Спосіб використання мультиплексної полімеразної ланцюгової реакції для визначення пародонтопатогенної флори

Спосіб використання мультиплексної полімеразної ланцюгової реакції для визначення наявності та співвідношення окремих мікроорганізмів, який відрізняється тим, що визначення проводять в порожнині рота, як мікроорганізми визначають - Lactobacillus spp./BK, Enterobacterium spp., Streptococcus spp., Gardnerella vaginalis/Prevotella bivia/Porphyromonas spp., Eubacterium spp., Mycoplasma genitalium+hominis, Candida spp.., а полімеразну ланцюгову реакцію проводять в режимі реального часу. (19) (21) u201100737 (22) 24.01.2011 (24) 12.12.2011 (46) 12.12.2011, Бюл.№ 23, 2011 р. (72) КАЙДАШЕВ ІГОР ПЕТРОВИЧ, ВЕСНІНА ЛЮДМИЛА ЕДУАРДІВНА, ШЛИКОВА ОКСАНА АНАТОЛІЇВНА, ІЗМАЙЛОВА ОЛЬГА ВАТАЛІЇВНА, БОБРОВА НЕЛЛЯ ОЛЕКСАНДРІВНА (73) ВИЩИЙ ДЕРЖАВНИЙ НАВЧАЛЬНИЙ ЗАКЛАД УКРАЇНИ "УКРАЇНСЬКА МЕДИЧНА СТОМАТОЛОГІЧНА АКАДЕМІЯ" 3 Недоліками даного способу є, перш за все, невелика кількість мікроорганізмів, що виявляються, та неможливість оцінки співвідношення резидентної мікрофлори порожнини рота та транзиторної, що надходить з зовні, відсутність внутрішнього контролю проведення ПЛР, що може призводити до появи хибно негативних результатів. В основу корисної моделі поставлена задача створення способу визначення складу мікрофлори порожнини рота, що дозволяє ідентифікувати 8 видів/родин як постійної (фізіологічної) мікрофлори так і сапрофітних та патогенних мікроорганізмів, що входять до складу набору реагентів для проведення мультиплексної полімеразної реакції: загальна бактеріальна маса, Lactobacillus spp./BK, Enterobacterium spp., Streptococcus spp., Gardnerella vaginalis/Prevotella bivia/Porphyromonas spp., Eubacterium spp., Mycoplasma genitalium+hominis, Candida spp.. Ідентифікація проводиться з метою визначення співвідношення окремих мікроорганізмів в порожнині рота для підвищення ефективності профілактики і лікування різних патологічних станів в організмі, що можуть виникати в наслідок дисбіозу мікрофлори порожнини рота. Поставлена задача вирішується створенням способу одночасного визначення наявності та співвідношення окремих мікроорганізмів з використанням мультиплексної полімеразної реакції, який відрізняється від відомого тим, що визначення проводять в порожнині рота, як мікроорганізми визначають - Lactobacillus spp./BK, Enterobacterium spp., Streptococcus spp., Gardnerella vaginalis/Prevotella bivia/Porphyromonas spp., Eubacterium spp., Mycoplasma genitalium+hominis, Candida spp.., а полімеразну ланцюгову реакцію проводять в режимі реального часу. Комп’ютерна верстка Л. Купенко 65337 4 Спосіб реалізується таким чином: матеріал зі слизової оболонки порожнини рота брали натщесерце стерильним зондом обертальними рухами, видаляли зонд, не доторкуючись губ, та вносили в пробірку з реагентом для термо-коагуляційного кондиціювання ДНК. В підготовлених зразках ДНК проводили кількісне визначення загальної бактеріальної маси, Lactobacillus spp./BK, Enterobacterium spp., Streptococcus spp., Gardnerella vaginalis/Prevotella bivia/Porphyromonas spp., Eubacterium spp., Mycoplasma genitalium+hominis, Candida spp.. за допомогою мультиплексної полімеразної ланцюгової реакції в режимі реального часу. Приклад практичного використання способу. Проведено визначення стану мікрофлори порожнини рота у двох осіб з встановленим діагнозом хронічний пародонтит в стадії ремісії. Отримано відмінність у складі мікрофлори обох осіб. У першої особи знайдено Streptococcus spp. - log 5,3 та Eubacterium spp. - log 5,2, загальна бактеріальна маса становила - log 6,7. У другої особи отримано наступні показники складу мікрофлори порожнини рота: загальна бак. маса - log 4,4 Enterobacterium spp.- log 4,9 та Eubacterium spp. - log 4,4. Таким чином, за допомогою способу, що заявляється, доцільно визначати якісний стан мікрофлори порожнини рота, кількісну оцінку різних груп мікроорганізмів умовно-патогенної флори і виявлення співвідношення між ними та загальною бактеріальною масою, кількісну оцінку нормофлори. Визначення співвідношення окремих видів мікроорганізмів в порожнині рота за допомогою способу, є зручним у використанні, інформативним, високоспецифічним, дозволить забезпечити об'єктивну, специфічну та чутливу діагностику дисбіозів, а також допоможе точніше контролювати перебіг захворювань порожнини рота та ефективність їх терапії. Підписне Тираж 23 прим. Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601