Спосіб висіву туберкуліногенного штаму м.avium

Спосіб висіву туберкуліногенного штаму М avium, що включає посів матричного туберкуліногенного штаму М avium на синтетичне живильне середовище з наступним культивуванням його, який відрізняється тим, що використовують сифонний спосіб посіву матричного туберкуліногенного штаму Винахід відноситься до ветеринарної мікробіологи і може бути використаний для посіву туберкуліногенного штаму М avium на синтетичне живильне середовище для культивування протешогенного штаму та одержання туберкуліну (ППД) для птахів Існує спосіб висіву туберкуліногенних штамів за допомогою бактеріологічної петлі (Труды ГКНКИ ветпрепаратов Т19 Москва, 1978, авт Гринев АА) При виготовленні туберкуліну для ссавців і птахів у біологічній промисловості використовується спосіб висіву виробничого штаму бактеріологічною ракеткою (петлею) 20-30 добової плівки культури мікобактерій на синтетичне живильне середовище та подальше культивування протягом 50-60 діб (В М Безгин, автореф дисс канд вет наук, 1990, М ) Це рішення може бути прототипом Недоліком цього способу є велика трудомісткість низька продуктивність праці при ПОСІВІ культур туберкульозних мікобактерій плівкою, небезпечність інфікування людей при пересіві живої культури на петлі, значний відсоток браку ПОСІВІВ пов'язаний з проростом бутилів сторонньою мікрофлорою та висока собівартість цільового продукту В основу винаходу поставлено задачу розробити спосіб висіву туберкул іногенного штаму М avium посівом матричного туберкуліногенного штаму (М avium) на синтетичне живильне середовище, культивуванням його шляхом використання сифонного способу посіву, щоб забезпечити спосіб висіву туберкуліногенного штаму М avium Порівняльний аналіз способу, що заявляється і прототипу від відомого відрізняється тим, що посів матричної культури в виробничих умовах здійснюється сифонним способом, а не плівкою, що відповідає критерію "новизна" Сифонний спосіб висіву матричної культури дає можливість підвищити адаптивні, ростові властивості культури М avium, збільшити вихід білка в культуральному фільтраті та активність цільового продукту і зменшити собівартість алергену Спосіб виконується таким чином Для виробничого посіву використовують 7-10добову матричну культуру, яка вирощена на картопляно-гліцериновому відварі з добре розвитою плівкою Перед висівом колбу з матровою розплодкою ретельно змішують протягом 1-2 хвилин до рівномірної зависі Після ЦЬОГО, одержану завісь висівають сифонним способом у бутлі з синтетичним живильним середовищем Бутлі з посівами культивують в термостаті при температурі 38-39°С Через 50-60 днів культивування, всі бутлі з вирощеною культурою автоклавують і через 10-12 годин бактеріальну масу ВІДДІЛЯЮТЬ ВІД культурального фільтрату При цьому визначають вихід бактерійної маси з 1л середовища, та накопичення білка в культуральному фільтраті, і вихід цільового продукту з 1л середовища Приклад 1 Утри бутля з синтетичним живильним середовищем висівали з розрахунку 2см 3 матричної культури на 1л середовища сифонним способом Бутлі культивували, як вказано вище Приклад 2 Теж саме, що в прикладі 1, тільки матричну ю 00 ю (О культуру висівали в КІЛЬКОСТІ 5СМ на 1л середовища сифонним способом Приклад 3 Теж саме, що і в прикладі 1, тільки висів мат3 ричної культури в бутлі проводили в дозі 10см на 1л середовища Ефективність сифонного способу посіву визначали через 50-60 днів після висіву туберкуліногенної культури М avium ваговому виходу вирощеної сухої бактеріальної маси білка в культуральному фільтраті і цільового продукту з 1л живильного середовища Результати проведених досліджень приведені в таблиці З матеріалів таблиці видно, що при ВИСІВІ матричної культури М avium сифонним способом у КІЛЬКОСТІ 2см (приклад 1) накопичення бактеріальної маси в середовищі становить 230мг білка від 3,2-3,8мг/см3, та вихід цільового продукту (алергену) 46000-47000ТЕ/см3 Що стосується цих показ 62585 ників, при висіву 5см на 1л середовища, то вони були дещо вищими (приклад 2) і становили по виходу бакмаси 250мг з 1л середовища, білка 5,25,6мг/см~ та цільового продукту 4700050000ТЕ/см , а при ПОСІВІ матричної розплідки 3 10см /л середовища ці показники становили ВІД3 ПОВІДНО (приклад 3) - 232мг, 4-5,0мг/см , 440003 47000ТЕ/см Результати проведених досліджень свідчать про те, що при ПОСІВІ матричної культури сифон3 ним способом у КІЛЬКОСТІ 5см на 1л середовища вихід бактеріальної маси був більшим на 23мг, 3 білка - 0,7-0,8мг/см , а вихід цільового продукту на 3 3000-4000ТЕ/см у порівнянні з прототипом Крім цього, з одного матричного бутля, культури в живильному середовищі можна засіяти 180200 виробничих бюбутилів замість 10-20 бутилів при ПОСІВІ плівкою Цей спосіб дозволяє механізувати техпроцес, зменшити потребу матеріалах у 30-40 разів Таблиця Штам мікобактерій Показники КІЛЬКІСТЬ бактеріа льної маси мг/л середовища М avium КІЛЬКІСТЬ білка Вихід І ЦІЛЬОВОГО М avium продукту з 1л середовища ТЕ/см3 М avium Комп'ютерна верстка А Крулевський Спосіб Запропонований приклад 2 приклад 3 приклад 1 230 Прототип 250 255 232 3,2-3,8 5,2-5,6 5,2-5,8 4,5-4,8 46000-47000 47000-50000 47000-49000 44000-47000 Підписне Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ДП "Український інститут промислової власності", вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119