссавців, меланомою ссавців і карциноефективної протипухлинної КІЛЬКОСТІ суттєво чисмою легенів ссавців, тої сполуки, позначеної тут Et 1560, разом з фармацевтично прийнятними носієм, розріджувачем який включає уведення зазначеному пацієнту або наповнювачем ефективної протипухлинної КІЛЬКОСТІ суттєво чистої сполуки, позначеної тут Et 875, разом з фарма Ектешасцидини (далі - Et або Et's) є надзвичайно потужними антипухлинними агентами, ізольованими з морського оболочника Ecteinascidia turbmata Зокрема, Et 729, 743 та 722 виявили багатообіцяючу активність in vivo, включаючи активність проти мишіної лейкемії Р388, меланоми В16, карциноми легенів Льюіса і кількох пухлин людини у ксеноплантатних моделях на мишах Винахід стосується кількох нових ектешасцидинових сполук, які одержують напівсинтетичним шляхом, тобто використовуючи раніше одержані ектешасцидинові сполуки як ВИХІДНІ матеріали Структури нових ектешасцидинів наведено нижче ВОС-В723 ОШОМв EB75 : їм * Hj* sTtsea їли mtol Було виявлено, що наведені нові ектешасцидинові сполуки мають таку ж протипухлинну активність, як і ВІДОМІ ектешасцидини, і як такі можуть бути використані у терапії, наприклад, для лікування пухлин у ссавців, включаючи меланому, карциному легенів тощо Дозування і спосіб уведення можуть варіюватись залежно від особливостей пацієнта і специфічної активності активного інгредієнта, їх визначення входить у компетенцію лікаря, що лікує У кресленнях фіг 1А, 1В - мас-спектр (МС) БШАНР (з бомбардуванням швидкими атомами з низьким розрізненням) ектешасцидину Et 757 у Magic Bullet (MB) Див Rinehart et al , Biochem Biophys Res Commun , 1984, 124,350 фіг2А, 2В - тандемний мас-спектр БША/МС ектешасцидину Et 757 у MB фіг 3 - спектр 1Н ЯМР (500 МГц) ектешасцидину Et 757 у CD3OD, фіг4А, 4В - мас-спектр БШАНР ектешасцидину Et 729 у MB, фіг5А, 5В - тандемний мас-спектр БША/МС ектешасцидину Boc-Et 729 у MB, фіг 6 - мас-спектр БШАНР ектешасцидину IsoEt 729 у MB, фіг7А, 7В - тандемний мас-спектр БША/МС ектешасцидину Iso-Et 743 у MB, фіг 8 - спектр 1Н ЯМР (500 МГц) ектешасцидину Iso-Et 757 у CD3OD, фіг 9 - розширення спектру НМВС (750 МГц) ектешасцидину Iso-Et 757 у CD3OD, фіг 10А, 10В - мас-спектр БШАНР ектешасцидину Et 875 у MB, фіг 11 А, 11В - тандемний мас-спектр БША/МС ектешасцидину Et 875 у MB, фіг 12 - мас-спектр БШАНР ектешасцидину Et 1560 у MB Як уже відзначалось, з особин Ecteinascidia turbmata були ізольовані кілька бюактивних ектеїнасцидинових сполук, наприклад, ектешасцидини 729, 743, 745, 759А, 759В, 770, 736 і 722, описані у патентах США 5 089 273, 5 256 663, 5 149 804, 5 478 932, 5 654 426, включених сюди посиланням Для ілюстрації і полегшення розуміння винаходу далі наведено не обмежуючі винахід приклади Усі наведені процентні значення є масовими (якщо не зумовлено інше) Приклад 1 Напівсинтез Et 757 59439 рахунок для C30H42N3O10S [M+H-H 2 O) m/z 744,2591, одержано 744,2619, див фіг 6 та 7 1 Н ЯМР і НМВС див фіг 8, 9, ВІДПОВІДНО Приклад 3 Напівсинтез Et 875 О О ***? о"р До розчину Et 729 (9,2мг, 0012ммоль, 1екв), діізопропіламіну (12,9мкл, 0,074ммоль, бекв) і CH 3 CN (ЗООмкл додають СН 3 І (1,5мкл, 0,024ммоль, 2екв) і resuntmg sonution scirred at 60°C for 24 год Реакційну суміш концентрують до сухості під нітрогеном, залишок очищують зворотно-фазовою ВЕРХ (Phenomenex/Ultracarb-ODS, 2мл/хвил ), використовуючи 75% МеОН/ЬЬО з 0,02 М NaCS, як мобільну фазу, і одержують Et 757 (2,2мг, 24%) і Et 743 (2,3мг, 25%) і комплексну суміш перметилованих продуктів Далі Et 757 очищують ВЕРХ (Ultncarb-ODS), використовуючи 60% МеОН/Н 2 О з 0,02 М NaCS, як мобільну фазу, і одержують чистий Et 757 (1,4мг, 15%) МС БША високого розрізнення (МС БШАНВР), розрахунок для C40H44N5O10S [M+H-H 2 O) m/z 758,2747, одержано 758,2765, див фіг 1 та 2 1 Н ЯМР - див фіг З Приклад 2 Напівсинтез Iso-Et 743 ч L, J пмериаин ,АЮН Ї Т Т «р-«ч &tlv,r.t —о см л-нге78^завСігїгоощ Льодяну оцтову кислоту (5мкл розчину 28% AcOH/CH 3 CN, 4екв) додають до суміші Et 743 (0,9мг, 0,001ммоль, 1екв), піперидину (5мкл розчину 2% піперидину/СНзСІЧ, 0,001 ммоль, 1екв), диметилмалонату (5мкл розчину 3% диметилмалонату/СНзСЫ, 0,001 ммоль, 1екв) і подрібнених активованих молекулярних 4А сит (~0,5мг) у CH3CN і одержану суспензію перемішують при кімнатній температурі протягом 24 год Реакційну суміш фільтрують, фільтрат концентрують до сухості, залишок очищують флеш-хроматографією (градієнтний елюент 100% СНСІ 3 — > 90% СНСІз/МеОН) і одержують Et 875 (180мг, 20%, R f 0,53 у 90% СНСІз/МеОН), МС БША ВР, розрахунок для C44H50N3O14S [M+H) rn/z 876,3013, одержано 876,2986, див фіг 10, 11 Приклад 4 Напівсинтез Et 1560 (димер Et 729) Mel, Wt! 747 Стадія A-Boc-Et729 До розчину Et 729 (12,5мг, 0,017ммоль, 1екв), дмзопропілетиламіну (1,5мкл, 0,07ммоль, 4екв) і CH3CN (ЗООмкл) додають дикарбонат ди-третбутилу (3,6мг, 0,017ммоль, 1,0екв) і розчин перемішують при кімнатній температурі протягом 9 год , реакційну суміш концентрують до сухості під нітрогеном, залишок очищують флешхроматографією (градієнтний елюент 100% СНСІ5—> 90% СНСІз/МеОН) і одержують Boc-Et 729 (11,6 мг, 9 1 % , Rf 0,53 у 90% СНСІ 3 /МеОН), МС БШАВР, розрахунок для C43H48N5O12S [M+H) m/z 830,2942, одержано 830,2958, див фіг 4, 5 Стадія В - Iso-Et 743 До Boc-Et 729 (11,6мг, 0,014ммоль, 1екв), дмзопропілетиламіну (7,1 мкл, 0,041 ммоль, Зекв), CH3CN (500мкл) і магнітного перемішувача у реакційній колбі додають СЬЫ Розчин перемішують при 60°С протягом 24 год , реакційну суміш концентрують до сухості під нітрогеном, потім додають 700мкл суміші тетрафторацтова кислота/СНгСЬ/НгО (4 1 1) Після перемішування суміші при кімнатній температурі протягом ЗО хвил , и концентрують сухості під нітрогеном, залишок очищують зворотно-фазовою ВЕРХ (AlltechС18, 2мл/хвил ), використовуючи 60% МеОН/Н2О з 0,02 М NaCI як мобільну фазу, і одержують Iso-Et 743 (1,9мг, 28%, на основі відновленого Et 729) і Et 729 (3,6мг), що не прореагував МС БШАВР, роз До Et 729 (2,4мг, 0,014ммоль, 1екв), дмзопропілетиламіну (2мкл), СНзСІЧ (75мкл), CH3J і магнітного перемішувача у реакційній колбі додають а,а'-дибром-р-ксилол (34мкл 12,5мкг/мкл розчину а.а'-дибром-р-ксилол/СНзСІЧ, 0,01 бммоль, 1 екв) Реакційну суміш концентрують до сухості під нітрогеном, залишок очищують флеш-хроматографією (градієнтний елюент 100% СНСІ 3 — > 90% СНСІз/МеОН) і одержують Et 1560 (300мг, 12%, Rf 0,53 у 90% СНСІз/МеОН), МС БША ВР, розрахунок для C34H35N6O29S2 [M+H-2H 2 O) m/z 1561,5260, одержано 1561,5221, див фіг 12 Біологічна активність Як уже відзначалось, ектешасцидини є високофункцюналізованими бісабо трис(тетрапдроізохінолш) алкалоїдами, які мають високу протипухлинну активність in vivo Ці сполуки одержують як натуральні продукти, головним чином, з мангрового оболочника Ectemascidia turbinata, який росте у карібському регіоні і Мексиканській затоці Головним продуктом екстрагування є Et 743, який проходить фазу І КЛІНІЧНИХ випробувань як препарат проти суцільних пухлин людини Див , наприклад, Kuffel et al , Proceedings of the American Association for Cancer Research, 38 596 (1997), Moore et al , Proceedings of the American Association for Cancer Research, 38 314 (1997), Mirsahs et al , Proceedings of the American Associa 59439 tion for Cancer Research, 38 309 (1997) Reid et al , ЕМ560 2,0 0,25 Cancer Chemotherapy and Pharmacology, 38 329Et875 0,5 1 334 (1996), Faircloth et al , European Journal of Cancer, 73 875-883 (1996), Eckhardt et al , Proceedings З табл можна бачити, що нові сполуки винаof the American Association for Cancer Research, 37 ходу виявляють цитотоксичну активність, яка за 409(1996), Hendiksetal, Proceedings of the Ameriрівнем перевищує активність цих натуральних can Association for Cancer Research, 37 389(1996), ектешасцидинових сполук у 10 разів Тому можна Далі наведено результати вивчення протипухлинної активності напівсинтетичних аналогів згідно з винаходом Табл 1 містить показники цитотоксичної активності in vitro нових ектешасцидинових сполук у порівнянні з активністю двох натуральних продуктів - Et 743 і Et 729 Таблиця Сполука Et729 Е1743 Et757 Iso-Et 743 Boc-Et 729 Цитотоксичність до лейкемії мишей L1210 ік 50 0,05 0,5 0,01 0,03 5,0 IK50(Et743)/IK50 10 1 50 17 0,1 сподіватись, що ці сполуки будуть корисними у вигляді фармацевтичних композицій при лікування пухлин ссавців, зокрема, людини Нижче наведено публікації, які дають додаткову інформацію і включені сюди посиланням 1 Rmehart К L, et al, J Nat Prod , 53 771 -791 (1990) 2 Wright A E et al , J Org Chem , 55 45084512(1990) 3 Sakai et al , Proc Nat Acad Sci USA, 89 11456-11460(1992) 4 Rmehart et al , J Org Chem , 55 4512-4515 (1990) Наведений опис винаходу і його бажаних втілень дає змогу фахівцю виконати потрібні йому модифікації і удосконалення винаходу, не виходячи за межі винаходу, визначені Формулою ФІГ. 1А 4.6Е7 4.2Е7 -3.7E7 3.2Е7 м + н - нгог 2.8Е7 758.2 .2.3Е7 -1.8Є7 Л.4Є7 .9.2Е6 677.1 . . . . . ., 650 700 ,7,',мО-«О 750 800 m/г •4.6Є7 -4.2Є7 -3.7Є7 3.2Є7 .2.8Є7 .1ЛЕ7 .1.4Е7 9.2Е6 4.6Є6 і і і і і ' ' І Л 850 900 О.ОЕО г т т т т ч і-"!""' І ' І ' ' Т ' ' Т " Г Ч , - т . у т - т - ч г - і - . ..,.....,• і п т г і , . . T . . r T . T . T - r T . . r . t r . . j г .-| t - v - j , , , , , , , 1 , , , , - - г - т - г - г т - - ц . 950 1000 1050 1100 1150 1200 1250 1300 1350 1400 1450 1500 ФІГ. 1В 59439 10 ФІГ. 2А 100-r* Х15.00 2.0Є8 1.8Є8 1.6Е6 1.4Е8 1.2Є8 .9.8Е7 .7.9Є7 .5.9Е7 3.9Е7 .2.0Е7 100-а*8070Н 60-І 50-І 40Н ЗОН 10Н 0^ 20 40 60 80 463.0 O.OEO т-утт-гутт". 100 1 2 0 140 1 6 0 1 8 0 2 0 0 2 2 0 2А 260 280 300 320 340 360 380 2.0E8 Х15.00 Н 758.2 1.8Є8 1-6E8 495.1 1.4E8 1.2E8 .9.8Є7 7.9Ё7 .5.ЭЕ7 3.9Є7 477.1 567.0 2.0E7 743.1 OO O . E І І І І і 1\ Г VI t~f Г% . 1.1. •ft,• .ГU | Птт m. 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620 640 660 680 700 720 740 760 760 ФІГ. 2В Д..Д.Ч. 4 ФІГ. З 11 12 59439 ФІГ. 4А 100 150 200 soo-f*[М-ьН-Н203* 90^ 830.2 8070 250 50, 350 400 450 Х2.50 500 550 600 650 НО. Н,СО 4Н 0.0Е0 m / z 7 5 0 800 1.1Е8 И 758.2 .9.6Е7 -8.6Е7 -7.5Е7 ОСИз 700 - 5.4Е7 4.3Є7 Q 3.2Е7 v_5 он -2.3Е7 ВОС-ЕТ 720 И.1Е7 О.ОЕ0 1000 1050 1100 1150 1200 1250 1300 1350 1400 1450 1500 їм+н-нго+мвг 984.2 ЗО-! 20 930.3 850 900 950 ФІГ. 4В ФІГ. 5А 10090^ о с н 2.0Е8 L1.8E8 1.6E8 _1.4Е8 Х3.00 774 v ВОС-ЕІ 729 80- 448 (-Н2О, -Вос) г ^ 224.1 І9.0Е7 L7.9E7 200 Г 350 j 300 „ „ ^ 250 ХЗЯО ц 774.3 80 706050-І 40-; 10 L3.9E7 І.2.0Є7 O.OEO m/z Д.4 2.ОЕ8 1.8ЄЄ 1.6Е8 493.2 461.2 447.2 479.2 450 50Q 523.2 -Вое 730.3 561.3 550 1.2E8 -9.8E7 -7.9E7 5.9E7 З.ЭЕ7 I 2.0E7 ' Ч » 600 j 650 ФІГ. SB I" I 700 750 r 800 85 m. 13 14 59439 144.2 9 4E7 9 0Є7 8.5E7 8 0E7 7SE7 7.1 £7 6 6E7 6 1E7 5.7E7 4 7E7 238 4 2E7 .3 8E7 (so - Et 743 .3 3E7 І.2.4Е7 1.9E7 -1.4E7 744 2 L9.4E6 L4 7E6 2 П 500 OQO I 601.1 7Q0.1 T ^Y-|-f-T""f 1 1 Г"'і'~і r-r-f rf-i ' 93 600 700 800 900 1050.2 1000 LOOEO 1100 m ФІГ. 6 ФІГ. 7А 100-j 9080706050^ 40304 20^ Ю-; oj 236. Г 100,^ 90-i 80л 7060^ 50: 40: ЗОН 20 J 10 1 9Ё8 17E8 15E8 1 4E8 1.2E8 Э7Е7 7 7E7 .5 8E7 -3 9E7 .19E7 хЮ.00 .|... ГТ .. Т ..^-'|'Т'">"|"Ч l"rf'"l ^•"Г"Г"Г 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 -X1G.00/ -G.OEO •M-\-l\'\ i^t' 1,' 1 Г'Т^^^І '"*' • V* TTiL•! V f f 260 280 30( 320 340 360 380 300 320 " mlz •*• 744.1 г1 ЭЕ8 :о^5сн, і5О - а743 И-7Е8 j 1 5E8 1 4Е8 Г И 2Е8 449.1 ^9 7E7 І 7 7Е7 І 5 8Е7 481.1 І.3.9Е7 46 2 5S3.0 И 9Е7 407.1 238 ; 0 0EO 00 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620 640 660 680 700 720 740 760 m 729 0 ФІГ. 7В 15 16 59439 І8О-ЕІ743 ФІГ. 8 ¥2 (млн ') 1.9 52.22 . S2.32H,62.02 Я 3 2.0 2.1 2.2 2.3 2.4 2.5 170 180 150 140 130 120 110 100 F1 (млн ' ) ФЇГ, 9 90 80 70 60 50 59439 17 18 ФІГ. 10А VT% 1" І • Ч' І "І Т І " І ' Т Н І І'" 1250 1300 1350 1400 -О.ОЕ0 1450 1500 m/z ФІГ. 10В 348 ОСИ, І но. СН„ 607 ЕІ876 100 -хзо.оо X15-00 - ^ 876-3 607.3 60-і 50^ 40 30-І 2Q-; 10-І 224.0 290.1 42.0 115.0 •' Н 1 744.2 493.2 340.1 549.3 390.1 696.3 / ' • '•• Ч Ї ^ •' 100 200 300 400 500 ФІГ. 11 600 700 829.4 „ • Mi., • • lj, l 800 900 5.3Є7 4.8Є7 4.3E7 -3.7E7 -3.2E7 2.7£7 -2.1E7 И.6Є7 H.1E7 -5.3Є7 O.OEO m/z 59439 19 20 1715.2 1450 1500 1550 1800 1650 1700 1750 ФІГ. 12 Комп'ютерна верстка Т Чепелєва Підписано до друку 06 10 2003 Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ТОВ "Міжнародний науковий комітет", вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна