Штам clostridium perfringens тип а “запорізький”, що пропонується для виготовлення вакцин проти анаеробних інфекцій сільськогосподарських тварин

Винахід відноситься до ветеринарної мікробіології, зокрема, до біотехнології і може бути використаний для виготовлення вакцин проти анаеробних інфекцій сільськогосподарських тварин, які широко поширені на тваринницьких фермах і завдають значних економічних збитків [4]. Хіміотерапія анаеробних інфекцій трудомістка і мало ефективна. В зв'язку з цим основним ефективним методом боротьби із названими хворобами є своєчасна вакцинація тварин. Штами анаеробних мікроорганізмів, що пропонуються для виробництва вакцин повинні мати стабільні морфологічні, культурально-біохімічні властивості, добре виражені патогенні властивості, бути нешкідливими та високо імуногенними. Аналогами винаходу є виробничі штами Clostridium perfringens на основі яких отримані вакцини проти анаеробних інфекцій сільськогосподарських тварин [1, 2, 3]. Прототипом винаходу є виробничий штам Clostridium perfringens тип А ВГНКИМ №28 - ДЕП, який використовується для виробництва асоційованої вакцини "НЕКОВАК" проти некробактеріозу великої рогатої худоби (2098127) та вакцини "ОВИКОН" проти інфекційних захворювань кінцівок (2098128) [2, 3]. У вітчизняній ветеринарній практиці немає штаму Clostridium perfringens тип А. який би був запропонований для виробництва вакцин проти анаеробних інфекцій. Ue затруднює розробку засобів специфічної профілактики проти таких економічно значимих захворювань, як анаеробна ентеротоксемія, некротичний ентерит поросят, анаеробна дизентерія ягнят, некробактеріоз великої рогатої худоби. Відмінними ознаками прототипу від заявленого штаму є наступні: - штам задепонований в колекції мікроорганізмів Російської Федерації і на Україні даного штаму мікроорганізмів немає; - вакцини, компонентом яких є антиген із штаму, що взятий за прототип, не завжди мають бажаний ефект при щепленні тарин і не забезпечують високої імуногенності у щепленого поголів'я. Задачею даного винаходу є створення вакцинного штаму Clostridium perfringens №130 тип А. який володіє стабільними морфологічними та культурально-біохімічними властивостями, добре вираженими патогенними властивостями і був виділений з матеріалу відібраного від теляти з ознаками ентеротоксемії. Штам Clostridium perfringens тип А “Запорізький” задепонований в колекції мікроорганізмів Державного науково-контрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів і має реєстраційний номер 130.(свідотство від 5.08.2002 р.) Морфологічні властивості. Грампозитивні товсті, нерухливі паличковидні бацили із заокругленими кінцями. Найчастіше розташовані поодиноко, інколи по 2 - 3 у ланцюжку. Мають спори овальної форми, що розташовані центрально, рідше - субтермінально. Культуральні властивості. Факультативний анаероб. Оптимальна температура культивування 37°C . На середовищі Кітт-Тароцці раннє помутніння через 5-6 годин, інтенсивна поява росту та газоутворення - через 612 годин. Через 48-56 годин наступає просвітління середовища та утворення осаду. На кров'яному агарі в анаеробних умовах утворює сірувато-зелені колонії округлої форми, випуклі з рівними краями та зоною гемолізу коричневого кольору. При доступі кисню колонії зеленіють. На середовищі Вільсон-Блера утворює колонії чорного кольору, при інтенсивному рості середовище чорніє з розривом стовпчика та утворенням газу через 1-3 години культивування. Молоко інтенсивно згортає з утворенням губчатого згусту, розріджує желатину. Ферментативні властивості. Штам Clostridium perfringens №130 тип А “Запорізький ферментує з утворенням кислоти і газу глюкозу, сахарозу, мальтозу, галактозу, не ферментує маніт, дульцит, не утворює сірководень. Таблиця 1 Біохімічні властивості вакцинного штаму Clostridium perfringens №130 тип А Глюкоза Мальтоза Галактоза Сахароза Маніт Дульцит Утворення сіроводню + + + + + Патогенні властивості. Штам Closlridium perfringens №130 тип А “Запорізький” патогенний для білих мишей та морських свинок. При внутрішньовенному введені білими мишам надосадової рідини 15 - 27-годинної бульйонної культури штаму Closlridium perfringens №130 тип А “Запорізький(термін культивування 15-27 годин) в дозі 0,5 см3 спостерігається швидка загибель тварин протягом 18-24 годин. При підшкірному чи внутрішньом'язовому введенні бульйонної культури в дозі 1,0 см3 спостерігається повільна загибель тварин протягом 32-48 годин. На місці ін'єкції шкіра відшаровується, м'язи мають вигляд вареного м'яса, сіруватобрудного кольору. Кишечник переповнений газами. Визначення типу токсину проводили в реакції нейтралізації специфічними сироватками з послідуючим інфікуванням тварин живою культурою. Штам Clostridium perfringens №130 тип А “Запорізький” характеризується високою токсигенністю для білих мишей та морських свинок. Максимальна концентрація токсину в живильному середовищі відмічається на 18 - 24 годину культивування.Мінімальна летальна доза для білих мишей 0,005см3.Загибель тварин настає швидко. Проведені дослідження, доводять те. що запропонований штам володіє високою патогенністю, придатний для виробництва вакцини проти анаеробної ентеротоксемії, некротичного ентериту поросят, анаеробної дизентерії ягнят, некробактеріозу великої рогатої худоби та інших клостридіозів сільськогосподарських тварин. Виготовлена вакцина, до складу якої входить цей штам, захищає тварин понад 80 % . Запропонований штам Clostridium perfringens №130 тип А “Запорізький” може бути використаний для виробництва вакцини проти анаеробних інфекцій сільськогосподарських тварин. Джерела інформації 1. Определитель бактерий Берджи /под. ред. Дж. Хоулта. Н. Крига, П. Снита и др. Перевод с англ. акад. РАН Г.А. Заварзина. - 9-е изд. в 2-х томах . - 1997. - 800с. 2. Патент 2098127 RU. А 61 К 39/116, С 12 N 1/20. Ассоциированная вакцина. "НЕКОВАК" против некробактериоза крупного рогатого скота / Сидорчук А.А.. Панасюк С.Д. и др.: № 96119157/13. Заявлено 26.09.96: Опубліковано 10.12.97. Бюл.№34. - 4с. 3. Патент 2098128 RU, A 61 К 39/116, С 12 N 1/20. Ассоциированная вакцина "ОВИКОН" против инфекционных заболеваний конечностей овец / Панасик С.Д., Кирилов Л.В., Кружнов Н.П. и др.; № 96119161/13. Заявлено 26.09.96; Опубліковано 10.12.97. Бюл. №34. - 4с. 4. Риженко В.В., Марченко О.М., Бондар Т.О., Галка І.В., Риженко І.В., Кравцова О.Л., Черніков О.О. Актуальні питання профілактики анаеробних інфекцій людини і тварини //Бюлетень "Ветеринарна біотехнологія" IBM УААН. Київ. 2002. - №2. - С. 199 - 204.