Спосіб виготовлення антисироватки до ліпополісахаридів збудника бурої бактеріальної гнилі картоплі

Спосіб виготовлення антисироватки до ліпополісахаридів (ЛПС) збудника бурої бактеріальної 3 59997 Одержаний розчин ЛПС зберігають в холодильнику при температурі 2-5°С до початку використання. Антисироватку до ЛПС патогена створюють в організмах кроликів віком від 0.5 до 1 року, які пройшли процедуру відбору і показали в результаті обстеження свою придатність до імунізації, тобто ці тварини являються цілком здоровими і в їх крові відсутні антитіла до ЛПС патогена. Дослідні тварини імунізують ЛПС з використанням неповного ад'юванта Фрейнда (НАФ) та преципітату. Преципітат одержують в процесі реакції кольцепреципітації ЛПС із гомологічною антисироваткою. Останню можна замінити антисироваткою, одержаною до бактерій патогена. Імунізацію тварин проводять по схемі, повний цикл якої складається з трьох ін'єкцій, які здійснюють в період імунізації і четвертої ін'єкції, яку здійснюють в період реімунізації. Три перші ін'єкції здійснюють з інтервалом в 9 діб, а четверту - через 25 діб після третьої. При кожній із трьох перших ін'єкцій кроликам вводять 1мг ЛПС, 1мл НАФ і 1мл преципітату на 1кг ваги тварини. Всі компоненти перед використанням старанно перемішують. Четверта ін'єкція складається с 2мг ЛПС, 1,5мл НАФ і 1,5мл преципітату і проводиться вона через 25 діб після третьої ін'єкції. При цьому кожну ін'єкцію проводять шляхом введення частини препарату підшкірно, а частину - внутрішньом'язово. За весь цикл імунізації в організм тварини вводять 5мг ЛПС на 1кг ваги. На 9 день після четвертої ін'єкції визначають вміст антитіл в пробах крові і при наявності антитіл в достатній для проведення реакції кількості, здійснюють забір крові через розріз сонної артерії. Одержану кров спочатку ставлять на 2 години в термостат при 37°С, а потім помішають в холодильник при температурі 2-5°С і зберігають при цих умовах протягом доби для відділення антисироватки від формених елементів крові. Одержану антисироватку відділяють від сформованого згустка крові шляхом зливання або відсмоктування спеці Комп’ютерна верстка Н. Лиcенко 4 альною піпеткою. Очищену від формених елементів антисироватку піддають консервації. Для цього в 100мл антисироватки розчиняють 3г суміші борної кислоти і сульфату натрія в пропорції 10:1 відповідно. В законсервованому стані антисироватку зберігають в холодильнику при температурі 2-5°С до початку досліджень. Перед використанням антисироватку можна очистити від консервантів шляхом діаліза її в кількості 5-10мл проти 3л дистильованої води протягом 2 годин. Запропонований нами спосіб забезпечує виготовлення антисироватки, необхідної для імунологічного вивчення збудника бурої бактеріальної гнилі картоплі та ідентифікації його видових і внутрішньовидових форм. Джерела інформації: 1. Щербакова Л.А., Умнов A.M., Найденова В.Н., Имуноферментный метод определения мицелия возбудителя стеблевой ржавчины в растениях пшеницы. Прикладная биохимия и микробиология том XXIV, выпуск 1, «Наука», 1988, с.114120. 2. Лонич Л.І., Кисельов Є.М. Розробка латексного антигенного діагностикуму для серологічного визначення туберкульозної інфекції. Мікробіологічний журнал, том 59, випуск 1, 1997, с.60-64. 3. Суриков И.М., Гаврилюк И.П., Оглуздин А.С., Цилосани Г.М. Иммунохимическое и електрофоретическое изучение белков каллусной и клубневой ткани регенератов картофеля. Физиология растений том 29, выпуск 4, 1982, с.758-761. 4. Ратушняк Л.К. Поширення та діагностика вірусу шарки сливи на півдні України. Автореферат дисертації на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук, Київ, 2004. 5. Paul Drigues, Andre Trigalet, Patrice Dupin, Daniel Samain. Comparative Studies of Lipopolysaccharide and exopolysaccharide from a virulent Strain of Pseudomonas Solanacearum and from Theree Avirulent Mutants. -journal of Bacteriologe, vol. 162, № 2. - May. 1985. Підписне Тираж 24 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601