Консорція бактерій chlorobium limicola ya-2002 i pseudomonas sp. – продуцент глікогену

Консорція бактерій Chlorobium limicola Ya2002 i Pseudomonas sp. - продуцент глікогену, що задепонована в Депозитарії Інституту мікробіології і вірусології НАН України за номером ІМВ К-8. (19) (21) u201014885 (22) 13.12.2010 (24) 25.10.2011 (46) 25.10.2011, Бюл.№ 20, 2011 р. (72) ГОРІШНИЙ МИРОСЛАВ БОГДАНОВИЧ, ГНАТУШ СВІТЛАНА ОЛЕКСІЇВНА, МОРОЗ ОКСАНА МИХАЙЛІВНА, ЛЕВИЦЬКА ОЛЬГА ВОЛОДИМИРІВНА, ГУДЗЬ СТЕПАН ПЕТРОВИЧ 3 КН2РО4-0,3; NH4Cl-0,34; КСl-0,34; . СаСl2 2Н2О - 0,15; MgSO4 7H2O-0,5; дистильована вода – до 1 л. До стерильного середовища додають наступні стерильні розчини: 10 % NaHCO3-15 мл; . 1М Na28 9Н2О - 2,5 мл; 2 мг вітаміну В12 розчиненого у 100 мл води 1мл; мікроелементи – 1 мл (25 % НСl - 10 мл, . FeSO4 7H2O - 2 г (сірчанокисле залізо розчиняють . в соляній кислоті), СоСl2 6Н2О - 190 мг, МnСl24Н2О -100 мг, ZnCl2 - 70 мг, Na2MoO42H2O - 36 мг, . NiCl26H2O – 24 мг, Н3ВO3 - 6 мг, СuСl2 2Н2О – 2мг); 10 % розчин натрію піровинограднокислого 10 мл; 10 % розчин натрію оцтовокислого - 10 мл; pH 6,7-6,8. Синтез біомаси консорцією бактерій ІМВ К-8 на цьому середовищі складає 5-6 г/л. Температурний оптимум культивування 28-30 °C, рН 6,8-7,0, інтенсивність освітлення 40 лк, довжина хвилі 700800 нм. Консорція бактерій зберігається у темряві при температурі 6±2 °C на вищезгаданому середовищі. Фізіологічні ознаки. При вирощуванні культури на різних поживних середовищах як донори водню і джерело вуглецю Комп’ютерна верстка А. Крижанівський 63723 4 використовує гідроген сульфід та вуглекислоту. Клітини містять бактеріохлорофіли с, d та каротиноїди (хлоробактерин та ізореніератин). У процесі детоксикації сірководню за сприятливих умов культивування та оптимального складу середовища глюкоза у клітинах перетворюється у глікоген, який нагромаджується як запасна речовина. Для високого виходу продукту забезпечують азотне та фосфорне голодування, а також високий вміст ацетату і пірувату в середовищі. Екстракцію глікогену здійснюють із висушених ацетоном бактерійних клітин, які обезжирюють киплячою сумішшю хлороформу та метанолу (2:1) та киплячим етиловим ефіром. Клітини висушують та екстрагують глікоген 30 % розчином калію гідроксиду. Додають 95 % етанол і осад глікогену відділяють центрифугуванням. Для очищення глікоген розчиняють у воді та осаджують при 0 °C льодяною оцтовою кислотою, осад промивають етанолом та ацетоном. Для кількісного визначення вмісту глікогену у клітинах бактерій його гідролізують до глюкози 1 н сірчаною кислотою. Вміст глюкози встановлюють глюкозооксидазним способом при довжині хвилі 450 нм. Вміст глікогену становить до 120 мг/г клітин, що вдвічі перевищує рівень біосинтезу глікогену штамом 8327 Chlorobium limicola forma thiosulfatophilum. Вищезгадані характеристики консорції бактерій Chlorobium limicola Ya-2002 і Pseudomonas sp. 1MB K-8 підтверджують досягнення передбачуваного технічного результату. Підписне Тираж 23 прим. Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601